Met behulp van de mouw techniek in een muismodel van aorta transplantatie - een instructie Video

Bij deze procedure wordt de aorta van de donor in de orthopneuïsche positie geplaatst en worden oppervlakkige beten genomen in het voedende vat. Verdoof de muizen met een mengsel van 1,5 volumeprocent isofluraan en 100% zuurstof via een gezichtsmasker. Leg de muis op een platform in de rugligging en plak alle poten op de operatietafel.

Plaats oftalmische zalf op de ogen om uitdroging tijdens de procedure te voorkomen. Controleer de reflexen door de achterpoten te knijpen om er zeker van te zijn dat de muis voldoende verdoofd is. Verwijder al het haar van de buik.

Breng een ontharingscreme aan of gebruik een scheerapparaat. Voer de operatie uit onder steriele omstandigheden. Desinfecteer de buik.

Om de donor-aorta te verwijderen, maak een middenlijn buiksnede en trek het darm manuele naar rechts. Weerkaat de darmen voorzichtig naar de zijkant met poedervrije handschoenen. Leg de darmen op een stuk gaas geweekt in zoutoplossing om ze vochtig te houden.

Dissecteer de abdominale aorta heel voorzichtig los van het omliggende weefsel met een stompe dissectie met pincetten. Dissecteer het segment van de aorta tussen de nierarterie en de bifurcatie van de vena cava met de pincetten. Bevestig alle kleine takken van dit segment met een 11-0 monofilament enkele hechting.

Voordat de aorta wordt verwijderd, injecteer 0,5 milliliter zoutoplossing met 50 eenheden heparine in de inferieure vena cava. Laat het donordier uitbloeden voordat het segment van de aorta is verwijderd. Spoel het transplantaat volledig met zoutoplossing en plaats het daarna onmiddellijk in een bak met ijskoude zoutoplossing.

Om de ontvanger voor te bereiden, verdoof het dier via een gezichtsmasker, verwijder het haar en desinfecteer zoals hierboven, en maak een middenlijn incisie van het borstbeen tot het bekken met een scalpel. Trek de buikwanden terug met retractoren. Wikkel de darmen in met gaas geweekt in zoutoplossing en verplaats ze heel voorzichtig naar rechts van het dier.

Dissecteer de infrarenale aorta vrij tussen de nierarteries proximal en de bifurcatie distaal met de pincetten. Bevestig alle kleine takken van dit segment met een 11-0 monofilament enkele hechting. Klem de proximale en distale delen van de aorta via een 6-0 enkele zijden hechting.

Deel de aorta in het midden tussen de klemmen en irrigeer de gesneden uiteinden met heparine zoutoplossing om het lumen open te spoelen. Plaats het transplantaat in de orthopneuïsche positie. Voer de anastomose uit met behulp van de mouwtechniek met hechtingen met 11-0 monofilament.

Met deze methode wordt het uiteinde van het voedende vat in het ontvangende vat geplaatst. Plaats het uiteinde van de infrarenale ontvanger-aorta binnen het proximale uiteinde van de donor-aorta. Voer de distale anastomose op dezelfde manier uit.

Plaats het distale uiteinde van de donor-aorta binnen het distale uiteinde van de ontvanger-aorta. Zorg ervoor dat de aorta niet gedraaid wordt door de perfecte uitlijning van donor en ontvanger aorta te waarborgen. Het moment van het loslaten van de klem is een zeer belangrijke stap van de procedure en moet heel voorzichtig worden uitgevoerd.

Na controle van de anastomose, laat de klemmen los. Laat eerst de distale klem voorzichtig los, gevolgd door de proximale klem. Op deze manier is er lage druk om de wanden bij elkaar te houden voordat de kant met hoge druk wordt losgelaten.

Het transplantaat wordt onmiddellijk geperfundeerd en een puls is zichtbaar. Verwijder voorzichtig de restanten van de zijde. Plaats de buikinhoud terug in de buikholte en sluit de wond met een doorlopende 3-0 polyglycolzuur hechting.

Toedien buprenorfine 0,05 milligram per kilogram aan de muis voordat de anesthesie wordt beëindigd. We presenteren de voorbeelden van de necropsie foto's van het transplantaat zes weken na transplantatie en zijn driedimensionale en B-modus ultrageluidsbeeld. De foto's tonen de doorlaatbaarheid van het transplantaat.

Er zijn geen veranderingen in lumendimensies zichtbaar in het transplantaat. Bovendien hebben we geen stenose of aneurysmale formaties gevonden. We hebben geen significante laesies waargenomen in getransplanteerde aorta's door histologische en immunohistochemische kleuring.

De kernen werden tegengekleurd met DAPI. Kortom, deze zeer snelle anastomosemethode zou kunnen worden gebruikt om vasculaire ziekten te bestuderen in genetisch gemodificeerde muizen.