Name: Met behulp van de mouw techniek in een muismodel van aorta transplantatie - een instructie Video (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Leer de mouwtechniek voor orthotopische aortatransplantatie bij muizen. Deze methode maakt snelle anastomose mogelijk en ondersteunt onderzoek naar vasculaire ziekten in genetisch gemanipuleerde muizen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We zouden graag bedanken Roma Wieczorek en Peter Kurdybacha voor hun uitstekende bewerken hulp, en Leon Decker en Uli Heuter voor hun uitstekende technische bijstand.

procedures met betrekking tot dierlijke onderwerpen werden goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) op de RWTH Aachen University, AZ 84-02.04.2012.A234.
 Opmerking: de procedure is aangetoond door middel van volwassen mannelijke wild type muizen met CD1 achtergrond. Houd de muizen in een gespecialiseerd laboratorium eenheid vóór en na de operatie, verzekeren van toegang tot voedsel, gespecialiseerde veterinaire controle en behandeling. Als de dieren worden gekocht van buiten het toestaan van één week acclimatisatie vóór het uitvoeren van chirurgie.
 1. voorbereiding van de Donor <ol><li>gebruik van steriele materialen en instrumenten te handhaven van de steriele omstandigheden tijdens de operatie te voorkomen infecties.</li>
	<li>Anesthetize elke muis met een mengsel van 1,5% door volume Isofluraan en 100% zuurstof via een gezichtsmasker. Leg de muis op een platform in de liggende positie en tape alle haar benen op de operatietafel. Controleer de reflexen door knijpen de achtervoeten om er zeker van te zijn dat de muis voldoende is verdoofd. Plaats van oogheelkundige zalf op de ogen om te voorkomen dat tijdens de procedure drogen.</li>
	<li>Verwijder alle haren uit de buik met behulp van een ontharende gel of gebruik van een scheerapparaat. Het uitvoeren van de bewerking onder steriele omstandigheden. Ontsmetten van de buik met afwisselende scrubs van chloorhexidine en steriel water.</li>
	<li>Verwijder de aorta donor via een middellijn abdominale incisie met schaar of scalpel. Intrekken van de darm handmatig naar rechts. Zachtjes handmatig weerspiegelen de darmen aan de kant met behulp van de gratis handschoenen poeder.
	<ol><li>Plaats van de darm op een stuk gaas bevochtigd met zoutoplossing om het te houden vochtige.</li>
		<li>Ontleden weg de abdominale aorta zeer zorgvuldig uit het omringende weefsel met behulp van een botte dissectie met een pincet.</li>
		<li>Scheiden van het segment van de aorta tussen de renale bloedvaten en de bifurcatie uit de vena cava met een pincet.</li>
		<li>Beveiligen van alle kleine takken van dit segment zeer zorgvuldig met 11-0 enkel monofilament hechtdraad.</li>
		<li>Voor het verwijderen van de aorta, injecteren 0.5 milliliter (mL) van zoutoplossing met 50 U van heparine in de vena cava inferior.</li>
		<li>Laat het donordier nadat het segment van de aorta is verwijderd exsanguinate.</li>
		<li>Spoel van de prothese volledig met zoutoplossing en vervolgens onverwijld overbrengen naar een container ijskoude zoutoplossing.</li>
	</ol></li></ol> 2. Voorbereiding van de ontvanger <ol><li>Anesthetize van het ontvangende dier met een mengsel van 1,5% door volume Isofluraan en 100% zuurstof via een gezichtsmasker, dan verwijderen van de haren en desinfecteren (afdeling 1). Maak een incisie van de middellijn van de xiphoid aan het bekken met een scalpel en intrekken van de abdominale muren. Ophthalmic zalf op de ogen om te voorkomen dat droogte tijdens de procedure plaats.</li>
	<li>Wrap de darm in zoutoplossing vochtig gaas en verdringen heel voorzichtig aan het dier &#39; s juiste.</li>
	<li>Ontleden de aorta infrarenal gratis proximally tussen de renale bloedvaten en de bifurcatie distally met een pincet.</li>
	<li>Beveiligen van alle kleine takken van dit segment zeer zorgvuldig met 11-0 enkel monofilament hechtdraad.</li>
	<li>Klem van de proximale en distale delen van de aorta met een 6-0 één zijde hechtdraad.</li>
	<li>Verdelen van de aorta in het midden tussen de klauwen en de gesneden eindigt met EDTA zoutoplossing te spoelen het lumen open irrigeren.</li>
	<li>Plaats de prothese in de positie van de orthotopic met het voederen vaartuig einde ingevoegd van het ontvangende vaartuig gevolgd door wordt met 11-0 monofilamenten verzorgen om te voorkomen dat eventuele torsie van de aorta door het correct uitlijnen van de donor en de ontvanger) Figuur 1) 10.</li> <li>zorgvuldig de ligaturen release na het uitvoeren van een inspectie van de anastomose. De distale klem eerst vrijgeven. Dit resulteert in lage druk houden van de wanden samen voorafgaand aan het vrijgeven van de proximale hogedruk zijde.</li>
	<li>Perfuse de prothese onmiddellijk en controleren op een zichtbare impuls. Verwijder voorzichtig de overblijfselen van de zijde. De lengte van de optimale overlap tussen donor en ontvanger aorta is 1-2 mm.</li>
	<li>De buik inhoud terug te keren naar de buikholte en sluit de hele wond met een lopende 3-0 polyglycolic zuur hechtdraad.</li>
	<li>Geven de muis buprenorfine (0,05 mg/kg lichaamsgewicht subcutaan (SC)) vóór de beëindiging van de anesthesie.</li>
	<li>Laat geen een dier zonder toezicht totdat het volledig bij bewustzijn. Beheren van pijn therapie met buprenophine 0,05 mg/kg lichaamsgewicht toegediend SC drie keer per dag gedurende drie dagen na de operatie zoals goedgekeurd door het lichaam van de institutionele toezicht.</li>
	<li>Voor weefsel oogsten, anesthetize de ontvangende muizen als hierboven beschreven en flush de vaartuigen met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) gevolgd door 4% formaldehyde/PBS, (pH = 7.4) door cardiale punctie. Verwijder voorzichtig de transplantaten. Na overnachting fixatie in 4% formaldehyde/PBS, proces monsters verder en inbedden in paraffine.</li>
</ol>

