Name: Ballon gebaseerde letsel ertoe Myointimal Hyperplasia in de muis abdominale Aorta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Leer een muizenmodel voor myointimale hyperplasie na aortale ballonletsel. Deze methode onderzoekt pathomechanismen van vaatletsel en versnelt inzicht in cardiovasculaire ziekteontwikkeling voor therapeutische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken Christiane Pahrmann voor haar technische bijstand.
D.W. werd gesteund door de Max Kade Foundation. T.D. ontvangen subsidies uit het anders Kröner Fondation (2012_EKES.04) en de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. ontvangen onderzoekssubsidies van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

Dieren ontvangen van humane zorg met inachtneming van de gids voor de beginselen van de proefdieren, opgesteld door het Instituut van laboratorium dierlijke hulpbronnen en gepubliceerd door de National Institutes of Health. Alle dierlijke protocollen werden goedgekeurd door de verantwoordelijke lokale autoriteit ('' Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, (Bureau voor gezondheid en consumentenbescherming) Hansestadt Hamburg'').
1. de katheter voorbereiding
Nota: Verwijs naar de Tabel van materialen voor informatie over de katheter.
<ol><li>Neem katheter uit de houder van de katheter.</li>
	<li>Trek de guidewire uit de lumen via de distale poort uit.</li>
	<li>Zet in een druppel Cyanoacrylaat lijm op de distale uiteinde van de katheter. Let op: Latex of nitril handschoenen dragen.</li>
	<li>Plaats de guidewire in de haven van de RX van de katheter en verder het via de lumen op de distale poort. Daarna trekken de guidewire terug iets te laten een ruimte van ~ 5 mm aan het einde.</li>
	<li>Wacht 5 minuten, zodat de lijm drogen.</li>
	<li>Verplaats de guidewire, het moet worden vastgesteld. Als er nog mobiele, herhaalt u stappen 1.3-1.6.</li>
	<li>Een 3-mL spuit vullen met 1,5 mL 0.9% zout en sluit deze aan op de poort van de inflatie ballon.</li>
	<li>Duw de plunjer van de injectiespuit te testen ballon inflatie. Laat 0,6 mL zoutoplossing in de spuit.</li>
</ol>2. muis voorbereiding
<ol><li>Mannelijke muizen op de leeftijd van 14 weken weegt ongeveer 30 g verkrijgen. Opmerking: We gebruikten dieren verkregen van het Instituut van de proefdieren. We gebruikten C57BL/6J hier.</li>
	<li>Met een inductie kamer kunt anaesthetize de muis met 2.0-2.5% isofurane (500 mL/min debiet zuurstof).</li>
	<li>Plaats de muis op de rug een verwarming pad en onderhouden van verdoving met een gelaatsmasker die betrekking hebben op de mond en neus van de muis. Controleren op voldoende diepte van de verdoving door te knijpen de achtervoeten en staart om te controleren of een afwezigheid van reflexen.</li>
	<li>Verwijder het buikhaar met behulp van een tondeuse.</li>
	<li>De achterpoten zijn verspreid en monteren van hun positie met behulp van tape.</li>
	<li>Desinfecteer de buikstreek met Povidon-jodium, gevolgd door 80% ethanol. Herhaal deze stap twee meer tijden.</li>
	<li>Gebruik een chirurgische gordijn om chirurgisch site doet niet krijgen besmet. Open de lagen van de huid en spieren langs de linea alba met een schaar of scalpel, bloot de buikorganen.</li>
	<li>De darmen lag in een 0,9% zout gehydrateerd handschoen en wikkel om ze te houden vochtig.</li>
	<li>Gebruik twee fijne pincet te verwijderen van het vetweefsel boven de abdominale aorta.</li>
	<li>Met behulp van een insuline spuit (30G), injecteren 250 µL van heparine oplossing (50 U/mL) in het Inferior Vena Cava (IVC) en wacht 3 min voor zijn systemische distributie. Heparine wordt hemostase onderdrukken en te voorkomen dat ongewenste stolling tijdens de operatie.</li>
	<li>Met behulp van twee pincet, ontleden de aorta infrarenal neer aan haar bifurcatie en zijn uitgaande schepen van de tak.</li>
	<li>Afbinden kant vaartuigen, die zouden moeten worden geplaatst in het geklemd gebied met een hoge temperatuur cauterizer.</li>
	<li>Stoppen van de bloedstroom door klemmen van de aorta infrarenal direct onder de renale bloedvaten.</li>
	<li>Plaats een tweede klem op een distale positie net boven de aorta bifurcatie.</li>
	<li>Het uitvoeren van een kleine horizontale opening met behulp van schaar op het middelpunt tussen de klauwen langs het schip. Opmerking: De grootte van de incisie moet gelijk aan 1/3 van de omtrek van het vaartuig.</li>
	<li>Een injectiespuit met een naald (30G) aansluit op de incisie en spoel de aorta met 250 µL heparine oplossing (50 U/mL).</li>
	<li>Plaats één enkele knoop aan weerskanten van de incisie met 10-0 hechtingen.</li>
	<li>Verwijden de aorta door het invoegen van een vaartuig dilator in de incisie en verspreid het schip lichtjes. Herhaal de dilatatie 2 tot 3 keer.</li>
	<li>Hydrateren de ballon-katheter met 0,9% zout.</li>
	<li>De afgevlakte ballon-katheter invoegen in de aorta en verder het richting de proximale klem op de aorta.</li>
	<li>Bij het bereiken van de proximale klem, voorzichtig openen van de proximale klem en opblazen van de ballon om te voorkomen dat bloed lekkage, door het injecteren van ~0.6 mL zoutoplossing. Opmerking: De verhouding van de opgeblazen ballon op vaartuig is 1.5:1.</li>
	<li>Verder de katheter retrograde voor ongeveer 2 cm.</li>
	<li>Trek de uitgebreide katheter terug, terwijl de deflatie van de ballon iets door het vrijgeven van de spuit.</li>
