Name: De oprichting van een Long kolonisatie Assay voor het circulerende Tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Leer een longkolonisatieassay voor circulerende tumorcellen om vroege extravasatie in longweefsel te visualiseren. Deze methode biedt inzicht in het metastaseproces van kanker.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs bedank Dr. Ming-Min Chang en Ms. Ya-Hsin Cheng voor hun technische ondersteuning. Dit werk werd gesteund door het ministerie van wetenschap en de technologie van Taiwan (meeste-103-2325-B-006-009, meeste-104-2325-B-006-001, meeste-105-2325-B-006-001 en MOST-106-2320-B-006-068-MY3) en het ministerie van volksgezondheid en welzijn (MOHW106-TDU-B-211-144004). Wij zijn ook dankbaar voor de steun van het onderzoekslaboratorium van de kern van de College of Medicine, National Cheng Kung University, voor hun multi foton confocal microscoop.

Alle experimenten op muizen werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van ons Instituut (de gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren, NCKU Medical College).
1. voorbereiding van de instrumenten, cultuurmedia en gerechten
<ol><li>Voordat u begint de experimentele protocollen, verkrijgen steriele chirurgische hechtingen, 1 mL spuiten met 26G/0,5 cm naald (voor staart-veneuze injectie), 3 mL spuiten met 24G/3 cm naald (voor longkanker perfusie), Dulbecco van bewerkt Eagle Media (DMEM), trypsine-EDTA-oplossing (5 g/L trypsine en 0.53 mM), foetale runderserum (FBS), 1 x PBS (137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM nb2PHO4en 1,8 mM KH2PO4) en 6 cm cultuur gerechten.</li>
</ol>2. voorbereiding en herstel van tumorcellen in suspensie
<ol><li>Bereiden van steriele Dulbecco bewerkt Eagle Media (DMEM) bevattende 10% of 20% FBS en 2 mM L-glutamine, 1 x PBS en 0,05% vers toevoegen trypsine-EDTA.</li>
	<li>Cultuur van de cellen in de DMEM aangevuld met 10% FBS bij 37 ° C en ze groeien zolang er geen samenvloeiing van 70-80% in de cultuur-schotel.</li>
	<li>Verwijder het medium van de cultuur (DMEM) van de gerechten, gevolgd door twee wasbeurten met 2 mL steriele 1 x PBS.</li>
	<li>Voeg vervolgens 1 mL van 0,05% trypsine-EDTA in de gerechten ter grondig dekking van alle cellen. Onmiddellijk verwijderen van 800 μL van de oplossing en laat slechts 200 μl in de gerechten. Incubeer de gerechten bij 37 ° C gedurende 30 s naar 1 min (afhankelijk van het celtype) en wachten totdat de meerderheid van de cellen in de onderbroken toestand.</li>
	<li>Voeg 1 mL verse DMEM met 10% FBS rechtstreeks in de gerechten om te stoppen met de enzymatische activiteit van trypsine en krachtig Pipetteer de celsuspensie het op en neer met een pipet 1000 µL ter voorbereiding van de schorsing van een enkele cel.</li>
	<li>Overdracht van de cellen van de schotel naar een 1,5 mL microcentrifuge buis, en spin down de cellen bij kamertemperatuur op 162 x g gedurende 3 minuten.</li>
	<li>Gecombineerd het supernatant en resuspendeer de cellen van de tumor in 1,5 mL DMEM met 20% FBS en eind over de cellen in suspensie bij 37 ° C gedurende 2 uur roteren. Opmerking: Als het medium geel tijdens het herstel, wisselen de oud medium met verse medium dat 20% FBS.</li>
</ol>3. fluorescentie kleuring en analyse van tumorcellen in suspensie met Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)
