Name: Cavernous zenuwstimulatie en opname van Intracavernous druk in een Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-23T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Leer een vereenvoudigde chirurgische techniek voor cavernous zenuwstimulatie en intracavernous drukmeting bij ratten. Deze methode is reproduceerbaar, snel en betrouwbaar voor onderzoek naar erectiestoornissen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben geen bevestigingen.

Dieren gehuisvest waren in de Universiteit van Zuid-Denemarken dier zorg faciliteit per institutionele richtsnoeren. Alle dierproeven zijn uitgevoerd volgens de National Institutes of Health Gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. Dit is een acute, niet-survival chirurgie-procedure.
1. bereiding van de buis, elektrode en instrumenten voor de chirurgische ingreep.
<ol><li>Gebruik de volgende microchirurgische instrumenten: chirurgische scharen, schuine micro schaar, een pincet weefsel, een paar Dumont #7 en #5 gebogen micro pincet, een micro naald houder en oprolmechanismen. Opmerking: Aangezien dit een acute procedure, hoeft de instrumenten niet te worden gesteriliseerd. Na gebruik schoon en veeg de tips met 70% ethanol.</li>
	<li>Geniet van de buis in 70% ethanol en spoel het daarna met steriele 0.9% NaCl met 100 U/mL heparine vóór gebruik. Laat de buis gevuld om te voorkomen dat de invoering van de luchtbellen in het systeem.</li>
	<li>Knip een stukje van 20-30 cm lengte van polyethyleen (PE)-50 slang te maken van een katheter voor de ICP-meting. Zorg ervoor dat de slang zo kort mogelijk te zijn om de demping van de druk.</li>
	<li>Buig een steriele 24G naald side-to-side tot de naald in het midden breekt. Sluit het stuk met de schuine kant aan het distale einde van de PE-buis voor plaatsing in de penile crus. De andere helft op de hub voor de aansluiting op de drukopnemer invoegen. Vul het systeem met EDTA saline (100 U/mL).</li>
	<li>Om de bipolaire Teflon beklede elektrode, draden gesneden twee 125 µm zilveren aan gelijke lengte. Gebruik een stuk tape te hechten de draden aan de rand van de tafel en rijg ze samen. Vervolgens, de elektrode te hechten aan een zwarte plaat.</li>
	<li>Maak een kleine incisie in de Teflon en gebruik van #5 micro pincet te strippen van een 4-5 mm-lengte van Teflon coating uit de toppen van de elektroden. De tips afgesneden met een scalpel te bereiken zelfs lengte en haken door buigen de uiteinden de stompe randen van een scalpel blad.</li>
	<li>Tape de elektrode met het einde enigermate te verlengen over de rand van de zwarte plaat met de haken naar boven gericht. Meng de lijm silicium op een kunststof plaat voor 10 s en wrap een lijm bubble rond de elektrode 1-2 mm van de haak.</li>
	<li>Laat het drogen voor ongeveer 5 min vóór gebruik (Figuur 1). Strip de Teflon uit een langere sectie aan de andere kant, voor verbinding aan de stimulator. Opmerking: Met opnieuw doen de haken op de distale uiteinde, kan de elektrode vele malen worden hergebruikt.</li>
</ol>2. voorbereiding van het dier
<ol><li>Scheren na het anesthetizing van het dier, de onderste helft van de buik, hals en perineum. Scrub het dier met 70% alcohol gevolgd door Povidon-jodium driemaal. Plaats de rat op een verwarmde chirurgische pad in een liggende positie. Dierenarts oog zalf van toepassing en de narcose overstappen naar een neus kegel met 2,5% Isofluraan en 0.8 L/min zuurstof als de vervoerder. Opmerking: Pas het niveau van Isofluraan en zuurstof aan het bereiken van een aanvaardbaar niveau van de verdoving.</li>
</ol>3. prechirurgische voorbereiding
<ol><li>Uitvoeren van de gehele chirurgische ingreep onder een operationele Microscoop: een variërend van 3.15 X tot 20 X vergroting is voldoende. Handschoenen gebruiken en onderhouden van een schoon milieu tijdens de operatie. Plaats de rat op een gordijn.</li>
</ol>4. Ischiocavernosus spier dissectie voor de ICP-meting
<ol><li>Gebruik een scalpel, rechte schaar en Dumont #7 gebogen micro pincet zodat een 1 cm verticaal 5 mm lateraal van de insnijding van de huid aan de middellijn beginnend op het niveau van de basis van de penis en uitbreiding van neerwaartse (figuur 2A). U kunt een Q-tip en zorgvuldig scheiden de fascia laterale naar het scrotum (figuur 2B). Na de ontrafeling van de fascia, koppelen van oprolmechanismen en palperen met een katoen-getipt swap te vinden van de ischial radii (figuur 2C).</li>
