Name: Een methode voor Islet transplantatie aan de majus in muis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Leer een methode voor eilandje-transplantatie naar het omentum bij diabetische muizen met behulp van hydrogel. Deze techniek verbetert de overleving en functie van eilandjes voor diabetesonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Enkele van de auteurs van dit werk werden deels gesteund door subsidies van nationale toets R & D programma van China (2017YFC1103704), Sanming Project van geneeskunde in Shenzhen (SZSM201412020), Fonds voor hoog niveau medische Discipline bouw van Shenzhen (2016031638), Shenzhen Stichting voor wetenschap en technologie (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), Shenzhen Stichting van gezondheid en gezinsplanning Commissie (SZXJ2017021).

Alle muizen gebruikt in deze studie werden verkregen uit de medische dier Center van Guangdong provincie. Het gebruik van dieren werd goedgekeurd door de ethische beoordeling Comité van Shenzhen tweede People's Hospital, overeenkomstig de beginselen van het welzijn van dieren.
1. islet transplantatie aan de majus
Opmerking: Dit protocol vereist 2 personen te bereiken.
<ol><li>Monteren van chirurgische materialen die zijn vermeld in tabel 1. Voorbereiden van aseptische veld in chirurgische gebied met steriele materialen zoals gordijnen en disposables en onderhouden van aseptische condities tijdens chirurgie. Alle chirurgische instrumenten te steriliseren. Steriele jassen dragen.</li>
	<li>Kies de eilandjes met behulp van een 200 µL pipette uiteinde onder de stereomicroscoop. Elke muis ontvangt 450 – 500 Islet gelijkwaardig (IEQ) per tansplant. Voor elk dier, genoeg eilandjes één transplantatie in een tube module-top steriele 1,5 mL met 100 µL van CMRL-1066 medium te plaatsen. Opmerking: Eilandjes kunnen worden geïsoleerd op de dag van de transplantatie, maar het is beter om te isoleren ze eergisteren dat herstel voor het proces van isolement.</li>
	<li>Houd de module-top buizen met eilandjes op ijs totdat u transplantatie.</li>
	<li>Ontdooi de kelder membraan matrix hydrogel en houden het op ijs na het verwijderen uit de diepvries van-20 ° C. De hydrogel bij 4 ° C tot 10 ° C vloeibaar is en stolt bij hogere temperaturen.</li>
	<li>Wegen en alle geadresseerden diabetesmuizen tag. Injecteren van 60 mg/kg pentobarbital natrium intraperitoneally. Test de de diepte van de verdoving door het toedienen van een teen snuifje. Een extra 10 mg/kg pentobarbital natrium geven als het dier op het knijpen reageert. Als er geen trekken van reflex, het niveau van de verdoving klopt voor chirurgie.</li>
	<li>Doekje de chirurgische site op de buik met behulp van 70% ethanol. Scheren van het haar van de site met een razer blade en Desinfecteer de omgeving met Iodophor. Beheren dierenarts zalf voor de ogen om te voorkomen dat droogte terwijl onder verdoving.</li>
	<li>Gebruik de oogheelkundige schaar te openen van de buik langs de middellijn van de buik met een snede van 4 tot en met 5 cm. Zet de darmen aan de linkerkant en bedek met zoute doorweekt gaas om overmatige uitdroging tijdens de operatie procedure te voorkomen.</li>
	<li>Gebruik katoenen wissers volledig bloot het gezichtsveld van de maag en zoek de majus (gevestigd onder de maag). Gebruik twee paar fijne pincet om de majus opzwellen. Zorg om te voorkomen dat schade scheuren.</li>
	<li>De hydrogel is op dit punt volledig ontdooid. Draai de buis met de eilandjes voor 30 s bij 200 x g en verwijder de bovendrijvende substantie. Gecombineerd 50 µL hydrogel, toe te voegen aan de buis met de eilandjes en resuspendeer de mix zachtjes de vorming van luchtbellen vermijden. Houd de buizen op ijs tijdens de procedure.</li>