<ol><li>Na herstel van de cel in suspensie, de juiste levensvatbare cellen getallen tellen met Trypan blauw in een kamer voor de titrating van de fluorescentie kleuring doses tellen Neubauer en voor staart veneuze injectie.</li>
	<li>Spin down de cellen bij 162 x g bij kamertemperatuur voor 3 min en resuspendeer die de Ingehuld cellen in 1 mL gesteriliseerd 1 x PBS, gevolgd door de kamertemperatuur centrifugeren op 162 x g gedurende 3 minuten.</li>
	<li>Resuspendeer de Ingehuld cellen in 500 µL van 1 X PBS met 10% FBS en 0, 5, 10, 20 of 40 µM CFSE voor dosistitraties, en de celsuspensie bij 37 oC gedurende 10 minuten in het donker uit te broeden.</li>
	<li>Spin down de cellen bij 162 x g bij kamertemperatuur gedurende 3 minuten en resuspendeer de Ingehuld cellen met 4 mL DMEM met 1% FBS. Herhaal deze stap van wassen drie keer. Resuspendeer de Ingehuld cellen met 4 mL DMEM alleen voor de laatste wasbeurt.</li>
	<li>De cellen van CFSE-label onverminderd fluorescentie-activated cell sorting (FACS) analyse om te kwantificeren van de intensiteit van de fluorescentie van een enkele cel of staart veneuze injectie. Opmerking: Houd de cellen op ijs voordat de FACS analyse of staart ader injecties wordt uitgevoerd.</li>
</ol>4. lung kolonisatie Assay
<ol><li>De cellen met het label met 20 µM CFSE bereiden (verwijs naar stap 3.1 via 3.4). Opmerking: Etikettering van tumorcellen, gebaseerd op de resultaten van de titratie van de analyse van FACS beslissen de dosis van de werken van CFSE (zie stap 3.3).</li>
	<li>Opwarmen van de staarten van 4-6 week-oude mannelijke C57BL/6 muizen (6 muizen) met een HQI-lamp voor 5-10 min op basis van muis-door-mouse muis staart aderen verwijden.</li>
	<li>Grondig meng en CFSE-geëtiketteerden tumorcellen gecombineerd met een spuit van 1 mL (26Gx1/2), het vermijden van alle bubbels in de celsuspensie (met een definitieve celdichtheid van 5 x 106 cellen/mL).</li>
	<li>Zorgvuldig injecteren 1 x106 CFSE-geëtiketteerden tumorcellen in 200 µL van DMEM in de muis staart ader, die moet worden ingediend in de afdekking van een muis. Opmerking: Tijdens de injectie, als de naald direct in het lumen van de ader van de staart geplaatst wordt, tumorcellen moeten gemakkelijk zonder worden geleverd in de circulatie moeten duwen hard op de spuit. Als het is moeilijk te duwen de tumorcellen via, zijn ze waarschijnlijk ingespoten buiten de staart ader, in de subcutane ruimte.</li>
	<li>Verdeel de muizen die intraveneus de CFSE-geëtiketteerden tumorcellen in twee groepen ontvangen: één groep zal ondergaan Long perfusie gevolgd door confocale microscopie en ImageJ kwantificering in de bepaling van de kolonisatie longkanker en de andere blijft alleen voor 4-5 weken in de lange termijn Long kolonisatie assay.</li>
	<li>Op 20, 38 of 45 h en 1 x 106 tumorcellen intraveneus geïnjecteerd tijdens een tijd cursus - en dosisafhankelijk titratie, anesthetize tumor-dragende muizen met 50-75 mg/kg zoletil 50, dat een goed aanvaard en goede anesthetizer23 is. Opmerking: Gebruik dierenarts zalf op de muizen van ogen om te voorkomen dat droogte terwijl onder verdoving.</li>
	<li>Overlangs snijden de huid en de subcutane weefsels uit de buik naar de regio van de borst met een chirurgische schaar. Open de pleurale holte met een chirurgische schaar en pincet volledig bloot het hart en de longen. Opmerking: Wees voorzichtig om te voorkomen dat afsnijden van bloedvaten.</li>