	<li>Ontleden door middel van het mediale adipeus weefsel van dit punt tot de ischiocavernosus spier is gevisualiseerd (figuur 3A). U kunt een paar Dumont #7 gebogen micro pincet en lengterichting scheiden de spier. De tunica albuginea verschijnt als een helder wit structuur (figuur 3B). Met behulp van micro pincet en een micro schaar, bloot de tunica albuginea adequaat om te zien van de cursus (Figuur 3 c).</li>
	<li>Na kalibratie van de instellingen van de systemen wordt invoegen buizen via de huid op het perineum, ervoor te zorgen dat het parallel aan de penile crus (Figuur 4 loopt). Laat de regel in plaats en de incisie met zoutoplossing vochtig te houden.</li>
</ol>5. CN dissectie voor stimulatie
<ol><li>Het maken van een 2 cm lager, middellijn abdominale incisie via de huid gebruikt, eerst een scalpel, en vervolgens een paar rechte schaar en micro pincet. Maken van een overeenkomende incisie door de fascia langs de linea alba en de onderliggende spier weefsel bloot de blaas en de prostaat.</li>
	<li>Het gebruik van oprolmechanismen om goede belichting. Katoen-tip swabs gebruikt om de prostaat te scheiden van het vetweefsel aan het verkrijgen van duidelijke visualisatie van het grote bekken ganglion (MPG) en GN, waarop het dorsolateral aspect van de prostaat (Figuur 5).</li>
	<li>Na de visualisatie van de MPG en de GN, incise zorgvuldig de fascia overliggende de zenuw 2-5 mm distale naar de MPG met schuine micro schaar (Figuur 6a). Met het gebruik van micro verlostang #5, verspreid het weefsel aan weerskanten van de zenuw en eronder te bevrijden van een 4-mm lange deel (Figuur 6b) en schuif een 9-0 hechtdraad onder de zenuw (Figuur 6 c).</li>
	<li>Verhoog de zenuw iets met de hulp van de hechtdraad (figuur 7a) ter vergemakkelijking van de plaatsing van de haken van de bipolaire elektrode rond de zenuw (figuur 7b). Laat een assistent mengeling de silicon tweecomponenten lijm met het puntje van een insuline naald voor 5 s. droog de zenuw en de lijm toepassen in het gebied rond de haken en de zenuw (Figuur 7 c, d). Houd de zenuw verhoogde door te trekken licht op de elektrode voor ongeveer 1 minuut om de lijm drogen.</li>
	<li>Verwijder de oprolmechanismen, met uitzondering van de oprolmechanismen aan de rechterkant om eventuele trekken of verdraaien van de elektrode te vermijden. NAT de blootgestelde organen met zoute en lag gaas gedrenkt in zout over de incisie.</li>
</ol>6. cavernous lichaam Cannulation voor het meten van ICP
<ol><li>Visualisatie van de tunica albuginea met oprolmechanismen herstellen. Zorg ervoor dat niet de oprolmechanismen hechten aan de ischiocavernosus spier als het de crus verstoren zal.</li>
	<li>Bevestig de naald en de slang met EDTA saline vóór de invoering ervan in de tunica albuginea leegmaken. Houd de tunica albuginea uitgerekt, met behulp van Dumont #7 gebogen micro pincet in de ene hand (niet-dominante), houden de tunica albuginea en de rest van de bovenliggende spier distale tot het punt van de invoegpositie. Houd de naald met rechte micro pincet in de andere dominante hand en zorg ervoor dat in te voeren parallel met de cursus van het holle lichaam (Figuur 8).</li>
	<li>Duw de naald 5-8 mm in de holle lichaam. Spoel de slang en druk op de crus voor het testen van de lijn (Figuur 9). Zorg ervoor dat er geen lekken zijn. Bevestig de slang aan de tabel met tape om te voorkomen dat per ongeluk trekken op de regel. Verwijder de oprolmechanismen.</li>
</ol>7. stimulatie van de GN
<ol><li>Met het programma voor het opnemen (bijvoorbeeldSpike 2) uitgevoerd, zowel de intracavernous en de gemiddelde arteriële druk continu opnemen.</li>
	<li>De volgende parameters instellen op een stimulator (bijvoorbeeldSD9 gras instrumenten, Zie Tabel of Materials) voor GN-stimulatie: huidige op 1,5 mA, frequentie 16 Hz, spanning op 3 V en pulsbreedte op 5 ms. toepassing 50 s van stimulatie met een minimum van 1 min van rusten tussen stimulaties. Opmerking: De eerste stimulaties resulteert dit meestal in verminderde reactie (Figuur 10).</li>
</ol>