<ol><li>Rowinska, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-+invasive+in+vivo+analysis+of+a+murine+aortic+graft+using+high+resolution+ultrasound+microimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Radiol%22%5BJournal%5D)">Non- invasive in vivo analysis of a murine aortic graft using high resolution ultrasound microimaging.</a> Eur J Radiol. 81 (2), 244-249 (2012).</li>
<li>Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse models of atherosclerosis.</a> Am J Med Sci. 323 (1), 3-10 (2002).</li>
<li>Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+arteriosclerosis%3A+from+arterial+injuries+to+vascular+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts.</a> Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+.Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc .Biol. 24 (3), 429-434 (2004).</li>
<li>Zernecke, A., Shagdarsuren, E., Weber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+in+atherosclerosis%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemokines in atherosclerosis: an update.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (11), 1897-1908 (2008).</li>
<li>Chereshnev, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+heterotopic+aortic+arch+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation.</a> J Surg Res. 111 (2), 171-176 (2003).</li>
<li>Koulack, J., McAlister, V. C., Giacomantonio, C. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+aortic+transplant+model+of+chronic+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection.</a> Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).</li>
<li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li>
<li>Baxter, K., Hao, P. M., Howden, B. O., Saunder, A., Jablonski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+technique+of+abdominal+heart+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Modified technique of abdominal heart transplantation in the rat.</a> J Heart Lung Transplant. 17 (11), 1057-1064 (1998).</li>
<li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice%3A+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J Heart Lung Transplant. 18 (10), 946-951 (1999).</li>
<li>Siemionow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathology+of+microarterial+anastomoses%3A+end-to-end+versus+end-in-end+%28sleeve%29+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Histopathology of microarterial anastomoses: end-to-end versus end-in-end (sleeve) technique.</a> J Hand Surg Am. 15, 619-625 (1990).</li>
<li>Charo, I. F., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+many+roles+of+chemokines+and+chemokine+receptors+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation.</a> N Engl J Med. 354 (6), 610-621 (2006).</li>
<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18 (6), 368-371 (1998).</li>
<li>Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice+for+the+study+of+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease.</a> J Vis Exp. (69), e4338(2012).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Voorafgaand aan deze studie werden verschillende andere modellen van transplantatie in muizen grondig geanalyseerd3,6,7,10,13,14. Het model van de aorta transplantatie met behulp van de techniek van de mouw met wijzigingen door Dambrin et al. werd geselecteerd als het gevonden die aan onze criteria en een hoge betrouwbaarheid van de mouw anastomosis in vergelijking met conventionele end-to-end hechtdraad methoden toonde 1 , 10.
Deze techniek is in vele opzichten gunstig met kruis-clamp tijd aanzienlijk verminderd minimaliseren van de schade aan de aorta tijdens de operatie. Een lage incidentie van trombose werd waargenomen naast het vermijden van een potentiële mismatch in vaartuig kaliber tussen de donor en de ontvanger. De bovenstaande opmerkingen maken deze techniek zeer geschikt voor onderzoek naar vaatziekten in aorta transplantaties in muizen.
In een follow-up studie waarin werd een echografie uitgevoerd 8 weken na de transplantatie, werden geen significante veranderingen waargenomen. Dit bevestigd veronderstellingen dat schade aan de aorta tijdens de operatie zou minimaal1.
De praktijk procedure gepresenteerd in dit artikel garandeert geen bijzondere waardevermindering zowel in de integriteit van de graft en de functie daarvan. Daarom kan worden geconcludeerd dat dit experimentele transplantatie model als een waardevol instrument voor toekomstige moleculaire en farmacologische onderzoek van degeneratieve vaartuig ziekte bij genetisch gemodificeerde muizen dienen kan.
Wij geloven dat de video-gids als lesmateriaal ter illustratie van het gebruik van dit eenvoudige arterio-arterial model functioneren en kan dat het aan een verdere vruchtbare debat over vele belangrijke kwesties in vasculaire pathologieën bijdragen zal. Deze zeer snelle wapendrager-methode kan worden gebruikt om te studeren vasculaire ziekte bij genetisch gemodificeerde muizen. Het kan ook worden gebruikt als een wijziging in het aneurysma model gecombineerd met transplantatie.
Er zijn kritische punten tijdens de procedure. Het plaatsen van de hechtdraad zelf is de meest kritische stap. De chirurg heeft te verzorgen om te voorkomen dat eventuele torsie van de aorta door de juiste uitlijning van donor en ontvanger. De klemmen zijn zorgvuldig verwijderd na inzage van de anastomose. De distale klem moet altijd eerst wat resulteert in lage druk houden van de wanden samen voorafgaand aan de release van de proximale hogedruk zijde worden vrijgegeven. Het gevolg van het niet goed na de reeks van versie zou worden bloeden.

