Name: Gewijzigd MicroSecure Vitrificatie: Een veilige, eenvoudige en zeer effectieve cryopreservatie Procedure for Human Blastocysten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Leer de MicroSecure Vitrificatie methode voor veilige cryopreservatie van menselijke blastocysten. Deze eenvoudige techniek minimaliseert variaties tussen laboratoria en verbetert succespercentages aanzienlijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MC Schiewe wil de heer Bos Garner danken aan het Fertility Center van Las Vegas voor zijn statistische expertise in het analyseren en evalueren van de jaarlijkse CDC en SART data. Ook de auteurs willen hun medisch directeur, Dr. Robert E. Anderson, bedanken voor zijn toegewijde steun en vertrouwen in onze technische vaardigheden en expertise.

<ol><li>Edgar, D. H., Gook, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+appraisal+of+cryopreservation+%28slow+cooling+versus+vitrification%29+of+human+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos.</a> Hum. Reprod. Update. 16, 536-554 (2012).</li>
<li>Schiewe, M. C., Whitney, J. B., Anderson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+risk+of+monochorionic+dizygotic+twin+blastocyst+formation+associated+with+early+laser+zona+dissection+of+group+cultured+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Potential risk of monochorionic dizygotic twin blastocyst formation associated with early laser zona dissection of group cultured embryos.</a> Fertil. Steril. 103, 417-421 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/301673333_The_Historic_Development_and_Incorporation_of_Four_Assisted_Reproductive_Technologies_Shaping_Today's_IVF_Industry">The historic development and incorporation of four assisted reproductive technologies shaping today's IVF industry.</a> J. Fertil. In Vitro Reprod. Med. Genet. 4, 2-9 (2016).</li>
<li>Rall, W. F., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ice-free+cryopreservation+of+mouse+embryos+at+-196+degrees+C+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification.</a> Nature. 313, 573-575 (1985).</li>
<li>Rall, W. F., Wood, M. J., Kirby, C., Whittingham, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Fertil%22%5BJournal%5D)">Development of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> J. Reprod. Fertil. 80, 499-504 (1987).</li>
<li>Schiewe, M. C., Rall, W. F., Stuart, L. D., Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cryoprotectant%2C+cooling+rate+and+in+situ+straw+dilution+using+conventional+freezing+or+vitrification+for+cryopreserving+sheep+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cryoprotectant, cooling rate and in situ straw dilution using conventional freezing or vitrification for cryopreserving sheep embryos.</a> Theriogenology. 36, 279-293 (1991).</li>
<li>Lane, M., Schoolcraft, W. B., Gardner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitrification+of+mouse+and+human+blastocysts+using+a+novel+cryoloop+container-less+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Vitrification of mouse and human blastocysts using a novel cryoloop container-less technique.</a> Fertil. Steril. 72, 1073-1078 (1999).</li>
<li>Mukaida, T., Oka, C., Goto, T., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+shrinkage+of+blastocoeles+using+either+a+micro-needle+or+a+laser+pulse+prior+to+the+cooling+steps+of+vitrification+improves+survival+rate+and+pregnancy+outcome+of+vitrified+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 21, 3246-3252 (2006).</li>
<li>Kuwayama, M., Vatja, G., Ieda, S., Kato, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+open+and+closed+methods+for+vitrification+of+human+embryos+and+elimination+of+potential+contamination%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and elimination of potential contamination.</a> Reprod. Biomed. Online. 11, 608-614 (2005).</li>
<li>Vanderzwalmen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Births+after+vitrification+at+morula+and+blastocyst+stages%3A+effect+of+artificial+reduction+of+the+blastocoelic+cavity+before+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification.</a> Hum. Reprod. 17, 744-751 (2002).</li>
<li>Schiewe, M. C. Quality control factors influencing the successful and reliable implementation of oocyte and embryo vitrification. <a target="_blank" href="http://www.intechopen.com/books/cryopreservation-in-eukaryotes/quality-control-factors-influencing-the-successful-and-reliable-implementation-of-oocyte-and-embryo-">Cryopreservation</a>. Marco-Jiménez, F., AkdemirKoç, H. , 1st Ed, InTech. Rijeka, Croatia. (2016).</li>
<li>Stachecki, J. J., Garrisi, J., Sabino, S., Caetano, J. P. J., Wiemer, K., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+safe%2C+simple%2C+and+successful+vitrification+method+for+bovine+and+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">A new safe, simple, and successful vitrification method for bovine and human blastocysts.</a> Reprod. Biomed. Online. 17, 360-367 (2008).</li>
<li>Panagiotidis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+vitrification+of+blastocysts+from+an+oocyte-donation+programme%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed vitrification of blastocysts from an oocyte-donation programme: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 470-476 (2013).</li>
<li>Papatheodorou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+oocyte+vitrification+system%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed oocyte vitrification system: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 595-602 (2013).</li>
<li>Schiewe, M. C., Zozula, S., Anderson, R. E., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Validation+of+microSecure+vitrification+(%26%23181%3BS-VTF)+for+the+effective+cryopreservation+of+human+embryos+and+oocytes">Validation of microSecure vitrification (µS-VTF) for the effective cryopreservation of human embryos and oocytes.</a> Cryobiology. 71, 264-272 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. MicroSecure vitrification for oocytes and embryos: optimum simplicity, security and cost and effectiveness combining FDA-approved products. J. Clin. Embryol. 13, 33-51 (2010).</li>
<li>Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+survival+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> Cryobiology. 24, 387-402 (1987).</li>
<li>Seki, S., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+warming+rate+on+the+survival+of+vitrified+mouse+oocytes+and+on+the+recrystallization+of+intracellular+ice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of warming rate on the survival of vitrified mouse oocytes and on the recrystallization of intracellular ice.</a> Biol. Reprod. 79, 727-737 (2008).</li>
<li>Schiewe, M. C. General hygiene and quality control practices in an embryo-production laboratory. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchiewe%2C+MC+%22Manual+of+the+International+Embryo+Transfer+Society%3A+A+Procedural+Guide+and+General+Information+for+the+Use+of+Embryo+Transfer+Technology%2C+Emphasizing+Sanitary+Precautions%22">Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the Use of Embryo Transfer Technology, Emphasizing Sanitary Precautions</a>. Stringfellow, D. A., Givens, D. , 3rd Ed, International Embryo Transfer Society. Champaign, IL. (2008).</li>
<li>Whitney, J. B., Nugent, N. L., Anderson, R. E., Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+center+validation+of+routine+blastocyst+biopsy+implementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Asst.+Reprod.+Genet%22%5BJournal%5D)">Single center validation of routine blastocyst biopsy implementation.</a> J. Asst. Reprod. Genet. , (2016).</li>
<li>Liebermann, L., Conaghan, J. <a target="_blank" href="http://embryologists.com/jce161-artificial-collapse-prior-blastocyst-vitrification/">Artificial collapse prior blastocyst vitrification: improvement of clinical outcomes.</a> J. Clin. Embryol. 16, 107-118 (2014).</li>
<li>Parmegiani, L., Tatone, C., Cognigni, G. E., Bernardi, S., Troilo, E., Arnone, A., Maccarini, A. M., Di Emidio, G., Vitti, M., Filicori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+warming+increases+survival+of+slow-frozen+sibling+oocytes%3A+a+step+towards+a+single+warming+procedure+irrespective+of+the+freezing+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Rapid warming increases survival of slow-frozen sibling oocytes: a step towards a single warming procedure irrespective of the freezing protocol.</a> Reprod Biomed Online. , (2014).</li>
</ol>