<ol><li>Eckhard, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEckhard%2C+C+%22Untersuchungen+%C3%BCber+die+Erektion+des+Hundes+In%3A+Beitr%C3%A4ge+zur+Anatomie+und+Physiologie%22">Untersuchungen über die Erektion des Hundes In: Beiträge zur Anatomie und Physiologie</a>. , Vol. Band III Giessen: Ferber 123-166 (1863).</li>
<li>Quinlan, D. M., Nelson, R. J., Partin, A. W., Mostwin, J. L., Walsh, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rat+as+a+model+for+the+study+of+penile+erection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">The rat as a model for the study of penile erection.</a> J Urol. 141 (3), 656-661 (1989).</li>
<li>Heaton, J. P., Varrin, S. J., Morales, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+characterization+of+a+bio-assay+of+erectile+function+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">The characterization of a bio-assay of erectile function in a rat model.</a> J Urol. 145 (5), 1099-1102 (1991).</li>
<li>Martinez-Pineiro, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+for+the+study+of+penile+erection%3A+pharmacologic+and+electrical-stimulation+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol%22%5BJournal%5D)">Rat model for the study of penile erection: pharmacologic and electrical-stimulation parameters.</a> Eur Urol. 25 (1), 62-70 (1994).</li>
<li>Hayashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+FK1706+on+erectile+function+following+bilateral+cavernous+nerve+crush+injury+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">The effect of FK1706 on erectile function following bilateral cavernous nerve crush injury in a rat model.</a> J Urol. 176 (2), 824-829 (2006).</li>
<li>Burnett, A. L., Becker, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophilin+ligands+promote+penile+neurogenesis+and+erection+recovery+after+cavernous+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Immunophilin ligands promote penile neurogenesis and erection recovery after cavernous nerve injury.</a> J Urol. 171 (1), 495-500 (2004).</li>
<li>Yamashita, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+injury-related+erectile+dysfunction+following+nerve-sparing+radical+prostatectomy%3A+a+novel+experimental+dissection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Nerve injury-related erectile dysfunction following nerve-sparing radical prostatectomy: a novel experimental dissection model.</a> Int J Urol. 16 (11), 905-911 (2009).</li>
<li>Burnett, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GGF2+is+neuroprotective+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury-induced+erectile+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sex+Med%22%5BJournal%5D)">GGF2 is neuroprotective in a rat model of cavernous nerve injury-induced erectile dysfunction.</a> J Sex Med. 12 (4), 897-905 (2015).</li>
<li>Lin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+Improved+Stem+Cell+Therapy+for+Erectile+Dysfunction+in+a+Rat+Model+of+Cavernous+Nerve+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle Improved Stem Cell Therapy for Erectile Dysfunction in a Rat Model of Cavernous Nerve Injury.</a> J Urol. 195 (3), 788-795 (2016).</li>
<li>Kapoor, M. S., Khan, S. A., Gupta, S. K., Choudhary, R., Bodakhe, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+erectile+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Animal models of erectile dysfunction.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 76, 43-54 (2015).</li>
<li>Mehta, N., Sikka, S., Rajasekaran, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+as+an+animal+model+for+male+erectile+function+evaluation+in+sexual+medicine+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sex+Med%22%5BJournal%5D)">Rat as an animal model for male erectile function evaluation in sexual medicine research.</a> J Sex Med. 5 (6), 1278-1283 (2008).</li>
<li>Cellek, S., Bivalacqua, T. J., Burnett, A. L., Chitaley, K., Lin, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+pitfalls+in+some+of+the+experimental+studies+in+erectile+function+and+dysfunction%3A+a+consensus+article%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sex+Med%22%5BJournal%5D)">Common pitfalls in some of the experimental studies in erectile function and dysfunction: a consensus article.</a> J Sex Med. 9 (11), 2770-2784 (2012).</li>
<li>Chung, E., De Young, L., Brock, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigative+models+in+erectile+dysfunction%3A+a+state-of-the-art+review+of+current+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sex+Med%22%5BJournal%5D)">Investigative models in erectile dysfunction: a state-of-the-art review of current animal models.</a> J Sex Med. 8 (12), 3291-3305 (2011).</li>
<li>Mullerad, M., Donohue, J. F., Li, P. S., Scardino, P. T., Mulhall, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+sequelae+of+cavernous+nerve+injury+in+the+rat%3A+is+there+model+dependency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sex+Med%22%5BJournal%5D)">Functional sequelae of cavernous nerve injury in the rat: is there model dependency.</a> J Sex Med. 3 (1), 77-83 (2006).</li>
<li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sex+Med%22%5BJournal%5D)">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> J Sex Med. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het belangrijkste doel van deze studie was om een vereenvoudigde chirurgische techniek van penile crus cannulation voor ICP opname en isolatie van de GN voor elektrostimulatie te beschrijven. Introduceerden we wijzigingen aan de dissectie van de holle lichaam te vereenvoudigen van de operatie en reproduceerbare opnamen van de toename van het ICP voorzien van CN stimulatie. Met een verticale huid incisie van 1 cm, laterale aan de basis van de penis, met behulp van de tastbare ischial radii als begeleiding, we bereikt goed...

