Name: Een multimodale Imaging aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordeling van bleomycine-geïnduceerde Lung Fibrosis in muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Leer een multimodale imaging-aanpak met Micro-CT en FMT voor longitudinale evaluatie van bleomycine-geïnduceerde longfibrose bij muizen. Deze niet-invasieve methode volgt anatomische en moleculaire veranderingen in een IPF-achtig model.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedank Dr. Daniela Pompilio en Roberta Ciccimarra voor technische hulp.

Alle dierproeven hierin beschreven werden goedgekeurd door de intramurale dierenwelzijn Comité voor dierlijke proefneming van Chiesi Farmaceutici en ERASMUS MC onder protocolnummer: EMC 3349 (138-14-07) voldoen aan de Europese richtlijn 2010/63 UE, Italiaanse D.Lgs 26/2014 en de herziene "Gids voor de zorg en gebruik van proefdieren"23.
Opmerking: Vóór gebruik, vrouwelijke ingeteelde C57Bl/6 (7-8 weken oud) muizen werden geacclimatiseerd gedurende ten minste 7 dagen aan de lokale vivarium omstandigheden (kamertemperatuur: 20-24 ° C, relatieve vochtigheid: 40-70%, 12 uur licht-donker cyclus), gratis toegang hebben tot standaard knaagdier chow en onthard water van de kraan.
1. intratracheale behandeling van muizen met bleomycine
<ol><li>De apparatuur voor de intra-tracheale instillation12,13,14te bereiden.</li>
	<li>Zet de muizen in de verdoving zaal verbonden aan een Isofluraan vaporisator vastgesteld op 2,5% gemengd met zuurstof. Selectievakje voor diepte van verdoving door het ontbreken van een teen-snuifje reactie. Het effect van de narcose is opgetreden na 3-5 min.</li>
	<li>Positie van de narcose muis op het platform van de intubatie, hangende het door haar snijtanden geplaatst op de draad.</li>
	<li>Zet de Laryngoscoop, neem een paar botte eindigde pincet en gebruik van de verlostang of de Laryngoscoop tip voorzichtig openen van de mond.</li>
	<li>Trek de tong en vasthoudt aan de kant met de pincet. Plaats de Laryngoscoop blade naar de achterkant van de mond tot de opening van de luchtpijp is gevisualiseerd en bewaar de Laryngoscoop op plaats.</li>
	<li>Met de andere hand, plaatst u de gasinleidbuis verbonden aan het einde van de PE-buis in de luchtpijp, het draaien van de drie-weg klep. Leveren van 50 µL van bleomycine (0.020 µg/muis). Na instillation, snel de buis uit de luchtpijp te voorkomen verstikking te verwijderen. De muizen rechtop houden voor een paar seconden.<ol>
<li>Beheren van bleomycine intratracheally op dag 0 en herhalen op dag 4 (Figuur 1).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwijder de muis uit de intubatie platform en controleren de muis voor 30 min (de tijd die nodig is om volledig herstellen van anesthesie).</li>
	<li>Uitvoeren in vivo imaging van de longen van de muizen door FMT en Micro-CT na dubbele bleomycine instillation op dag 7, 14 en 21.</li>
</ol>2. in vivo Imaging door fluorescentie moleculaire tomografie
Opmerking: Vooraf, bereiden een verse stamoplossing 6 nmol/ml MMP gevoelige fluorescerende substraat 680 in zoutoplossing (0,9% natriumchloride) en store beschermd tegen het licht bij 4 ° C vóór gebruik. Het is stabiel voor maximaal 6 maanden bij 4 ° C. MMP imaging agent equilibreer tot kamertemperatuur vóór het injecteren in dieren toestaan.
<ol><li>
Sonde injectie
	<ol>
<li>De apparatuur voor intraveneuze injectie van de MMP sonde oplossing voor te bereiden. Vooraf warm water bij 50 ° C te verwarmen van de staart van de muis.</li>
		<li>Om de muis nekvel stevig te begrijpen, nemen hetzelve met de staart en laat ze aan de greep van de deksel van de kooi. Houd de muizen over de schouders van het dier en zetten de staart in een bekerglas van warm water, voor 4 tot maximaal 8 s thermische schade ter voorkoming van thermische schade aan de huid van de staart.  Controleer de aderen zwelling voor gemakkelijker visualisatie en inbrengen van de naald.</li>
		<li>Tijdens de injectie-procedure, de muizen gebracht in een plastic afdekking te houden het gestage en trekken de staart door een speciale gat in de rug. Vinden de twee caudal aderen aan weerszijden van de staart; niet de slagader aan de onderzijde van de staart.</li>
		<li>Steek de naald (26G) van de 1 mL spuit in de ader. Als de naald correct geplaatst wordt, injectie zal gemakkelijk en de oplossing van de sonde zal uitmonden in het schip.</li>
		<li>Injecteer de MMP sonde oplossing bij 10 mL/kg.</li>
		<li>Gooi de naald. Opmerking: De optimale imaging tijdstip is 24 uur na de injectie van de sonde MMP want het is de tijd die nodig is door de sonde te worden geactiveerd. Als longitudinale studies worden uitgevoerd, is de optimale opnieuw injectie tijd 7 dagen, waardoor voor de volledige goedkeuring van de agent van de muis.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
FMT imaging Opmerking: Voordat u begint, altijd verwijderen de vacht op en rond de gebieden van het dier die naar zijn beeld, in dit geval de borst, om te voorkomen dat verstrooiing en absorptie in weefsel.<ol>
<li>Anesthetize van de muis, zet het in de verdoving kamer en zet het wiel Isofluraan tot 2,5% voor inductie en 2% voor onderhoud.</li>
		<li>Initialiseren van de data-acquisitie software en open een nieuwe studie in de database voor het experiment.</li>
		<li>Voordat u begint de beeldvorming met FMT, overdracht van de muis in de beeldvorming cassette. Plaats de narcose muis in het midden van de cassette voor het optimaal gebruik van het gezichtsveld van de FMT imaging. Houden de muizen veilige, vlakke zachtjes gecomprimeerde tegen beide vensters van de beeldvorming cassette. De hoogte aanpassen door knoppen op de cassette en schuif het vervolgens in het docking station.</li>
		<li>Klik op een onderwerp in het scannen venster en klikt u op voorbeeld om te zien het live beeld.</li>
		<li>Trekken de scan regio groot genoeg zodat weefsel rondom het verwachte gebied van fluorescentie is vastgelegd. Met inbegrip van een totaal van 25 scan punten garanties zullen de longen regio volledig gescande.</li>
		<li>Zodra de ROI wordt getekend, klikt u eerst op toevoegen aan wederopbouw wachtrij en klik vervolgens op scannen naar image van de muis. Zorg ervoor dat de juiste laser op 680 nm is geselecteerd.</li>
		<li>Wanneer het image aquisition is voltooid, plaatst u de muisaanwijzer weer in zijn kooi. Zorg ervoor dat het volledig herstelt van anesthesie.</li>
		<li>Kwantificeren van de picomoles van fluorescentie in het venster van de analyse van de analysesoftware met behulp van de ROI tool en de ROI rond 700-800 mm3 op het signaal afkomstig uit de regio van de longen te verminderen. Wees voorzichtig om uit te sluiten van de lever signaal. Kopieer de ROI op de andere onderwerpen hebben ze gelijk in de dimensie en hun positie in elke dierlijke afbeelding aan te passen.</li>
		<li>Afbeeldingen exporteren als jpg-bestanden.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. in Vivo Imaging door Micro-CT
Let op: Voordat u begint, en Verwijder altijd alle metalen sieraden of de metalen voorwerpen in de buurt van het imaginggebied, om te voorkomen dat verstrooiing van röntgenstraling in.
