Name: Muismodellen van Helicobacter infectie en maag pathologieën (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Leer muismodellen van Helicobacter-infectie voor gastro-enterologie en microbiologie. Deze methode onderzoekt bacteriële kolonisatie en maagpathologieën om inzicht te geven in ontsteking en kankerontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedank mevrouw A. De Paoli en Ms. Georgie Wray-McCann voor technische bijstand. De auteurs erkennen gebruik van de faciliteiten en technische bijstand van Monash histologie Platform, afdeling Anatomie en ontwikkelingsbiologie, Monash University. Het laboratorium wordt ondersteund door financiële middelen van de nationale gezondheids- en medische onderzoek Raad (NHMRC) naar RLF (APP1079930, APP1107930). RLF wordt ondersteund door een Senior Research Fellowship van de NHMRC (APP1079904). KD en MC worden beide ondersteund door Monash afgestudeerde beurzen. KD wordt ook ondersteund door het centrum voor aangeboren immuniteit en Infectious ziekten, Hudson Institute of Medical Research, terwijl MC een postdoctorale International-beurs van de faculteit geneeskunde, verpleegkunde en gezondheidswetenschappen, Monash University heeft. Onderzoek op de Hudson Institute of Medical Research wordt ondersteund door de Victoriaanse regering operationele infrastructuur Support Program.