Zoals opgemerkt in een eerdere studie, is veel aandacht besteed aan lymfkliertest aorta transplantatie modellen waarmee discriminatie tussen specifieke vasculaire reacties veroorzaakt door de prothese zelf en bepaalde systemische factoren die verband houden met een arteriogenic omgeving 1 , 2 , 3. de belangrijkste factor die hier een cruciale rol speelt is de beschikbaarheid van knock-out en transgene muizen. Hun betrokkenheid bij een dergelijk model biedt de mogelijkheid om te identificeren en bepalen van nieuwe pathofysiologische trajecten in verband met de ontwikkeling van degeneratieve vaatziekten, zoals atherosclerose en aneurysma vorming4, 5.
Het is vermeldenswaard dat tijdens de enting een intrinsieke ischemie/reperfusie letsel aan de vaartuigen die bestemd zijn voor de transplantatie weergegeven. Dus, het voorkomen van specifieke problemen met de integriteit van de prothese of een onverwachte ontstekingsreactie in de postoperatieve periode kan niet worden uitgesloten eventueel uitschakeling pathofysiologische veranderingen in degeneratieve vasculaire ziekten3 ,4,5,6,7. Mouw wapendrager is de alternatieve methode in eind voor arteriële wapendrager van vaartuigen met een diameter van minder dan een millimeter en is met succes toegepast in de nier- en cardiale transplantatie bij ratten die werd vervolgens aangepast op aorta transplantatie in muizen door Dambrin et al. 8 , 9 , 10 , 11.
Aorta schade met behulp van de mouw transplantatie techniek wordt geminimaliseerd met een zeer lage technische mislukkingstarief, te wijten aan het duurzame gemiddeld slechts 20 min. De resultaten van onze vorige hebben uitstekende functionele en structurele eigenschappen van een isograft in vivo aangetoond na de transplantatie die met behulp van de mouw techniek1. Dambrin et al. beschrijven die na een korte leercurve het slagingspercentage was meer dan 78%10. Complicaties zoals trombose zijn zeldzaam, bijvoorbeeld Engelbrecht et al. deed niet observeren trombose met behulp van de mouw techniek in niertransplantatie in de rat8.
Het model van de lymfkliertest aorta transplantatie met mouw anastomoses is een snelle en eenvoudige tool om te studeren van iso/allograft reacties in het getransplanteerde vaartuig. Deze video toont de aorta transplantatie procedure uitgevoerd in ons laboratorium. Dit model van de transplantatie kan nuttig zijn bij het bepalen van de pathologische mechanismen van vasculaire degeneratieve ziekte en kan bijdragen aan de verdere evaluatie van moleculaire en farmacologische interventies12.