In vivo onderzoek van erectiele functie bij proefdieren begon in 1863 met het experimentele pionierswerk van Eckhard1. Elektrostimulatie van de bekken zenuwen werd gebruikt voor het opwekken van de verhoogde ICP bij honden. Gedurende de 20ste eeuw, werden soortgelijke experimentele protocollen gebruikt in grotere dieren zoals honden, apen, katten en konijnen. Evaluatie van erectiele functie in een rat werd eerst ontwikkeld door Quinlan et al. in 19892. De methode heeft sindsdien werden aangepast en bijgewerkt door verschillende andere groepen34. Vandaag, is de rat de meest gebruikte dierlijk model voor het bestuderen van de pathologie van erectiestoornissen en evalueren van opkomende behandelmogelijkheden. De belangrijkste stappen van de procedure opnemen, opnemen van de systemische bloeddruk met behulp van een regel in de halsslagader, cannulation van de penile crus maatregel ICP en stimulatie van de GN voor het opwekken van een toename van het ICP. Hoewel verschillende onderzoekers hebben het model verfijnd, de reproduceerbaarheid blijft een probleem en variabele resultaten hebben gemeld door verschillende laboratoria. Verschillende valkuilen behouden blijven.
Vorige artikelen5,6,7,8,9,10 beschrijven het gebruik van het volledige penile blootstelling met degloving van de penis voor holle lichaam cannulation. Dit is niet een optimale aanpak als manipulatie en storend dissectie veroorzaakt schade aan structuren, die essentieel voor de erectiele functie zijn. De dissectie van de GN is goed beschreven10,11, maar van de zenuw stimulatie is niet optimaal zijn als gevolg van meerdere factoren die van invloed kunnen zijn op de experimentele resultaten. De techniek van CN stimulatie omvat de opheffing van de zenuw van het omringende weefsel door te trekken op de elektrode bipolaire haak, die is gepositioneerd rond de zenuw, en drogen van de zenuw vóór elke stimulatie. Dit kan leiden tot verschillende graden van schade aan de zenuwen en elektrische huidige lekkage, resulterend in een verminderde reactie of valse stijging van het ICP door stimulatie van alternatieve trajecten bv, bekkenbodemspieren, blaas en gastro-intestinale Tract12. Al deze factoren beperken de reproduceerbaarheid.
Tijdens onze studie vastgesteld we hebben dat zowel de diepte en de soort verdoving een diepgaand effect op de ICP hebben. De verdoving gebruikt zijn natrium pentobarbital, ketamine/xylazine of ketamine/midazolam injectie of Isofluraan/zuurstof inademen.
Hier beschrijven we een vereenvoudigde chirurgische methode en gegevens ter ondersteuning van normalisatie van het experimentele protocol verstrekken.

