Name: NMR-spectroscopie als een robuust hulpmiddel voor de snelle evaluatie van het lipidenprofiel van visolie supplementen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-01T11:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Leer hoe u NMR-spectroscopie gebruikt voor snelle lipidenprofilering van visoliesupplementen. Deze methode analyseert vetzuren en hun positionele verdeling zonder uitgebreide monsterbereiding.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de Foods for Health Discovery thema aan de Ohio State University en het Department of Food Science and Technology aan de Ohio State University. De auteurs willen graag de NMR faciliteit aan de Ohio State University en de NMR faciliteit aan de Penn State University bedanken.

<ol><li>Simopoulos, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+ratio+of+omega-6%2Fomega-3+essential+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">The importance of the ratio of omega-6/omega-3 essential fatty acids.</a> Biomed. Pharmacother. 56 (8), 365-379 (2002).</li>
<li>Goodnight, S. H. Jr, Harris, W. S., Connor, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+dietary+omega+3+fatty+acids+on+platelet+composition+and+function+in+man%3A+a+prospective%2C+controlled+study%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The effects of dietary omega 3 fatty acids on platelet composition and function in man: a prospective, controlled study.</a> Blood. 58 (5), 880-885 (1981).</li>
<li>Harper, C., Jacobsen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Usefulness+of+omega-3+fatty+acids+and+the+prevention+of+coronary+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Usefulness of omega-3 fatty acids and the prevention of coronary heart disease.</a> Am. J. Cardiol. 96 (11), 1521-1529 (2005).</li>
<li>Kremer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+high-dose+fish+oil+on+rheumatoid+arthritis+after+stopping+nonsteroidal+antiinflammatory+drugs.+Clinical+and+immune+correlates%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Effects of high-dose fish oil on rheumatoid arthritis after stopping nonsteroidal antiinflammatory drugs. Clinical and immune correlates.</a> Arthritis and Rheumatol. 38 (8), 1107-1114 (1995).</li>
<li>Malasanos, T., Stackpoole, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+effects+of+omega-3+fatty+acids+in+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Biological effects of omega-3 fatty acids in diabetes mellitus.</a> Diabetes Care. 14, 1160-1179 (1991).</li>
<li>Han, Y., Wen, Q., Chen, Z., Li, P. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1876610211019503">Review of Methods Used for Microalgal Lipid-Content Analysis.</a> Energ. Procedia. 12, 944-950 (2011).</li>
<li>Guillén, M., Ruiz, A. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ejlt.200300799/abstract">1H nuclear magnetic resonance as a fast tool for determining the composition of acyl chains in acylglycerol mixtures.</a> Eur. J. Lipid Sci. Technol. 105, 502-507 (2003).</li>
<li>Sacchi, R., Medina, I., Aubourg, S. P., Addeo, F., Paolillo, L. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/237943502_Proton_Nuclear_Magnetic_Resonance_Rapid_and_Structure-Specific_Determination_of_o-3_Polyunsaturated_Fatty_Acids_in_Fish_Lipids">Proton nuclear magnetic resonance rapid and structure specific determination of ω-3 polyunsaturated fatty acids in fish lipids.</a> J. Am Oil Chem Soc. 70, 225-228 (1993).</li>
<li>Igarashi, T., Aursand, M., Hirata, Y., Gribbestad, I. S., Wada, S., Nonaka, M. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/226798699_Nondestructive_Quantitative_Acid_and_n-3_Fatty_Acids_in_Fish_Oils_by_High-Resolution_1H_Nuclear_Magnetic_Resonance_Spectroscopy">Nondestructive quantitative acid and n-3 fatty acids in fish oils by high-resolution 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy.</a> J. Am. Oil Chem. Soc. 77, 737-748 (2000).</li>
<li>Plans, M., Wenstrup, M., Saona, L. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/s11746-015-2666-8">Application of Infrared Spectroscopy for Characterization Dietary Omega-3 Oil Supplements.</a> J. Am. Oil Chem. Soc. 92, 957-966 (2015).</li>
<li>Jian-hua, C. I. A. <a target="_blank" href="http://pubs.sciepub.com/jfnr/2/2/1/">Near-infrared Spectrum Detection of Fish Oil DHA Content Based on Empirical Mode Decomposition and Independent Component Analysis.</a> J Food Nutr Res. 2 (2), 62-68 (2014).</li>
<li>Millen, A. E., Dodd, K. W., Subar, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+vitamin%2C+mineral%2C+nonvitamin%2C+and+nonmineral+supplements+in+the+United+States%3A+The+1987%2C+1992%2C+and+2000+National+Health+Interview+Survey+results%5BTitle%5D)+AND+%22J.+of+Am.+Diet+Assoc%22%5BJournal%5D)">Use of vitamin, mineral, nonvitamin, and nonmineral supplements in the United States: The 1987, 1992, and 2000 National Health Interview Survey results.</a> J. of Am. Diet Assoc. 104 (6), 942-950 (2004).</li>
<li>Dwyer, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+developing+analytical+and+label-based+dietary+supplement+databases+at+the+NIH+office+of+dietary+supplements%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Compos.+Anal%22%5BJournal%5D)">Progress in developing analytical and label-based dietary supplement databases at the NIH office of dietary supplements.</a> J. Food Compos. Anal. 21, S83-S93 (2008).</li>
