Name: Visualisatie van Biofilm vorming in Candida albicans met behulp van een geautomatiseerd Microfluidic-apparaat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 14 s
Description: Leer biofilmvorming van Candida albicans visualiseren in realtime met een geautomatiseerd microfluidisch apparaat. Deze methode test antimicrobiële middelen en genetische mutanten effectief.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken alle leden van de lab Nobile voor nuttige discussies over biofilm testen. Deze studie werd ondersteund door de National Institutes of Health (NIH) subsidie R21 AI125801 (C.J.N.). D.L.R. werd gesteund door een doctoral beurs van de Universiteit van California Institute voor Mexico en de Verenigde Staten (UC-MEXUS) en de Consejo Nacional de Ciencia y Technologia (CONACYT).

<ol><li>Nobile, C. J., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+Biofilms+and+Human+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Candida albicans Biofilms and Human Disease.</a> Annu Rev Microbiol. 69, 71-92 (2015).</li>
<li>Kojic, E. M., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+infections+of+medical+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Candida infections of medical devices.</a> Clin Microbiol Rev. 17 (2), 255-267 (2004).</li>
<li>Fox, E. P., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFox%2C+EP+%22Candida+albicans%3A+Symptoms%2C+Causes+and+Treatment+Options%22">Candida albicans: Symptoms, Causes and Treatment Options</a>. Dietrich, L. A., Friedmann, T. S. , Nova Science Publishers. 1-24 (2013).</li>
<li>Gulati, M., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+biofilms%3A+development%2C+regulation%2C+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Candida albicans biofilms: development, regulation, and molecular mechanisms.</a> Microbes Infect. 18 (5), 310-321 (2016).</li>
<li>Uppuluri, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersion+as+an+important+step+in+the+Candida+albicans+biofilm+developmental+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Dispersion as an important step in the Candida albicans biofilm developmental cycle.</a> PLoS Pathog. 6 (3), e1000828(2010).</li>
<li>Andes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+an+in+vivo+central+venous+catheter+Candida+albicans+biofilm+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of an in vivo central venous catheter Candida albicans biofilm model.</a> Infect Immun. 72 (10), 6023-6031 (2004).</li>
<li>Nett, J. E., Marchillo, K., Spiegel, C. A., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+an+in+vivo+Candida+albicans+biofilm+denture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Development and validation of an in vivo Candida albicans biofilm denture model.</a> Infect Immun. 78 (9), 3650-3659 (2010).</li>
<li>Nett, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+indwelling+urinary+catheter+model+of+Candida+albicans+biofilm+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Rat indwelling urinary catheter model of Candida albicans biofilm infection.</a> Infect Immun. 82 (12), 4931-4940 (2014).</li>
<li>Krom, B. P., Willems, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Models+for+Candida+Biofilm+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In Vitro Models for Candida Biofilm Development.</a> Methods Mol Biol. 1356, 95-105 (2016).</li>
<li>Hawser, S. P., Douglas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+formation+by+Candida+species+on+the+surface+of+catheter+materials+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Biofilm formation by Candida species on the surface of catheter materials in vitro.</a> Infect Immun. 62 (3), 915-921 (1994).</li>
<li>Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+method+for+in+vitro+antifungal+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob Agents Chemother. 45 (9), 2475-2479 (2001).</li>
<li>Nett, J. E., Cain, M. T., Crawford, K., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+a+Candida+biofilm+microtiter+plate+model+for+measurement+of+antifungal+susceptibility+by+tetrazolium+salt+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Optimizing a Candida biofilm microtiter plate model for measurement of antifungal susceptibility by tetrazolium salt assay.</a> J Clin Microbiol. 49 (4), 1426-1433 (2011).</li>
<li>Krom, B. P., Cohen, J. B., McElhaney Feser, G. E., Cihlar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+candidal+biofilm+microtiter+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized candidal biofilm microtiter assay.</a> J Microbiol Methods. 68 (2), 421-423 (2007).</li>
<li>Lohse, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+and+Optimizations+of+Candida+albicans+In+Vitro+Biofilm+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Assessment and Optimizations of Candida albicans In Vitro Biofilm Assays.</a> Antimicrob Agents Chemother. 61 (5), (2017).</li>
<li>Winter, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Identification+of+Biofilm-Specific+Proteolysis+in+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Global Identification of Biofilm-Specific Proteolysis in Candida albicans.</a> mBio. 7 (5), (2016).</li>
<li>Nobile, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+recently+evolved+transcriptional+network+controls+biofilm+development+in+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A recently evolved transcriptional network controls biofilm development in Candida albicans.</a> Cell. 148 (1-2), 126-138 (2012).</li>
<li>Fox, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+regulatory+network+temporally+controls+Candida+albicans+biofilm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An expanded regulatory network temporally controls Candida albicans biofilm formation.</a> Mol Microbiol. 96 (6), 1226-1239 (2015).</li>
<li>Nobile, C. J., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cell-surface+genes+and+biofilm+formation+by+the+C.+albicans+transcription+factor+Bcr1p%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cell-surface genes and biofilm formation by the C. albicans transcription factor Bcr1p.</a> Curr Biol. 15 (12), 1150-1155 (2005).</li>
<li>Baker, K. <a target="_blank" href="https://www.cshlpress.com/link/atbench2.htm">At the bench: A laboratory navigator</a>. 27, Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2005).</li>
</ol>