Opmerking: Long straling geïnduceerde fibrose is dat een gemeenschappelijk vinden tijdens straling geïnduceerde long letsel24. Micro-CT afgeleid indexcijfers noch histologische bevindingen geassocieerd met lung fibrosis waren aanwezig in zoute behandelde controle muizen op dag 21 onderworpen aan vier Micro-CT beeldvorming van sessies, die aangeeft dat de X-ray dosis afgeleverd aan de dieren tijdens de Micro-CT examens was niet voldoende om te beïnvloeden de bevindingen.
<ol><li>De Micro-CT inschakelen door op de knop van de groene stroom en start de software te warmen de x-ray-bron. Gebruik de kleine boring en het dierlijke bed voor muizen imaging.</li>
	<li>Maak de database door te klikken op nieuwe database voor een nieuwe en bouwen de browser gebaseerd op aantal muizen in de experiment, of klikt u op verbinding maakt met een bestaande database als u wilt opslaan van de gegevens naar een eerder gemaakte.</li>
	<li>Voordat u begint met het scannen, selecteert u de overname-parameters in het besturingsvenster software: röntgenbuis spanning, 90 kV; CT X-ray buis stroom, 160 µA; Live röntgenbuis huidige, 80 µA; FOV, 36 mm; Geen gating techniek; Scanresolutie techniek, hoog 4 min.</li>
	<li>Anesthetize van de muizen door inhalatie van 3% Isofluraan en leg ze op het bed in de boring ingevoegd met een neus kegel leveren een constante aanvoer van verdoving. Immobiliseren de poten van de muizen met tape op het bed om de borst te worden blootgesteld.</li>
	<li>Schuif de deur van het instrument en de Live-modus te zien hier de muispositie in real time door op de knop vastleggen inschakelen. Verplaats het dierlijke bed uitlijnen van de borst met de beeldveld (FOV) met behulp van knoppen direct gelegen aan de CT-instrument. Centreren van de scan op de muis; Als dat niet het positie aanpassen met linker- en rechterpijl gelegen op de CT-instrument.</li>
	<li>Optimale bed standpunt bevestigen door het draaien van de gantry door 90 ° te selecteren en te klikken op instellen. Zorg ervoor dat de regio naar afbeelding volledig binnen de FOV is.</li>
	<li>Niet elke gating techniek toepassen en de scan starten door te klikken op de knop van de CT-Scan . Klik op Ja in het bericht waarin informeert dat de x-ray-bron wordt ingeschakeld. Opmerking: Zodra de x-stralen worden aangezet, de oranje lamp op de top van het instrument zal worden verlicht en de schuifdeur onmogelijk zal zijn te openen voor de veiligheid van de operator. Wanneer de scan voltooid is, verschijnt een nieuw venster van de 2D Viewer software met de transaxial, coronale en Sagittaal segment van de wederopbouw.</li>
	<li>Controleer de beeldkwaliteit en zorg ervoor dat u niet hebben wazig beelden van bewegingen als gevolg van het lage niveau van de verdoving. Herhaal indien nodig de scan.</li>
	<li>Plaats de dieren terug in de kooi en zorg ervoor dat ze volledig herstellen van anesthesie.</li>
</ol>4. Bronchoalveolar Lavage
<ol><li>Anesthetize dieren met 3% Isofluraan en offer door bloeden van de abdominale aorta.</li>
	<li>Met schaar waarmee werkmapberekeningen het thoracale kooi en de hals. Dan bloot van de luchtpijp en maak een kleine incisie om de BAL procedure moet worden uitgevoerd met een 21-gauge lavage buis gekoppeld aan een 1 mL spuit zonder de naald. Let niet op het doorsnijden van de luchtpijp.</li>
	<li>Voor het uitvoeren van de BAL, vul de 1 mL spuit zonder naald met 0,6 mL steriele oplossing [10 x Henks evenwichtig zoutoplossing (HBSS) 100 mM ethyleendiamminetetra azijnzuuroplossing (NA2EDTA); 1 mM 4-(2-hydroxy-ethyl)-1-piperazineethansulphonic zuur (HEPES); gedistilleerd water].</li>
	<li>De buis lavage invoegen de incisie in de luchtpijp en langzaam injecteren en trekken de oplossing 3 keer, pauzeren op de derde terugtrekking om optimale verzameling van de BALF voor latere analyse.</li>
</ol>5. histologie en Histomorphometry
<ol><li>Bloot en longen, ze opblazen met een canule via de luchtpijp door zachte infusie met 0,6 mL van 10% neutraal gebufferde formaline verwijderen en opslaan van de monsters bij kamertemperatuur gedurende 24 uur.</li>
	<li>Uitdrogen van monsters door verschillende passages in toenemende concentraties van alcohol oplossingen (60% ethanol voor 1 h 70% ethanol voor 1 h, 90% ethanol voor 1 h, 95% ethanol voor 2 h en 100% ethanol voor 2 h) met behulp van een automatische weefsel processor.</li>
	<li>Plaats specimens in xyleen gedurende 2 uur te laten doorschijnend. Aan het einde van uitdroging, infiltreren monsters in paraffine bij 60 ° C gedurende 3 h en insluit in de geautomatiseerde processor.</li>
	<li>5 µm dik seriële delen gebruikend rotary microtome verkrijgen.</li>
	<li>Deparaffinize en hydrateren van dia's in aflopende rangen van ethanol en vlek met Masson van Trichrome met behulp van een automatische weefsel processor.</li>
	<li>Handmatig focus op longkanker segmenten, scannen met 20 X vergroting met behulp van een dia scanner en digitale foto's vastleggen van gehele Long secties met behulp van de software bekijken met een resolutie van 451 nm/pixel.</li>
	<li>Morfologisch beoordelen fibrotische long letsel door semi-kwantitatieve en kwantitatieve parameters als volgt:<ol>
<li>Het bepalen van de score Ashcroft. Semi-kwantitatief rang morfologische veranderingen in de longen secties volgens de schaal gedefinieerd door Ashcroft10 gewijzigd door Hübner et al. 25 gebruik het systeem van 0-8 score om te beoordelen alle parenchym in de Long-secties.</li>
		<li>Bepaal het gehalte aan collageen. De mate van fibrose10,25 te kwantificeren door de Microscoop software voor de analyse van de afbeelding. Willekeurig drie ROIs op 10 X vergroting, per elke dia selecteren Door standaardisatie van drempel kleurinstellingen, detecteren de collageen als groen-gekleurde gebied.</li>
		<li>Het bepalen van de alveolaire lucht-gebied. De alveolaire lucht gebied als een indirecte parameter van fibrose10,25te kwantificeren. Door middel van dezelfde software en ROIs toegepast voor de Fractie van de fibrose, het gebied van de lucht binnen de ROIs met behulp van een witte drempel te detecteren.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21727191">Integrating mechanisms of pulmonary fibrosis.</a> J. Exp. Med. 208 (7), 1339-1350 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A., Ramalingam, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+fibrosis%3A+therapeutic+translation+for+fibrotic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of fibrosis: therapeutic translation for fibrotic disease.</a> Nat. Med. 18 (7), 1028-1040 (2012).</li>
<li>Moore, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+fibrotic+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Animal models of fibrotic lung disease.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (2), 167-179 (2013).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nintedanib+on+the+microvascular+architecture+in+a+lung+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Effects of nintedanib on the microvascular architecture in a lung fibrosis model.</a> Angiogenesis. , (2017).</li>
<li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17993587">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), 152-160 (2008).</li>
<li>Organ, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+segmental+challenge+model+for+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Lung+Res%22%5BJournal%5D)">A novel segmental challenge model for bleomycin-induced pulmonary fibrosis in sheep.</a> Exp Lung Res. 41 (3), 115-134 (2015).</li>