<li>Monakhova, Y. B., Ruge, I., Kuballa, T., Lerch, C., Lachenmeier, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+coenzyme+Q10+in+food+supplements+using+1H+NMR+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Vitam.+Nutr.+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of coenzyme Q10 in food supplements using 1H NMR spectroscopy.</a> Int. J. Vitam. Nutr. Res. 83 (1), 67-72 (2013).</li>
<li>Monakhova, Y. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardless+1H+NMR+determination+of+pharmacologically+active+substances+in+dietary+supplements+and+medicines+that+have+been+illegally+traded+over+the+internet%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Test.+Anal%22%5BJournal%5D)">Standardless 1H NMR determination of pharmacologically active substances in dietary supplements and medicines that have been illegally traded over the internet.</a> Drug Test. Anal. 5 (6), 400-411 (2013).</li>
<li>Berger, S., Braun, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBerger%2C+S+%22200+and+more+NMR+experiments%3A+a+practical+course%22">200 and more NMR experiments: a practical course</a>. , Wiley-VCH. Weinheim. (2004).</li>
<li>Knothe, G., Kenar, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+fatty+acid+profile+by+1H-NMRspectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Lipid+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Determination of the fatty acid profile by 1H-NMRspectroscopy.</a> Eur. J. Lipid Sci. Technol. 106, 88-96 (2004).</li>
<li>Sacchi, R., Medina, J. I., Aubourg, S. P., Paolillo, I. G. L., Addeo, F. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jf00032a016">Quantitative High-Resolution 13C NMR Analysis of Lipids Extracted from the White Muscle of Atlantic Tuna (Thunnus alalunga).</a> J. Agric. Food Chem. 41 (8), 1247-1253 (1993).</li>
<li>Dais, P., Misiak, M., Hatzakis, E. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/277335832_Analysis_of_marine_dietary_supplements_using_NMR_spectroscopy">Analysis of marine dietary supplements using NMR spectroscopy.</a> Anal. Methods. 7 (12), 5226-5238 (2015).</li>
<li>Pickova, J., Dutta, P. C. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/s11746-003-0809-7">Cholesterol Oxidation in Some Processed Fish Products.</a> J. Anal. Oil Chem. Soc. 80 (10), 993-996 (2003).</li>
<li>Siddiqui, N., Sim, J., Silwood, C. J. L., Toms, H., Iles, R. A., Grootveld, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicomponent+analysis+of+encapsulated+marine+oil+supplements+using+high-resolution+1H+and+13C+NMR+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J.+of+Lipid+Rsrch%22%5BJournal%5D)">Multicomponent analysis of encapsulated marine oil supplements using high-resolution 1H and 13C NMR techniques.</a> J. of Lipid Rsrch. 44 (12), 2406-2427 (2003).</li>
<li>Sua´rez, E. R., Mugford, P. F., Rolle, A. J., Burton, I. W., Walter, J. A., Kralovec, J. A. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/s11746-010-1638-2">13C-NMR Regioisomeric Analysis of EPA and DHA in Fish Oil Derived Triacylglycerol Concentrates.</a> J. Am. Oil Chem. Soc. 87, 1425-1433 (2010).</li>
<li>Youlin, X. A., Moran, S., Nikonowiczband, E. P., Gao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Z-restored+spin-echo+13C+1D+spectrum+of+straight+baseline+free+of+hump%2C+dip+and+roll%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Chem%22%5BJournal%5D)">Z-restored spin-echo 13C 1D spectrum of straight baseline free of hump, dip and roll.</a> Magn. Reson. Chem. 46, 432-435 (2008).</li>
<li>Tengku-Rozaina, T. M., Birch, E. J. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ejlt.201300357/abstract">Positional distribution of fatty acids on hoki and tuna oil triglycerides by pancreatic lipase and 13C NMR analysis.</a> Eur. J. Lipid Sci. Technol. 116 (3), 272-281 (2014).</li>
<li>Berry, S. E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triacylglycerol+structure+and+interesterification+of+palmitic+and+stearic+acid-rich+fats%3AAn+overview+and+implications+for+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr.+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Triacylglycerol structure and interesterification of palmitic and stearic acid-rich fats:An overview and implications for cardiovascular disease.</a> Nutr. Res. Rev. 22 (1), 3-17 (2009).</li>
<li>Hunter, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+effects+of+dietary+fatty+acids+as+related+to+their+position+on+triglycerides%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">Studies on effects of dietary fatty acids as related to their position on triglycerides.</a> Lipids. 36, 655-668 (2001).</li>
<li>Vlahov, G. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/(SICI)1097-458X(199805)36:5%3C359::AID-OMR274%3E3.0.CO;2-Z/abstract">Regiospecific analysis of natural mixtures of triglycerides using quantitative 13C nuclear magnetic resonance of acyl chain carbonyl carbons.</a> Magnetic Res. in Chem. 36, 359-362 (1998).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Wijzigingen en strategieën voor het oplossen Spectral kwaliteit. De lijnbreedte van het NMR-signaal en derhalve de resolutie van het NMR-spectrum is sterk afhankelijk van vulplaten, die een werkwijze voor het optimaliseren van de homogeniteit van het magneetveld. Voor routinematige analyse 1D shimming is voldoende en een 3D-shimming is niet vereist, aangezien zij worden uitgevoerd door personeel NMR regelmatig. Indien dit niet het geval is, moet een 3D shimming worden voorafgaa...