	<li>Opnieuw koppelen de proximale klem wanneer de katheter de insnijding van de aorta bereikt. Volledig leeglopen van de ballon en verwijder deze.</li>
	<li>Spoel de aorta met 250 µL heparine oplossing (50 U/mL) met behulp van een injectiespuit 30G.</li>
	<li>Sluit de aorta incisie met hechtingen van 10-0. Plaats onderbroken steken op elke laterale kant, gevolgd door een of twee steken aan de ventrale zijde.</li>
	<li>Open de distale klem. In het geval van het bloeden, sluit de klem weer en plaats extra steken.</li>
	<li>Open de proximale klem zorgvuldig.</li>
	<li>Plaats twee wissers op het hechtdraad te steunen en elke bloeden te stoppen.</li>
	<li>Het plaatsen van absorbeerbare hemostats op het hechtdraad om het te ondersteunen. Opmerking: Een aorta puls zichtbaar moet zijn distally van de incisie.</li>
	<li>Plaats de darmen terug in de buik.</li>
	<li>Spoel de buikholte met steriele zoutoplossing 0,9%, dat is voorverwarmde tot 37 ° C.</li>
	<li>Sluit de buikspier laag met 6-0 lopende hechtingen.</li>
	<li>Sluit de huid met 5-0 lopende hechtingen.</li>
	<li>4-5 mg/kg Carprofen subcutaan injecteren alvorens de muis om wakker te worden. Volgen van het dier totdat het bewustzijn heeft opgedaan, onderhouden sternale ligcomfort. Houd het dier alleen in een kooi tot volledig herstel.</li>
	<li>Metamizole toevoegen aan het drinkwater (50 mg/100 mL) als pijn medicatie voor 3 dagen en het dier dagelijks controleren. Meestal muizen als de zoete smaak van metamizole en beginnen drinken onmiddellijk na de operatie. Indien gewenst, kunnen aanhoudende-release injecteerbare agenten worden gebruikt in plaats van metamizole. Opmerking: De observatieperiode voor dit model is 28 dagen.</li>
</ol>3. histopathologie
<ol><li>Oogst de aorta ballon-gewond na 28 dagen door het opstellen van de muizen, zoals beschreven in stappen 2.2 tot en met 2.9.</li>
	<li>Gebruik schaar euthanaseren van de muis door te snijden zijn hart te verwijderen van de ballon-verwonde aorta (tussen de bifurcatie en 0.3 mm boven de renale bloedvaten).</li>
	<li>Spoel het lumen van het vaartuig met 0,9% NaCl.</li>
	<li>Los van het geoogste vaartuig in 4% paraformaldehyde (PFA) 's nachts en het uitdrogen in de toenemende concentraties van ethanol, beginnend met 70% ethanol voor 80% ethanol voor 1 uur, 2 uur, 95% ethanol voor 2 uur, en 100% ethanol voor 5 uur. Vervolgens, Incubeer de monsters in xyleen voor 2 uur 3 keer, voordat het infiltreren van de monsters met parafin. Opmerking: in plaats van het spuien van het geoogste vaartuig met 0,9% NaCl, het kan worden gespoeld met 4% PFA. Let op: PFA xyleen zijn giftig en met bijzondere zorg moeten worden behandeld.</li>
	<li>Het monster inbedden in paraffine en snijd in plakjes van 5 µm dikte gebruikend microtome.</li>
	<li>Deparaffinize de dia's met xyleen 3 keer voor 5 minuten.</li>
	<li>Hydrateren weefsel dia's met behulp van een afnemend aantal ethanol. Begin met 100% ethanol 2 keer voor 5 min, gevolgd door 3 minuten van 95%, 80% en 70% ethanol.</li>
	<li>De dia's met Masson van trichrome kleuring als beschreven18vlek.</li>
	<li>Dehydrateren gebeitst dia's in 100% ethanol 2 keer voor elke 10 min. Schakel met xyleen 2 keer voor elke 10 min en mount montage medium.</li>
	<li>De dia's met een heldere veld microscoop bekijken. Gebruik een lens met 5 x vergroting en een numerieke diafragma van 0,12 voor een overzichtsfoto of een lens met 20 x vergrotingen met een numerieke diafragma voor 0.35 voor gedetailleerde observatie.</li>
</ol>4. immunofluorescentie microscopie
<ol><li>Hydrateren weefsel dia's met behulp van een afnemend aantal ethanol. Begin met 100% ethanol 2 keer voor 5 min, gevolgd door 3 min van 95%, 80% en 70% ethanol.</li>
	<li>Uitvoeren van antigeen-ophalen door verwarming van de dia's in de oplossing van de antigeen-gegevensherwinning in een stomer voor 20 min.</li>
	<li>Laat de dia's afkoelen tot kamertemperatuur.</li>
	<li>Na het wassen de dia's voor driemaal met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS), antigeen blokkerende oplossing van toepassing op secties voor 30 min.</li>
	<li>Wassen van dia's drie keer, gedurende 5 min met PBS.</li>
	<li>Incubeer secties met primair antilichaam verdund in primair antilichaam verdunningsmiddel. Opmerking: De juiste concentratie en incubatie tijd moet afzonderlijk gekozen worden voor elke antilichaam.</li>
	<li>Wassen van dia's drie keer, gedurende 5 min met PBS te verwijderen unbound antilichaam.</li>
	<li>Incubeer secties met een vooraf geconjugeerd secundair antilichaam verdund in secundair antilichaam verdunningsmiddel. Opmerking: De juiste concentratie en incubatie tijd moet afzonderlijk gekozen worden voor elke antilichaam.</li>
	<li>Verwijder niet-afhankelijke antistoffen door de dia's gedurende 5 minuten wassen drie keer.</li>
	<li>Counterstain van de celkernen met 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) gedurende 15 minuten; de eindconcentratie van de DAPI moet 350 nM.</li>
	<li>Mount dia's in immunofluorescentie compatibel montage oplossing. Opmerking: Gebruik van de verkeerde montage oplossing kan verdoezelen de fluorescentie-signaal.</li>
	<li>Dia's weergeven met een fluorescentie Microscoop. Gebruik een 40 x vergroting lens met een numerieke diafragma van 1.3.</li>
</ol>