<ol><li>Goh, K. L., Chan, W. K., Shiota, S., Yamaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Helicobacter+pylori+infection+and+public+health+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Helicobacter%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Helicobacter pylori infection and public health implications.</a> Helicobacter. 16, Suppl 1. 1-9 (2011).</li>
<li>Montecucco, C., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Living+dangerously%3A+how+Helicobacter+pylori+survives+in+the+human+stomach%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Living dangerously: how Helicobacter pylori survives in the human stomach.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2 (6), 457-466 (2001).</li>
<li>Akopyants, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+the+cag+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Analyses of the cag pathogenicity island of Helicobacter pylori.</a> Molecular Microbiology. 28 (1), 37-53 (1998).</li>
<li>Censini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cag%2C+a+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori%2C+encodes+type+I-specific+and+disease-associated+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">cag, a pathogenicity island of Helicobacter pylori, encodes type I-specific and disease-associated virulence factors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (25), 14648-14653 (1996).</li>
<li>Peek, R. M., Fiske, C., Wilson, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+innate+immunity+in+Helicobacter+pylori-induced+gastric+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Role of innate immunity in Helicobacter pylori-induced gastric malignancy.</a> Physiological Reviews. 90 (3), 831-858 (2010).</li>
<li>O'Rourke, J. L., Lee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+Helicobacter+pylori+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Animal models of Helicobacter pylori infection and disease.</a> Microbes and Infection. 5 (8), 741-748 (2003).</li>
<li>Sakagami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrophic+gastric+changes+in+both+Helicobacter+felis+and+Helicobacter+pylori+infected+mice+are+host+dependent+and+separate+from+antral+gastritis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Atrophic gastric changes in both Helicobacter felis and Helicobacter pylori infected mice are host dependent and separate from antral gastritis.</a> Gut. 39 (5), 639-648 (1996).</li>
<li>Correa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+and+gastric+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori and gastric carcinogenesis.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 19, S37-S43 (1995).</li>
<li>Enno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALToma-like+lesions+in+the+murine+gastric+mucosa+after+long-term+infection+with+Helicobacter+felis.+A+mouse+model+of+Helicobacter+pylori-induced+gastric+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">MALToma-like lesions in the murine gastric mucosa after long-term infection with Helicobacter felis. A mouse model of Helicobacter pylori-induced gastric lymphoma.</a> The American Journal of Pathology. 147 (1), 217-222 (1995).</li>
<li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+mouse+model+of+Helicobacter+pylori+infection%3A+introducing+the+Sydney+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A standardized mouse model of Helicobacter pylori infection: introducing the Sydney strain.</a> Gastroenterology. 112 (4), 1386-1397 (1997).</li>
<li>Crabtree, J. E., Ferrero, R. L., Kusters, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+colonizing+Helicobacter+pylori+strain+SS1+may+lack+a+functional+cag+pathogenicity+island%5BTitle%5D)+AND+%22Helicobacter%22%5BJournal%5D)">The mouse colonizing Helicobacter pylori strain SS1 may lack a functional cag pathogenicity island.</a> Helicobacter. 7 (2), 139-140 (2002).</li>
<li>Israel, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+strain-specific+differences+in+genetic+content%2C+identified+by+microarray%2C+influence+host+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori strain-specific differences in genetic content, identified by microarray, influence host inflammatory responses.</a> Journal of Clinical Investigation. 107 (5), 611-620 (2001).</li>
<li>Fox, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori-induced+gastritis+in+the+domestic+cat%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori-induced gastritis in the domestic cat.</a> Infection and Immunity. 63 (7), 2674-2681 (1995).</li>
<li>Lee, A., Hazell, S. L., O'Rourke, J., Kouprach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+spiral-shaped+bacterium+from+the+cat+stomach%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Isolation of a spiral-shaped bacterium from the cat stomach.</a> Infection and Immunity. 56 (11), 2843-2850 (1988).</li>
<li>Ferrero, R. L., Wilson, J. E., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+Helicobacter-induced+gastric+cancer%3A+use+of+cocarcinogens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of Helicobacter-induced gastric cancer: use of cocarcinogens.</a> Methods in Molecular Biology. 921, 157-173 (2012).</li>
<li>Ferrero, R. L., Thiberge, J. M., Huerre, M., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+of+specific-pathogen-free+mice+to+chronic+Helicobacter+pylori+%28strain+SS1%29+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Immune responses of specific-pathogen-free mice to chronic Helicobacter pylori (strain SS1) infection.</a> Infection and Immunity. 66 (4), 1349-1355 (1998).</li>
<li>Blanchard, T. G., Nedrud, J. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18770594">Laboratory maintenance of Helicobacter species.</a> Current Protocols in Microbiology. , Chapter 8, Unit8B 1 (2012).</li>