De consumptie van n -3-vetzuren in het dieet gebleken gunstig tegen verschillende omstandigheden zoals hartstoornissen 1, 2, 3, 4 ontstekingsziekten en diabetes 5. De Westerse dieet is in n -3 vetzuren slecht beschouwd en daarmee de consumptie van visolie supplementen wordt aanbevolen om de n te verbeteren -6 / n -3 balans in de voeding van de consument 1. Ondanks de recente stijging van visolie supplement consumptie, vragen blijven over de veiligheid, authenticiteit en kwaliteit van sommige van deze producten. De snelle en nauwkeurige analyse van de samenstelling van visolie supplementen is essentieel voor de kwaliteit van deze commerciële producten goed te kunnen beoordelen en te zorgen voor de veiligheid van de consument. De meest voorkomende methoden voor de beoordeling van visolie supplements zijn gaschromatografie (GC) en infraroodspectroscopie (IR). Hoewel deze zijn zeer gevoelige methoden, ze lijden aan verschillende nadelen 6. GC-analyse is tijdrovend (4-8 h), omdat scheiding en derivatisering verschillende verbindingen vereist 7 en lipide oxidatie kan optreden tijdens de analyse 8, 9. Terwijl IR spectroscopie kwantitatief kan worden, wordt een voorspellingsmodel moeten worden geconstrueerd met gebruikmaking partiële kleinste kwadraten regressie (PLSR), hoewel er uitzonderingen waarbij Infraroodbanden kan worden toegeschreven aan een enkele verbinding 10. PLSR vereist de analyse van een groot aantal monsters, die het tijdstip van de analyse 11 toeneemt. Om deze reden is er een toenemende belangstelling voor de ontwikkeling van nieuwe analytische methoden die nauwkeurige en snelle analyse van een groot aantal van visolie monsters mogelijk te maken. Organisaties zoals de Office van voedingssupplementen (ODS) aan de National Institutes of Health (NIH) en de Food and Drug Administration (FDA) hebben samengewerkt met de Association of Official Analytical Chemists (AOAC) om deze nieuwe methoden 12, 13 te ontwikkelen. Een van de meest veelbelovende analysemethoden voor het screenen en evalueren van meerdere componenten matrices, zoals voedingssupplementen, is kernspinresonantie (NMR) spectroscopie 14, 15. NMR spectroscopie heeft een aantal voordelen: het is een niet-destructieve en kwantitatieve techniek vereist minimale tot geen monstervoorbereiding en wordt gekenmerkt door uitstekende nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid. Bovendien NMR spectroscopie is een milieuvriendelijke methode omdat het gebruik maakt van slechts kleine hoeveelheden oplosmiddelen. Het belangrijkste nadeel van NMR-spectroscopie is de relatief lage gevoeligheid in vergelijking met andere analytical methoden zijn echter recente technologische vooruitgang in instrumentatie zoals sterkere magneetvelden, cryogene probes met verschillende diameters, geavanceerde gegevensverwerking en veelzijdige pulssequenties en technieken de gevoeligheid verhoogd tot het nM traject. Terwijl NMR instrumentatie is hoge kosten, de lange levensduur van NMR spectrometers en de vele toepassingen van NMR lager de kosten van de analyse op de lange termijn. Deze gedetailleerde video protocol is bedoeld om nieuwe mensen in het veld voorkomen valkuilen geassocieerd met 1H en 13C NMR spectroscopische analyse van visoliesupplementen.