	<li>Gebruik twee paar pincet te halen van de randen van de majus en het vormen van een groef tussen de wand van de maag en darmen die geschikt is voor een klein volume van de vloeistof met de prothese islet zachtjes te verhogen.</li>
	<li>Laat de tweede persoon bijstaan in de procedure en de geresuspendeerde islet-hydrogel mengsel (de gehele inhoud van de tube) gecombineerd met een 200 µL Pipetteer tip, het leveren van de inhoud in de groef.</li>
	<li>Zorg ervoor dat het mengsel is goed gepositioneerd in de groef door zachtjes verhogen of te verlagen van de randen van de majus. Volledige plaatsing van het mengsel binnen 3 min voordat de hydrogel stolt als gevolg van de lichaamstemperatuur. Nadat de hydrogel ingesteld, vouw de majus ter dekking van de prothese. Opmerking: de majus zal houden aan de omliggende maag muur, zoals de hydrogel stolt.</li>
	<li>Nadat de hydrogel is volledig verhard, gebruik katoenen wissers te verplaatsen van de darmen terug in de buikholte, verzorgen niet te raken van de site van transplantatie.</li>
	<li>Voeg 20 µL van cefalosporine (5 ~ 10 mg) in de buikholte om besmetting te voorkomen, dan gebruik 4-0 hechtdraad om te sluiten van de buik.</li>
	<li>De muis terug naar haar kooi en herhaal alle stappen uit voor elke muis-ontvanger. De muizen warm te houden en visueel volgen totdat ze volledig weer voldoende bewustzijn te handhaven sternale ligcomfort. De muizen gescheiden van andere dieren houden totdat zij volledig zijn hersteld.</li>
	<li>Injecteren 50 µL van cefazolin natrium (0,05 mg/mL) elke dag voor een week als na chirurgie profylaxe. Beheren van Bupivicaine + buprenorfine, d.w.z. toepassen 1-3 druppels van 0,25% Bupivicaine op de site van de incisie topisch vóór plaatsing van wond clips. Beheer van Buprenorphine(0.03 mg/ml with sterile 0.9% saline, 0.05-0.10 mg/kg) via de intraperitoneaal (IP)-route.</li>
	<li>Meten van niet-vasten bloedglucose niveau uit een staart-veneuze bloedmonster met behulp van een bloedglucosemeter eenmaal per dag na de transplantatie. Wanneer transplanteren naar de majus, kan de prothese islet hebben een vertraagde functie en niet het bereiken van een volledig normale bloedglucose niveau 2-3 weken.</li>
	<li>Voor histologie, verwijder de omental prothese van de muis aan het einde van het experiment na de transplantatie. Het weefsel volgens de histologische protocollen vast te stellen. De prothese kan worden geanalyseerd voor immunokleuring of immunofluorescentie studies.</li>
</ol>2. alternatieve methode voor transplantatie aan de majus
Opmerking: Een alternatieve fibrine-trombine hydrogel die wordt gebruikt bij kamertemperatuur kan worden vervangen voor de kelder membraan matrix hydrogel. Het bestaat uit 2 componenten, een fibrine sealer eiwit oplossing (50 U/mL trombine en 10 mg/mL fibrinogeen). Wanneer de componenten worden gemengd, vormen ze een klonter die houdt van de eilandjes op zijn plaats.
<ol><li>Gebruik de samengestelde fibrine-thombin-hydrogel bij kamertemperatuur. Zoals in stap 1.2 ontvangt elke muis 450 – 500 islet equivalenten (IEQ) per transplantatie. Plaats de eilandjes in een tube module-top steriele 1,5 mL met 100 µL van CMRL-1066 medium. Onmiddellijk vóór de transplantatie, gecombineerd de eilandjes in een steriele PE50 buizen voor een lengte van 10 cm en centrifugeer zachtjes (30 bij 200 x g s) vormen een losse pellet.</li>
	<li>Voorbereiding van het dier zoals aangegeven vorenstaand (1.5-1.8 stappen) met de majus verspreid. Mengen van de componenten van de hydrogel (10 µL/elke) en plaats op de majus. (Afbeelding 3D)</li>
	<li>Onmiddellijk verdrijven de eilandjes van de buizen op de hydrogel. De hydrogel maakt een klonter rond de eilandjes. (Figuur 3E)</li>
	<li>Vouw de majus over de hydrogel en de eilandjes vormen een zakje. (Figuur 3F) Verder met stappen 1.13 aan 1.18.</li>
</ol>