<ol><li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Natl+Vital+Stat+Rep%22%5BJournal%5D)">Deaths: final data for 2009.</a> Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).</li>
<li>Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+proliferation+of+smooth+muscle+cells+as+an+explanation+for+recurrent+coronary+artery+stenosis+after+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).</li>
<li>Greenwald, S. E., Berry, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+vascular+grafts%3A+the+importance+of+mechanical+and+haemodynamic+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties.</a> J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).</li>
<li>Majesky, M. W., Schwartz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+diversity+in+arterial+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle diversity in arterial wound repair.</a> Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).</li>
<li>Owens, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+differentiation+of+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells.</a> Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).</li>
<li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease.</a> Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).</li>
<li>Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+atherosclerosis%3A+a+comprehensive+review+of+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice.</a> Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).</li>
<li>Karas, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+intimal+proliferation+after+balloon+injury+and+stenting+in+swine%3A+an+animal+model+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis.</a> J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).</li>
<li>Ip, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelets%2C+thrombin+and+hyperplasia+in+restenosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).</li>
<li>Mason, R. G., Read, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+species+differences+in+fibrinolysis+and+blood+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res%22%5BJournal%5D)">Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation.</a> J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).</li>
<li>Lafont, A., Faxon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+animal+models+of+post-angioplasty+restenosis+sometimes+poorly+predict+the+outcome+of+clinical+trials%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).</li>
<li>Matter, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+balloon-induced+inflammation%2C+proliferation%2C+and+neointima+formation+in+apolipoprotein+E+%28ApoE%29+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice.</a> Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).</li>
<li>Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+arterial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of arterial injury.</a> Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).</li>
<li>Simon, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+neointimal+formation+in+Mac-1%28-%2F-%29+mice+reveals+a+role+for+inflammation+in+vascular+repair+after+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty.</a> J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).</li>
<li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li>
<li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide%2C+gender%2C+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li>
<li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myointimal+hyperplasia%3A+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).</li>
<li>Stubbendorff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+myointimal+hyperplasia+versus+atherosclerosis+in+mice%3A+an+introduction+of+two+valid+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models.</a> J Vis Exp. (87), e51459(2014).</li>
<li>Deuse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichloroacetate+prevents+restenosis+in+preclinical+animal+models+of+vessel+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury.</a> Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit artikel toont een lymfkliertest model voor het bestuderen van de ontwikkeling van myointimal hyperplasie en laat de verkenning van de onderliggende pathologische processen en het testen van nieuwe geneesmiddelen of een therapeutische opties.
De meest kritische stap in dit protocol is de ontbossing van de aorta. Speciale aandacht moet worden besteed tijdens deze stap, zoals overdreven ontbossing tot aneurysma vorming en model falen leiden zal. Aan de andere kant, als denudatie onvoldoende w...