<table><tbody><tr><td>Halsey Needle Holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps -</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Lexer-Baby Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Micro Needle Holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Scissors</td><td>Aesculap, Germany</td><td>Typ OC498R</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Suture Forceps</td><td>Geuder, Germany</td><td>19015</td><td></td></tr><tr><td>6-0 silk black (Silk)</td><td>Deknatel, Research Triangle Park NC, USA</td><td>18020-60- FST</td><td></td></tr><tr><td>11-0 monofilament (Ethilon)</td><td>Ethicon, Norderstedt, Germany</td><td>EH7438G</td><td></td></tr><tr><td>3-0 polyglycolic acid suture (Serafit)</td><td>Serag-Wiessner, Naila, Germany</td><td>60203214</td><td></td></tr><tr><td>Isofluorane</td><td>Any genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Any genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.9% saline</td><td>Any genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Any genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bepanthene eye and nose cream</td><td>Bayer, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscop</td><td>Zeiss</td><td>Opmi MDO/S5</td><td></td></tr><tr><td>Vaporiser</td><td>Eickemeyer</td><td>TEC3</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound</td><td>Vevo, Canada</td><td>770,2100</td><td></td></tr></tbody></table>

met behulp van de mouw techniek in een muismodel van aorta transplantatie - een instructie video

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Aorta transplantatie Orthotopic met behulp van de mouw techniek vermindert schade aan de aorta met mislukkingstarief van slechts 10-20%. De tijd om de aorta in muizen met behulp van de methode mouw anastomose was kort en gemakkelijk gemiddeld 20 min, studies van iso/allo transplantaten toelaat. Het volgende artikel beschrijft de procedure van de aorta transplantatie gebruikt in ons laboratorium. De muizen waren verdoofd met een mengsel van 1,5% volume Isofluraan en 100% zuurstof via een gezichtsmasker. Op dit punt, het segment van de aorta tussen de renale bloedvaten en de bifurcatie werd gescheiden van de vena cava, vrij bereid en clampedat de proximale en distale segmenten met een enkele zijde hechtdraad. Voorafgaand aan de verwijdering van de aorta, werd een zoutoplossing met heparine geïnjecteerd in de vena cava inferior. Vervolgens de aorta werd gesneden tussen de klauwen en een zoutoplossing heparine oplossing werd gebruikt voor het spoelen van de lumen. De techniek van de mouw met monofilamenten hechtingen werd gebruikt om te planten van de abdominale aorta in de positie van de orthotopic.