<ol><li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+research+and+clinical+practice%22%5BJournal%5D)">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).</li>
<li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+Induction+Immunotherapy+Promotes+Long-Term+Insulin+Independence+After+Islet+Transplantation+in+Type+1+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes.</a> American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).</li>
<li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+lancet%22%5BJournal%5D)">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li>
<li>Nilsson, B., Ekdahl, K. N., Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction+to+improve+islets+of+Langerhans+engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Control of instant blood-mediated inflammatory reaction to improve islets of Langerhans engraftment.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 16 (6), 620-626 (2011).</li>
<li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients%2C+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li>
<li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes%3A+recent+advances+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+metabolic+syndrome+and+obesity%3A+targets+and+therapy%22%5BJournal%5D)">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211(2014).</li>
<li>Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27834384">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Cantarelli, E., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+transplantation+sites+for+pancreatic+islet+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+diabetes+reports%22%5BJournal%5D)">Alternative transplantation sites for pancreatic islet grafts.</a> Current diabetes reports. 11 (5), 364(2011).</li>
<li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+animal+models+for+preclinical+islet+transplantation%3A+no+model+fits+all+%28research+purposes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Murine animal models for preclinical islet transplantation: no model fits all (research purposes).</a> Islets. 5 (2), 79-86 (2013).</li>
<li>Beli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erratum+to%3A+CX3CR1+deficiency+accelerates+the+development+of+retinopathy+in+a+rodent+model+of+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Erratum to: CX3CR1 deficiency accelerates the development of retinopathy in a rodent model of type 1 diabetes.</a> J Mol Med (Berl). 95 (5), 565-566 (2017).</li>
<li>Hafner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+Patterns+of+Retinal+Oxygen+Saturation+and+Microvascular+Hemodynamic+Parameters+Preceding+Retinopathy+in+Patients+With+Type+II+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Regional Patterns of Retinal Oxygen Saturation and Microvascular Hemodynamic Parameters Preceding Retinopathy in Patients With Type II Diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (12), 5541-5547 (2017).</li>
<li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nature Biotechnology. 35 (1), 82017(2017).</li>
<li>Voigt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+Progression+Rate+of+Diabetic+Retinopathy+in+Type+2+Diabetes+Patients+in+Correlation+with+the+Duration+of+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Endocrinol+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Prevalence and Progression Rate of Diabetic Retinopathy in Type 2 Diabetes Patients in Correlation with the Duration of Diabetes.</a> Exp Clin Endocrinol Diabetes. , (2017).</li>
<li>Baidal, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+of+an+Intraabdominal+Endocrine+Pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioengineering of an Intraabdominal Endocrine Pancreas.</a> New England Journal of Medicine. 376 (19), 1887-1889 (2017).</li>
<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. , (2016).</li>
<li>Berman, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+the+endocrine+pancreas%3A+intraomental+islet+transplantation+within+a+biologic+resorbable+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Bioengineering the endocrine pancreas: intraomental islet transplantation within a biologic resorbable scaffold.</a> Diabetes. 65 (5), 1350-1361 (2016).</li>
<li>Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28109023">Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment.</a> Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).</li>
<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).</li>
<li>Hajizadeh-Saffar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+VEGF+expression+by+human+embryonic+stem+cell-derived+mesenchymal+stromal+cells+reduces+the+minimal+islet+mass+required+to+reverse+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li>
</ol>