<li>Kim, J. S., Chang, J. H., Chung, S. I., Yum, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+the+host+genetic+background+on+immune+responses+to+Helicobacter+pylori+infection+and+therapeutic+vaccine+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunology+and+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Importance of the host genetic background on immune responses to Helicobacter pylori infection and therapeutic vaccine efficacy.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 31 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Nedrud, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+genetic+influence+on+the+innate+inflammatory+response+to+helicobacter+infection+of+the+gastric+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Lack of genetic influence on the innate inflammatory response to helicobacter infection of the gastric mucosa.</a> Frontiers in Immunology. 3, 181(2012).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+felis+eradication+restores+normal+architecture+and+inhibits+gastric+cancer+progression+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Helicobacter felis eradication restores normal architecture and inhibits gastric cancer progression in C57BL/6 mice.</a> Gastroenterology. 128 (7), 1937-1952 (2005).</li>
<li>Ferrero, R. L., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning%2C+expression+and+sequencing+of+Helicobacter+felis+urease+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Cloning, expression and sequencing of Helicobacter felis urease genes.</a> Molecular Microbiology. 9 (2), 323-333 (1993).</li>
<li>Stevenson, T. H., Castillo, A., Lucia, L. M., Acuff, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+Helicobacter+pylori+in+various+liquid+and+plating+media%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Growth of Helicobacter pylori in various liquid and plating media.</a> Letters in Applied Microbiology. 30 (3), 192-196 (2000).</li>
<li>Uotani, T., Graham, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+Helicobacter+pylori+using+the+rapid+urease+test%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of Helicobacter pylori using the rapid urease test.</a> Annals of Translational Medicine. 3 (1), 9(2015).</li>
<li>Riley, L. K., Franklin, C. L., Hook, R. R., Besch-Williford, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+murine+helicobacters+by+PCR+and+restriction+enzyme+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Identification of murine helicobacters by PCR and restriction enzyme analyses.</a> Journal of Clinical Microbiology. 34 (4), 942-946 (1996).</li>
<li>Chaouche-Drider, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+commensal+Helicobacter+sp.+of+the+rodent+intestinal+flora+activates+TLR2+and+NOD1+responses+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A commensal Helicobacter sp. of the rodent intestinal flora activates TLR2 and NOD1 responses in epithelial cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5396(2009).</li>
<li>Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+bilis%3A+bacterial+provocateur+orchestrates+host+immune+responses+to+commensal+flora+in+a+model+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Helicobacter bilis: bacterial provocateur orchestrates host immune responses to commensal flora in a model of inflammatory bowel disease.</a> Gut. 56 (7), 898-900 (2007).</li>
<li>McGee, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+enhances+Helicobacter+pylori+resistance+to+antibiotics+and+LL-37%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Cholesterol enhances Helicobacter pylori resistance to antibiotics and LL-37.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (6), 2897-2904 (2011).</li>
<li>Viala, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod1+responds+to+peptidoglycan+delivered+by+the+Helicobacter+pylori+cag+pathogenicity+island%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Nod1 responds to peptidoglycan delivered by the Helicobacter pylori cag pathogenicity island.</a> Nature Immunology. 5 (11), 1166-1174 (2004).</li>
<li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+and+specific+PCR+method+to+detect+Helicobacter+felis+in+a+conventional+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Vaccine+Immunology%22%5BJournal%5D)">A sensitive and specific PCR method to detect Helicobacter felis in a conventional mouse model.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 3 (1), 73-78 (1996).</li>
<li>Ng, G., Every, A., McGuckin, M., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Helicobacter+felis+colonization+in+male+129%2FSv+mice+fails+to+suppress+gastritis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Increased Helicobacter felis colonization in male 129/Sv mice fails to suppress gastritis.</a> Gut Microbes. 2 (6), 358-360 (2011).</li>
<li>Ferrero, R. L., Ave, P., Radcliff, F. J., Labigne, A., Huerre, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outbred+mice+with+long-term+Helicobacter+felis+infection+develop+both+gastric+lymphoid+tissue+and+glandular+hyperplastic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Outbred mice with long-term Helicobacter felis infection develop both gastric lymphoid tissue and glandular hyperplastic lesions.</a> The Journal of Pathology. 191 (3), 333-340 (2000).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit protocol beschrijft het gebruik van een in vivo muismodel voor Helicobacter infectie. De kritische stappen van de procedure zijn de: 1) voorbereiding van Helicobacter entmateriaal met levensvatbare en motile bacteriën; 2) levering van het juiste aantal bacteriën aan de muis via intragastric maagsonde; 3) detectie van bacteriële infectie door het tellen van de kolonie en/of PCR; en 4) verwerking van weefsels van de maag om de beoordeling van histopathologisch onderzoek in besmet magen. Verde...