<table><tbody><tr><td>Avance III 850 NMR instrument</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Avance III 500 NMR instrument</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TCI 5 mm probe</td><td>Bruker</td><td></td><td>Helium cooled inverse (proton deetected) NMR probe featuring three independent channels (1H, 13C, 15N)</td></tr><tr><td>BBO prodigy 5 mm probe</td><td>Bruker</td><td></td><td>Nitrogen cooled observe (X-nuclei detected) probe, featuring two channels; one for 1H and 19F detectionand one for X-nuclei (covering from 15N to 31P)</td></tr><tr><td>Spinner turbin</td><td>Bruker</td><td></td><td>NMR spinners are made by polymer materials and they have a rubber o-ring to hold the NMR tube securely in place</td></tr><tr><td>Topspin 3.5</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>deuterated chloroform</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp;865-49-6</td><td>99.8 atom % D, contains 0.03 TMS</td></tr><tr><td>2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp;128-37-0</td><td>purity >99%</td></tr><tr><td>Fish oil samples</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NMR tubes</td><td>New Era</td><td>NE-RG5-7</td><td>5mm OD Routine &ldquo;R&rdquo; Series NMR Sample Tube</td></tr><tr><td>BSMS</td><td>Bruker</td><td></td><td>Bruker Systems Management System; control system device</td></tr></tbody></table>

nmr-spectroscopie als een robuust hulpmiddel voor de snelle evaluatie van het lipidenprofiel van visolie supplementen

NMR Spectroscopy as a Robust Tool for the Rapid Evaluation of the Lipid Profile of Fish Oil Supplements