	<li>Stropdas de superieure vena cava (SVC) en de vena cava inferior (IVC) met steriele chirurgische hechtingen om te voorkomen dat de terugvoer van de oplossing van de perfusie tijdens Long perfusie.</li>
	<li>Snijd de wand van de linkerventrikel met een chirurgische schaar te openen een horizontalis (ongeveer 2-4 mm) om de afvoer van de perfusie-oplossing van de longen.</li>
	<li>1 x PBS injecteren in het rechterventrikel met een spuit met 3 mL en verwijder de gedraineerde oplossing met constante zuigkracht tijdens Long perfusie totdat de longen van een roodachtige kleur tot volledig bleke wenden.</li>
</ol>5. confocal microscopische beeldvorming en analyse van Long-gekoloniseerd tumorcellen
<ol><li>Verwijder de nu-pale longen uit de pleurale Holte en de vijf lobben scheiden door het weg te snijden van de ligamenten van de luchtpijp en bindweefsel met chirurgische schaar en pincet24.</li>
	<li>Bereiden een brancard-achtige Long houder zoals weergegeven in figuur 3B door wikkelen van een nylon hechtdraad rond twee metalen staven om te produceren een reticulate textuur met een spatie tussen de twee staven voor de plaatsing van longkanker lobben. Stel de Long houder in een 6 cm schotel. Opmerking: De houder van de Long wordt gebruikt om te stabiliseren van de Long lobben onder het objectief van een confocal microscoop.</li>
	<li>Indienen en monteren van de Long lobben op de reticulate textuur van de houder van de longen. Cover en Bevochtig de lobben van de Long met 1 x PBS.</li>
	<li>Onder voorbehoud van de cultuur van de 6-cm schotel herbergen de lobben van de longen op de Long houder confocale microscopie fluorescentie beelden opnemen van de tumorcellen Long-koloniseren.</li>
	<li>Gebruik voor imaging, objectieven (5 X, MPLN, NB: 0.1, WD: 20, lucht).</li>
	<li>Draai het wieltje van de filter aan NIBA (excitatie/emissie; 470-495 nm/510-550 nm) en gebruik een 488 nm laser te wekken CFSE, duidelijk visualiseren beelden van fluorescentie stippen in de lobben van de longen.</li>
	<li>Draai het wieltje van de filter te R690 (voor MaiTai HP Mussel laser) om te scannen met 2.0 µs/pixel scannen vaart en optimaliseren van de HV, Gain naam module en verschuiving niveaus.</li>
	<li>Fotograferen fluorescentie (512 x 512 pixels) met behulp van de Microscoop software met een 10 µs/pixel scansnelheid.</li>
	<li>Kwantificeren en de microscopische beelden met behulp van ImageJ en GraphPad software als eerder beschreven21statistisch te analyseren.</li>
</ol>6. lange termijn Long kolonisatie testen
Let op: Herhaal stap 4.1 tot 4.5.
<ol><li>De muizen offeren na tumor cel inoculatie voor 4-5 weken en monteren van hun longen met Bouin van vloeibare25 voor 1 tot 2 dagen.</li>
	<li>Kwantificeren en de knobbeltjes van de tumor uit de longen van de muizen met software21statistisch te analyseren.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Samen met de lange termijn Long kolonisatie testen, korte termijn methodologie we hier gebruikt om te evalueren in vivo Long kolonisatie door CTCs in verre organen duidelijk onthuld en de specifieke rol van polyFN gemonteerd op CTCs in koloniseren gedifferentieerd de longen, wat vervolgens tot de extravasation en metastatische processen18,19,20,21 leidde. Hoewel cellen met lange termij...