De muizen verhaald verdoving binnen 15-30 min met geen waargenomen fysieke bijzondere waardevermindering, hoewel er een verhoogd risico op trombose. Echografie analyse was opgebruikt tijdens postoperatieve volgen. De wild type muizen gebruikt in de studie toonde geen wijzigingen in de afmetingen van hun lumen. Dienovereenkomstig, stenoses noch aneurysmal formaties werden waargenomen. De transplantatie-dieren niet vertonen plaque ontwikkeling van wanden (Figuur 2).
Conventionele kleuring procedures zoals immunohistology kunnen worden gebruikt om te bepalen van de plaque, patroon van de zachte spiercellen en accumulatie van macrofagen. In onze studie de histologische en immunohistochemische kleuring 6 weken na het enten om te testen van de integriteit van de prothese werd uitgevoerd. Histologische kleuring (haematoxyline en eosine (HE) en immunohistochemische kleuring (Smooth Muscle actine (SMA) en Macrophage (MAC2)) (Figuur 3) toonde ons ongewijzigd distributiepatronen van zachte spiercellen, intact endothelial cel voering, en geen accumulatie van cellen in de intima. Deze bevindingen wijzen erop dat er geen significante laesie of cel activatie is gevonden in de geënte vaartuigen (Figuur 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54915/54915fig1.jpg"> 
Figuur 1 : Techniek sleeve. De abdominale aorta was getransplanteerd met behulp van de techniek van de mouw. In deze procedure, werd van de donor aorta geplaatst in de positie van de orthotopic met oppervlakkige beten in de voeding vaartuig aanwezig. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54915/54915fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54915/54915fig2.jpg"> 
Figuur 2 : Intraoperatieve en echografie beelden. Voorbeelden van de intraoperatieve (necropsie) weergave van de transplantaten 6 weken na de transplantatie (A), de drie-dimensionale echografie (B) en B-wijzemening (C). De postoperatieve follow-up werd uitgevoerd met behulp van echografie. De foto's tonen de bij van de prothese met geen verandering in lumen dimensies. Bovendien werden geen stenoses of aneurysmal formaties waargenomen. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54915/54915fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54915/54915fig3.jpg"> 
Figuur 3 : Histologische en beelden van immunohistochemistry. De histologische en immunohistochemistry vertegenwoordiger beelden van getransplanteerde dieren op 6 weken na de transplantatie. Geen significante laesies werden waargenomen in getransplanteerde aortas door histologie (haematoxyline en eosine, hij, 100 X vergroting, schaal bar = 50 µm), immunohistochemische kleuring (gladde spieren actine SMA (rood) of Macrophage MAC2 (groen), 200 X vergroting, schaal bar = 25 µm). Kernen werden tegen gekleurd door DAPI (blauw). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54915/54915fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

Presenteren we een orthotopic aortaklep transplantatie model met behulp van de mouw techniek in muizen. Het is een zeer snelle wapendrager-methode, die kan worden ingezet in studies van vasculaire ziekte.