De westerse dieet is slecht in n -3 vetzuren, dus de consumptie van visolie supplementen wordt aanbevolen om de inname van deze essentiële voedingsstoffen te verhogen. Het doel van deze werkzaamheden is de kwalitatieve en kwantitatieve analyse van ingekapselde visoliesupplementen aantonen met behulp van hoge resolutie 1H en 13C NMR spectroscopie NMR gebruikmaking van twee verschillende instrumenten; een 500 MHz en een 850 MHz instrument. Zowel proton (1H) en koolstof (13C) NMR-spectra kunnen worden gebruikt voor de kwantitatieve bepaling van de hoofdbestanddelen van visoliesupplementen. Kwantificering van de lipiden in visoliesupplementen wordt verkregen door integratie van de geschikte NMR-signalen in het betrokken 1D spectra. Resultaten verkregen met 1H en 13C NMR komen goed overeen met elkaar, ondanks het verschil in resolutie en gevoeligheid tussen de twee kernen en de twee instrumenten. 1H NMR biedensa snellere analyse vergeleken met 13C NMR, omdat het spectrum kan worden opgenomen in minder dan 1 minuut, in tegenstelling tot 13C NMR-analyse, die duurt 10 minuten tot een uur. Het 13C NMR spectrum echter veel meer informatief. Het kan kwantitatieve gegevens voor een groter aantal individuele vetzuren en kunnen worden gebruikt voor het bepalen van de positie verdeling van vetzuren op de glycerol hoofdketen. Beide kernen kan kwantitatieve informatie in slechts een experiment zonder de noodzaak van zuivering of scheiding stappen. De sterkte van het magneetveld voornamelijk invloed op de 1H NMR spectra vanwege de lagere resolutie bij 13 C NMR echter ook goedkopere NMR instrumenten efficiënt worden toegepast als standaardmethode door de voedingsindustrie en kwaliteitscontrolelaboratoria.

1H en 13C NMR spectra werden verzameld voor in de handel verkrijgbaar visoliesupplementen behulp van twee NMR instrumenten; Een 850 MHz en 500 MHz spectrometer. Deze spectra kunnen worden gebruikt voor de kwantitatieve bepaling van bestanddelen van de visolie, zoals docosahexaeenzuur (DHA) en eicosapentaeenzuur (EPA), en andere verbindingen zoals n -1 acylketens en uit voedingsoogpunt belangrijke index zoals n -6 / n -3-verhouding. De kwan...

Hierbij werd een hoge resolutie 1H en 13C kernmagnetische resonantie (NMR) spectroscopie gebruikt als een snel en betrouwbaar middel voor kwantitatieve en kwalitatieve analyse van ingekapselde visolie supplementen.

NMR-spectroscopie als een robuust hulpmiddel voor de snelle evaluatie van het lipidenprofiel van visolie supplementen

The western diet is poor in n-3 fatty acids, therefore the consumption of fish oil supplements is recommended to increase the intake of these essential ...