De auteurs melden geen belangenconflicten.

Islet transplantatie aan de lever via de portal-ader is de meest gebruikte methode van islet transplantatie bij de mens, maar er zijn nog steeds zorgen voor efficiëntie en veiligheid zoals portal veneuze trombose en lever steatosis17. Recente studies tonen aan dat de majus mogelijk een geschikt alternatief voor de lever, maar er moet meer onderzoek worden verricht voorafgaand aan klinische vertaling12,14,18</su...

Volgens de internationale Diabetes Federatie (IDF), diabetes mellitus is momenteel invloed op 382 miljoen mensen, met een verwachte toename 592 miljoen mensen van 20351. In beide allogene en XENOGENECELLEN islet transplantatie is systemische immunosuppressieve therapie noodzakelijk. Zonder immunosuppressiva is immuun afwijzing een belangrijke oorzaak van graft verlies2. Er is ook een groot probleem van getransplanteerde islet verlies als gevolg van de onmiddellijke bloed gemedieerde inflammatoire reactie (IBMIR)3,4. Echter, zelfs in de afwezigheid van een immuunrespons zoals syngeneic of auto-transplantatie modellen, in de lever via de portal vein getransplanteerd eilandjecellen verloren gaan als gevolg van ontsteking en/of aan ongunstige omgevingsfactoren, als arme bloed voorzien van verminderde oxygenatie en/of nutriënten5,6. Dientengevolge, met het oog op een langdurige metabole functie, zijn hogere islet nummers nodig om te compenseren voor het verlies van de oorspronkelijke cel dat engraftment7 vermindert.
In een poging om het eilandje engraftment optimaliseren, verschillende alternatieve anatomische sites experimenteel zijn onderzocht, evenals klinisch, met veelbelovende, nog geen definitieve resultaten8. Overwegende dat sommige van de alternatieve sites bieden een gemakkelijke en veilige toegang (bv., huid, nieren, maag submucosa en de capsule anterior kamer van het oog) of een groter oppervlak voor grotere islet massa (bv., peritoneale holte), overleven en fysiologische metabole prestaties van de getransplanteerde eilandjes zijn nog steeds beperkt en blijven een zorg-9. Het zoeken naar een meer geschikte plaats voor islet engraftment loopt.
De majus was een van de vele anatomische sites die werden onderzocht in de vroege ontwikkeling van islet transplantatie, en bleek een succesvolle omgeving voor eilandjes10,11,12,13, 14. Echter, intraportal islet infusie werd de klinische keuze due gedeeltelijk aan de relatieve eenvoud van de procedure en vroege succes in dierlijke modellen6. Ook, gedeeltelijk, de negatieven die is gekoppeld aan deze site, met name massale vroege islet verlies, waren minder begrepen en minder beperken in de vroege dagen van de experimentele islet transplantatie als het veld verviel. Met meer recente dwingende aanwijzingen waaruit blijkt dat intravasculaire islet infusie verre van is ideaal, de majus is opnieuw opkomende als een potentieel waardevolle site voor transplantatie van de cel.
De majus (in de vorm van een omental zakje) biedt relatieve voordelen ten opzichte van de lever15,16. Het is goed gevacuoliseerd en gemakkelijk toegankelijk. Het kunt ophalen van de prothese (indien nodig) en/of een biopsie. De ischemische periode ervaren door de eilandjes is verminderd in vergelijking met de lever en de majus kan relatief grote islet massa die niet mogelijk in de intraportally, waar een stijging van de portal druk kunnen leiden tot complicaties.
Een syngeneic muismodel van transplantatie werd gebruikt in het protocol getest in de studie, dienst C57BL/6 mannelijke muizen tussen 6-8 weken oud met een lichaamsgewicht van 20 – 25 g. Islet ontvangers werden weergegeven met een enkele injectie van streptozotocin met een dosis van 250 diabetische mg/kg ip. De inductie van diabetes kan succesvol worden beschouwd als de bloedglucose niveau van de muis meer dan 24 mmol/L 48 h na injectie is en boven dat niveau voor een minimum van 5 dagen blijft.
Syngeneic eilandjes werden geïsoleerd uit de alvleesklier van leeftijd-matched donoren volgende eerder gepubliceerde methoden met enkele wijzigingen. Kortom, werd de collagenase geïnjecteerd in de galblaas in de plaats van de koker van de gal. Dit werd gedaan als een verbetering ter vergemakkelijking van het gemak van injectie. Collagenase infusie werd gevolgd door incubatie, verstoring van het weefsel, dichtheid verlopende scheiding en hand-picking te verkrijgen pure eilandjes. Eilandjes werden 's nachts gekweekt in CMRL-1066 medium aangevuld met 10% warmte-geïnactiveerd foetale runderserum (FBS) in T175 kolven bij 37 ° C, onder 95% lucht - 5% CO2 vóór de transplantatie.