MC Schiewe dient als een lid van de wetenschappelijke adviesraad om innovatieve Cryo Enterprises en als technisch directeur aan de California Cryobank. De productie van deze video-artikel is betaald door Ovation vruchtbaarheid. De auteurs hebben geen concurrerende financiële overeenkomsten of belangenconflicten bekend te maken met betrekking tot de verglazing van gameten en embryo&#39;s.

Tegenwoordig is er een hoge verwachtingen van het bereiken van volledige blastocyst overleving (&gt; 95%) en het bereiken implantatie succes vergelijkbaar met die van verse embryo. Sommige groepen hebben gesuggereerd dat de live geboortecijfers van verglaasd embryo transfer cycli zijn misschien zelfs hoger dan verse blastocysten wanneer de intacte gecryopreserveerd embryo is getransplanteerd in een gezonde, niet-hormonaal gestimuleerde baarmoeder. Onze gegevens geven duidelijk aan dat vitrificatie effectief en betrouwbaar de levensvatbaarheid van de verse embryo. Verder hebben we aangetoond dat onze aseptische, gesloten methode, genaamd MicroSecure verglazing (uS-VTF), een optimaal resultaat vergelijkbaar met of groter dan de commerciële standaarden (dwz geopend apparaatsystemen) van de IVF industrie kan bereiken. Variant wordt geassocieerd met technische herhaalbaarheid en betrouwbaarheid tussen individuen met een veelvoud van de verglazing apparaten / methoden. Op zijn beurt heeft dit geleid tot inconsistencies tussen programma&#39;s toe te passen verglazing. Daarom is het niet verwonderlijk dat apparaat vertrouwdheid een belangrijke factor is met betrekking tot laboratorium vaardigheid en succesvolle resultaten. Het is dit concept van &quot;technische signature&quot; 11, dat verklaart waarom herhaalbaarheid tussen programma&#39;s problematisch kan zijn. heeft niet alleen de ontwikkeling van meer dan een dozijn commerciële apparaten ingewikkeld dit verschijnsel, heeft het creëerde kwaliteitscontrole zorgen. Gelukkig verglazing gesloten systemen, zoals uS-VTF, Rapid-I en VitriSafe, nu blijken even effectief systemen inrichting 12, 13, 14 open zetten. MicroSecure VTF is een roman, aseptische verglazing techniek ontwikkeld met technische gemak, betrouwbaarheid en cryo-veiligheid in het achterhoofd. Door het combineren van het gebruik van twee eerder goedgekeurde, FDA-compatibele apparaten, het is een niet-commercieel verglazing systeem wet de duidelijke voordeel van een gevestigde goedkope, in tegenstelling tot gespecialiseerde machines. Daarnaast zijn unieke tamperproof en geïnternaliseerd dual-gekleurde labeling-systeem, evenals tal van andere kwaliteitscontrole voordelen hebben gemaakt mS-VTF een aantrekkelijke wereldwijde optie 11. Als een niet-commerciële VTF apparaat, echter, het wijdverbreide industrie applicatie wordt langzaam evolueert. Alleen door de voortdurende publicatie van de veiligheid, beveiliging en klinische effectiviteit zal mS-VTF gain groeiende gebruik. In augustus 2014 wanneer geconfronteerd met het onvermogen om de oorspronkelijke 0,3 ml embryo stro vervaardigd met een inwendige, niet-absorberende hydrofobe plug verkrijgen, konden we de pS-VTF methode betrouwbaar wijzigen. In het kort werden de nieuwe 0.3-mL sperma / embryo rietjes met hun katoenen-PVP pluggen effectief aangepast. Dit was gewoon bereikt door het creëren van een binnenste afdichting voor de katoen stekker, waardoor het voorkomen van contact en vocht wicking met deopen einde VTF tip (dat wil zeggen, de flexipette met het embryo of de eieren). Bovendien, als 40-mm ID staven zijn niet toegankelijk, het drijfvermogen probleem in verband met de lichtere 30-mm staven kunnen worden contragewichten met twee kogellagers. Deze extra maatregelen hebben de techniek iets minder eenvoudige zeer effectief gemaakt, maar toch. Vandaag de dag, de economie en de werkzaamheid worden steeds belangrijker problemen, zoals biopsie blastocysten meestal individueel worden verglaasd totdat hun euploidy status wordt bevestigd op een genetica rapport. Blastocysten met een bevestigde niet-levensvatbare aneuploidy staat meestal krijgen weggegooid, met toestemming van de patiënt, binnen enkele weken. Zo kan een meerderheid (&gt; 50%) van de VTF apparaten worden weggegooid na korte termijn opslag, het veroorzaken van een escalerende jaarlijkse kosten bij het gebruik van commerciële apparaten. Overall, uS-VTF is een zeer effectieve, betrouwbare en reproduceerbare werkwijze voor cryopreservatie van menselijke blastocysten. De superieure kwaliteit-control design securely labels en veilig opgeslagen embryo&#39;s / eicellen terwijl het elimineren van herstel mislukking en het optimaliseren van de post-warming overleven en de levensvatbaarheid, die het gebruik van het systeem als een universele benadering van embryo verglazing rechtvaardigt.