Helicobacter pylori is een spiraal-vormige, gramnegatieve, menselijke maag pathogen aanwezig in alle bevolkingsgroepen over de hele wereld, met infectieniveaus in ontwikkelingslanden naar schatting in de orde van 80%1. Hoewel de meeste H. pylori-geïnfecteerde individuen zijn asymptomatisch, sommige meer ernstige ziekten, variërend van peptic ulceratie aan maagkanker2te ontwikkelen. H. pylori-geassocieerde kankers zijn over het algemeen gekenmerkt door kwaadaardige veranderingen in epitheliale cellen (GECs) of door de vorming van extra knooppunten lymfoïde weefsels in de maag, resulterend in maag adenocarcinoom of mucosa-geassocieerde lymfoïde weefsel (mout) lymfoom, respectievelijk. H. pylori is zeer geschikt om te overleven in de strenge ecologische niche van de maag als gevolg van de aanwezigheid van verschillende virulentiefactoren en mechanismen te vergemakkelijken zijn aanhankelijkheid, de groei en het metabolisme in deze niche. In het bijzonder bezitten virulente stammen van H. pylori de 40 kb cag pathogeniteit eiland (cagPAI) dat ongeveer 30 genen benodigd voor de productie van een Type 4 secretie systeem (T4SS)3,4 codeert . CAG PAI-positieve H. pylori -stammen zijn geassocieerd met de inductie van hogere niveaus van chronische ontsteking in de host, die als een essentiële voorloper van maag adenocarcinoom5heeft zijn betrokken.
In vivo diermodellen, vooral muizen, zijn zeer informatief geweest doordat onderzoekers te onderzoeken van de relatieve bijdragen van host, bacteriële en ecologische factoren op H. pylori infectie en ziekte resultaat6. Studies hebben eerder aangetoond dat langdurig H. pylori infectie van muizen op de resultaten van de C57BL/6-genetische achtergrond in de ontwikkeling van chronische gastritis en klier atrofie, beide kenmerken van H. pylori infectie7. Bovendien is besmetting met de verwante katachtige/canine bacteriesoorten, H. felis, gebleken voor het opwekken van mout vorming in muizen met soortgelijke pathologie en progressie van de ziekte zoals gezien in de menselijke MALT lymfoom-8,9. De meest gebruikte H. pylori isolaat in muis kolonisatie studies is de "Sydney stam 1" (SS1) stam10, dat is cagPAI+ , maar heeft een niet-functionele T4SS (T4SS−)11. Andere gebruikte stammen omvatten H. pylori B128 7.13 (cagPAI+/T4SS+)12 en X47-2AL (cagPAI-/T4SS−)13. Voor H. felis infecties, de stam CS1 ('kat spiraal 1" cagPAI-/T4SS−) is over het algemeen gebruikte14.
Hierin bieden wij een protocol met een beschrijving van de voorbereiding van Helicobacter entmateriaal voor in vivo infectie, de procedure voor intragastric maagsonde van muizen, alsmede methoden voor de verwerking van weefsels voor de studie van histopathologische veranderingen in de maag. Met name dit artikel zal zich richten op de histologische methoden gebruikt voor het visualiseren van bacteriële kolonisatie en beoordelen van histopathologische veranderingen, met inbegrip van de vorming van de mout, in het maagslijmvlies van geïnfecteerde muizen. Sommige van de hier beschreven methoden kunnen worden aangepast aan de studie van andere darm-pathogenen zoals S. Typhimurium of C. rodentium.