Clarissa J. Nobile is een van de oprichters van BioSynesis, Inc., een bedrijf ontwikkelen remmers en diagnostiek van C. albicans biofilms.

De aanpasbare microfluidic biofilm assay hier beschreven staat voor de visualisatie van biofilm vorming in real time op het niveau van een eencellige wanneer blootgesteld aan een vaste rente laminaire flow en constante temperatuur. Het biedt een krachtig instrument om te bestuderen van de ontwikkeling van biofilms bij wild-type en gemuteerde stammen en de effecten van antimicrobiële agent behandelingen op biofilms onder omstandigheden die fysiologische omstandigheden nabootsen waargenomen in klinische instellingen. In te...

Candida albicans is een commensale lid van de menselijke microbiota, maar het is ook een opportunistisch pathogeen, kan veroorzaken oppervlakkig en ernstige schimmelinfecties1,2. Een kenmerk van de grote virulentie van C. albicans is haar vermogen om vorm veerkrachtig en resistente biofilms, Gemeenschappen van cellen vastgehouden aan een oppervlak en omsloten door een extracellulaire matrix materiële1,3. C. albicans biofilms zijn zeer gestructureerd, met verschillende lagen van meerdere celtypen (ronde ontluikende gist-formulier cellen, ovale pseudohyphal cellen en tubulaire hyphal cellen)4. C. albicans biofilm ontwikkeling begint met de hechting van de cellen van de ronde gist-vorm op een oppervlak (zaaien de biofilm), gevolgd door de verspreiding van deze cellen op het oppervlak, en vervolgens de rijping van de onrijpe biofilm structureert in een volledig gevormde biofilm die is omgeven door extracellulaire matrix materiële4. De volwassen biofilm is voornamelijk samengesteld uit langgerekte hyphal cellen die dichte en onderling verbonden netwerken vormen, die de architecturale stabiliteit met de biofilm4. Gedurende de hele levenscyclus van biofilm, ronde ontluikende gist cellen verspreiden van de volwassen biofilm, en kunnen reizen naar andere regio's van het lichaam veroorzaken gedissemineerde infecties of zaad nieuwe biofilms op andere sites4,5. C. albicans kan biofilms vormen op biotische oppervlakken, zoals mucosal oppervlakken en in de gehele weefsel van de gastheer, en op abiotische oppervlakken, zoals katheters, pacemakers, kunstgebitten en prothetische gewrichten. Als gevolg van de weerspannige eigenschappen van biofilms, ze zijn uiterst moeilijk uit te roeien, en in veel gevallen is de enige effectieve behandeling strategie verwijderen van de geïnfecteerde apparaat4. Het is dus van cruciaal belang voor het onderzoeken van biofilm vorming onder omstandigheden die vergelijkbaar zijn met die waargenomen in klinische instellingen.
Er zijn verschillende kritische in vivo dierlijke modellen gebruikt bij het bestuderen van C. albicans biofilm vorming6,7,8; echter, deze studies kunnen worden duur, tijdrovend, en worden beperkt door het aantal stammen en antimicrobiële stoffen die kunnen worden getest op een bepaald moment. In vitro biofilm testen, aan de andere kant, toestaan voor de beoordeling van het snelle, hoge-doorvoer van antischimmel verbindingen en gemuteerde stammen, en zijn veel meer kosteneffectief en ethische dan biofilm testen uitgevoerd out in dierlijke modellen9, 10,11,12,13,14. Hier beschrijven we een in vitro assay die we ontwikkeld en geoptimaliseerd voor het observeren van biofilm vorming stoffelijk onder laminaire stroom met behulp van een aanpasbare microfluidic apparaat14,15. De bepaling voorziet in de visualisatie van elke fase van de vorming van de biofilm, met inbegrip van de naleving van de eerste stap, celproliferatie biofilm rijping en spreiding van de cel. De bepaling is ook handig om te visualiseren cel morfologie wijzigingen in de gehele ontwikkeling van een biofilm.
Microtiterplaat platen, die meestal worden gebruikt voor in vitro biofilm testen, terwijl de hoge doorvoer, toegestaan niet voor gecontroleerde stromingscondities. Traditionele laminaire flow cel systemen voor de continue beoordeling van biofilm vorming in gecontroleerde stromingscondities toestaan, maar deze zijn vaak tijdrovend te zetten en hebben de neiging te hebben beperkt dynamisch bereik controle en doorvoer. Het microfluidic-apparaat gebruikt hier overwint deze beperkingen door een combinatie van hoge-doorvoer platen (met 48 putten) met een ingebouwde laminaire flow kamer en zeer reproduceerbaar, veelzijdig en aanpasbaar.
Hier beschrijven we een protocol voor het gebruik van een commercieel beschikbare geautomatiseerde microfluidic apparaat te beoordelen van biofilm vorming van een wild-type C. albicans stam, de gevolgen van een bekende antimycoticum voor de ontwikkeling van een biofilm, en de biofilm vorming in twee gemuteerde stammen (bcr1Δ/Δ en efg1 Δ/Δ), die eerder werden gemeld dat biofilm gebreken in vitro en in vivo16,17,18. De beschreven protocol kan worden gebruikt voor het testen van de werkzaamheid van antimicrobiële stoffen in de remming van biofilm vorming in de gehele ontwikkeling van een biofilm, en om genen nodig zijn voor normale biofilm ontwikkeling door screening mutant bibliotheken te identificeren.