<li>Organ, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+correlations+in+a+large+animal+model+of+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pulm+Med%22%5BJournal%5D)">Structural and functional correlations in a large animal model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> BMC Pulm Med. 15, 81(2015).</li>
<li>Shen, B., Du, L., Sanchez, C., Edwards, D. J., Chen, M., Murrell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+characterization+of+the+bleomycin+biosynthetic+gene+cluster+from+Streptomyces+verticillus+ATCC15003%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nat+Prod%22%5BJournal%5D)">Cloning and characterization of the bleomycin biosynthetic gene cluster from Streptomyces verticillus ATCC15003.</a> J Nat Prod. 65 (3), 422-431 (2002).</li>
<li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Delivery+of+Bleomycin%3A+A+Comprehensive+Anticancer+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cancer+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Targeted Delivery of Bleomycin: A Comprehensive Anticancer Review.</a> Curr Cancer Drug Targets. 16 (6), 509-521 (2016).</li>
<li>Ashcroft, T., Simpson, J. M., Timbrell, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+method+of+estimating+severity+of+pulmonary+fibrosis+on+a+numerical+scale%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Simple method of estimating severity of pulmonary fibrosis on a numerical scale.</a> J Clin Pathol. 41 (4), 467-470 (1988).</li>
<li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+the+lung+inflammatory+response+to+Pseudomonas+aeruginosa+and+its+modulation+by+azithromycin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin.</a> J Transl Med. 13, 251(2015).</li>
<li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+monitoring+of+lung+inflammation+in+CFTR-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice.</a> J Transl Med. 14 (1), 226(2016).</li>
<li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+transiently+transgenized+mice+with+a+bovine+interleukin+8+%28CXCL8%29+promoter%2Fluciferase+reporter+construct%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct.</a> PloS one. 7 (6), 39716(2012).</li>
<li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlightened+Mannhemia+haemolytica+lung+inflammation+in+bovinized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Enlightened Mannhemia haemolytica lung inflammation in bovinized mice.</a> Vet Res. 45, 8(2014).</li>
<li>Tassali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MR+imaging%2C+targeting+and+characterization+of+pulmonary+fibrosis+using+intra-tracheal+administration+of+gadolinium-based+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">MR imaging, targeting and characterization of pulmonary fibrosis using intra-tracheal administration of gadolinium-based nanoparticles.</a> Contrast Media Mol Imaging. 11 (5), 396-404 (2016).</li>
<li>Ma, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+asthmatic+inflammation+using+hybrid+fluorescence+molecular+tomography-x-ray+computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Assessment of asthmatic inflammation using hybrid fluorescence molecular tomography-x-ray computed tomography.</a> J Biomed Opt. 21 (1), 15009(2016).</li>
<li>Van de Velde, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+micro-CT+provides+biomarkers+of+lung+disease+that+can+be+used+to+assess+the+effect+of+therapy+in+preclinical+mouse+models%2C+and+reveal+compensatory+changes+in+lung+volume%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Longitudinal micro-CT provides biomarkers of lung disease that can be used to assess the effect of therapy in preclinical mouse models, and reveal compensatory changes in lung volume.</a> Dis Model Mech. 9 (1), 91-98 (2016).</li>
<li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterologous+Matrix+Metalloproteinase+Gene+Promoter+Activity+Allows+In+Vivo+Real-time+Imaging+of+Bleomycin-Induced+Lung+Fibrosis+in+Transiently+Transgenized+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Heterologous Matrix Metalloproteinase Gene Promoter Activity Allows In Vivo Real-time Imaging of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Transiently Transgenized Mice.</a> Front Immunol. 8, 199(2017).</li>
<li>Hellbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+dark-field+radiography+facilitates+the+diagnosis+of+pulmonary+fibrosis+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">X-ray dark-field radiography facilitates the diagnosis of pulmonary fibrosis in a mouse model.</a> Sci Rep. 7 (1), 340(2017).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+imaging+of+experimental+lung+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive imaging of experimental lung fibrosis.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 53 (1), 8-13 (2015).</li>
<li>Ruscitti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+assessment+of+bleomycin-induced+lung+fibrosis+by+Micro-CT+correlates+with+histological+evaluation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Multidiscip+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Longitudinal assessment of bleomycin-induced lung fibrosis by Micro-CT correlates with histological evaluation in mice.</a> Multidiscip Respir Med. 12, 8(2017).</li>
<li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+inflammation+and+airway+remodeling+by+fluorescence+molecular+tomography+in+a+chronic+asthma+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring inflammation and airway remodeling by fluorescence molecular tomography in a chronic asthma model.</a> J Transl Med. 13, 336(2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%2C+8th+ed%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th ed</a>. , National Research Council. Washington DC. (2011).</li>
<li>Meganck, J. A., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dosimetry+in+Micro-computed+Tomography%3A+a+Review+of+the+Measurement+Methods%2C+Impacts%2C+and+Characterization+of+the+Quantum+GX+Imaging+System%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Dosimetry in Micro-computed Tomography: a Review of the Measurement Methods, Impacts, and Characterization of the Quantum GX Imaging System.</a> Mol Imaging Biol. , (2016).</li>
<li>Hubner, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+quantification+of+pulmonary+fibrosis+in+histological+samples%29%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples).</a> BioTechniques. 44 (4), 507-514 (2008).</li>
<li>King, T. E., Pardo, A., Selman, M. <a target="_blank" href="http://www.soneco.com.ar/images/diapositivas/fibrosis_pulmonar_idiopatica.pdf">Idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Lancet. 378 (9807), 1949-1961 (2011).</li>
<li>De Langhe, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+lung+fibrosis+and+emphysema+in+mice+using+automated+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Quantification of lung fibrosis and emphysema in mice using automated micro-computed tomography.</a> PloS one. 7 (8), 43123(2012).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende belangen hebben.