Arteriële stenose in coronaire en perifere bloedvaten heeft een groot effect op de morbiditeit en mortaliteit voor patiënten1. Een onderliggende pathologische mechanisme is myointima hyperplasie (MH), dat wordt gekenmerkt door toenemende proliferatie, migratie en synthese van de extracellulaire matrix eiwitten van vasculaire vlotte spier cellen (SMC)2. SMC bevinden zich in de laag van de media van het vaartuig en migreren op stimulatie op het oppervlak van de lumen. Stimulerend signalen zijn groeifactoren, cytokines, cel-cel contact, lipiden, componenten van de extracellulaire matrix en mechanische schuintrekken en strek krachten3,,4,,5,6. Letsel van de vaatwand, pathologische of iatrogene, endothelial cel en gladde spieren celschade veroorzaken ontstekingsreacties stimuleren en dus leiden tot MH7.
Verschillende dierlijke modellen zijn momenteel beschikbaar voor de studie van arteriële letsel en myointima hyperplasie. Grote dieren zoals varkens of honden hebben het voordeel van het delen van een soortgelijke slagader en coronaire anatomie met mensen en zijn vooral geschikt voor studies die onderzoeken angioplasty technieken, procedure en apparaten8. Varken modellen hebben echter het nadeel van de hogere thrombogeniciteit9,10, terwijl honden alleen een milde reactie op schip schade11 hebben. Daarnaast vereisen alle grote dierlijke modellen speciale huisvesting, apparatuur en personeel, die zijn verbonden met hoge kosten en zijn niet altijd beschikbaar bij een instelling. Kleine dierlijke modellen zijn voorzien van ratten en muizen. Vergeleken met ratten, hebben muizen de voordelen van lagere kosten en het bestaan van een verscheidenheid van knock out modellen. Het model, als beschreven in deze video kan worden gecombineerd met ApoE-/-muizen gevoed met een westerse dieet te nauw bootsen de klinische setting van angioplasty in atherosclerotische vaartuigen12. Voorgaande modellen geïnduceerde vasculaire verwonding via draad letsel13, vloeistof uitdroging14, voorjaar15of cuff letsel16. Aangezien de aard van de schade zal sterk invloed op de ontwikkeling en de Grondwet van MH, is met behulp van een katheter met ballon voor het opwekken van schip schade de beste manier om na te bootsen de klinische setting.
In dit artikel beschrijven we een nieuwe methode om te induceren MH met een katheter met ballon in muizen. Het gebruik van een katheter met ballon (1.2 mm x 6 mm) met een RX-Port (figuur 1A) kan het schrapen van de intima laag en op hetzelfde moment, de inductie van een overdistension van het schip. Beide van deze factoren zijn belangrijk voor de ontwikkeling van MH triggers. De tijd van de waarneming van dit model is 28 dagen17.