Met behulp van de mouw techniek in een muismodel van aorta transplantatie - een instructie Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Bij deze procedure wordt de aorta van de donor in de orthopneuïsche positie geplaatst en worden oppervlakkige beten genomen in het voedende vat. Verdoof de muizen met een mengsel van 1,5 volumeprocent isofluraan en 100% zuurstof via een gezichtsmasker. Leg de muis op een platform in de rugligging en plak alle poten op de operatietafel.Plaats oftalmische zalf op de ogen om uitdroging tijdens de procedure te voorkomen. Controleer de reflexen door de achterpoten te knijpen om er zeker van te zijn dat de muis voldoende verdoofd is. Verwijder al het haar van de buik.Breng een ontharingscreme aan of gebruik een scheerapparaat. Voer de operatie uit onder steriele omstandigheden. Desinfecteer de buik.Om de donor-aorta te verwijderen, maak een middenlijn buiksnede en trek het darm manuele naar rechts. Weerkaat de darmen voorzichtig naar de zijkant met poedervrije handschoenen. Leg de darmen op een stuk gaas geweekt in zoutoplossing om ze vochtig te houden.Dissecteer de abdominale aorta heel voorzichtig los van het omliggende weefsel met een stompe dissectie met pincetten. Dissecteer het segment van de aorta tussen de nierarterie en de bifurcatie van de vena cava met de pincetten. Bevestig alle kleine takken van dit segment met een 11-0 monofilament enkele hechting.Voordat de aorta wordt verwijderd, injecteer 0,5 milliliter zoutoplossing met 50 eenheden heparine in de inferieure vena cava. Laat het donordier uitbloeden voordat het segment van de aorta is verwijderd. Spoel het transplantaat volledig met zoutoplossing en plaats het daarna onmiddellijk in een bak met ijskoude zoutoplossing.Om de ontvanger voor te bereiden, verdoof het dier via een gezichtsmasker, verwijder het haar en desinfecteer zoals hierboven, en maak een middenlijn incisie van het borstbeen tot het bekken met een scalpel. Trek de buikwanden terug met retractoren. Wikkel de darmen in met gaas geweekt in zoutoplossing en verplaats ze heel voorzichtig naar rechts van het dier.Dissecteer de infrarenale aorta vrij tussen de nierarteries proximal en de bifurcatie distaal met de pincetten. Bevestig alle kleine takken van dit segment met een 11-0 monofilament enkele hechting. Klem de proximale en distale delen van de aorta via een 6-0 enkele zijden hechting.Deel de aorta in het midden tussen de klemmen en irrigeer de gesneden uiteinden met heparine zoutoplossing om het lumen open te spoelen. Plaats het transplantaat in de orthopneuïsche positie. Voer de anastomose uit met behulp van de mouwtechniek met hechtingen met 11-0 monofilament.Met deze methode wordt het uiteinde van het voedende vat in het ontvangende vat geplaatst. Plaats het uiteinde van de infrarenale ontvanger-aorta binnen het proximale uiteinde van de donor-aorta. Voer de distale anastomose op dezelfde manier uit.Plaats het distale uiteinde van de donor-aorta binnen het distale uiteinde van de ontvanger-aorta. Zorg ervoor dat de aorta niet gedraaid wordt door de perfecte uitlijning van donor en ontvanger aorta te waarborgen. Het moment van het loslaten van de klem is een zeer belangrijke stap van de procedure en moet heel voorzichtig worden uitgevoerd.Na controle van de anastomose, laat de klemmen los. Laat eerst de distale klem voorzichtig los, gevolgd door de proximale klem. Op deze manier is er lage druk om de wanden bij elkaar te houden voordat de kant met hoge druk wordt losgelaten.Het transplantaat wordt onmiddellijk geperfundeerd en een puls is zichtbaar. Verwijder voorzichtig de restanten van de zijde. Plaats de buikinhoud terug in de buikholte en sluit de wond met een doorlopende 3-0 polyglycolzuur hechting.Toedien buprenorfine 0,05 milligram per kilogram aan de muis voordat de anesthesie wordt beëindigd. We presenteren de voorbeelden van de necropsie foto's van het transplantaat zes weken na transplantatie en zijn driedimensionale en B-modus ultrageluidsbeeld. De foto's tonen de doorlaatbaarheid van het transplantaat.Er zijn geen veranderingen in lumendimensies zichtbaar in het transplantaat. Bovendien hebben we geen stenose of aneurysmale formaties gevonden. We hebben geen significante laesies waargenomen in getransplanteerde aorta's door histologische en immunohistochemische kleuring.De kernen werden tegengekleurd met DAPI. Kortom, deze zeer snelle anastomosemethode zou kunnen worden gebruikt om vasculaire ziekten te bestuderen in genetisch gemodificeerde muizen.

using-sleeve-technique-mouse-model-aortic-transplantation-an

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We beschrijven een techniek waarbij een deel van de abdominale aorta van een muis getransplanteerd orthotopically is om net onder de nierslagaders in een allogene of syngene ontvanger. Deze techniek kan nuttig zijn in studies waarin transplantatie van grote slagaders van gelijke grootte is als voordelig.

Orthotope Aorta Transplantatie in Muizen voor de Studie van vasculaire aandoeningen

We beschrijven protocollen voor onze muis graft arteriosclerois (GA) modellen die tussenkomst van een muis bloedvatsegment betrekken in een ontvanger van dezelfde inteeltstam. Door terugkruisen extra genetische veranderingen in het vat donor kan het model het effect van specifieke genen op GA beoordelen.