Ondanks vele onderzoeksgroepen zich te concentreren op de ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen voor de behandeling van de IPF, op dit moment zijn slechts twee beschikbaar voor patiënten. Er is een dringende medische noodzaak om te vinden van meer effectieve therapieën7 omdat alleen Long transplantationis bekwaam om te overleven van 4-5 jaar26verlengen. De essentiële voorwaarde voor translationeel geneeskunde en ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen is de beschikbaarheid ...

Idiopathische longfibrose (IPF) is chronische longziekte met progressieve daling van longkanker functies die helaas vaak dodelijk is binnen vier jaar na de diagnose1. De belangrijkste functies van de IPF zijn afzetting van de extracellulaire matrix en fibroblast proliferatie, maar de pathogenese is nog niet volledig begrepen. De meest gesteunde hypothese is dat meerdere cycli van longkanker verwondingen leiden tot de vernietiging van de alveolaire epitheliale cellen die tot wijziging van de proliferatie van de mesenchymale celcyclus, overdreven accumulatie van fibroblasten en myofibroblasts leidt, en verhoogde matrix productie. Bemiddelaars bij deze processen betrokken zijn, zoals matrix metalloproteinasen (MMP) gevonden in fibrose ontwikkeling menselijke IPF of in diermodellen bleomycine-geïnduceerde dysregulated. De ongecontroleerde MMP productie leidt tot een onevenwichtige collageen depositie in de longen interstitium en de alveolaire ruimte, nabootsen van abnormale wond reparatie1,2.
Een van de belangrijkste belemmeringen voor Geneesmiddelenontwikkeling is de beschikbaarheid van toegankelijke Muismodellen die menselijke pathogenese en het fenotype van de ziekte na te bootsen. Verschillende agenten zijn gebruikt voor het opwekken van fibrose van de Long in diermodellen: bestraling schade, beheer van asbest en silica, beheer van fibrinogenic cytokines en bleomycine3,4; maar bleomycine is de meest gebruikte in muizen, ratten, cavia's, hamsters, konijnen5 of in grote dieren (niet-menselijke primaten, paarden, honden en herkauwers)6,7. Bleomycine is een antibioticum dat is gemaakt door de bacterie Streptomyces verticillus8 en wordt gebruikt als een anti-kanker agent9. Longfibrose is een veelvoorkomende bijwerking van de drug en om deze reden, het wordt gebruikt in experimentele dierlijke modellen voor het opwekken van longfibrose.
De fibrotische letsels optreden in Long bleomycine-geïnduceerde fibrose modellen, 14-21 dagen na toediening van bleomycine. In het gepresenteerde werk gebruikten we een nieuw protocol voor het opwekken van fibrose van de Long in muizen door dubbele bleomycine intratracheale instillatietest. De muismodel van bleomycine is zeer tijdrovend, omdat nieuwe geneesmiddelen moeten worden beoordeeld op gevestigde fibrotische laesies en getest om te onderscheiden van hun anti-fibrotische effecten van anti-inflammatoire effecten.
Biochemische bepaling van collageen inhoud, morphometrical en histologische analyse waren gebaseerd op de postmortem analyse, beperking van de mogelijkheid om te volgen van de pathogenese van de ziekte bij hetzelfde dier. Hoewel deze parameters werden beschouwd als een gouden standaard voor de evaluatie van de fibrose, deed ze niet bieden van een tijdelijke of ruimtelijke verdeling van de fibrotische laesie en beletsel voor een manier om het proces van progressie van de ziekte te onderzoeken. 10
Onlangs, niet-invasieve imaging-technologieën zijn toegepast op de monitor airway remodelleren, ontsteking en fibrose progressie in lymfkliertest modellen: Magnetic Resonance Imaging (MRI), Micro Computer Tomografie (Micro-CT), moleculaire fluorescentie Tomografie (FMT) en bioluminescente (BLI)11,12,13,14,15,16,17,18,19 2120, ,. Stellen wij een niet-invasieve beeldvormende aanpak als u wilt controleren lengterichting lung fibrosis progressie door FMT en Micro-CT op verschillende tijdstippen na een bleomycine challenge22.
Vele trajecten zijn betrokken bij de oprichting en de ontwikkeling van fibrose, en is niet veel bekend. Alleen een dieper inzicht in deze processen kan vertalen naar meer drug targets die in de kliniek overdragen mag. De mogelijkheid om te controleren lengterichting MMP activering door fluorescentie moleculaire tomografie gekoppeld aan de detectie van Long parenchymal veranderingen door Micro-CT misschien in de toekomst worden gebruikt voor toegang tot de klinische respons op behandeling.