<table><tbody><tr><td>10-0 Ethilon suture</td><td>Ethicon</td><td>2814G</td><td></td></tr><tr><td>3 mL Syringe</td><td>BD Medical</td><td>309658</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>5-0 prolene suture</td><td>Ethicon</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 prolene suture</td><td>Ethicon</td><td>8706H</td><td></td></tr><tr><td>Acid Fuchsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8129-25G</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Antigen retrieval solution</td><td>Dako</td><td>S1699</td><td></td></tr><tr><td>Azophloxin</td><td>Waldeck</td><td>1B-103</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Bepanthen Eye and Nose ointment</td><td>Bayer</td><td>1578675</td><td>Eye ointment</td></tr><tr><td>Betadine Solution</td><td>Betadine Purdue Pharma</td><td>NDC:67618-152</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Charles River</td><td>Stock number 000664</td><td></td></tr><tr><td>Clamp applicator</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td>JAW DIMS: 4 x 0.75 mm
LENGTH: 13 mm</td></tr><tr><td>Collagen 3</td><td>abcam</td><td>ab7778</td><td>Antibody</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fischer</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Goat IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A21432</td><td>Secondary antibody</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td>Secondary antibody</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A11055</td><td>Secondary antibody</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A31572</td><td>Secondary antibody</td></tr><tr><td>Ethanol 70%</td><td>Th. Geyer</td><td>2270</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 96%</td><td>Th. Geyer</td><td>2295</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol absolute</td><td>Th. Geyer</td><td>2246</td><td></td></tr><tr><td>FAP</td><td>abcam</td><td>ab28246</td><td>Antibody</td></tr><tr><td>Forceps fine</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Forceps standard</td><td>Fine Science Tools</td><td>11023-10</td><td></td></tr><tr><td>Glacial Acetic Acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020</td><td></td></tr><tr><td>Hair clipper</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Rotexmedica</td><td>PZN 3862340</td><td>25.000 I.E./mL</td></tr><tr><td>High temperature cautery kit</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Image-iT FX Signal Enhancer</td><td>Invitrogen</td><td>I36933</td><td>Blocking solution</td></tr><tr><td>Light Green SF</td><td>Waldeck</td><td>1B-211</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Microsurgical clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine - 4mm</td></tr><tr><td>MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange</td><td>Abbott</td><td>1012268-06U</td><td></td></tr><tr><td>Molybdatophosphoric acid hydrate</td><td>Merck</td><td>1.00532.0100</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>B.Braun</td><td>PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12075-14</td><td></td></tr><tr><td>Novaminsulfon</td><td>Ratiopharm</td><td>PZN 03530402</td><td>Metamizole</td></tr><tr><td>Orange G</td><td>Waldeck</td><td>1B-221</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Leica biosystems</td><td>REF 39602004</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>PFA 4%</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>#157135S</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S solution</td><td>Serva Electrophoresis</td><td>33427</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Primary antibody diluent</td><td>Dako</td><td>S3022</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold Mounting solution</td><td>Thermo Fischer</td><td>P36930</td><td>Mounting solution for immunofluorescence stained slides</td></tr><tr><td>Replaceable Fine Tip</td><td>Bovie</td><td>H101</td><td></td></tr><tr><td>Resorcin-Fuchsin Weigert</td><td>Waldeck</td><td>2E-30</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Rimadyl</td><td>Pfizer</td><td>400684.00.00</td><td>Carprofen</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Scissors Vannas-style</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Secondary antibody diluent</td><td>Dako</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>Fast acting Adhesive MINIS 3x1g</td><td>UHU</td><td>45370</td><td>Cyanoacrylate</td></tr><tr><td>Slide Rack</td><td>Ted Pella</td><td>21057</td><td></td></tr><tr><td>SM22</td><td>abcam</td><td>ab10135</td><td>Antibody</td></tr><tr><td>SMA</td><td>abcam</td><td>ab21027</td><td>Antibody</td></tr><tr><td>Staining dish</td><td>Ted Pella</td><td>21075</td><td></td></tr><tr><td>Surgical microscope</td><td>Leica</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>Tabotamp fibrillar</td><td>Ethicon</td><td>431962</td><td>Absorbable hemostat</td></tr><tr><td>Transpore Surgical Tape</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>U-100 Insulin syringe</td><td>BD Medical</td><td>324825</td><td></td></tr><tr><td>Vessel Dilator</td><td>Fine Science Tools</td><td>18603-14</td><td></td></tr><tr><td>Vitro-Clud</td><td>Langenbrinck</td><td>04-0001</td><td></td></tr><tr><td>Weigerts iron hematoxylin Kit</td><td>Merck</td><td>1.15973.0002</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Th. Geyer</td><td>3410</td><td></td></tr></tbody></table>

ballon gebaseerde letsel ertoe myointimal hyperplasia in de muis abdominale aorta