<table><tbody><tr><td>Bacteriologische reagentia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxoid Blood Agar Base No.2</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>CM0271B</td><td>Los op in gedeïoniseerd water voorafgaand aan sterilisatie</td></tr><tr><td>Premium Defibrinated Horse blood</td><td>Australian Ethical Biologicals</td><td>PDHB100</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Brain Heart Infusion Broth</td><td>BD Bioscience</td><td>237500</td><td>Los op in gedeïoniseerd water voorafgaand aan sterilisatie</td></tr><tr><td>CampyGen gas packs</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>CN0035A/CN0025A</td><td></td></tr><tr><td>Histologische reagentia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Formaline, neutraal gebufferd, 10%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Absoluut alcohol, 100% Gedenatureerd</td><td>ChemSupply</td><td>AL048-20L-P</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol (2-propanol)</td><td>Merck</td><td>100995</td><td></td></tr><tr><td>Xyleen (zwavelvrij)</td><td>ChemSupply</td><td>XT003-20L</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxyline</td><td>Amber Scientific</td><td>MH-1L</td><td>Filter voor gebruik</td></tr><tr><td>Eosine, waterige kleurstof</td><td>Amber Scientific</td><td>EOCA-1L</td><td>Filter voor gebruik</td></tr><tr><td>Wright-Giemsa Stain, gemodificeerd</td><td>Sigma Aldrich</td><td>WG80-2.5L</td><td>Verdun voor gebruik (20% Giemsa, 80% gedeïoniseerd water)</td></tr><tr><td>Histolene</td><td>Grale Scientific</td><td>11031/5</td><td></td></tr><tr><td>DPX montagemedium</td><td>VWR</td><td>1.00579.0500</td><td></td></tr><tr><td>Moleculairbiologische reagentia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA BR Assay Kit</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>Q32850</td><td></td></tr><tr><td>Oligonucleotiden</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>De annealingtemperatuur van de ureB primers gebruikt in dit onderzoek is 61 &deg;C</td></tr><tr><td>GoTaq Flexi DNA Polymerase</td><td>Promega</td><td>M8291</td><td>Kit bevat 10x PCR buffer en Magnesium Chloride</td></tr><tr><td>dNTP's</td><td>Bioline</td><td>BIO-39028</td><td>Verdun tot 10 mM in steriel nucleasevrij water voor gebruik</td></tr><tr><td>Moleculair Grad Agarose</td><td>Bioline</td><td>BIO-41025</td><td></td></tr><tr><td>Natriumwaterstofcarbonaat</td><td>Univar (Ajax Fine Chemicals)</td><td>A475-500G</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium Sulfaat Heptahydraat</td><td>Chem-Supply</td><td>MA048-500G</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotica</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vancomycine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>V2002-1G</td><td>Los op in gedeïoniseerd water</td></tr><tr><td>Polymyxine B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4932-5MU</td><td>Los op in gedeïoniseerd water</td></tr><tr><td>Trimethoprim (&ge;98% HPLC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7883</td><td>Los op in 100% (absoluut) Ethanol</td></tr><tr><td>Amfotericine</td><td>Amresco (Astral Scientific)</td><td>E437-100MG</td><td>Los op in gedeïoniseerd water</td></tr><tr><td>Bacitracine van Bacillus licheniformis</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B0125</td><td>Los op in gedeïoniseerd water</td></tr><tr><td>Naladixinezuur</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N8878</td><td>Los op in gedeïoniseerd water</td></tr><tr><td>Overige reagentia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methoxyfluraan (Pentrhox)</td><td>Medical Developments International</td><td>Niet van toepassing</td><td></td></tr><tr><td>Paraffinewas</td><td>Paraplast Plus, Leica Biosystems</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>Apparatuur en plasticwerk</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxoid Anaerobic Jars</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>HP0011/HP0031</td><td></td></tr><tr><td>COPAN Pasteur Pipettes</td><td>Interpath Services</td><td>200CS01</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5810R centrifuge</td><td></td><td></td><td>Verzamel bacteriële pellets door centrifugatie bij 2.200 rpm gedurende 10 minuten bij 4 &deg;C</td></tr><tr><td>23 g precision glide naald</td><td>BD Bioscience</td><td>301805</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Bemis, VWR</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Portex fine bore polyethyleen buis</td><td>Smiths Medical</td><td>800/100/200</td><td></td></tr><tr><td>Kunststof voedingskatheters</td><td>Instech&nbsp; Laboratories</td><td>FTP20-30</td><td></td></tr><tr><td>1 mL tuberculine luer slip wegwerpspuiten</td><td>BD Bioscience</td><td>302100</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf micropestle voor 1,2 - 2 mL buisjes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z317314</td><td>Autoclaveerbare polypropyleen pestels gebruikt voor maaghomogenisatie</td></tr><tr><td>GentleMACs Dissociator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>Gebruik een vooraf ingesteld gentleMACS Programma voor muismagensweefsel</td></tr><tr><td>M Tubes (oranje dop)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>30-093-236</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Fluorometer</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>Steriele plastic loop</td><td>LabServ</td><td>LBSLP7202</td><td></td></tr><tr><td>Cold Plate, Leica EG1160 Embedding System</td><td>Leica Biosystems</td><td>Niet van toepassing</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Base Mould System, Base Mold 38 x 25 x 6</td><td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td><td>4124</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek III Uni-Casette System</td><td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td><td>4170</td><td></td></tr><tr><td>Microtoom, Leica RM2235</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gelaaide SuperFrost Plus glazen slides</td><td>Menzel Glaser, Thermo Fischer Scientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr></tbody></table>