<table><tbody><tr><td>FMT 2500 Fluorescente Tomografie Systeem</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td>Experimenteel Bouwer</td><td></td></tr><tr><td>MMPsense 680</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td>NEV10126</td><td>Beschermen tegen licht, bewaar de sonde bij 4 &deg;C</td></tr><tr><td>TrueQuant software</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vrouwelijke ingebouwde C57BL/6</td><td>San Pietro Natisone Horst, The Netherlands (UD),&nbsp;</td><td></td><td>Voorafgaand aan gebruik, werden de dieren geacclimatiseerd gedurende ten minste 5 dagen aan de lokale diergaarde omstandigheden</td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>ESTEVE spa</td><td>571329.8</td><td>Niet inhaleren</td></tr><tr><td>Automatische celteller</td><td>Dasit XT 1800J</td><td>Experimenteel Bouwer</td><td></td></tr><tr><td>Zoutoplossing, 0,9% natriumchloride (NaCl)</td><td>Eurospital</td><td>15A2807</td><td></td></tr><tr><td>Quantum FX Micro-CT scanner&nbsp;</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bleomycine sulfaat uit Streptomyces Verticillus&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>&nbsp;B2434&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Automatische weefsel Processor&nbsp;</td><td>ATP700 Histo-Line Laboratories</td><td>ATP700&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Inbeddingssysteem&nbsp;</td><td>EG 1160 Leica Biosystems</td><td>EG 1160</td><td></td></tr><tr><td>Roterende microtoom&nbsp;</td><td>Slee Cut 6062</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digitale diascanner&nbsp;</td><td>NanoZoomer S60, Hamamatsu Photonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-AR beeldanalysesoftware&nbsp;</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masson&rsquo;s Trichrome Kleuring</td><td>Histo-Line Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% neutraal-gebufferde formaline</td><td>Sigma</td><td>HT5012-1CS</td><td></td></tr><tr><td>Penn-century model DP-4M Dry power insufflator</td><td>Penn-century</td><td>DPM-EXT</td><td></td></tr><tr><td>PE190 micro medische buis</td><td>2biologische instrumenten snc</td><td>BB31695-PE/8</td><td></td></tr><tr><td>Spuit zonder naald 5 mL</td><td>Terumo</td><td>SS*05SE1</td><td>Snij de planken van de zuiger met een schaar</td></tr><tr><td>Hamilton 0.10 mL (model 1710)</td><td>Gastight</td><td>81022</td><td></td></tr><tr><td>Discofix 3-weg stopkraan</td><td>Braun</td><td>4095111</td><td></td></tr><tr><td>Spuit met naald 1 mL</td><td>Pic solution</td><td>3,071,260,300,320</td><td>Gebruik zonder naald</td></tr><tr><td>Kunststof voedingsbuisjes 18 ga x 50 mm</td><td>2biologische instrumenten snc</td><td>FTP-18-50</td><td>Snij schuin de punt&nbsp;</td></tr></tbody></table>