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

Het gebruik van diermodellen is essentieel voor een beter begrip van MH, een belangrijke oorzaak voor arteriële stenose. In dit artikel tonen we een lymfkliertest ballon denudatie model, dat vergelijkbaar is met gevestigde schip schade modellen in grote dieren. De aorta denudatie model met ballon katheters bootst de klinische setting en leidt tot vergelijkbare pathobiological en fysiologische veranderingen. Kort na het uitvoeren van een horizontale snede in de aorta abdominalis, zal een katheter met ballon worden ingevoegd in het schip, opgeblazen en retrogradely ingevoerd. Inflatie van de ballon zal leiden tot intima letsel en overdistension van het schip. Na het verwijderen van de katheter wordt de aorta incisie afgesloten met enkele hechtingen zette. Het model weergegeven in dit artikel is reproduceerbaar, gemakkelijk uit te voeren, en snel en betrouwbaar kan worden vastgesteld. Het is vooral geschikt voor de beoordeling van dure experimentele therapeutische agenten, die kunnen worden toegepast op een economische manier. Met behulp van verschillende stammen van de knock-out-muis, kan de impact van verschillende genen op MH ontwikkeling worden beoordeeld.

Ballon denudatie is een geschikt model te bestuderen voor de ontwikkeling van MH in muizen. Dieren herstellen goed van de operatie en een uitstekende conditie na bewerking weergeven. We vastgesteld dit model in 50 muizen met minder dan 3% sterftecijfer als gevolg van de chirurgische procedure. Cijfers 1B -C tonen de belangrijkste chirurgische stappen. Na een huid incisie langs de linea alba, identificeren van de aorta abdominalis...

Dit artikel demonstreert een lymfkliertest model voor het bestuderen van de ontwikkeling van myointimal hyperplasie (MH) na de ballon van de aorta blessure.

Ballon gebaseerde letsel ertoe Myointimal Hyperplasia in de muis abdominale Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