muismodellen van helicobacter infectie en maag pathologieën

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Helicobacter pylori is een maag ziekteverwekker die aanwezig is in de helft van de wereldbevolking en is een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit bij de mens. Verschillende Muismodellen van maag Helicobacter infectie zijn ontwikkeld om te bestuderen van de moleculaire en cellulaire mechanismen waarbij H. pylori bacteriën koloniseren de maag van menselijke gastheren en ziekte veroorzaken. Hierin beschrijven we protocollen: 1) bacteriële schorsingen voorbereiden op de infectie in vivo van muizen via intragastric maagsonde; 2) bepalen bacteriële kolonisatie niveaus in muis maag weefsel, door de Kettingreactie van de polymerase (PCR) en levensvatbare tellen; en 3) beoordelen pathologische veranderingen, door histologie. Om vast te stellen HelicobactTranslator infectie bij muizen, specifieke pathogenen vrije (SPF) dieren worden eerst geïnoculeerd met suspensies (met ≥105 kolonie-vormende eenheden, CFUs) van muis-koloniseren stammen van beide Helicobacter pylori of andere maag Helicobacter spp. van dieren, zoals Helicobacter felis. Op de juiste tijdstippen na infectie, zijn magen weggesneden en ontleed sagittally in twee gelijke weefsel fragmenten, elk bestaande uit het antrum en lichaam regio's. Een van deze fragmenten wordt vervolgens gebruikt voor levensvatbare tellen of DNA-extractie, terwijl de andere histologische verwerking is onderworpen. Bacteriële kolonisatie en histopathologische veranderingen in de maag kunnen routinematig in maag weefselsecties gekleurd met Warthin-Starry Giemsa of Haematoxylin en eosine (H & E) vlekken, als passend worden beoordeeld. Extra immunologische analyses kunnen ook worden uitgevoerd door immunohistochemistry of immunofluorescentie op muis maag weefselsecties. De hieronder beschreven protocollen zijn speciaal ontworpen om de beoordeling in muizen van maag pathologieën die lijkt op die in de mens-gerelateerde H. pylori ziekten, waaronder ontstekingen, klier atrofie en lymfoïde follikel vorming. De bereiding van het entmateriaal en intragastric maagsonde protocollen kunnen ook worden aangepast aan het bestuderen van de pathogenese van andere zuurbestendige menselijke pathogenen die muizen, zoals Salmonella Typhimurium of Citrobacter rodentiumkoloniseren.