<table><tbody><tr><td>BioFlux 1000z</td><td>Fluxion</td><td></td><td>Geautomatiseerd microfluïdisch apparaat voor live celanalyse</td></tr><tr><td>48-well plate 0-20 dyne</td><td>Fluxion</td><td>910-0047</td><td>Microfluïdische plaat</td></tr><tr><td>Montage Software</td><td>Fluxion</td><td>Version 7.8.4.0</td><td>Visualisatie-analysesoftware</td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td>NIH</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/</td><td></td></tr><tr><td>Yeast Extract</td><td>Criterion</td><td>C7341</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Peptone</td><td>BD Biosciences</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose (D-Glucose)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D163</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Phosphate Monobasic</td><td>Fisher Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R6504</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>Nutrient Broth</td><td>Criterion</td><td>C6471</td><td></td></tr><tr><td>Difco D-Mannitol</td><td>BD Biosciences</td><td>217020</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Criterion</td><td>C5001</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Corning</td><td>30-003-CF</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Inoculating Loops</td><td>VWR</td><td>30002-094</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes with Clear Lid</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Cuvettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-127</td><td></td></tr><tr><td>Lens Paper</td><td>VWR</td><td>52846-001</td><td></td></tr><tr><td>Microplate and Cuvette Spectrophotometer</td><td>BioTek</td><td>EPOCH2TC</td><td></td></tr><tr><td>Shaking Incubator</td><td>Eppendorf</td><td>M12820004</td><td></td></tr></tbody></table>

visualisatie van biofilm vorming in candida albicans met behulp van een geautomatiseerd microfluidic-apparaat