Vitrificatie is de meest invloedrijke geassisteerde reproductieve technologie in de in vitro fertilisatie (IVF) industrie sinds de ontwikkeling van intracytoplasmatische sperma-injectie. Vandaag de dag, blastocysten zijn gecryopreserveerd zonder verlies in levensvatbaarheid van het embryo eerder in verband met conventionele langzaam invriezen methoden 1. Met betrouwbare post-warming embryo te overleven, is de onvruchtbaarheid industrie transformeren in de gewenste gebruik van gecryopreserveerde embryo transfer cycli, die vergelijkbaar of hoger zwangerschapsuitkomsten dan de traditionele verse embryo transfer opleveren. In samenwerking met blastocyst biopsie en pre-implantatie genetische screening (PGS), is verglazing uitgegroeid tot een belangrijk klinisch hulpmiddel om gezonde live-geboorte resultaten te optimaliseren via euploid single embryo transfer 2, 3. Muizen-embryo verglazing werd ontwikkeld in het midden van de jaren 1980 4, </sup&gt; 5 en aangepast aan de veeteelt in 1990 6. Gebaseerd op de vooronderstelling dat oplossingen voor vitrificatie vormen een metastabiele toestand glasseous, zonder beschadiging ijs- kristalvorming, heeft bewezen de totale cellulaire integriteit van embryo efficiënter behouden. Interessant, heeft de veelbelovende acceptatie van vitrificatie in de menselijke embryologie niet beginnen te realiseren tot de 21 ste eeuw. Vroege publicaties bevorderen van verglazing samenviel met de ontwikkeling van unieke &quot;open&quot; systeemapparaten 7, 8, 9. Echter, de goedkeuring van vitrificatie in de klinische praktijk was traag, zoals het kwam op een moment dat verbeteringen in slow blastocyst invriezen werden ook optreedt. Succesvolle conventionele langzame snelheid invriezen, naast verglazing, in lijn gebracht met verbeteringen in kweeksystemen embryo, en met de incorporation van blastocoel-instortende benaderingen, die zowel de totale overleving van trophectoderm verbeterd en vervolgens 10 implantatie. In het laatste decennium, heeft verglazing technologie snel verdrongen conventionele bevriezing praktijken. Grotendeels, dit te wijten aan de ontwikkeling van gespecialiseerde inrichtingen verglazing. Sommige van deze apparaten zijn de algemene veiligheid, efficiëntie en effectiviteit van de klinische verglazing gehandicapt door het introduceren inherent ontwerpfouten naar apparaten die worden gebruikt in de IVF-industrie 11. Inderdaad, de nuances van verschillende voorzieningen teneinde aanzienlijke technische verschillen tussen programma&#39;s, meestal aangeduid als &quot;technische handtekeningen&quot; 12. Zo, wetenschappelijke tijdschriften, zoals het Journal of Gevisualiseerde Experiments (JoVE), kan dienen als een waardevolle bron voor het aantonen van de technische details, die zal bijdragen tot het resultaat variatie te verminderen. Een ander permanent probleem is dat some embryologen blijven worden geïnformeerd, zelfs vandaag de dag, op basis van beweringen dat de &quot;ultra-snelle afkoeling van embryo&#39;s of eicellen in een &#39;open verglazing system&#39; (dat wil zeggen, direct embryo contact met vloeibare stikstof (LN 2)) is een voorwaarde voor het optimaliseren slagingspercentages. &quot; Duidelijk dat deze overtuiging onjuist is, gebaseerd op het bewezen succes van aseptische gesloten systemen 13, 14, 15. Gebaseerd op de principes van cryobiological verglazing, de effectiviteit van vitrificatie is sterk afhankelijk opwarmsnelheden dan bij een koelsnelheid van 16, 17, 18. In het algemeen, onafhankelijk van de verglazing apparaat gebruikt, de snelheid van opwarmen moet de afkoelsnelheid overschrijden hoge overleving te verzekeren. Hoge opwarming zoveel mogelijk te beperken de mogelijkheid voor elke ijs groei (dwz de Recrystallization van kernen onzuiverheden in cryo-oplossingen) tijdens de ontglazing fase van de opwarming van de aarde. Toegegeven, kan de stabiliteit van de oplossing voor vitrificatie (dat wil zeggen de soort en concentratie van cryoprotectieve middelen toegepast) een verstorend effect, maar dit is in een afzonderlijk 11 publicatie. Gezien de cooling-warming rate issues, MicroSecure Vitrificatie (mS-VTF) is ontwikkeld in 2008 als een goedkope, niet-commerciële, FDA-compliant methode die het kwaliteitssysteem aspecten van vitrificatie geoptimaliseerd. Het was uniek in dat het aangeboden tamper-proof, geïnternaliseerd, dual-gekleurde labeling. Verder kan door het laden en opslaan van de embryo&#39;s direct in het steriele flexipette voor pipetteren (dus zonder pipetteren een secundaire inrichtingoppervlak) en met ionomere hars rietjes die volledig las afdichting een geautomatiseerd sealer, technische variatie is effectief geëlimineerd. Bij de beoordeling van de completeness van verglazing apparaten voor potentieel gebruik, zijn er verschillende kwaliteitscontrole factoren waarmee rekening moet worden gehouden, waaronder: 1) Het labelen van potentiële -Kan labels goed worden nageleefd? Zijn ze Tamperproof? Bieden ze dual-color identificatie potentieel? Is het een secundaire etiket vereist, en kan het etiket eenvoudig worden verwijderd voor administratieve doeleinden (dat wil zeggen, de patiënt verificatie) post-warming? 2) Technische gemak -Kan embryo&#39;s gemakkelijk worden geladen in / op het apparaat in een tijdig en eenvoudig geïdentificeerd en opgespoord post-warming? 3) Procedurele eenvoud / herhaalbaarheid -Heeft de verglazing methode aanbod eenvoud en betrouwbaarheid die gemakkelijk maakt voor de herhaalbaarheid, die de variatie tussen de technici (intern) en programma&#39;s (extern) minimaliseert? 4) LN 2 opslagcapaciteit eenvoudig en veilig -Kan de apparaten worden behandeld en geïdentificeerd? Is hun stowoeden potentiële ruimte efficiënt? Heeft het apparaat bieden veiligheid en zekerheid van fysieke schade of eventuele verontreinigingen als een aseptische gesloten systeem? 