een multimodale imaging aanpak op basis van micro-ct en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordeling van bleomycine-geïnduceerde lung fibrosis in muizen

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

Idiopathische longfibrose (IPF) is een dodelijke longziekte, gekenmerkt door de geleidelijke en onomkeerbare vernietiging van Long architectuur, waardoor significante verslechtering in de longfunctie en daaropvolgende dood van respiratoire insufficiëntie.
De pathogenese van IPF in experimentele dierlijke modellen heeft zijn geïnduceerd door bleomycine administratie. In deze studie onderzoeken we een IPF-achtige muismodel geïnduceerd door een dubbele intratracheale bleomycine instillation. Standaard histologische evaluaties gebruikt voor het bestuderen van de Long-fibrose zijn invasieve terminal procedures. Het doel van dit werk is volgen lung fibrosis via noninvasive beeldvormingstechnieken zoals fluorescerende moleculaire tomografie (FMT) en Micro-CT. Deze twee technologieën gevalideerd met de bevindingen van de histologie kunnen vertegenwoordigen een revolutionaire functionele aanpak voor real-time niet-invasieve monitoring van IPF ziekte ernst en progressie. De fusie van verschillende benaderingen stap een verder voor het begrijpen van de IPF ziekte, waar de moleculaire gebeurtenissen die plaatsvinden in een pathologische aandoening kunnen worden waargenomen met FMT en de daaropvolgende anatomische veranderingen kunnen worden gecontroleerd door Micro-CT.

Spontane resolutie van de Long-fibrose letsels waargenomen drie weken nadat één bleomycine administratie en gematigde structurele wijzigingen de grenzen van dit model markeren. Alleen preventieve behandeling kan worden uitgevoerd als gevolg van de smalle therapeutische venster dat niet tot klinische praktijk17 leidt.
Hier, wij laten zien dat onze protocol van dubbele bleomycine intratracheale instillatiet...

Beschrijven we een niet-invasieve multimodale aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordelingvan de muismodel van lung fibrosis geïnduceerd door dubbele intratracheale instillatietest van bleomycine imaging.

Een multimodale Imaging aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordeling van bleomycine-geïnduceerde Lung Fibrosis in muizen