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Candida albicans is de meest voorkomende schimmel pathogeen van de mens, veroorzaakt ongeveer 15% van de gevallen van de ziekenhuizen opgelopen sepsis. Een kenmerk van de grote virulentie van C. albicans is haar vermogen om vorm biofilms, gestructureerde gemeenschappen van cellen die zijn gekoppeld aan de biotische en abiotische oppervlakken. C. albicans biofilms kunnen vormen op host weefsels, zoals mucosale lagen, en op medische apparaten, zoals katheters, pacemakers, kunstgebitten en gewrichtsprotheses. Biofilms vormen belangrijke klinische uitdagingen omdat ze zeer resistent tegen fysische en chemische verstoringen zijn, en fungeren kunnen als reservoirs op zaad dat wordt verspreid infecties. Verschillende in vitro testen hebben gebruikt om te bestuderen van de vorming van het C. albicans biofilm, zoals microtiterplaat plaat testen, metingen van het droge gewicht, cel levensvatbaarheid testen en confocale scanning laser microscopie. Al deze testen zijn één eindpunt testen, waar de biofilm vorming is beoordeeld op een specifiek tijdstip. Hier beschrijven we een protocol om te bestuderen van biofilm vorming in real-time met behulp van een geautomatiseerde microfluidic apparaat onder laminaire stromingscondities. Deze methode zorgt voor de waarneming van biofilm vorming zoals de biofilm na verloop van tijd ontwikkelt, met behulp van aanpasbare voorwaarden die die van de host, zoals die ondervonden in vasculaire katheters nabootsen. Dit protocol kan worden gebruikt ter beoordeling van de tekortkomingen van de biofilm van genetische mutanten alsmede de remmende effecten van antimicrobiële agentia over biofilm ontwikkeling in real-time.

Wij uitgevoerd de microfluidic biofilm assay beschreven hier met behulp van een wild-type C. albicans stam onder twee media voorwaarden (RPMI-1640 en Spider media), de stam van de wild-type in het bijzijn van de bekende antischimmel drug amfotericine B (16 µg/mL) in RPMI, en twee gemuteerde stammen eerder gemeld dat gebreken in de formatie van de biofilm (bcr1Δ/Δ en efg1 Δ/Δ) in Spider media.
Video 1 t...

Dit protocol beschrijft het gebruik van een aanpasbaar geautomatiseerde microfluidic apparaat te visualiseren van biofilm vorming in Candida albicans , onder fysiologische omstandigheden van de gastheer.

Visualisatie van Biofilm vorming in Candida albicans met behulp van een geautomatiseerd Microfluidic-apparaat