Het algemene doel van deze methode is om het lipidenprofiel van visolie-supplementen te bepalen met behulp van nucleaire magnetische resonantie-spectroscopie. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen voor lipidenanalyse, zoals het lipidegehalte van visolie-supplementen en de positionele distributie van verschillende vetzuren op het glycerolskelet. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een snelle en robuuste analyse van verschillende moleculen in één enkel overzicht mogelijk maakt, zonder dat er scheidings- en zuiveringsstappen nodig zijn.Om de monsters voor proton- en koolstof-NMR-analyse voor te bereiden, extraheer eerst 120 µL, wat ongeveer 110 mg visolie is, uit een dieetcapsule met een spuit en breng dit over in een glazen flesje van 4 mL. Noteer het gewicht van de visolie. Gebruik 500 µL van een BHT-stokoplossing om 100 mg ± 10 mg visolie op te lossen.Nadat de olie is opgelost, brengt u de gehele oplossing direct over in een hoogwaardige NMR-buis van vijf millimeter en plaatst u er een dop op. Analyseer de monsters binnen 24 uur na de monstervoorbereiding. Plaats de NMR-buis in een spinner-turbine.Plaats de spinner en de buis bovenop een gegradeerde dieptemeter en druk voorzichtig op de bovenkant van de buis totdat de onderkant de bodem van de meter raakt. Plaats de NMR-buis vervolgens in een open plek van de monsterhouder. Noteer het slotnummer waarin het monster is geplaatst.Om het monster in het NMR-instrument te laden, keert u terug naar de besturingscomputer en typt u SX-nummer, waarbij nummer het vak in de monstercassette is waarin het monster zich bevindt. Wacht tot het deuteriumsignaal van gedeutereerd chloroform op het scherm verschijnt. Zodra het deuteriumsignaal zichtbaar is, typt u lock"on in de opdrachtregel en selecteert u gedeutereerd chloroform uit de lijst met oplosmiddelen om het monster te locken met behulp van de deuteriumresonantie.Typ "bsmsdisp" in de opdrachtregel om te controleren of het centrifugeren niet actief is. Als de spin-knop groen is, klik er dan op om het centrifugeren te deactivateren. Typ na het invoeren van het commando "new" om een nieuwe dataset aan te maken, een naam voor de dataset in het naamtabblad en het experimentnummer in het experimentnummertabblad met de titel EXPNO.Gebruik nummer één in het tabblad procesnummer met de titel PROCNO. Schrijf de titel van het experiment in het tabblad TITLE. Klik in het tabblad Experiment op Select en kies het parameterbestand C13IG.Select vervolgens "Set selected item in editor" en klik op OK. Typ "getprosol" in de opdrachtregel om de standaardparameters voor de huidige NMR-probe en het oplosmiddel te verkrijgen. Typ vervolgens de opdracht "atma" om de automatische tuning en matching van de probe uit te voeren voor zowel koolstof- als protonkernen. Voer daarna eendimensionale gradiënt-shimming uit om een zeer homogeen magnetisch veld en daarmee een optimale lijnvorm voor de NMR-signalen te bereiken.Om dit te doen, gebruikt u de standaard automatische procedure voor 1D-shimming door simpelweg opeenvolgend de commando's qu topshim 1dfast ss;qu topshim tuneb ss;en qu topshim report" in de opdrachtregel uit te voeren. Verwerf na parameteroptimalisatie, zoals beschreven in het tekstprotocol, eendimensionale koolstof-NMR-spectra. Ga hiervoor naar de koolstofdataset en gebruik een inverse gated gedecouplede pulsequentie door pulprog zgig" in de opdrachtregel te typen.Typ commando's in de opdrachtregel om de spectrale parameters in te stellen met nppm, het centrum van de RF-zender, het aantal scans, het aantal dummy-scans, het aantal datapunten en de pulsduur voor een pulshoek van negentig graden. Typ "digmod baseopt" in de opdrachtregel om een spectrum met een verbeterde basislijn te verkrijgen. Stel vervolgens een relaxatietijd van 60 s in voor het 850 megahertz-instrument door "di 60s" in de opdrachtregel te typen.Stel de ontvangerversterking in op een passende waarde met het commando rga" voor automatische berekening van de ontvangerversterking. Start tot slot de acquisitie door het commando pulse acquire zg" in de opdrachtregel te typen. Om de gegevens te verwerken, typt u eerst si 64K" in de opdrachtregel om zero filling toe te passen en de grootte van het rail-spectrum in te stellen op 64K.Stel vervolgens de lijnverbredingsparameter in op 1,0 hertz door "lb 1.0" in de opdrachtregel te typen om een wachtfunctie met een lijnverbredingsfactor van 1,0 hertz toe te passen vóór de 4ea-transformatie. Voer de 4ea-transformatie uit door "efp" in de opdrachtregel te typen. Voer vervolgens een automatische fasecorrectie uit door het commando "apk" in de opdrachtregel te typen.Als er aanvullende faseaanpassingen nodig zijn om het spectrum verder te verbeteren, klik dan op het tabblad Process. Klik vervolgens op het pictogram Adjust Phase en de pictogrammen voor Phase Correction voor nulde-orde en eerste-orde fasecorrectie. Sleep de muis terwijl u op de pictogrammen voor nulde-orde en eerste-orde fasecorrectie klikt, totdat alle signalen in de positieve absorptiemodus staan.Pas de waarden voor de fasecorrectie toe en sla deze op door op de knop Return and Save te klikken om de modus voor fasecorrectie te verlaten. Pas een polynoomfunctie van de vierde orde toe voor basislijncorrectie bij integratie door het commando abs n" in de opdrachtregel te typen. Om chemische verschuivingen in ppm ten opzichte van TMS te rapporteren, zoomt u in op het TMS-signaal, klikt u vervolgens op het Calibration-pictogram en plaatst u de cursor met de rode lijn bovenop het NMR-signaal dat als referentie dient, in dit geval TMS.Gebruik indien nodig de middelste muisknop om de drempelintensiteit aan te passen. Klik met de linkermuisknop en typ 0 in. Wanneer BHT als interne standaard wordt gebruikt, integreert u de piek bij delta 151,45 over een bereik van vijf hertz aan elke zijde van de piek.Stel vervolgens de integraal gelijk aan de micromol BHT per 0,5 milliliters van de voorraadoplossing. Integreer de relevante pieken over een bereik van vijf hertz aan weerszijden van de piek. Indien het nodig is om op een specifiek gebied te focussen, klik dan op het markeericoon om dit te deactiveren.Klik vervolgens met de linkermuisknop en sleep om in te zoomen op het gebied. Klik opnieuw op het markeerpictogram om de integratiefunctie te activeren en ga naar de volgende piek. Klik met de linkermuisknop en sleep de cursor door het integraal.Klik op de knop Return Save Regions. Hier wordt een representatief spectrum getoond van de Carbon NMR-analyse in het gebied van de carbonylkoolstof. De NMR-signalen van EPA en DHA op de sn-1, 3 en sn-2 posities worden weergegeven.Deze signalen kunnen worden gebruikt voor de kwantitatieve bepaling van EPA en DHA. Hier wordt een representatief spectrum van de proton-NMR-analyse getoond. De NMR-signalen van EPA en DHA die voor hun bepaling kunnen worden gebruikt, zijn weergegeven.Het proton-NMR-spectrum wordt gekenmerkt door een smallere spectrale breedte vergeleken met het koolstof-NMR-spectrum en heeft daardoor een lagere spectrale resolutie. Zodra de techniek onder de knie is, kan deze in minder dan 30 minuten worden uitgevoerd mits deze correct wordt toegepast. Na de ontwikkeling van deze techniek konden onderzoekers op het gebied van lipideanalyse snel verschillende lipidecomponenten analyseren die voorkomen in matrices met meerdere componenten, zoals voedingssupplementen, plantaardige olie en biobrandstoffen.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe protonen- en koolstof-NMR-spectroscopie kan worden toegepast voor de analyse van het lipidenprofiel van visoliesupplementen. Vergeet niet dat werken met sterke magnetische velden die door NMR-spectrometers worden gegenereerd, uiterst gevaarlijk kan zijn voor pacemakers en chirurgische prothesen, evenals voor elektronische artikelen zoals creditcards en horloges.