Dit protocol beschrijft een mondelinge maagsonde techniek om intragastric infectie met H. pylori of H. felis in lymfkliertest Muismodellen (Figuur 1). Na euthanasie, magen zijn verwijderd, gewogen en verdeeld in 2 gelijke helften, bestaande uit het antrum, lichaam en niet-klierweefsel regio's van maag weefsels (Figuur 2). De niet-klierweefsel regio is verwijderd voordat u eventueel analyses uitvoert.
Succesvolle kolo...

Muizen vertegenwoordigen een onschatbare waarde in vivo -model om te studeren van besmetting en ziekten veroorzaakt door gastro-intestinale micro-organismen. Hier beschrijven we de methoden gebruikt bij het bestuderen van bacteriële kolonisatie en histopathologische veranderingen in muismodellen van Helicobacter pylori-gerelateerde ziekte.

Muismodellen van Helicobacter infectie en maag pathologieën

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van gastro-enterologie over de impact van leden van de microbiota, met name die van het geslacht Helicobacter, op ontsteking en kanker. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de studie van Helicobacter-infectie en de impact ervan op de maag onder fysiologische omstandigheden mogelijk maakt. De implicaties van deze techniek breiden zich uit tot de ontwikkeling van therapieën voor de preventie of eliminatie van Helicobacter-infectie of de gevolgen ervan, met inbegrip van antibiotica, geneesmiddelen of vaccins.Deze methoden geven inzicht dat specifiek is voor de pathogenese van Helicobacter-infectie. Een aantal van de technieken kan echter worden aangepast aan de studie van andere gastro-intestinale pathogenen. Over het algemeen, individuen nieuw op deze methode zal worstelen met de voorbereiding van een bacteriële entmateriaal in staat is tot vaststelling van een infectie bij muizen.Het is absoluut noodzakelijk dat de Helicobacter isolaten bekende muiskoloniserende stammen zijn die geen uitgebreide subcultuur in vitro hebben ondergaan. Bovendien moet het aantal in vitro subculturen voor deze stammen worden geregistreerd. Voeg bacteriële suspensies toe aan 15-milliliter polystyreenbuizen en gebruik een plastic lus om een druppel van 10 tot 20 microliter van elke cultuur over te brengen op individuele glazen microscoopplaten.Beoordeel vervolgens de levensvatbaarheid en beweeglijkheid van de bacteriën onder fasecontrastmicroscopie bij een 100 keer vergroting. Gebruik de H.pylori-inocula alleen als de meerderheid van de bacteriën een bacillaire vorm heeft. H.felis inocula moet voornamelijk spiraalvormige bacteriën bevatten.En laad de inocula in individuele, wegwerp, een milliliter spuiten. Rust elke spuit uit met een naald van 23 meter en gebruik plastic paraffinefilm om een wegwerppolythyleenkatheter aan elke naald te bevestigen. Houd vervolgens handmatig een zes tot acht weken oude specifieke pathogene-vrije en Helicobacter-vrije muis bij de scruff van de nek en staart, en steek een katheter in het midden van de open kaak.Leid de katheter in een staart naar de slokdarm, het uitbreiden van de nek van de muis om het gemak van de toegang tot de maag door de slokdarm en uit de buurt van de luchtpijp mogelijk te maken totdat de meeste of alle katheter niet meer zichtbaar is en een weerstand wordt gevoeld. Lever vervolgens minstens één keer 10 aan de vijfde bacterie om een optimale kolonisatie en ziektepathologie te garanderen. Gebruik aan het einde van het experiment een fijne, gebogen schaar om de buikholte te openen voor excisie van de maag.Snijd de maag langs de grotere kromming, en voorzichtig wassen het orgaan twee keer in een 50-milliliter buis van verse PBS per wasbeurt om eventuele resterende voedsel te verwijderen. Na de tweede wasbeurt, plaats het weefsel in een bezoedelde, zes centimeter, plastic petrischaal om het natte gewicht op te nemen. Na het afvlakken van de maag, bisect het monster sagittally in twee gelijke weefselfragmenten bestaande uit het antrum, lichaam, en niet-kliernnomach regio's.Verwijder het niet-kliergebied en weeg de helft van elke maag voordat u het stuk weefsel opslaat in de juiste oplossing voor de geplande downstream-analyse. Voeg de andere helft van het maagweefsel toe aan een 15-milliliter conische buis met 10% formaline, waardoor de weefsels na 10 seconden tegen de bovenzijde van de buizen worden afgevlakt. Wanneer de weefsels op de buiswanden zijn aangebracht, dompelt u de monsters gedurende ten minste 24 uur opnieuw onder in de formaline.Om het aantal levensvatbare H.pylori in de maag na infectie te tellen, homogeniseren maagmonsters opgeslagen in BHI, en het uitvoeren van dubbele seriële verdunningen van de resulterende maaghomogenates in verse, steriele bouillon. Verdeel voorgedroogde paardenbloed agar, of HBA, platen aangevuld met extra antibiotica in drie of vier segmenten, en voeg, met behulp van een aanpassing van de Miles en Misra-techniek, 10 tot 100 microliter van elke maaghomogenate verdunning toe aan een segment van elke agarplaat. Verdeel de homogenaten met steriele, plastic lussen en laat de platen drogen.Plaats vervolgens de platen in een omgekeerde positie in anaerobe gaspotten met een petrischaaltje water en een gasverpakking. Dan, incubeer de potten op 37 graden Celsius voor vier tot zeven dagen. Wanneer kolonies kunnen worden waargenomen, opsommen de segmenten met tussen de 10 en 100 geïsoleerde kolonies.Na euthanasie wordt de maag geoogst van de dieren en gewogen. De niet-kliergebied wordt verwijderd, en de maag is verdeeld in twee gelijke helften bestaande uit het antrum en het lichaam. Succesvolle kolonisatie wordt meestal bevestigd door het uitvoeren van levensvatbare tellen en de daaropvolgende opsoming van individuele kolonies van maaghomogenates gestreept op HBA platen.Merk op dat de aanwezigheid van vervuilende bacteriën uit de muis maagmicrobiota of grote aantallen H.pylori kolonies kan de opsommen van H.pylori CFUs compliceren. Als alternatief kan PCR worden gebruikt om infectie te verifiëren met behulp van specifieke gevalideerde primers gericht op een 325-base paar regio van de H.felis en H.pylori ureB genen. In dit representatieve experiment vertoonden wild-type C57 Black-6 muizen matige tekenen van ontsteking, waaronder hyperplasie en klieratrofie na zes maanden na infectie met H.felis, evenals cellulaire infiltratie van de submucosa.Meer ernstige ontsteking wordt waargenomen in knock-out muizen op hetzelfde moment punt, met de extra aanwezigheid van lymfefoetjes waargenomen in de nabijheid van de cellulaire infiltreert. H.felis bacteriën kunnen ook worden gevisualiseerd in Giemsa-gekleurde delen van geïnfecteerde muis maagweefsel. Na deze procedure kunnen andere methoden zoals kwantitatieve PCR, immunohistochemie of immunofluorescentie worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden over de soorten gastheerreacties die tijdens de Helicobacter-infectie zijn geïnduceerd.Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van microbiologie en gastro-enterologie om de veroorzakerrol van Helicobacter pylori bij maagziekte bij de mens te onderzoeken. Na het bekijken van deze video, moet u een goed begrip hebben van hoe muizen reproduceerbaar te infecteren met Helicobacter-soorten en de pathologie die met de infectie wordt geassocieerd te bestuderen. Vergeet niet dat de Helicobacter stammen gebruikt in dit protocol besmettelijk zijn, en daarom standaard bioveiligheid procedures moeten altijd worden gevolgd tijdens het werken met deze bacteriën.

mouse-models-of-helicobacter-infection-and-gastric-pathologies

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates the establishment of Helicobacter pylori infection through the intragastric gavage technique in a mouse model. The bacterial suspension is administered via a catheter inserted through the mouth into the stomach. Inoculated bacteria colonize and establish an infection in the stomach, which can be used to study the host-pathogen interaction.