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Het algemene doel van dit protocol is om de biofilmvorming van Candida albicans in realtime te visualiseren onder fysiologische omstandigheden van de gastheer. Deze methode maakt het mogelijk om de vorming van de biofilm te observeren terwijl deze zich in realtime ontwikkelt en kan worden gebruikt om de effectiviteit van antimicrobiële middelen te testen of om genetische mutanten te beoordelen. Deze techniek kan worden gebruikt om potentiële therapeutische middelen te screenen op activiteit tegen biofilms op een hoge doorvoer en hun effectiviteit kan worden gemeten, gevisualiseerd en vergeleken met huidige behandelingen.Het grote voordeel van deze techniek is dat het kan worden gebruikt om de vorming van de biofilm te meten onder verschillende omstandigheden die van belang zijn voor onderzoekers. Hoewel deze methode specifiek is ontwikkeld om de biofilmvorming van Candida albicans te bestuderen, kan het ook worden toegepast op andere biofilmvormende micro-organismen, inclusief andere schimmelsoorten en bacteriën. Om te beginnen, bereid single colony culturen van verschillende C.albicans stammen voor uit cellen geplaatst op agar van extract pepton dextrose of YPD-medium volgens standaard microbiologische praktijken.Schakel vervolgens het microfluïdische systeem in dat de controller, de twee voedingseenheden, de microscoop, de camera en de computer omvat die aan het systeem is gekoppeld. Zodra de computer is geladen, opent u de software die het systeem bestuurt. Zoek het streepjescodenummer van de plaat die in gebruik is en voer het nummer in wanneer dit door de software wordt gevraagd.Stel vervolgens in de controlemodule de temperatuur van het microfluïdische systeem in op 37 graden Celsius. Klik vervolgens op de inlaatputten I1, I7, I13 en I19 en laat steriele lucht gedurende vijf minuten door de interface plaatbuizen stromen om eventuele condensatie te verwijderen. Wanneer alle condensatie is verdampt, plaatst u de 48-wel microfluïdische plaat van 0-20 dyne op de microscoopstandaard.Voor een 12-uurs experiment met biofilmvorming, begint u door 600 microliter voorverwarmd medium toe te voegen aan de inlaatputten. Laat de schoongemaakte interface plaat langzaam op de 48-wel microfluïdische plaat zakken. Schuif vervolgens de interface plaat iets naar links totdat de buizen op de inlaat- en uitlaatputten zijn gepositioneerd en vastklikken.Stel in het deel van de software voor scheurcontrole de stroommodus in op constant en stel de maximale scheur in op één dyne per vierkante centimeter. Klik vervolgens op de inlaatputten met media om de stroom van media van inlaat naar uitlaatputten te beginnen om het kanaal voor te bereiden. Na vijf minuten stroming, klikt u op de stopknop in het gedeelte van de software voor controle van de puttenplaat.Verwijder vervolgens de interface plaat en observeer de putten van de microfluïdische plaat. Er zou slechts een kleine druppel media zichtbaar moeten zijn in de uitlaatputten. Om wild-type en mutant C.albicans stammen te testen, voegt u 50 microliter van de wild-type SC5314 celcultuur in spider media toe aan twee uitlaatputten, voegt u de bcr1 mutant in spider media toe aan twee uitlaatputten en voegt u de EFG1 mutant in spider media toe aan twee uitlaatputten.Plaats de interface plaat terug op de microfluïdische plaat en klik het deksel vast. Ga terug naar het deel van de software voor scheurcontrole, stel de stroommodus in op constant en stel de maximale scheur in op twee dyne per vierkante centimeter. Klik op de uitlaatputten met cellen om de stroom van media van de uitlaat naar de inlaatputten te beginnen om te beginnen met het zaaien van C.albicans.Klik na drie seconden op de stopknop in het gedeelte van de software voor controle van de puttenplaat om te voorkomen dat cellen de inlaatputten binnenkomen. Laat de cellen 10-20 minuten stationair blijven zonder stroming in het bekijkingskanaal voor de initiële cellulaire hechting. Open in het venster van de beeldvormingsmodule de module voor multidimensionele acquisitie en klik op het tabblad voor de stand in het menu aan de linkerkant.Laad in het gedeelte voor de stand de hoofdstandlijst voor de 48-wel 0-20 dyne microfluïdische plaat. Open vervolgens de module voor aanpassing van de herlaad van het monster en verplaats de stand naar de modules voor absolute positie. Druk in de module voor aanpassing van de herlaad van het monster op de live-knop om een beeldvoorbeeld met kruislijnen te zien.Gebruik de joystick om de puttenplaat zo te positioneren dat de punt van de pijl naast bekijkingskanaal vier zich uitlijnt met de kruislijnen in de software. Ga vervolgens naar het menu voor het verplaatsen van de stand naar de absolute positie en druk op de knop voor het instellen van de oorsprong. Ga vervolgens terug naar de module voor aanpassing van de herlaad van het monster, klik op het gedeelte voor het initiële referentiepunt in het menu aan de linkerkant en laad het bestand voor de 48-wel 0-20 dyne microfluïdische plaat.Dubbelklik in het gedeelte voor de stand van de module voor multidimensionele acquisitie op standpositie 22.2 om de microscoopbeeldstand en de camerafocus in nauwe nabijheid te brengen van de pijlmarkering bij bekijkingskanaal 22. Gebruik vervolgens de joystick om de puttenplaat zo te positioneren dat de punt van de pijl naast bekijkingskanaal 22 zich uitlijnt met de kruislijnen. Kopieer de Y-coördinaat in de module voor multidimensionele acquisitie in de Y-positie van.2 in het tabblad voor het bijwerken van referentiepunten van de module voor aanpassing van de herlaad van het monster. Klik vervolgens in het tabblad voor het bijwerken van standposities van de module voor aanpassing van de herlaad van het monster op toepassen op de MDA standlijst. Gebruik in het venster van de beeldvormingsmodule de module voor multidimensionele acquisitie en klik op het tabblad voor opslaan in het menu aan de linkerkant.Selecteer vervolgens de bestandsnaam voor het experiment en de map om de verworven beelden op de computer op te slaan. Klik vervolgens op het tabblad voor tijdslapse en stel het in om 145 totaal beelden te verwerven met vijf minuten tussen elk beeld. Stel vervolgens in het tabblad voor golflengten het aantal golflengten in op een en leg vast met 50% Brightfield en 5

visualization-biofilm-formation-candida-albicans-using-an-automated

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Beschrijven we een eenvoudige, snelle en robuuste methode voor de vorming...