Muismodellen voor Graft Arteriosclerosis

Het murine cervicale harttransplantatie model is geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade studies. We pasten de procedure met een niet-hechtingsmanchet techniek en uitgevoerd meer dan 1000 succesvolle transplantaties met deze benadering.  Hierin geven we meer details van deze techniek om de video te vullen.

Muizen Baarmoederhalskanker harttransplantatie Model met een aangepaste manchet Techniek

Het manuscript beschrijft de stappen die nodig zijn om de heterotopische harttransplantatie uit te voeren in de muis.

Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek

We beschrijven een protocol voor aortische interpositie-grafting bij muizen. Het doel van het protocol is om een model te bieden waarmee pathologische processen en therapeutische strategieën kunnen worden bestudeerd die relevant zijn voor allo-immuunreacties in slagaders en de resulterende arteriële veranderingen die bijdragen aan falen van orgaantransplantatie.

Mouse Model van Allo-immuun geïnduceerde Vascular Afwijzing en Transplant Aderverkalking

De manchettechniek verkort en vergemakkelijkt het model van heterotope cervicale harttransplantatie bij muizen door technisch uitdagende hechtingsanastomosen van kleine bloedvaten te vermijden. De technische details die in dit videopapier worden getoond, zouden onderzoekers in staat moeten stellen dit model in hun laboratoria tot stand te brengen.

Heterotopische Cervical harttransplantatie in Muizen

Het doel van dit protocol is te beschrijven stap voor stap de techniek van minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing (TAC) in muizen. Door eliminatie van intubatie en ventilatie die verplicht is voor de gebruikte standaardprocedure zijn, minimaal invasieve TAC vereenvoudigt de operatieve procedure en vermindert de stam het dier op te zetten.

Techniek van minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing in muizen voor inductie van links ventriculaire hypertrofie

Hier presenteren we een protocol van heterotopische aorta transplantatie in muizen met behulp van de niet-hecht manchet techniek in een cervicale Murine model. Dit model kan worden gebruikt om de onderliggende pathologie van chronische transplantaat vasculopathie (CAV) te bestuderen en kan helpen bij het evalueren van nieuwe therapeutische middelen om de vorming ervan te voorkomen.

Murine cervicaal aorta transplantatie model met behulp van een gemodificeerde niet-hecht manchet techniek

We introduceren een binnenband benadering van de manchettechniek voor muis cervicale heterotopische harttransplantatie om evert het vat over de manchet te helpen. We ontdekten dat de samenwerking tussen twee ervaren chirurgen de operatietijd aanzienlijk verkort.

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

In het huidige protocol wordt een muisharttransplantatiemodel gebruikt voor het onderzoeken van het mechanisme van cardiale allograftafstoting. In dit heterotope harttransplantatiemodel wordt de operatie-efficiëntie verbeterd en wordt de overleving van harttransplantaten verzekerd door een cervicale end-to-end anastomose van hartimplantatie met behulp van een gemodificeerde Cuff-techniek.

Een aangepaste manchettechniek voor muis cervicaal heterotopisch harttransplantatiemodel

Harttransplantatiemodellen bij muizen vertegenwoordigen waardevolle onderzoeksinstrumenten voor het bestuderen van de immunologie van transplantaties. Het huidige protocol beschrijft muis heterotopische cervicale harttransplantatie waarbij manchetten op de gemeenschappelijke halsslagader van de ontvanger en de longslagaderstam van de donor worden geplaatst om laminaire bloedstroom mogelijk te maken.

Muis heterotopische cervicale harttransplantatie met behulp van vasculaire manchetten

Leer de mouwtechniek voor orthotopische aortatransplantatie bij muizen. Deze methode maakt snelle anastomose mogelijk en ondersteunt onderzoek naar vasculaire ziekten in genetisch gemanipuleerde muizen.

Met behulp van de mouw techniek in een muismodel van aorta transplantatie - een instructie Video

Meer video's verkennen