5) Herstel potentieel / Overlevingsvermogen -Is het apparaat ontwerp gevoelig zijn voor mogelijke problemen in de gegarandeerde herstel van de embryo&#39;s, en zullen ze betrouwbaar verglazen en onderhouden volledige cellulaire integriteit post-warming? De laatste specifieke kwaliteit van zorg, de recovery rate, daadwerkelijk is verrassend geminimaliseerd gepubliceerde rapporten; Dit wordt gedaan door het algemeen het verbergen van de ongunstige uitkomst (dwz verloren embryo of ei) in typisch goede overlevingskansen. Elk apparaat vatbaar voor inconsistent herstel (&lt;99%) is ernstig gebrekkig en vormt een procedurele verplichting. Onze aseptische, gesloten mS-VTF methode is strategisch ontwikkeld om rekening te houden voor elke kwaliteitscontrole maatregel. Echter, na 5 jaar van het klinisch succes en validatie 14 De procedure had to worden gewijzigd. De originele 0,3-mL embryo rietjes (het bezit van een hydrofobe plug) werden uit de IVF-industrie verwijderd en vervangen door een 0.3-mL sperma stro het bezit van een standaard katoen / PVP plug (dwz opnieuw gelabeld als een sperma / embryo stro). Deze procedurele document schetst de specifieke stappen en strategieën die nodig zijn om veilig, eenvoudig en effectief te implementeren mS-VTF. Verder hebben we aandacht voor de modificatie (s) die nodig is om op betrouwbare wijze rekening te houden met het aanbod beperkingen, totdat een alternatief ideale stro container terug in het klinisch laboratorium opnieuw ingevoerd.

```html
<table><tbody><tr><td>Aluminum Cane</td><td>IVM</td><td>XC055</td><td></td></tr><tr><td>Ball bearings, 3/32"</td><td>VXB.com</td><td>KIT15977</td><td>roestvrij staal</td></tr><tr><td>CBS semen/embryo straw, 0.3 mL</td><td>CryoBioSystems</td><td>25292</td><td>individueel steriel</td></tr><tr><td>Color, ID rods, 30 mm</td><td>CryoBioSystems</td><td>019021-26</td><td>gewogen</td></tr><tr><td>Culture tubes, 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352099</td><td>Conical</td></tr><tr><td>Culture tubes, 10 mL</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td>Snap-cap</td></tr><tr><td>Cryosleeves</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Filter, 250 mL</td><td>Fisher Sci.</td><td>09-740-2A</td><td>0,22 µm</td></tr><tr><td>Flasks, Tissue Culture 50 mL</td><td>Falcon</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Flexipettes, 300 µm ID</td><td>Cook Med.</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>Steriele, 20/verpakking</td></tr><tr><td>Forcep, Large</td><td>Miltex</td><td>6-30TC</td><td></td></tr><tr><td>Forcep, Splinter - fine</td><td>Miltex</td><td>17-305</td><td></td></tr><tr><td>Goblet</td><td>IVM</td><td>PA003</td><td></td></tr><tr><td>Heat Sealer, SYMS 1</td><td>CryoBioSystems</td><td>16399</td><td>110 V of 220 V met adapter</td></tr><tr><td>Hepes-buffered media&nbsp;</td><td>Life Global of</td><td>LGGH-100; 100&nbsp;mL, of</td><td>bewaard bij 2 - 8 &ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>H-HTF; 90126; 100 mL</td><td>met niet-essentiële AA's</td></tr><tr><td>Labels, Cryo</td><td>GA International</td><td>CL-23T1</td><td>Verschillende kleuren</td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen Tank, 40&nbsp;L</td><td>MVE of Taylor Warton</td><td>diverse</td><td>vloeibare opslag&nbsp;</td></tr><tr><td>LN2; Dewar flacon, 0.5&nbsp;L</td><td>Hampton Research</td><td>HR4-695</td><td>Roestvrij staal</td></tr><tr><td>6-well Custer Dishes</td><td>Biogenics</td><td>015/020</td><td>plasticware per doos</td></tr><tr><td>Pipette Bulb, Micro Cap</td><td>Drummond</td><td>Fisher#13681451</td><td>Gaatje op de top van de bulb</td></tr><tr><td>Petri Dishes, 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 58 mm</td><td>Nunc</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tips, ART long</td><td>Fisher Sci.</td><td>02-707-80</td><td>10 - 100 µL</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond of Falcon</td><td>diverse</td><td>oplaadbaar</td></tr><tr><td>Pipetting Device, Stripper</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 1&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 2&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 5&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 10&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>Scissors, Surgical Mayo</td><td>Miltex</td><td>5-SC-16</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Nikon, Olympus, Leica</td><td>diverse</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Gauze pads, 4" x 4"</td><td>Kendall Healthcare</td><td>6939</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic serum</td><td>Life Global, of</td><td>LGPS-20; 20 mL, of</td><td>bewaard bij 2 - 8 &ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>SS-99193; 12 x 10 mL</td><td>koop laag endotoxine lot</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Chemical Co.</td><td>#S9378</td><td>Aliquot in 50&nbsp;mL kolven, 1 jaar; 
17,1 g/kolf + Medium tot 50 mL; 
maakt een 1 M oplossing; 
Filter met 0,22 µm eenheid</td></tr><tr><td>Timer</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Thawing Solution</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-TS (&le;1,0 M Sucrose)</td><td>T1, T2, T3, T4; bewaard bij 2 - 8 &ordm;C gedurende &le;1 maand na opening</td></tr><tr><td>Vitrification Solution*,**</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-VS (&ge;7,9 M [Glycerol/EG])</td><td>V1, V2, V3; bewaard bij 2 - 8 &ordm;C gedurende &le;1 maand na opening</td></tr><tr><td colspan="4">* Niet-permeërende cryobeschermende additieven kunnen omvatten: sucrose, ficoll en natriumhyaluronaat&nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">** Andere commerciële preparaten zijn typisch ethyleenglycol (EG)/dimethylsulfoxide (DMSO; 30% v/v; 4,8 M), maar kunnen ook EG/propyleenglycol zijn (32% v/v; 5,2 M). Gemengde oplossingen worden meestal gebruikt om cryotoxiciteitszorgen van een hoge molare oplossing te verminderen. Commerciële oplossingen bevatten meestal een ES en VS oplossing. De formulering van commercieel preparaat is meestal eigendom van de fabrikant.</td></tr></tbody></table>
```