Een 96 Goed microtiterplaat-gebaseerde methode voor de controle Formation en schimmelwerende gevoeligheid testen van Candida albicans Biofilms

We hebben een hoge dichtheid microarray platform bestaande uit 3D nano-biofilms...

Candida albicans Biofilm Chip (Ca BChip) voor high-throughput antimycoticum Screening

Source: Kurz, D. L., et al. Microfluidic Platform to Study Bioclogging in Porous Media. J. Vis. Exp. (2022)The video demonstrates the use of a microfluidic device to study biofilm formation. A bacterial suspension is introduced into the microchannel, followed by incubation to allow biofilm development. Flow is then resumed, and pressure monitoring along with imaging is used to detect biofilm formation and pore blockage over time.

A Microfluidic Device for Real-Time Imaging and Pressure Tracking During Biofilm Formation

This video demonstrates the development of an in vivo mouse model to study the biofilm formation of Candida albicans in subcutaneous tissue. The experiment involves implanting Candida-infected devices in the animal's back region for biofilm development.

Candida albicans Biofilm Formation in an In Vivo Mouse Model

This video describes a method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae using microscopy. Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and involve numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation.

A Method for Sample Preparation to Visualize Biofilm Forming Bacteria on Fungal Hyphae

Protocollen voor de studie van biofilmvorming in een microfluïdisch apparaat dat poreuze media nabootst, worden besproken. Het microfluïdische apparaat bestaat uit een array van micro-pillaren en de biofilmvorming door Pseudomonas fluorescens in dit apparaat wordt onderzocht.

Protocol voor Biofilm Streamer Vorming in een microfluïdische apparaat met micro-pijlers

We presenteren een experimentele procedure van Candida albicans biofilmontwikkeling in een muis subcutaan model. Schimmelbiofilms werden gekwantificeerd door het bepalen van het aantal kleurvormende eenheden en door niet-invasieve bioluminescentie-beeldvorming, waarbij de hoeveelheid geproduceerd licht overeenkomt met het aantal levensvatbare cellen.

Candida albicans biofilm ontwikkeling op medisch-relevante vreemde lichamen in een muis Subcutane Model Gevolgd door bioluminescentiebeeldvorming

Het doel van deze methoden papier is het gebruik van een microfluïdische systeem te beschrijven voor de ontwikkeling van multi-species biofilms dat soort gewoonlijk geïdentificeerd in humaan supragingivale tandplaque bevatten. Methoden om biofilm architectuur, biofilm levensvatbaarheid, en een aanpak om te oogsten biofilm voor cultuur-afhankelijke of cultuur-onafhankelijke analyses zijn gemarkeerd beschrijven.

Toepassing van een High-throughput<em&gt; In Vitro</em&gt; Microfluïdische System op mondelinge Multi-species biofilms Ontwikkel

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode te groeien en kwalitatief analyseren bacteriële biofilms op schimmeldraden door confocale en elektronenmicroscopie.

Een nieuwe methode voor Kwalitatieve Multi-schaal analyse van bacteriële biofilms op draadschimmelcel Koloniën met behulp van confocale en Electron Microscopy

We beschrijven de vergadering, operatie, en schoonmaken van een apparaat van de stroom ontworpen om schimmel biofilm beeldvorming in real-time terwijl onder stroom. Wij bieden ook en bespreken van kwantitatieve algoritmen worden gebruikt op de verworven beelden.

Real-time Imaging en kwantificering van schimmel Biofilm ontwikkeling met behulp van een bewerking in twee fasen recirculatie-stroomsysteem

Om de interne kenmerken van Candida albicans biofilms te bekijken en te kwantificeren, bereiden we vaste intacte exemplaren voor die worden verduidelijkt door refractieve indexmatching. Vervolgens kan optische sectioning microscopie worden gebruikt om driedimensionale beeldgegevens te verkrijgen, hoewel de volledige dikte van de biofilm.

Verduidelijken en beeldvorming Candida albicans Biofilms

Leer biofilmvorming van Candida albicans visualiseren in realtime met een geautomatiseerd microfluidisch apparaat. Deze methode test antimicrobiële middelen en genetische mutanten effectief.

Visualisatie van Biofilm vorming in Candida albicans met behulp van een geautomatiseerd Microfluidic-apparaat

Meer video's verkennen