Metastase is de belangrijkste oorzaak van kanker overlijden1,2. Tumorcellen uit primaire weefsels verkregen Voer het verkeer in suspensie en overleven van verschillende hematogene uitdagingen, bijvoorbeeld, anoikis, immuun aanvallen en schade als gevolg van de shear stress van bloeddruk of geometrische beperkingen, voordat ze zijn kundig voor koloniseren verre organen, een belangrijke stap die het succes van metastase3,,4,,5,6te dicteren. Daarom, krachtige inspanningen momenteel gedaan in karakterisering van circulerende tumorcellen (CTCs) en het correleren van deze kenmerken met maligniteit van de tumor, uitzaaiingen en overlevingskansen bij kanker patiënten7,8 , 9. aangezien het proces van uitzaaiing van kanker specifiek een in vivo -evenement toont, dierlijke modellen zijn de enige aanpak die de volledige systemische proces van metastase10,11,12 vangt .
CTCs geworden uitgezaaide tumor weefsels via meerdere cellulaire gebeurtenissen met inbegrip van de kolonisatie van verre organen1,2. Echter, de meest gebruikte metastase assays13,14,15 bieden niet een manier om het observeren van CTC kolonisatie van verre organen. Een in vivo test ontwerp voor CTC kolonisatie visualisatie is daarom dringend noodzakelijk. Hoewel verschillende in vivo en ex vivo korte blijven termijn Long kolonisatie testen zijn ontworpen, problemen en nadelen. Bijvoorbeeld, terwijl groene fluorescentie proteïne (GFP)-overexpressing tumor cellen zijn gebruikt in deze testen22,23, het kost tijd om stabiel transfect en kloon van tumorcellen met voldoende GFP fluorescerende intensiteit onder de Microscoop. Evenzo, voorbijgaande kleuring van tumorcellen met de lange termijn cel tracer CFSE is werkzaam ter vervanging van de tumorcellen GFP-uitdrukken, maar nog steeds moeilijk te beoordelen of de CFSE-geëtiketteerden tumorcellen zijn gekoppeld of alleen aanwezig binnen de therapieën voor de verwijderde verre organen16,17.
Polymere fibronectine (polyFN) is geassembleerd op oppervlakken voor CTCs is gebleken dat kritisch bijdragen tot de uiteindelijke oprichting van uitgezaaide tumor weefsels18,19,20,21,22 . Hier, we uitgevoerd korte termijn Long kolonisatie testen die in zwevende Lewis lung carcinoma cellen (LLCs) stabiel uiting van FN-shRNA (shFN) of scramble-shRNA (shScr) en vooraf gemarkeerd met CFSE intraveneus in C57BL/6 muizen geënt werden. Na 2-3 dagen, werden muis longen eerst geperfundeerd met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) voor het verwijderen van niet-vastgemaakte CTCs binnen de therapieën alvorens te worden onderworpen aan confocale microscopie en kwantificering van LLCs Long-koloniseren. We toonden duidelijk dat het aantal Long-koloniseren shFN LLCs en tumor knobbeltjes aanzienlijk werden verminderd in vergelijking met shScr LLCs, aanzienlijk ondersteunend de rol van polyFN vergadering op CTCs in het vergemakkelijken van de kolonisatie en de groei van CTCs in de longen. Onze studie nog verdere onderzoek voor de rol van polyFN in kanker uitzaaiingen.