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Het algemene doel van dit onderzoek naar een IPF-achtig muismodel is om longfibrose longitudinaal te bewaken met niet-invasieve beeldvormingstechnieken zoals FMT en micro-CT. Deze methode kan de volgorde van specifieke moleculaire gebeurtenissen in longfibrose verbeteren. Het belangrijkste voordeel van deze technieken is dat anatomische veranderingen van specifieke moleculaire gebeurtenissen niet-invasief kunnen worden gemonitord.De toepassingen van deze technologieën strekken zich uit tot de therapie van IPF-pathologie omdat de fusie van FMT en micro-CT de mogelijkheid biedt om ziekteprogressie en nieuwe therapie-evaluatie te bestuderen. Begin met het plaatsen van een geanesthetiseerde muis op het intubatieplatform en hang deze op aan zijn snijtanden die op de draad zijn geplaatst. Schakel de laryngoscope in en neem vervolgens een paar stompe pincetten en open voorzichtig de mond.Plaats de laryngoscoopblad naar de achterkant van de mond tot de opening van de luchtpijp zichtbaar is. Gebruik de andere hand om de afgifteslang aan het uiteinde van de PE-buis in de luchtpijp te steken. Draai de driewegklep om 50 microliter bleomycine af te geven.Verwijder na installatie snel de buis uit de luchtpijp om verstikking te voorkomen. Houd de muizen een paar seconden rechtop. Voor sonde-injectie pakt u de muis bij de staart en laat u hem de kooideksel grijpen.Grijp vervolgens over de schouders en houd de muis bij de nek vast. Dompel de staart onder in een beker met warm water om de aderen te laten zwellen voor betere visualisatie en naaldinjectie. Zoek de twee caudale aderen aan weerszijden van de staart, niet de slagader aan de onderkant van de staart.Steek de 26 gauge naald van de met MMP geladen 1 milliliter spuit in de ader en injecteer de MMP-sonde-oplossing met 10 milliliter per kilogram lichaamsgewicht. Om te beginnen initialiseert u de datumverwervingssoftware en opent u een nieuwe studie in de database voor het experiment. Voordat u met de beeldvorming begint, brengt u de geschoren en geanesthetiseerde muis naar het midden van de beeldvormingskas.Houd de muis plat, veilig en zachtjes tegen beide vensters van de beeldvormingskas gedrukt. Klik vervolgens in het scanvenster van de software op "Onderwerp" en vervolgens op voorbeeld om de live-afbeelding te zien. Teken het scangebied voldoende groot zodat de weefsels rond het verwachte gebied van fluorescentie worden vastgelegd.Zodra de ROY is getekend, klikt u op "Toevoegen aan reconstructiewachtrij" en vervolgens op "Scannen" om de muis te beeldvormen. Wanneer de beeldacquisitie is voltooid, verwijdert u de muis uit de beeldvormingskas en plaatst u hem terug in de thuiskooi. Kwantificeer de picomolen fluorescentie met behulp van de ROY-tool en verminder de ROY rond 700 tot 800 kubieke millimeter op het signaal afkomstig van het longgebied.Herhaal de beeldvorming elke zeven dagen of zoals vereist. Om met micro-CT te beeldvormen, schakel eerst de micro-CT in door op de groene aan/uit-knop te drukken en start de software om de röntgenbron op te warmen. Maak de database aan door op "Nieuwe database" te klikken en bouw de browser op basis van het aantal muizen in het experiment.Selecteer voordat u met de scan begint de acquisitieparameters in het softwarebesturingsvenster als volgt. Stel de röntgenbuisspanning in op 90 kilovolt, de CT-röntgenbuisstroom op 160 micro angstroms, de werkelijke röntgenbuisstroom op 80 micro angstroms en het beeldveld op 36 millimeter. Selecteer geen Gating Technique" en High Resolution" en vier minuten voor scantechniek.Nadat de muis is geanesthetiseerd door inademing van 3% isofluraangezet, plaatst u deze op het dierenbed dat in de kleine boring is geplaatst met een neuskoker die een constante toevoer van anesthesie biedt. Immobiliseer de poten met tape op het bed om de borstkas bloot te leggen. Sluit vervolgens de instrumentdeur en schakel live-modus in om de muispositie in realtime te zien door op de knop voor opname te drukken.Verplaats het dierenbed om de borstkas te aligneren met het beeldveld met behulp van de knoppen op het CT-instrument. Zodra de muis gecentreerd is, draait u de draaibare om de optimale bedpositie te bevestigen door 90 graden te selecteren en op "Instellen" te klikken. Klik vervolgens op de CT-scanknop. Klik op "Ja" bij het bericht dat informeert dat de röntgenbron wordt ingeschakeld.Na de beeldvorming plaatst u de dieren terug in de kooi en bewaakt u tot ze volledig zijn hersteld van de anesthesie. Herhaal de beeldvorming elke zeven dagen of zoals vereist. Kleuring met Masson's trichrome onthult de morfologie in het longweefsel.Foto's van de met bleomycine behandelde groep vertoonden een uitgesproken fibrosepatroon dat vanaf dag zeven begon, voornamelijk als enkele fibrotische massa's en vorderde op dag 14 tot samenvloeiende conglomeraten van substitueerd collageen en bleef onveranderd tot dag 21. Herhaalde micro-CT-beeldvorming maakte kwantificering en segmentatie van de luchtwegen in fibrose longlobben mogelijk. De luchtwegen werden verdeeld in een centrale en distale deel.De distale delen van de luchtwegen zijn het intrapulmonaire kanaal en splitsen zich op in de longlobben als de rechter craniale lob, rechter middelste lob, rechter caudale lob, rechter accessoire lob en linker long. Kwantificering van de luchtwegstraal toonde een verhoogde straal bij de met bleomycine behandelde muizen in vergelijking met saline-controles. Elk punt vertegenwoordigt de gemiddelde standaardfout van het gemiddelde van vijf dieren voor een totaal van 30 muizen.Kwantificering van de totale longfibrose van voertuig- of bleomycine-behandelde muizen op verschillende tijdstippen toont aan dat deze micro-CT-parameters overeenkomen met histologische bevindingen. Eenmaal beheerst kan deze techniek routinematig worden uitgevoerd voor geneesmiddelscreening. Na de ontwikkeling heeft deze techniek de weg geëffend voor onderzoekers op het gebied van longfibrose-ziekte om de effectiviteit van de herhaalde behandeling in IPF-achtige diermodellen

a-multimodal-imaging-approach-based-on-micro-ct-fluorescence

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een experimenteel muismodel van bot metastase is opgericht naar aanleiding intracardiale levering van luciferase expressie mamma tumorcellen. De ontwikkeling van tumoren en resulteerde osteolytische laesie werden longitudinaal gevolgd met bioluminescentie en micro-CT beeldvorming.