gewijzigd microsecure vitrificatie: een veilige, eenvoudige en zeer effectieve cryopreservatie procedure for human blastocysten

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

Klinische embryo verglazing geëvolueerd met de ontwikkeling van unieke verglazing apparaten in de 21 ste eeuw en met de misvatting dat ultra-snelle koeling in een &#39;open&#39; systeem (dat wil zeggen, direct LN 2 contact) was een noodzaak om vitrificatie succes te optimaliseren. Het dogma rond het belang van het koelen van de tarieven leidde tot onveilige praktijken onderworpen aan technische variatie en tot de oprichting van verglazing apparaten die belangrijke kwaliteitscontrole factoren (bijvoorbeeld, gebruiksgemak, herhaalbaarheid, betrouwbaarheid, veiligheid etikettering en opslag veiligheid) buiten beschouwing gelaten. Inzicht in de kwaliteitscontrole gebreken van andere apparatuur toegestaan ​​voor de ontwikkeling van een veilig, veilige, herhaalbare en betrouwbare mS-VTF methode gericht op intra- en inter-technicus variatie te minimaliseren. Net zo belangrijk is, combineerde de beschikbaarheid van twee bestaande FDA-compatibele apparaten: 1) een 0,3-mL ionomere hars embryo stro met geïnternaliseerde, dual-gekleurd, tamper-pdak labeling met herhaalbare las zegel potentieel; en 2) verkort, veelgebruikte, 300-um ID steriele flexipettes direct het embryo (en) te laden om een ​​zeer effectieve globale verglazing apparaat. Net als andere aseptische, gesloten verglazing systemen (bijvoorbeeld High Security Vitrificatie (HSV), Rapid-i, en VitriSafe) effectief gebruikt in de reproductieve geneeskunde, microSecure Vitrificatie (mS-VTF) heeft bewezen dat het een hoge post-warming overleven en zwangerschap kunnen bereiken uitkomsten met zijn aandacht voor eenvoud, en minder technische variant. Hoewel de 0,3 ml embryo stro met een intern hydrofoob plug commercieel werd vervangen door een standaard sperma rietje bezit katoen polyvinylpyrrolidon (PVP) stekkers, handhaafde de ionomere hars samenstelling te lassen sluiting te waarborgen. Echter, de katoen stekkers lont uit de vloeistof-embryo inhoud van de flexipettes bij contact. Een gemodificeerd pS-VTF methode werd aangepast om een ​​extra interne las omvattendichten alvorens de stekker van het apparaat laden kant. De toegevoegde technische stap naar de microsiemens-VTF procedure heeft geen invloed op haar succesvolle toepassing, zo hoog overlevingskansen (&gt; 95%) en zwangerschap tarieven blijven vandaag.