<table><tbody><tr><td>Adson forceps</td><td>Fine Science Tool</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 forceps</td><td>Fine Science Tool</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forceps</td><td>Fine Science Tool</td><td>11273-20</td><td></td></tr><tr><td>ToughCut Mayo schaar</td><td>Fine Science Tool</td><td>14110-15</td><td></td></tr><tr><td>Miniatuur Vannas Spring schaar</td><td>Fine Science Tool</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Fine Hemostat</td><td>Fine Science Tool</td><td>13020-12</td><td></td></tr><tr><td>Crile Hemostat</td><td>Fine Science Tool</td><td>13004-14</td><td></td></tr><tr><td>Kwik-Sil Adhesive</td><td>World Precision Instruments</td><td>KWIK-SIL</td><td></td></tr><tr><td>Teflon gecoate zilverdraad 0,125 mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>AGT0510</td><td></td></tr><tr><td>Elastische draad retractors</td><td>Op maat gemaakt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scalpelmesje</td><td>Fine Science Tool</td><td>10023-00</td><td></td></tr><tr><td>PE-50 buis</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0753</td><td></td></tr><tr><td>23 G Naald</td><td>Kruuse</td><td>121272</td><td></td></tr><tr><td>SD-9 Square Pulse Stimulator</td><td>Somatco</td><td>1077/183</td><td></td></tr><tr><td>Bloeddruk transducer en kabel</td><td>World Precision Instruments</td><td>BLPR2</td><td></td></tr><tr><td>Raucotupf Katoenen applicators</td><td>Lohmann-Raucher</td><td>11966</td><td></td></tr><tr><td>Pro-ophta Ocular Sticks</td><td>Lohmann-Raucher</td><td>16515</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0,9 % 100 mL</td><td>Lokaal apotheek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparine</td><td>Lokaal apotheek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>25 mL Spuit</td><td>Odense University Hospital</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Veterinaire oogzalf - Viscotears</td><td>Lokaal apotheek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zilverdraden&nbsp;</td><td>Science Products GmbH, Heidelberg, Duitsland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siliconenlijm&nbsp;</td><td>Kwik-Sil, World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cavernous zenuwstimulatie en opname van intracavernous druk in een rat

Cavernous Nerve Stimulation and Recording of Intracavernous Pressure in a Rat

De stimulatie van de cavernous zenuw (CN) en meting van intracavernous druk (ICP) hebben veel gebruikt voor het testen en evalueren van therapieën voor erectiele disfunctie. Echter, de gebruikte methoden verschillen tussen laboratoria en valkuilen bestaan nog steeds. Het doel van deze studie was om een chirurgische techniek waarmee een betrouwbare en reproduceerbare model te beschrijven. Door de ischiocavernosus spier op zijn punt van plaatsing op de ischial radii bloot te leggen, kon de penile crus worden gecanuleerd met minimale dissectie en schade aan de structuren die betrokken zijn bij de erectiele functie. Herhaaldelijke stimulatie van de GN, zonder de noodzaak voor het heffen en drogen, werd bereikt door het gebruik van een 125 µm bipolaire zilveren elektrode en biocompatibel silicon lijm te isoleren van het elektrode-zenuw-complex. Deze methode voorkomt neuropraxia door vermindering van de rekken en drogen van de zenuw en biedt volledige isolatie van de zenuw, ontkenning van elektrische lekkage en preventie stimuleren van alternatieve trajecten.