<table><tbody><tr><td>Materiaal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine&nbsp;(BSA)</td><td>Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan)</td><td>101-9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Bouin's vloeistof</td><td>MCC(medical chemical corporation)/POISON</td><td>456-A-1GL</td><td></td></tr><tr><td>CFSE Proliferatiekleurstof</td><td>ebiosciences</td><td>65-0850-85</td><td>Volledige naam: Carboxyfluorescein succinimidyl ester</td></tr><tr><td>Dulbecco's aangepast Eagle Media (DMEM)&nbsp;</td><td>(Gibco)ThermoFisher Scientific</td><td>12100-061</td><td></td></tr><tr><td>Ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA)</td><td>Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan)</td><td>101-6381-92-6</td><td>Voor bereide trypsine-EDTA oplossing( Uiteindelijke concentratie: 0.53mM )&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum (FBS)</td><td>(Gibco)ThermoFisher Scientific</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Lewis longcarcinoom (LLC)</td><td>ATCC, Manassas, VA, USA</td><td>CRL-1642</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine, USP&nbsp;</td><td>(Gibco)ThermoFisher Scientific</td><td>21051-024</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchloride (KCl)</td><td>Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan)</td><td>101-7447-40-7</td><td>Voor bereide 1X PBS ( Uiteindelijke concentratie: 2.7mM )</td></tr><tr><td>Kaliumfosfaatmonobasisch (KH2PO4)</td><td>Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan)</td><td>101-7778-77-0</td><td>Voor bereide 1X PBS ( Uiteindelijke concentratie: 1.8mM )</td></tr><tr><td>Natriumchloride (NaCl)</td><td>Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan)</td><td>101-7647-14-5</td><td>Voor bereide 1X PBS ( Uiteindelijke concentratie: 137mM )</td></tr><tr><td>Natriumfosfaatdibasisch (Na2HPO4)</td><td>Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan)</td><td>101-10039-32-4</td><td>Voor bereide 1X PBS ( Uiteindelijke concentratie: 10mM )</td></tr><tr><td>Trypan Blauw</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6146</td><td>0.5 g mengen met 100 mL 1X PBS</td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4799</td><td>Voor bereide trypsine-EDTA oplossing ( Uiteindelijke concentratie: 5g/L )</td></tr><tr><td>Zoletil 50</td><td>Virbac</td><td></td><td>Verdunnen met 1X PBS&nbsp;</td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Apparatuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Compacte Tafeltop Centrifuge 2420</td><td>KUBOTA Co.</td><td>2420</td><td></td></tr><tr><td>Kweekschaal (6cm)</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co.</td><td>705001</td><td></td></tr><tr><td>Wegwerpspuit (met naald)</td><td>Perfect Medical Industry Co.</td><td></td><td>24G/3 cm;3 ml &amp; 26G/0.5 cm;1 ml</td></tr><tr><td>End over end mixer</td><td>C.T.I YOUNG CHENN</td><td>TS-20</td><td>Voor herstel van geschorste cellen&nbsp;</td></tr><tr><td>FACSCalibur (FACS)</td><td>BD biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Dimeda</td><td>10.102.14</td><td></td></tr><tr><td>Forma Direct Heat CO2 incubator</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>HEPA CLASS 100</td><td></td></tr><tr><td>Muisbegrenzer (Cylindrische Begrenzer 15-30 gm)</td><td>Stoelting</td><td>51338</td><td></td></tr><tr><td>Multifoton Confocal Microscoop BX61WI</td><td>Olympus</td><td>FV1000MPE</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer telkamer</td><td>Marienfeld-Superior</td><td>640010</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische schaar</td><td>Dimeda</td><td>08.370.11</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische hechtdraad&nbsp;</td><td>UNIK SURGICAL SUTURES MFG. CO.</td><td>NO. 0034</td><td>Zwarte gevlochten zijde; niet-absorbeerbaar (25YD; U.S.P. 4/0)</td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifugebuis</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co.</td><td>615001</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Greiner buis</td><td>Greiner bio-one</td><td>188271</td><td></td></tr></tbody></table>