nmr-spectroscopy-as-robust-tool-for-rapid-evaluation-lipid-profile

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Een methode voor het metaboliet extractie van microbiële gemeenschappen plankton wordt gepresenteerd. Hele gemeenschap bemonstering wordt bereikt door middel van filtratie op speciaal geprepareerde filters. Na lyofilisatie worden waterige oplosbare metabolieten geëxtraheerd. Deze aanpak maakt het voor de toepassing van milieu-metabolomics tot de trans-omics onderzoek van de natuurlijke of experimentele microbiële gemeenschappen.

Concentratie van de metabolieten van Low-density Planktonische Gemeenschappen voor het milieu Metabolomics met behulp van nucleaire magnetische resonantie spectroscopie

Een progressieve kolonisatie procedure wordt beschreven om nader te beoordelen de impact ervan op de host levermetabolisme. Colonization is gecontroleerd non invasief door het evalueren van de urinaire excretie van microbiële metabolieten door co-NMR-based metabool profiel, terwijl levermetabolisme wordt beoordeeld door de hoge resolutie Magic Angle Spinning (HR MAS) NMR profilering van intact biopsie.

Het beoordelen van de lever metabole veranderingen tijdens Progressieve kolonisatie van Kiemvrije Mouse door 1 H NMR-spectroscopie

Werkwijze voor de bepaling van vetzuren en samenstelling microalgen gebaseerd op mechanische celdisruptie, oplosmiddelhoudende vetextractie, verestering en kwantificatie en identificatie van vetzuren met gaschromatografie wordt beschreven. Een tripentadecanoin interne standaard wordt gebruikt ter compensatie van eventuele verliezen bij de winning en onvolledige omestering.