Het gebruik van dit protocol met de stimulatie van de aanbevolen instellingen, onder inademing verdoving met Isofluraan 2,0% zuurstof 0.8 L/min, moeten produceren resultaten zoals weergegeven in Figuur 11 en figuur12, waar er meerdere rug aan rug stimulaties tussen 75-80 mm Hg. Figuur 13 toont de dezelfde stabiele reactie over een 20-min stimulatie met het antwoord stabiel op 73-77 mm Hg. Test de...

Deze studie beschrijft een vereenvoudigde chirurgische ingreep en techniek voor het uitvoeren van cavernous zenuwstimulatie met het isolement van de zenuw-elektrode complex met siliconen lijm en meting van de intracavernous druk.

Cavernous zenuwstimulatie en opname van Intracavernous druk in een Rat

The stimulation of the cavernous nerve (CN) and measurement of intracavernous pressure (ICP) have been used extensively to test and evaluate therapies for ...

De algemene doelen van deze methode zijn om een vereenvoudigde chirurgische techniek te beschrijven van canuleringstechniek van het peniscrus voor intracaverneuze drukregistratie en de dissectie en isolatie van de caverneuze zenuw voor elektrostimulaties. Dit experimentele protocol kan worden gebruikt om de pathofysiologie van erectiestoornissen te bestuderen en nieuwe therapieën te testen. Het grote voordeel van deze techniek is dat het reproduceerbaar, snel en betrouwbaar is.Er zijn grote valkuilen aangepakt en geëlimineerd die in deze tutorial zijn beschreven. Hoewel deze methode inzicht kan geven in erectiestoornissen, is de isolatie van het zenuwelektrodencomplex met biocompatibele siliconenlijm toepasbaar voor elektrostimulaties van elke perifere zenuw, waardoor fysiologisch onderzoek van andere organen mogelijk is. Om met deze procedure te beginnen, scheer na het verdoven van het dier de onderste helft van zijn buik en perineum.Wreef het dier met 70%alcohol en povidonjodium drie keer afwisselend. Plaats daarna de rat op een verwarmd chirurgisch kussen in een liggende positie. Breng zalf op de ogen aan en houd de rat verdofd via een neuskoker met 2,5%isofluraan.Voer vervolgens de gehele chirurgische procedure uit onder een operatiemicroscoop op een laken. Maak vervolgens een centimeter lange huidincisievlak onder de middenlijn, beginnend op het niveau van de basis van de penis en zich naar beneden uitstrekkend. Gebruik een wattenstaafje om voorzichtig de fascia zijdelings van het scrotum te scheiden.Na het dissekeren van de fascia, gebruik een paar retractoren om de huidranden en het testikel naar achteren te trekken en de ischiaal tuberositeit te lokaliseren door middel van palpatie met een wattenstaafje. Dissecteer door het vetweefsel mediaal totdat de ischiocavernosus-spier zichtbaar wordt. Gebruik een paar forceps om de spier longitudinaal te scheiden en de tunica albuginea bloot te leggen.De tunica albuginea zal verschijnen als een felwitte structuur. Na kalibratie van de systeeminstellingen, breng slangen aan door de huid van het perineum, zorg ervoor dat deze parallel loopt aan het peniscrus. Laat vervolgens de lijn op zijn plaats en houd de incisie vochtig met zoutoplossing.Maak bij deze procedure een twee centimeter lange middenlijnbuikincisievlak door de huid. Maak een bijpassende incisie door de fascia langs de linea alba om de blaas en de prostaat bloot te leggen. Gebruik de retractoren om een goede zichtbaarheid te krijgen.Gebruik vervolgens wattenstaafjes om de prostaat van het vetweefsel te scheiden. Pas de retractoren aan en voltooi de dissectie totdat u een duidelijke visualisatie van de MPG en CN krijgt die op de dorsale laterale aspect van de prostaat lopen. Na het lokaliseren van de MPG en CN, snijdt u voorzichtig de fascia die de zenuw bedekt twee tot vijf millimeter distaal van de MPG.Vervolgens verspreidt u het weefsel aan elke kant van de zenuw