de oprichting van een long kolonisatie assay voor het circulerende tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

Metastase is de belangrijke doodsoorzaak kanker. De rol van circulerende tumorcellen (CTCs) biij van uitzaaiing van de kanker, waarin Long kolonisatie door CTCs kritisch aan de vroege Long metastatische processen bijdraagt, heeft krachtig onderzocht. Als zodanig, zijn dierlijke modellen de enige aanpak die de volledige systemische proces van metastase vangt. Gezien het feit dat er zich problemen in eerdere experimentele designs voordoen voor de behandeling van de bijdragen voor CTCs aan bloedvat extravasation, we een in vivo -bepaling van het Long-kolonisatie vastgesteld waarin een lange-termijn-fluorescentie cel-tracer, carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE), werd gebruikt voor het label van de geschorste tumorcellen en longkanker perfusie Schakel niet-specifiek gevangen CTCs voorafgaand aan longkanker verwijdering, confocal imaging en kwantificering werd uitgevoerd. Polymere fibronectine (polyFN) is geassembleerd op CTC oppervlakken is gebleken te bemiddelen Long kolonisatie in de uiteindelijke oprichting van uitgezaaide tumor weefsels. Hier, als u wilt specifiek testen de eis van polyFN vergadering op CTCs voor longkanker kolonisatie en extravasation, we korte termijn uitgevoerd Long kolonisatie testen waarin geschorst Lewis lung carcinoma cellen (LLCs) stabiel uiten FN-shRNA (shFN) of Scramble-shRNA (shScr) en vooraf gelabeld met 20 μM van CFSE waren intraveneus geënt in C57BL/6 muizen. Wij succesvol gebleken dat de capaciteiten van shFN LLC cellen te koloniseren de muis longen werden aanzienlijk verminderd ten opzichte van shScr LLC cellen. Daarom kan dit op korte termijn methodologie algemeen worden toegepast om aan te tonen specifiek de mogelijkheid voor CTCs binnen het verkeer om te koloniseren de longen.

Voordat u de in-vivo -bepaling van het Long-kolonisatie uitvoert zoals wordt geïllustreerd in figuur 1A om te testen of polyFN op zwevende tumorcellen bemiddelt Long kolonisatie en/of extravasation bij het vergemakkelijken van metastase, we eerst getitreerd verschillende concentraties van CFSE, een fluorescerende stof die cel permeabele covalent conjugaten van intracellulaire amine-bevattende moleculen26,<sup class=...

Een dierlijk model is nodig om het ontcijferen van de rol van circulerende tumorcellen (CTCs) bij de bevordering van longkanker kolonisatie tijdens kanker uitzaaiingen. Hier, we vastgesteld en met succes uitgevoerd een in vivo assay op specifiek proef de eis van polymere fibronectine (polyFN) vergadering over CTCs voor longkanker kolonisatie.

De oprichting van een Long kolonisatie Assay voor het circulerende Tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van sleutelvragen op het gebied van kankermetastase over de rol van kolonisatie van de longen bij het bereiken van kankermetastase. Het grote voordeel van deze techniek is dat vroeg extravaseerde kankercellen in de longen tijdens kankermetastase kunnen worden gevisualiseerd. De procedure zal worden gedemonstreerd door Cheng-Han Yang, een doctoraatsstudent uit mijn laboratorium.Wanneer de tumorcelcultuur 70 tot 80 procent confluëntie heeft bereikt, was de cultuur twee keer in twee milliliter steriele PBS per wasbeurt en voeg een milliliter van 0,5% Trypsin-EDTA toe aan de kweekschaal. Verwijder onmiddellijk 800 microliter van de supernatant en plaats de kweekschaal gedurende 30 tot 60 seconden op 37 graden Celsius totdat de meeste cellen zich hebben losgemaakt van de plaat. Voeg een milliliter vers medium toe, aangevuld met 10% FBS om de reactie te stoppen en gebruik een 1000 microliter pipette om de celoplossing krachtig te mengen.Breng de resulterende enkele cel suspensie over in een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter en verzamel de cellen door centrifugatie. Herstel vervolgens de tumorcel pellet in 1,5 milliliter medium aangevuld m

the-establishment-lung-colonization-assay-for-circulating-tumor-cell

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

De nieuwe protocol gerapporteerd in deze studie kan selectieve detectie van longmetastasen in cel resolutie in muizen door...

Verbeterde visualisatie van longmetastasen bij Single Cell resolutie in Muizen van de gecombineerde<em&gt; In-situ</em&gt; Perfusie van het longweefsel en X-gal kleuring van<em&gt; LacZ</em&gt;-Label tumorcellen

This video describes the colony formation assay, which helps determine lung cancer cells' ability to proliferate indefinitely and form individual colonies. We can analyze the effect of an anticancer agent on the colony-forming cells by analyzing the changes in the number and/or size of the resulting colonies.