Monitoring tumormetastasen en osteolytische laesies met bioluminescentie en Micro CT Imaging

Diffuse fluorescentie tomografie biedt een relatief goedkope en potentieel hoge hele benadering van de...

Computed Tomography-begeleide tijd-domein Diffuus fluorescentie tomografie in kleine dieren voor het lokaliseren van Cancer Biomarkers

We beschrijven een protocol voor hybride beeldvorming, dat fluorescentie-gemedieerde tomografie (FMT) combineert met micro-computertomografie (µCT). Na fusie en reconstructie voeren we interactieve orgaansegmentatie uit om kwantitatieve metingen van de fluorescentieverdeling te extraheren.

Hybride μCT-FMT beeldvorming en beeldanalyse

We beschrijven een methode voor de detectie van tumorknobbelontwikkeling in de longen van een adenocarcinoom muismodel met behulp van micro-computertomografie en het gebruik ervan voor het monitoren van veranderingen in knobbelgrootte over tijd en als reactie op behandeling. De nauwkeurigheid van de beoordeling werd bevestigd met histologische kwantificering aan het eindpunt.

Met behulp van micro-computertomografie voor de evaluatie van de ontwikkeling van tumoren en follow-up van de respons op de behandeling in een muismodel van longkanker

Beschrijven we een methode om engraftment van de orthotopic van longkanker kankercellen in de longen lymfkliertest aanzienlijk te verbeteren door preconditionering van de luchtwegen met blessure. Deze benadering kan ook worden toegepast om te studeren stromale interacties binnen de longen communicatie, gemetastaseerde verspreiding, long kanker co morbiditeit en efficiënter genereren patiënt afgeleid xenografts.

Preconditionering de luchtwegen van muizen met bleomycine verhoogt de efficiëntie van Orthotopic long kanker cel Engraftment

Hier gebruiken we bioluminescente, X-ray, en het positron-emissie tomografie/berekend tomography imaging te bestuderen hoe remmende mTOR activiteit beïnvloedt het beenmerg-geaccepteerd myeloma tumoren in een xenograft model. Dit zorgt voor fysiologisch relevante, niet-invasieve en multimodale analyses van het effect van de anti-myeloma van therapieën gericht op beenmerg-geaccepteerd myeloma tumoren in vivo.

Multimodale bioluminescente en positronisch-emissie tomografie/computationele Tomography Imaging van Multiple Myeloma beenmerg Xenografts in NOG muizen

Hier presenteren we een effectieve methode voor het onderzoeken van de antifibrotische activiteit van intraveneus geïnfundeerde humane mesenchymale stromale cellen verkregen uit de gehele navelstreng na de inductie van long letsel door een Endotracheale injectie van bleomycine in C57BL /6 muizen. Dit protocol kan eenvoudig worden uitgebreid tot de preklinische testen van andere therapieën.

Inductie van muis long letsel door Endotracheale injectie van bleomycine

Hier presenteren we een protocol om micro-computertomografie (micro-CT) te gebruiken om geventileerde gebieden te kwantificeren in een unilateraal bleomycine-geïnduceerd longfibrosemodel via intratracheale instillatie aan de laesiezijde.

Unilaterale longvolumeanalyse met behulp van micro-CT voor verbeterde beoordeling van longfibrose in preklinische modellen

Dit protocol demonstreert de orofaryngeale aspiratietechniek voor gebruik in het bleomycine muizenmodel van longfibrose.

orofaryngeale toediening van bleomycine in het muizenmodel van longfibrose

Hier presenteren we een protocol om pulmonale fibrose bij muizen te modelleren met gebruik van geaerosoliseerde bleomycine toegediend via de luchtpijp. Deze geoptimaliseerde methode maakt uniforme, kwantitatieve en precieze toediening mogelijk zonder chirurgische incisie, wat de reproduceerbaarheid en betrouwbaarheid van door bleomycine geïnduceerde fibrose verbetert.

Een verfijnde aerosolgebaseerde intratracheale bleomycine toedieningsmethode voor reproduceerbare en minimaal invasieve muismodellen van pulmonale fibrose

Leer een multimodale imaging-aanpak met Micro-CT en FMT voor longitudinale evaluatie van bleomycine-geïnduceerde longfibrose bij muizen. Deze niet-invasieve methode volgt anatomische en moleculaire veranderingen in een IPF-achtig model.

Een multimodale Imaging aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordeling van bleomycine-geïnduceerde Lung Fibrosis in muizen (Video) | JoVE Journal

Een multimodale Imaging aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordeling van bleomycine-geïnduceerde Lung Fibrosis in muizen

Meer video's verkennen