Het algemene doel van dit op muizen gebaseerde modelsysteem is om de ontwikkeling van myointimale hyperplasie na aortaballonletsel te bestuderen. Dit modelsysteem kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over myointimale hyperplasie, zoals welke factoren bijdragen aan de ontwikkeling ervan. Door de ontwikkeling van myointimale hyperplasie bij transgene muizen te bestuderen, hopen we een beter begrip te krijgen van het pathomechanisme van de ziekte.Een ander voordeel van dit diermodel is dat de ziekte snel voortschrijdt. In slechts enkele weken zijn we bij muizen bestudeerd. Eerst, bereid de vereiste katheter voor.Verwijder het uit de houder en trek de geleidedraad uit door het lumen door de distale poort. Plaats vervolgens een druppel cyanoacrylaat op het distale uiteinde van de katheter en leid de geleidedraad door de RX-poort, vervolgens door het lumen en uit de distale poort. Trek vervolgens de geleidedraad iets terug om ongeveer vijf millimeter uit te steken en laat het lijmmiddel drogen.Vul later een drie milliliter spuit met 1,5 milliliter 0,9% saline en verbind deze met de ballonopblaaspoort van de katheter. Druk vervolgens op de plunjer om de ballonopblaasfunctie te testen. Laat ongeveer 0,6 milliliter saline in de spuit.Bereid vervolgens de muis voor op de operatie. Verdoof hem in een isofluraancamer en geeft later tijdens de operatie isofluraan via een neuskoker. Bevestig voordat u doorgaat een voldoende diepte van de anesthesie door de achterpoten en staart te knijpen om een afwezigheid van reflexen te verifiëren.Verwijder vervolgens het buikhaar met een haartrimmer en fixeer de positie van de achterpoten met tape. Desinfecteer tenslotte het buikgebied met drie afwisselende scrubs van povidonjodium gevolgd door 80% ethanol. Begin met het openmaken van de huid en spierlagen langs de linea alba om de buikorganen bloot te leggen.Verplaats vervolgens de darmen opzij, wikkel ze in een in saline gedrenkte gaas om ze vochtig te houden. Gebruik nu twee fijne forceps om het vetweefsel boven de abdominale aorta te verwijderen. Injecteer vervolgens ongeveer 12 eenheden heparinesulfaat uit een insulinespuiten in de IVC en wacht drie minuten voor systemische verdeling.Gebruik vervolgens forceps om de aorta infrarenaal tot aan de bifurcatie te dissecteren en de uitgaande takken te onthullen. Lig vervolgens de zijvaatjes langs de aorta infrarenaal binnen het gebied dat zal worden geklemd. Stop vervolgens de bloedstroom door de vaat direct onder de nierarteries te klemmen en op een distale positie net boven de aortabifurcatie te klemmen.Voer nu een kleine horizontale insnijding uit langs het vaatvat op het middelpunt tussen de klemmen. De insnijding moet ongeveer 1/3 van de omtrek van het vaatvat zijn. Spoel vervolgens de aorta met heparineoplossing door middel van een insulinespuiten, zoals eerder.Plaats vervolgens 10-0-naden met enkele knopen aan elke zijde van de insnijding. Om verder te gaan, verwijd de aorta. Plaats een vaatdilater in de insnijding en spreid het vaatvat lichtjes uit.Doe dit twee of drie keer. Bereid vervolgens de ballonkatheter voor door deze met saline te bevochtigen. Voer vervolgens de ballonkatheter opgeblazen in de aorta in en breng deze naar de proximale klem toe.Open voorzichtig de proximale klem en blaas de ballon op om bloedlekkage te voorkomen door ongeveer 0,6 milliliter saline te injecteren. Breng vervolgens de katheter retrograde ongeveer twee centimeter vooruit. Trek de katheter terug terwijl u de ballon lichtjes afblaast.Wanneer de katheter de insnijding van de aorta bereikt, bevestig de proximale klem opnieuw. Blaas vervolgens de ballon volledig af en verwijder deze. Spoel nu de aorta met heparineoplossing.Ga vervolgens verder door de aortasnede te sluiten met onderbroken 10-0-naden aan elke laterale zijde. Gevolgd door een of twee steken aan de ventrale zijde. Open vervolgens de distale klem, controleer op bloeding en plaats eventueel aanvullende steken.Zodra er geen bloeding meer is, opent u voorzichtig de proximale klem. Gebruik wattenstokken op de steken voor ondersteuning en om de bloeding te vertragen. Plaats vervolgens absorberende hemostatis op de steken om ze te ondersteunen.Met beide klemmen geopend, zou een aortapuls zichtbaar moeten zijn vanaf de insnijding. Plaats de darmen nu terug in de buik en spoel de buikholte met op 37 graden Celsius verwarmde saline. Sluit vervolgens de buikspierlaag met 6-0 loopnaden.En sluit vervolgens de huid met 5-0 loopnaden. Injecteer vervolgens onmiddellijk een pijnstiller subcutaan voordat het dier wakker wordt. Houd de muis nu in de gaten totdat hij bij bewustzijn is en sternal recumbirens kan handhaven.Eenmaal bij bewustzijn, huisvest het dier alleen totdat het volledig is hersteld. Zorg voor metamizool in het drinkwater gedurende drie dagen. Zorg ervoor dat u de muis elke dag controleert om een goede herstel te waarborgen.Ballondenudatiek is een geschikte methode om de ontwikkeling van myointimale hyperplasie bij muizen te bestuderen. Dieren herstelden goed van de operatie en verkeerde in uitstekende fysieke conditie. Minder dan 3% stierf bij meer dan 50 operaties.Myointimale hyperplasie ontwikkelde zich progressief in de transplantatie. Histologisch kleuring met Masson's trichrome toonde de myointima-vorming binnen de interne elastische lamina. De myointimale laesies bestonden hoofdzakelijk uit cellulaire componenten die positief waren voor SM22, wat gladde spiercellen aangeeft, en ECM-cellen zoals myofibroblasten, ook getoond in rood.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u de ballonletsels bij muizen moet uitvoeren. Eenmaal beheerst, kan deze techniek in 20 minuten worden uitgevoerd als deze goed wordt uitgevoerd.

balloon-based-injury-to-induce-myointimal-hyperplasia-mouse-abdominal

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Deze video toont twee modellen van intima plaque ontwikkeling in muizen slagaders en benadrukt de verschillen in myointimal hyperplasie en atherosclerose.