Colony Formation Assay: Assessing the Efficacy of Anticancer Agents on Colony-Forming Lung Cancer Cells

Dit manuscript beschrijft een methode om te kwantificeren tumor cel accumulatie in de longen in een diermodel van uitzaaiing van de tumor.

Long Tumor cel aanwerving Assay

We beschrijven de oprichting van orthotopische colorectale tumoren via injectie van tumorcellen of organoïden in de cecum van muizen en de daaropvolgende isolatie van circulerende tumorcellen (CTC's) uit dit model.

Isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker

Hier presenteren we een protocol voor een ex vivo long kanker model dat bootst de stappen van de progressie van de tumor en helpt bij het isoleren van een primaire tumor, circulerende tumorcellen, en metastatische laesies.

Acellulair en cellulaire Lung Model studie Tumor uitzaaiingen

De karakterisering van circulerende tumorcellen (Ctc's) is een populair onderwerp in translationeel onderzoek. Dit protocol beschrijft een semiautomatische immunofluorescentie (IF)-test voor PD-L1-karakterisering en inventarisatie van Ctc's in niet-kleincellige longkanker (NSCLC)-patiënt monsters.

Semi-automatische PD-L1 karakterisering en opsomming van circulerende tumor cellen van niet-kleincellige longkanker patiënten door immunofluorescentie

Een in vitro model systeem werd ontwikkeld om weefsel architectonische veranderingen vast te leggen tijdens long plaveisel carcinoom (LUSC) progressie in een 3-dimensionale (3D) co-cultuur met kanker-geassocieerde fibroblasten (CAFs). Dit organoïde systeem biedt een uniek platform om de rollen van diverse tumorcel-intrinsieke en extrinsieke veranderingen te onderzoeken die het tumorfenotype moduleren.

Multidimensionaal Coculture System model Long Plaveisel Carcinoom Progressie

De beschreven aanpak combineert experimentele staart ader metastase assays met in vivo levende dierlijke beeldvorming zodat real-time monitoring van borstkanker metastase vorming en groei in aanvulling op de kwantificering van metastasen aantal en grootte in de longen.

Gecombineerd gebruik van staart ader metastase assays en real-time in vivo beeldvorming om borstkanker te kwantificeren gemetastaseerde kolonisatie en last in de longen

Het kweken van CTC's maakt een diepere functionele karakterisering van kanker mogelijk, door specifieke markerexpressie te testen en resistentie tegen geneesmiddelen en het vermogen om de lever te koloniseren te beoordelen, naast andere mogelijkheden. Over het algemeen zou de CTC-cultuur een veelbelovend klinisch hulpmiddel kunnen zijn voor gepersonaliseerde geneeskunde om de uitkomst van de patiënt te verbeteren.

Circulerende tumorcellijnen: een innovatief hulpmiddel voor fundamenteel en translationeel onderzoek

Een grote uitdaging bij het ontwikkelen van nieuwe therapieën voor longkanker is het modelleren van de micro-omgeving van de tumor naarmate de regionale ziekte evolueert naar gemetastaseerde ziekte. Hier beschrijven we een eenvoudige methode om een orthotopisch syngeen model van longkanker op te stellen dat het mogelijk maakt om in vivo de ziekte in de loop van de tijd te volgen.

Een minimaal invasieve methode voor het genereren van een syngeen orthotopisch muismodel van longkanker

Dit protocol presenteert een gedetailleerde methode om hoogwaardige eencelsuspensies te isoleren uit zowel gezond als tumordragend muislongweefsel. Dit protocol kan worden toegepast op scRNA-seq, flowcytometrie-analyse en primaire celisolatie.

Geoptimaliseerde voorbereiding van heel muis tumordragend longweefsel voor flowcytometrie en single-cell RNA-sequencing

Leer een longkolonisatieassay voor circulerende tumorcellen om vroege extravasatie in longweefsel te visualiseren. Deze methode biedt inzicht in het metastaseproces van kanker.

De oprichting van een Long kolonisatie Assay voor het circulerende Tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen

Meer video's verkennen