Analyse van vetzuurgehalte en Compositie in Microalgen

Een eenvoudig protocol om de neutrale vetgehalte van algen cellen te bepalen met behulp van een Nile Red kleuring procedure wordt beschreven. Deze tijdbesparende techniek biedt een alternatief voor traditionele-gravimetrische basis lipide kwantificering protocollen. Het is ontworpen voor de specifieke toepassing van controle bioproces prestaties.

Een eenvoudige en snelle protocol voor het meten van neutrale lipiden in algencellen met behulp van fluorescentie

De neurochemie van het zoogdierbrein verandert bij vele neurologische en systemische ziekten. Karakteristieke profielen van cerebrale metabolieten kunnen efficiënt worden verkregen op basis van ruwe extracten van hersenweefsel. Hiervoor wordt hoge-resolutie NMR-spectroscopie gebruikt, wat een gedetailleerde kwantitatieve analyse van metabolietenconcentraties (metabolomics) mogelijk maakt.

Metabolomic Analyse van de hersenen van de rat door de hoge resolutie nucleaire magnetische resonantie spectroscopie van Tissue Extracten

Dit protocol beschrijft een interne doorvoer voor aanvullende analytische en omics technieken, culminerend in een volledig gekoppeld karakterisering van natuurlijke organische stof en microbiële proteomics in verschillende ecosystemen. Deze aanpak maakt robuuste vergelijkingen voor het identificeren van de metabolische banen en het transformaties die belangrijk zijn voor het beschrijven van de gasproductie van broeikasgassen en het voorspellen van reacties op veranderingen in het milieu.

Single-doorvoer complementaire High-resolution analytische technieken voor het karakteriseren van complexe natuurlijke organische stof mengsels

Dit artikel presenteert een modulair protocol voor weefsellipideomica en transcriptomica, en plasmalipideomica in neurologische ziektemuismodellen gericht op lipiden die ten grondslag liggen aan ontsteking en neuronale activiteit, membraanlipiden, stroomafwaartse boodschappers en mRNA-coderende enzymen / receptoren die ten grondslag liggen aan de lipidefunctie. Bemonsterings-, monsterverwerkings-, extractie- en kwantificeringsprocedures worden beschreven.

Lipidomics en Transcriptomics bij neurologische aandoeningen

Gestimuleerde Raman scattering (SRS) microscopie maakt selectieve, labelvrije beeldvorming van specifieke chemische moieties mogelijk en het is effectief gebruikt om lipidemoleculen in vivo in beeld te brengen. Hier geven we een korte inleiding tot het principe van SRS-microscopie en beschrijven we methoden voor het gebruik ervan bij de opslag van beeldvormende lipiden in Caenorhabditis elegans.

Labelvrije beeldvorming van lipideopslagdynamiek bij Caenorhabditis elegans met behulp van gestimuleerde Raman-verstrooiingscopie

Dit protocol is voor de bepaling van lipiden in zeewater en biologische specimens. Lipiden in filtraten worden geëxtraheerd met chloroform of mengsels van chloroform en methanol in het geval van vaste stoffen. Lipideklassen worden gemeten door staaf dunnelaagchromatografie met vlamionisatiedetectie en hun som geeft het totale lipidengehalte.

Bepaling van totale lipide- en lipideklassen in mariene monsters

Shotgun massaspectrometrie-gebaseerde lipidomics levert een gevoelige kwantitatieve momentopname van een breed spectrum van lipidenklassen tegelijkertijd in een enkele meting van verschillende knaagdierweefsels.

Shotgun Lipidomics van Knaagdier weefsels

Leer hoe u NMR-spectroscopie gebruikt voor snelle lipidenprofilering van visoliesupplementen. Deze methode analyseert vetzuren en hun positionele verdeling zonder uitgebreide monsterbereiding.

NMR-spectroscopie als een robuust hulpmiddel voor de snelle evaluatie van het lipidenprofiel van visolie supplementen

Meer video's verkennen