en eronder om een vier millimeter lang gedeelte vrij te maken en vervolgens een naald onder de zenuw te schuiven. Verhoog de zenuw lichtjes met behulp van de naald om het plaatsen van de haken van de bipolaire elektrode rond de zenuw te vergemakkelijken. Laat een assistent de twee componenten van de siliconenlijm vijf seconden met de punt van een insulinenaad mengen.Droog de zenuw en breng de lijm aan op het gebied rond de haken en de zenuw. Houd de zenuw verhoogd door ongeveer een minuut lichtjes aan de elektrode te trekken om de lijm te laten drogen. Verwijder vervolgens de retractoren, behalve de retractoren aan de rechterkant om enig trekken of draaien van de elektrode te voorkomen.Bevochtig vervolgens de blootgestelde organen met zoutoplossing en leg gaas gedrenkt in zoutoplossing over de incisie. Herstel bij deze procedure de zichtbaarheid van de tunica albuginea met behulp van retractoren. Zorg ervoor dat u de retractoren niet aan de ischiocavernosus-spier bevestigt, omdat dit het crus zal vervormen.Bevestig vervolgens de naald aan PE50-slangwerk en spoel de slang met geheparineerde zoutoplossing voordat u deze in de tunica albuginea introduceert. Houd de tunica albuginea uitgerekt en houd het overliggende spierweefsel distaal van het inbrengpunt met uw dominante hand vast. Houd vervolgens de naald in uw niet-dominante hand en breng deze in het caverneuze lichaam in.Spuit de slang door om de juiste plaatsing in de caverneuze lichamen zonder lekkage te bevestigen. Het inbrengen van de naald in het caverneuze lichaam voor drukregistratie is een kritisch punt. Bij het inbrengen van de naald in het crus is het belangrijk dat het crus wordt uitgerekt en de naald parallel aan het traject wordt ingebracht.Spuit de slang door en druk op het crus om de slang te testen. Zorg ervoor dat er geen lekken zijn. Bevestig vervolgens de slang aan de tafel met tape om per ongeluk trekken aan de slang te voorkomen.Verwijder vervolgens de retractoren. Stel de parameters in op een stimulator en breng stimulatie aan gedurende 50 seconden met minimaal een minuut rust tussen de stimulaties. Deze figuur toont een verminderde eerste respons met een stimulatie van 50 millimeter kwik, gevolgd door de tweede en derde stimulatie van 66 millimeter kwik.Vervolgens werden de daaropvolgende metingen op het normale niveau van 73 millimeter kwik geregistreerd. Hier wordt de stabiliteit van de resultaten getoond met dit protocol met 10 opeenvolgende stimulaties tussen 75 en 78 millimeter kwik. Deze figuur toont de effectieve anesthesiegebruiken op intracaverneuze druk.De afname en fluctuatie van de respons bij toenemend isofluraan in vergelijking met de stabiele respons bij 2% in de eerste twee en de laatste drie stimulaties werd waargenomen. De blauwe lijn bovenaan toont de constante hoofdarterige druk. Deze figuur toont het effect van het type anesthesie op intracaverneuze druk.De initiële stimulaties die onder isofluraan-anesthesie werden uitgevoerd, vertoonden een drukgrootte van 80 millimeter kwik. Nadat fentanyl midazolam werd toegediend, was er een toename van de respons tot 110 millimeter kwik. Deze figuur toont het effect van zuurstoftoediening via

cavernous-nerve-stimulation-recording-intracavernous-pressure

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Sanchez, C. A., et al. Preparation of Peripheral Nerve Stimulation Electrodes for Chronic Implantation in Rats. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates vagus nerve stimulation in an awake rat. A rat with an implanted chronic peripheral nerve cuff electrode and trained in a lever press task is connected to a stimulus generator via an implanted head cap. The vagus nerve is stimulated immediately after each successful lever press, resulting in the expansion of the motor map.