1341 verglaasd blastocysten werden opgewarmd tussen 2012 tot juni 2014, en 1341 embryo&#39;s gewonnen (100%), terwijl 1316 overleefde (98,1%). Biopsie blastocysten ervaren meer dan 99,5% overleving. Bij het overbrengen van voornamelijk single, genetisch getest, euploid, verglaasd embryo&#39;s, waren we in staat om een aantal van de hoogste implantatie tarieven en live geboortecijfers in de Verenigde Staten, onafhankelijk van de leeftijd te bereiken (figuur 3) 20, volgens recente nationale statistieken door het Centrum gemeld for Disease control en de Society for Assisted Reproductive Technologies (tabellen 1 en 2). Het evalueren van een goede prognose patiëntenpopulatie (minder dan 35 jaar oud) voor gecryopreserveerd cycli alleen (tabel 1), ons laboratorium beter gepresteerd dan het nationale gemiddelde voor zowel implantatie tarieven (dat wil zeggen, de efficiëntie van een embryo om een zwangerschap te vestigen) en uiteindelijk leven geboortecijfers<html> met meer dan 30%. Daarnaast is de initiële validatie / verificatie van onze gewijzigde opslag rietjes in mid-2014 met behulp van 70 onderzoek goedgekeurde, re-verglaasd aneuploïd blastocysten resulteerde in 100% herstel en 100% overleving. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig1.jpg" /> Figuur 1. MicroSecure VTF Setup. De VTF schotel (A) wordt geassembleerd met 3 verschillende rijen oplossingen voor vitrificatie die 3 druppels wash gebruiken vóór de introductie in afzonderlijke, genummerde bedrijf druppeltjes. Bovendien afzonderlijke pipetten met verkorte VTF uiteinden (dat wil zeggen 300-um ID flexipettes) zijn bevestigd en georganiseerd piepschuim buisrek (B), die kan worden geroteerd behoren werd gebruikt. Merk op dat een vertegenwoordiger van het besteedbaar micropipet bulb pipetteren assemblage rust op de piepschuim rek.<html> arget = &quot;_ blank&quot;&gt; Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig2.jpg" /> Figuur 2. Gemodificeerde Blastocyst Grading System. Onze aangepaste Gardner blastocyst beoordelingssysteem is goed voor de geïnduceerde hernia van TE cellen blastocyst biopsie te vergemakkelijken. De modificatie beschouwt de voortijdige uitkomen van volledige blastocysten (A: Grade 3 = minder dan 10% hernia) en geëxpandeerde blastocysten (B: Grade 4 = tot 50% hernia), terwijl een broed blastocyst (C) heeft van meer dan 50% herniatie 16. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> 54871fig3.jpg &quot;/&gt; Figuur 3. Vergelijkende zwangerschapsuitkomsten. Over een cumulatieve 1,5 jaar verricht, werden zwangerschap data vergeleken met de effecten van de overdracht-verglaasd opgewarmd euploid blastocysten beoordelen (n = 172 cycli / 144 transfers) in vergelijking met niet-PGS cycli (n = 160 cycli / 153 transfers) met voornamelijk verse overdraagt 18. Voor onze experimentele doeleinden, deze gegevens duidelijk blijkt dat biopsie blastocysten verglaasd door de microsiemens-VTF procedure hun levensvatbaarheid te behouden. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Databron </td><td> # Cycles </td><td> Bedoel # van embryo&#39;s </td><td> Implantatie tarieven (%) </td><td> Live geboortecijfers (%) </td></tr><tr><td> NB Lab * </td><td> 144 </td><td> 1.2 </td><td> 74.00% </td><td> 74.50% </td></tr><tr><td> Nationaal gemiddelde </td><td> 20.423 </td><td> 1.7 </td><td> 39,60% </td><td> 44.10% </td></tr><tr><td colspan="5"> * De gegevens werden gemiddeld op basis van de 2014 prestaties van Orange County Vruchtbaarheid, Zuid-Californië Fertility Center en de Zuid-Californië Centrum voor Reproductieve Geneeskunde clinics met de huidige Ovation Vruchtbaarheid laboratorium (NB Lab), die de microSecure vitrificatie procedure in 2008 opgericht. </td></tr></tbody></table> Tabel 1. 2014 CDC Assisted Reproductive Statistics. Bevroren embryo transfer zwangerschap gegevens van vrouwen jonger dan 35 jaar oud uit drie rapportage arts klinieken met behulp van onze NB Lab vergelijking met de VS 2013 nationale gemiddelde van meer dan 450 rapportage klinieken. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2"> SART nationale gemiddelden </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Clinic - Staat </td><td> Vrouw </td><td> Vrouw </td><td> Vrouw </td><td> Vrouw </td></tr><tr><td></td><td> &lt;35 jr </td><td> 35-37 yrs </td><td> 38-40 yrs </td><td> 41-42 yrs </td></tr><tr><td> SCCRM-CA * </td><td> 63,1% </td><td> 58,3% </td><td> 40,6% </td><td> 32,3% </td></tr><tr><td> CCRM-CO * </td><td> 64,7% </td><td> 61,5% </td><td> 40,4% </td><td> 32,2% </td></tr><tr><td> RMA-NJ * </td><td> 63,2% </td><td> 59,7% </td><td> 34,6% </td><td> 18,7% </td></tr><tr><td> Nationaal gemiddelde </td><td> 48,6% </td><td> 38,3% </td><td> 24,3% </td><td> 12,3% </td></tr><tr><td colspan="5"> SCCRM-Southern California Center for Reproductive Medicine; CCRM-Colorado Center for for Reproductive Medicine; en RMA-Reproductive Medicine Associates </td></tr><tr><td colspan="5"> * Deze vooraanstaande klinieken hebben alle voornamelijk uitgevoerd verglaasd embryo transfer cycli, in samenwerking met pre-implantatie genetische testen, in hun standaard praktijk van de zorg voor de patiënt om live geboorte succes per embryo getransplanteerd te optimaliseren. </td></tr></tbody></table> Tabel 2. 2014 Cumulatieve levende geboortecijfers, zoals gerapporteerd door de Society for Assisted Reproductive Technologies (SART), voor de SCCRM Clinic met behulp van onze Ovation Vruchtbaarheid Lab in Newport Beach, CA, in contrast met een aantal andere gerespecteerde programma&#39;s, alsook met de SART nationale gemiddelden.

MicroSecure Vitrification werd ontwikkeld als een niet-commercieel, aseptisch gesloten vitrificatieapparaatsysteem dat voldoet aan de FDA-normen voor goede fabricage- en weefselverwerkingspraktijken. Vanwege de terugtrekking van hydrofobe embryo-strohalmen met pluggen uit de industrie, werd de vitrificatieprocedure aangepast om een binnenste afdichting op te nemen vóór de standaard interne katoenen plug.