An Intragastric Gavage Technique for Controlled Helicobacter Infection in Mice

In this video, we describe a protocol to quantify Helicobacter pylori load in mouse stomach tissues post-infection to confirm its colonization.

Quantification of Helicobacter pylori Load in an Infected Mouse Stomach

This video demonstrates a method to establish a gastric organoid infection model by microinjecting gastric pathogen Helicobacter pylori into the lumen of the organoids. This model helps in studying infection-induced changes in gastric cells.

Establishing an Infection Model Through Microinjection of Gastric Organoids with Pathogenic Bacteria

Hier beschrijven we een methode om het oncogene bacteriële orgaantje, bekend als het Cag Type IV Secretie Systeem (Cag-T4SS), te visualiseren.  We ontdekken dat de Cag-T4SS differentieel wordt geproduceerd op het oppervlak van H. pylori als reactie op wisselende omstandigheden van ijzerbeschikbaarheid.

Hoge Resolutie Elektronenmicroscopie van de Helicobacter pylori Cag Type IV Afscheiding System Pili Geproduceerd in wisselende omstandigheden van Iron Beschikbaarheid

Dit artikel toont chirurgische procedures van gastro-oesofageale reflux bij muizen. Deze modellen zijn nuttige hulpmiddelen voor onderzoek naar mechanismen en behandeling van gastro-oesofageale refluxziekte en mogelijk Barrett’s slokdarm en slokdarmadenoom.

Chirurgische Modellen van Gastro-oesofageale met Muizen

Uit stamcellen afgeleide culturen bevatten een enorm potentieel om infectieziekten te modelleren. Hier wordt de kweek van muis en menselijke gastrische organoïden, afgeleid van volwassen stamcellen, beschreven. De organoïden worden gemicro-injecteerd met het gastrische pathogeen Helicobacter pylori.

Organoids als model voor Infectieziekten: cultuur van de mens en muizen Maag Organoids en Micro-injectie van Helicobacter pylori

Hier beschrijven we een protocol voor de vaststelling en het kweken van mens - en muis-afgeleide 3-dimensionale (3D) maag organoids, en de methode voor de overdracht van 3D organoids naar een 2-dimensionale enkelgelaagde. Het gebruik van de maag epitheliale enkelgelaagde als een roman kras-wond assay voor regeneratie studies wordt ook beschreven.

Muis en mens-afkomstige primaire maag epitheliale enkelgelaagde cultuur voor de studie van regeneratie

Hier voerden we een systematische evaluatie uit van patiënten met de diagnose laaggradige intra-epitheliale neoplasie van de maag door eerdere endoscopische biopsie en verkregen we een pathologische diagnose door volledige resectie van de laesie door endoscopische submucosale dissectie (ESD), waarbij we factoren analyseerden die mogelijk het risico op pathologische escalatie verhogen.

Opstellen en evalueren van een risicovoorspellingsmodel voor pathologische escalatie van laaggradige intra-epitheliale neoplasie in de maag

Dit protocol beschrijft een immunokleuringsmethode voor de hele maag, aangepast van de "Swiss roll"-techniek die oorspronkelijk voor de muisdarm is ontwikkeld.

Verbeterde ruimtelijke mapping van maagspierlagen van de muis met behulp van een aangepaste Swiss roll-techniek

Deze video zal aantonen methoden om transurethrally veroorzaken muis infecties van de urinewegen en kwantificeren van de omvang van de resulterende infecties.

Transurethrale Inductie van Mouse urineweginfectie

Leer muismodellen van Helicobacter-infectie voor gastro-enterologie en microbiologie. Deze methode onderzoekt bacteriële kolonisatie en maagpathologieën om inzicht te geven in ontsteking en kankerontwikkeling.

Muismodellen van Helicobacter infectie en maag pathologieën

Meer video's verkennen