Inducerende Myointimal Hyperplasie Versus atherosclerose in Muizen: Een inleiding van twee geldige Models

Dit protocol maakt gebruik van een ballonkatheter om een ​​intraluminale blessure aan de rat halsslagader veroorzaken en voortaan ontlokken neointimale hyperplasie. Dit is een gevestigd model voor de studie van de mechanismen van vasculaire remodellering reactie op letsel. Het wordt ook veel gebruikt om de geldigheid van mogelijke therapeutische benaderingen te ontwikkelen.

Vasculaire Ballon Letsel en Intraluminale Administration in Rat halsslagader

We beschrijven een chirurgische techniek die draadletsel veroorzaakt in de femorale arterie van muizen om neo-intimale hyperplasie te induceren als een testmodelsysteem voor de perivasculare toediening van therapeutische verbindingen voor het remmen van restenose.

Muizenmodel van Femorale Artery Wire Injury met Implantatie van een Perivasculaire Drug Delivery Patch

Restenosis na cardiovasculaire procedures (bypass operatie, angioplastie of stenting) is een significant probleem waardoor de duurzaamheid van deze procedures wordt verminderd. Een ideale therapie zou de proliferatie van gladde spiercellen (VSMC) verhinderen, terwijl het bevorderen van regeneratie van het endothelium. We beschrijven een model voor gelijktijdige beoordeling van VSMC proliferatie en endotheliale functie in vivo.

Murine Aortic Crush Injury: Een Efficiënt<em&gt; In Vivo</em&gt; Model van gladde spiercel proliferatie en endotheliale functie

Dierlijke modellen van atherosclerose zijn essentieel om te begrijpen van het mechanisme en te onderzoeken van nieuwere benaderingen om te voorkomen dat de ontwikkeling van plaque of breuk, een belangrijke doodsoorzaak in de geïndustrialiseerde wereld. Dit protocol maakt gebruik van een combinatie van ballon letsel en cholesterol rijk dieet voor het opwekken van atherosclerotische plaques in konijn iliac slagader.

Het konijn-Model van versnelde atherosclerose: een methodologische perspectief van de schade van de ballon Iliac slagader

Hier presenteren we een protocol van heterotopische aorta transplantatie in muizen met behulp van de niet-hecht manchet techniek in een cervicale Murine model. Dit model kan worden gebruikt om de onderliggende pathologie van chronische transplantaat vasculopathie (CAV) te bestuderen en kan helpen bij het evalueren van nieuwe therapeutische middelen om de vorming ervan te voorkomen.

Murine cervicaal aorta transplantatie model met behulp van een gemodificeerde niet-hecht manchet techniek

De rat carotis slagader ballon letsel bootst de klinische angioplastiek procedure uitgevoerd om de bloedstroom in atherosclerotische vaten te herstellen. Dit model induceert de arteriële letselrespons door de arteriële wand te verwijderen en de intimale laag endotheelcellen te ontnuderen, wat uiteindelijk remodellering en een intimale hyperplastische respons veroorzaakt.

Een Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury met Periadventitial Therapeutic Application

Het huidige protocol beschrijft een gestandaardiseerde chirurgische methode voor het elastase-geïnduceerde AAA-model door de directe toepassing van elastase op de adventitia van infrarode abdominale aorta bij muizen.

Muis Abdominale Aorta Aneurysma Model Geïnduceerd door Perivasculaire Toepassing van Elastase

Dit protocol beschrijft een calciumfosfaat-geïnduceerd abdominaal aorta-aneurysma (AAA) muismodel om de pathologische kenmerken en moleculaire mechanismen van AAAs te bestuderen.

Een calciumfosfaat-geïnduceerd muis abdominaal aorta-aneurysma model

Dit manuscript presenteert een protocol voor het opstellen van een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen met behulp van calciumchloride en elastase, waarbij de voordelen van eerdere modelleringsmethoden worden gecombineerd. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologische mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan abdominale aorta-aneurysma's.

Een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen door periadventitiële infiltratie van calciumchloride en elastase

Dit protocol biedt een herhaalbare en betrouwbare methode om abdominale aorta-aneurysma's (AAA's) in C57BL/6-muizen op te wekken met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase-toepassing, als een AAA-model dat een immuunsensitisatiecomponent bevat.

Betrouwbare creatie van een model voor muriene abdominale aorta-aneurysma met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase

Leer een muizenmodel voor myointimale hyperplasie na aortale ballonletsel. Deze methode onderzoekt pathomechanismen van vaatletsel en versnelt inzicht in cardiovasculaire ziekteontwikkeling voor therapeutische toepassingen.

Ballon gebaseerde letsel ertoe Myointimal Hyperplasia in de muis abdominale Aorta

Meer video's verkennen