Gewijzigd MicroSecure Vitrificatie: Een veilige, eenvoudige en zeer effectieve cryopreservatie Procedure for Human Blastocysten

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

Het algemene doel van de MicroSecure embryo vitrificatiemethode is om een veilige, betrouwbare, eenvoudige maar effectieve aseptische gesloten vitrificatieprocedure voor menselijke embryo's te bieden. Deze methode is ontwikkeld om de kwaliteitscontrolevariabelen bij de vitrificatie van menselijke embryo's te minimaliseren, waardoor een betrouwbaar en reproduceerbaar succes wordt gegarandeerd. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het ernaar streeft technische variaties tussen biologen en laboratoria te elimineren.Onze techniek is zo eenvoudig uit te voeren dat we vinden dat de grootste uitdaging voor onze stagiairs is om te leren pipetteren van embryo's zonder ze te verliezen. Het idee achter onze methode was om de behoefte aan gespecialiseerde apparaten te elimineren door twee veel gebruikte FDA-goedgekeurde items aan te passen. Een intern gelabelde ionomeren opslagbuis en een steriele flexipet.Visuele demonstratie van deze techniek is uiterst nuttig omdat het de basistips benadrukt die zorgen voor een succesvolle toepassing. Plaats voor het begin van de procedure de steriele 0,3 ml zaadbuis op het teflonoppervlak van de elektrode van een eenvoudige tafelimpulssealer, net voor de plug, om een interne afdichting te creëren. Druk op de hendel om de warmte te activeren en laat de hendel los wanneer het rode licht is uitgeschakeld en een pieptoon wordt gehoord.Duwt vervolgens de katoenen plug naar voren tegen de binnenste afdichting voordat u de setup voltooit. Voor cryo-dilutie en blastocyst-belasting van de monsters, verwijder de patiëntenkweekschaal uit de incubator en bevestig alle monsteridentificaties met een secundaire bron. Gebruik onder een stereomicroscoop een vitrificatie flexipet, ook wel vit tip genoemd, om de blastocysten in afzonderlijke houdendruppels in de bovenste rij van een overeenkomstige cryoschaal te verplaatsen.Vul vervolgens de flexipet vooraf met 3 microliter V1-oplossing en doseer de helft van de inhoud op de eerste embryo. Aspireer het embryo en breng het over naar de eerste V1 wasdruppel. Pipetteer vervolgens het embryo twee tot drie keer rond de omtrek van de druppel en veeg de resterende pipetteninhoud buiten de druppel op het oppervlak van de schaal.Verplaats vervolgens de blastocyst naar een individuele V1 houdendruppel en preload de vit tip met de volgende V2 oplossing voordat u de extra embryo's pipetteert met een nieuwe vit tip. Na het wassen van alle blastocysten in de V2 en V3 druppels zoals net gedemonstreerd, veeg de resterende oplossing en bubbels van de vit tip buiten de V3 houdendruppel en vul de tip volledig met schone V3 oplossing van rond het eerste embryo. Spuit ongeveer 1 microliter van het volume weg en aspireer de blastocyst en de resterende V3 oplossing volledig in de vit tip.Verwijder nu de tip van de pipet en gebruik een steriele gaasdoek om de resterende V3 oplossing van de buitenoppervlakte van de vit tip te drogen. Het drogen van het buitenoppervlak van de tip is cruciaal en brengt geen extra risico op embryoverlies met zich mee. Steek vervolgens het tipuiteinde eerst in de open kant van de vooraf afgesloten buis en draai de buis om, labeleinde naar beneden.Observeer de tip bij de binnenste plug. Laat een luchtrui van 1 cm op het open uiteinde en verzegel het vervolgens veilig. Wanneer alle buizen zijn afgesloten, dompel ze direct in vloeibare stikstof in een roestvrijstalen dewar fles en bewaar de buizen in de open kelk bevestigd aan de patiëntencane.Plaats voor cryo-oplossing elutie en verdunning de overeenkomstige zes wel verdunningschaal in het midden van een stereomicroscoopplatform en een 60 mm petrischaal met een sucrose verwarmingsbad van 37 graden Celsius aan een zijde van de microscoop. Isoleer vervolgens de buis die moet worden verwarmd en houd de bovenste buisverbinding boven het vloeistofniveau om de identiteit van het monster te bevestigen. Gebruik mayo schaar om de buis onder de interne plug vast te zetten, om de vit tip ondergedompeld in de vloeibare stikstof te houden.Tik stevig met de schaar tegen de dewar fles om de tip los te maken van de binnenste buiswand als kwaliteitscontrolemaatregel en til de buis in de omgevingslucht in een horizontale oriëntatie naast of onder het stereoscoopoppervlak. Grijp het niet-gelabelde uiteinde van de buis, snijd de buis bij de binnenste plug. Til vervolgens de buis boven de verwarmingsbadschaal en giet de vit tip in het bad onder een hoek van 60 graden, totdat de tip volledig is uitgedrukt.De basis van de flexipet moet boven de wand van de schaal rusten. Na 5 tot 10 seconden, breng de basis van de pipet in een microcap pipetteerapparaat. Start een timer van vijf minuten.Terwijl u de microscoop bekijkt, gebruikt u een wijsvinger om het bulbgat te bedekken en knijpt u zachtjes in de bulb om de gevitrificeerd blastocyst uit de vit tip in de T1 was te laten vrijkomen. Na het bevestigen van de vrijlating van de blastocyst, veegt u de resterende V3 oplossing en bubbels weg door middel van positieve druk, waarbij u de inhoud in het midden van een ongebruikte wegwerpschaal evacueert. Breng de vit tip over op een sterber pipet en verplaats het embryo in de tweede T1 druppel onder olie gedurende de resterende vier minuten.Gedurende de incubatie, vult u de flexipet vooraf met de volgende oplossing en verdunt u de blastocyst in de T2, 3 en 4 druppels met intervallen van drie minuten. Eindelijk, brengt u de blastocysten in evenwicht in de T5 druppel gedurende vijf minuten op een oppervlak van 37 graden Celsius, voordat u ze terugbrengt naar de incubator. Het Gemodificeerde Gardner Blastocyst Grading System beschouwt volledige blastocysten als die met minder dan 10% herniatie van de trofectoderm cellen, terwijl blastocysten met maximaal 50% herniatie worden geclassificeerd als geëxpandeerd.Blastocysten die meer dan 50% herniatie vertonen, worden beschouwd als het uitkomen. Met behulp van de gedemonstreerde cryo-bewarings- en opwarmmethoden, zijn consistent hoge niveaus van levendgeborenen per cyclusstart bere