Vagus Nerve Stimulation via Chronically Implanted Peripheral Nerve Cuff Electrodes in Rats

This video demonstrates the procedure for recording compound muscle action potential (CMAP) in rats by applying electrical stimuli to the ulnar nerve, adjusting electrodes for optimal signal, and increasing stimulation to assess nerve functionality. This method enables the in vivo investigation of the peripheral nerve functions in neurological disorders.

In Vivo Measurement of the Compound Muscle Action Potential in a Rat

This video demonstrates the isolation and stimulation of the cavernous nerve in an anesthetized rat to study blood pressure changes in the cavernous body.

Performing Cavernous Nerve Stimulation in Rats to Measure Intracavernous Pressure

Axonale prikkelbaarheid technieken bieden een krachtig hulpmiddel om te onderzoeken pathofysiologie en biofysische wijzigingen die voorafgaan aan de onomkeerbare degeneratieve gebeurtenissen. Dit manuscript demonstreert het gebruik van deze technieken op het telefoonbotje van narcose ratten.

In Vivo Elektrofysiologische meting van de Rat telefoonbotje met axonale prikkelbaarheid testen

Intracavernosal druk opname (ICP) is een belangrijke methode om te evalueren van de erectiele functie van proefdieren. Hier, een gedetailleerd protocol blijkt procedure voor de opname van ICP door catheterizing de crura penis en dan elektrisch stimuleren de cavernous zenuwen bij ratten.

Intracavernosal druk opname erectiele functie bij knaagdieren moet worden geëvalueerd

We ontwikkelden een techniek die gelijktijdig zowel electrocorticography als lokale veld potentieel in reactie op Nociceptieve laser stimuli vrij bewegen ratten vastgelegd. Deze techniek helpt een directe relatie van electrocortical signalen op de mesoscopische en macroscopische niveau, dat vergemakkelijkt het onderzoek van Nociceptieve informatieverwerking in de hersenen.

Gelijktijdige opnamen van corticale lokale veld mogelijkheden en Electrocorticograms in reactie op Nociceptieve Laser Stimuli vrij bewegen ratten

Bestaande benaderingen voor de bouw van chronisch implanteerbare perifere zenuwboektroden voor gebruik bij kleine knaagdieren vereisen vaak gespecialiseerde apparatuur en/of hoog opgeleid personeel. In dit protocol demonstreren we een eenvoudige, goedkope aanpak voor het fabriceren van chronisch implanteerbare manchetelektrodes en tonen we hun effectiviteit voor nervusstimulatie (VNS) bij ratten.

Voorbereiding van perifere zenuwstimulatie elektroden voor chronische implantatie bij ratten

Dit protocol beschrijft in vivo intracellulaire opname van rat lumbale motoneurons met gelijktijdige trans-spinale directe stroom stimulatie. De methode stelt ons in staat om membraaneigenschappen te meten en ritmisch afvuren van motoneurons op te nemen voor, tijdens en na anodale of kathodale polarisatie van het ruggenmerg.

In Vivo intracellulaire opname van type-geïdentificeerde Rat Spinal Motoneurons tijdens trans-spinale directe stroomstimulatie

Het huidige protocol beschrijft de chirurgische techniek voor het implanteren van een elektrode-array op de abdominale nervus vagus bij ratten, samen met methoden voor chronische elektrofysiologische tests en stimulatie met behulp van het geïmplanteerde apparaat.

Implantatiechirurgie voor stimulatie van de nervus vagus in de buik en opnamestudies bij wakkere ratten

Een nieuwe techniek om de druk in de schedel op te nemen wordt beschreven. De minimaal invasieve methode maakt gebruik van een fiber-optic drukgevoelige systeem om intracraniële druk (ICP) nauwkeurig te meten in verdoofd ratten zonder significante hersentrauma. De techniek kan worden gebruikt in uiteenlopende experimentele modellen.

Epidurale intracraniale druk meting in ratten met behulp van een Fiber-optic Pressure Transducer

Leer een vereenvoudigde chirurgische techniek voor cavernous zenuwstimulatie en intracavernous drukmeting bij ratten. Deze methode is reproduceerbaar, snel en betrouwbaar voor onderzoek naar erectiestoornissen.

Cavernous zenuwstimulatie en opname van Intracavernous druk in een Rat

Meer video's verkennen