modified-microsecure-vitrification-safe-simple-highly-effective

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Een ethyleen-glycol-gebaseerde methode voor verglazing muis embryo's wordt beschreven. Is het voordelig om andere methoden in zijn eenvoud en lage embryonale toxiciteit, en kan dus worden breed toepasbaar voor vele stammen van muizen, met inbegrip van inteelt en gen-gemodificeerde muizen.

Invriezen van embryo&#39;s door Mouse Ethyleen Glycol-Based Vitrificatie

In this video, we demonstrate an ultra-rapid cryo vitrification method for preserving biological samples. The method entails the use of a combination of cryoprotectants to protect the biological tissue from freezing damage by preventing intracellular ice crystal formation.

Vitrification-based Cryopreservation: An Ultra-rapid Cooling Technique to Preserve Biological Specimens at Very Low Temperatures for Long-term Storage

In this video, we describe the procedure for vitrification of harvested rabbit embryos at desired development stage using ethylene glycol and dimethyl sulfoxide as cryoprotectants and cryogenic straw as the carrier system. The vitrified embryos have high survival rate and can be stored for an extended period until use.

Rabbit Embryo Vitrification Using Cryogenic Straw:  An Ultra-Rapid Cooling Technique to Preserve Rabbit Embryos for Long-term Storage

Assisted reproductieve technieken (ARTs) worden voortdurend geëvalueerd om de resultaten te verbeteren en de daaraan verbonden Risico's te verminderen. Dit manuscript beschrijft een minimaal invasieve embryotransfer procedure met een efficiënt cryopreservatie protocol dat het gebruik van konijnen als een ideaal dierlijk model van menselijke voortplanting toelaat.

Minimaal invasieve embryo transfer en embryo verglazing bij de optimale embryo fase in konijnen model

Hier presenteren we een time-lapse Morfometrische protocol te volgen van de intensiteit van de blastocyst krimp en re-expansie tijdens previtrification interventies en na opwarming van de aarde herstel. De toepassing van het protocol is mogelijk in in vitro bevruchting laboratoria die toegerust zijn met time-lapse microscopen en wordt aanbevolen bij de ontwikkeling van een optimale blastocyst verglazing methode.

Morfometrische Protocol voor de objectieve beoordeling van de Blastocyst gedrag tijdens verglazing en opwarming van de aarde stappen

Blastocyst biopsie en vitrificatie zijn vereist voor het efficiënt uitvoeren van preimplantatie genetische testen. Een aanpak die de sequentiële opening van de zona pellucida en het ophalen van 7-8 trophectoderm cellen in dag 5-7 post-inseminatie beperkt zowel het aantal benodigde manipulaties en de blootstelling van het embryo aan suboptimale omgevingscondities.

Menselijke blastocyst biopsie en vitrificatie

Dit manuscript beschrijft een protocol voor de minimale volume vitrification van onrijpe katoocyten met laboratorium-gemaakte media op commerciële steunen. Het dekt elke stap van eicelisolatie van ex vivo gonaden tot vitrificatie en opwarming.

Minimale volume vitrificatie van onvolwassen feline oocyten

Oöcyt cryopreservatie wordt erkend door verschillende internationale wetenschappelijke verenigingen als de gouden standaard voor vruchtbaarheidsbehoud bij postpubertale vrouwen. De aangewezen klinische en laboratoriumstrategieën verzekeren maximumeffectiviteit, efficiency, en veiligheid van vruchtbaarheidsbehoudsbehandelingen.

Vruchtbaarheidsbehoud door oöcyt vitrificatie: klinische en laboratoriumperspectieven

Het protocol is gericht op het bieden van een standaardmethode voor de vitrificatie van volwassen en juveniele schapenoöcyten. Het omvat alle stappen van de bereiding van de in vitro rijpingsmedia tot de post-opwarmingscultuur. Oöcyten worden in het MII-stadium ge verglaasd met behulp van Cryotop om het minimale essentiële volume te garanderen.

Vitrificatie van in vitro gerijpte oöcyten verzameld uit volwassen en prepubertale eierstokken bij schapen

Een protocol voor de vitrificatie van eierstokweefsel, als een alternatieve cryopreservatiemethode voor het veelgebruikte langzame invriesprotocol, wordt gepresenteerd.

Verglazing van het weefsel van de eierstokschors om een glazige staat van aggregatie te bereiken

Hier presenteren we het Spatel Montevideo-protocol voor het vitrificeren van pre-implantatie-embryo's bij muizen en schapen, bestaande uit een zelfgemaakte spatel en met behulp van zelfgemaakte oplossingen. Embryo's worden snel in evenwicht gebracht in twee cryoprotectieve oplossingen van toenemende concentratie, op de spatel geladen, ondergedompeld in vloeibare stikstof en ten slotte verzegeld met een rietje van 0,5 ml.

Spatel Montevideo Apparaat voor de verglazing van embryo's van zoogdieren

Leer de MicroSecure Vitrificatie methode voor veilige cryopreservatie van menselijke blastocysten. Deze eenvoudige techniek minimaliseert variaties tussen laboratoria en verbetert succespercentages aanzienlijk.

Gewijzigd MicroSecure Vitrificatie: Een veilige, eenvoudige en zeer effectieve cryopreservatie Procedure for Human Blastocysten

Meer video's verkennen