<table><tbody><tr><td>Uitrusting</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 inch (12-13 cm) Schaar</td><td>RWD Life Science&nbsp;</td><td>S12030-11</td><td></td></tr><tr><td>Fijne pincetten</td><td>RWD Life Science</td><td>F11010-13</td><td></td></tr><tr><td>Kleine wondclips</td><td>RWD Life Science</td><td>R33003-01</td><td></td></tr><tr><td>Acutenaculum</td><td>RWD Life Science</td><td>F31044-13</td><td></td></tr><tr><td>2 paar weefselpincetten</td><td>RWD Life Science</td><td>&nbsp;F13023-10</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Naald met hechtdraad</td><td>Chenghe, China</td><td>17094</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu;L Pipet en tips</td><td>Gilson</td><td>PN11</td><td></td></tr><tr><td>One Touch ultraeasy Basic bloedglucosemonitoringsysteem&nbsp;&nbsp;</td><td>Johnson &amp; Johnson</td><td>33391713</td><td></td></tr><tr><td>Scheermesje</td><td>Philips</td><td>HC1099/15</td><td></td></tr><tr><td>Materiaal en dieren</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbitalnatrium</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P3761</td><td>Voor anesthesie&nbsp;</td></tr><tr><td>Hydrogel&nbsp;</td><td>bdbiosciences.com</td><td>356234</td><td>Basement Membrane Matrix</td></tr><tr><td>Fibrine-Trombinegrostel&nbsp;</td><td>Baxter.com</td><td>1501250</td><td>Componenten stollen wanneer ze worden gemengd</td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Yingniu medical, Anhui, China</td><td>23170608</td><td></td></tr><tr><td>Iodofoor</td><td>Lierkang medical technology, Shangdong, China</td><td>170521</td><td></td></tr><tr><td>Normale zoutoplossing</td><td>Baxter.com</td><td>2B1324</td><td></td></tr><tr><td>Cefalexine</td><td>Lukang medical, Shangdong, China</td><td>150303</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin</td><td>Baxter.com</td><td>2G3508</td><td></td></tr><tr><td>smeermiddel oogzalf</td><td>Major Pharmaceuticals</td><td>203964</td><td></td></tr><tr><td>streptozotocine</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>collagenase Type V</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>C9262</td><td></td></tr><tr><td>CMRL-1066 media</td><td>celltrans, Wenzhou, China</td><td>X018D1</td><td></td></tr><tr><td>histopaque</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>10771</td><td>dichtheidsgradiënt</td></tr><tr><td>PE50 slang</td><td>Braintreesci.com</td><td>PE50 100 FT</td><td>Polyethyleen.023" x.038</td></tr><tr><td>Calcein AM</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>C1359</td><td></td></tr><tr><td>Propidiumjodide</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>optimale snijtemperatuur compound (OCT)</td><td>Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL</td><td>4583</td><td>inbeddingsmedium</td></tr><tr><td>insuline antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td><td>8138S</td><td></td></tr><tr><td>hematoxyline kleurmiddel</td><td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td><td>14166S</td><td></td></tr><tr><td>eosine kleurmiddel</td><td>Beyotime Biotech, China</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.&nbsp;</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6 Muizen</td><td>Medical Animal Center of Guangdong Province</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal runderserum</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30084</td><td></td></tr><tr><td>T175 kolven</td><td>Falcon</td><td>353112</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Snap-topbuisjes</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr></tbody></table>

een methode voor islet transplantatie aan de majus in muis

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

Islet Transplantatie is voorgesteld als een mogelijke behandeling voor diabetes type 1. Recente overtuigend bewijs geeft aan dat intravasculaire islet infusie verre van ideaal is en de majus daarom opnieuw opkomende als een potentieel waardevolle site voor islet transplantatie. Dit experiment vereist het isolement van hoge kwaliteit eilandjes en de inplanting van de eilandjes aan de diabetische ontvangers. Transplantatie aan de majus vereist chirurgische stappen die kunnen beter visueel worden aangetoond. Hier is de gedetailleerde stappen voor deze procedure worden gepresenteerd. Twee methoden voor het mengen van de geïsoleerde eilandjes met hydrogel voor het plaatsen van het mengsel in het omental zakje van diabetesmuizen worden hier beschreven. Verschillende hydrogels worden gebruikt voor de verschillende omstandigheden. Niveaus van de glucose van het bloed van syngeneic kleine eilandjes in de majus gegevensontvangers diabetische muis werden gevolgd tot maximaal 35 dagen. Sommige dieren werden opgeofferd na 14 dagen naar immuno-histochemische analyses uit te voeren. Deze aanpak van de pre-klinische transplantatie kan worden gebruikt als voorlopige gegevens aanloop naar vertaling naar klinische transplantatie.

Post-Digestive staat van de alvleesklier wordt weergegeven in figuur 1A. Gezuiverde eilandjes worden weergegeven in figuur 1B. Dithizone kleuring en testen van de levensvatbaarheid van de eilandjes zijn afgebeeld in Figuur 2. De belangrijkste stappen van de islet transplantatie voor de majus zijn afgebeeld in Figuur 3. De niveaus van de glucose van het bloed van de ontva...

Een methode voor de omental transplantatie van de eilandjes in een muis is ingevoerd. De geïsoleerde eilandjes met hydrogel zijn gemengd en het mengsel wordt geplaatst in de omental etui van een diabetische muis. Vervolgens de bloedglucose wordt gecontroleerd en immuno-histochemische analyse wordt uitgevoerd.

Een methode voor Islet transplantatie aan de majus in muis

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het eilandjetransplantatieveld, zoals eilandjestransplantatie naar het omentum. De implicaties van deze techniek breiden zich uit tot therapie van diabetes type I omdat het omentum opnieuw opduikt als potentiële waardeplaats voor eilandjetransplantatie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de geïsoleerde eilandjes worden gemengd met hydrogel en het mengsel wordt geplaatst in het omentumzakje van diabetische muis.Begin met het voorbereiden van een aseptisch veld in het chirurgische gebied met steriel materiaal zoals gordijnen en disposables. Plaats de gesteriliseerde chirurgische instrumenten in het aseptische veld. Kies de donor eilandjes onder de stereo-microscoop met behulp van een 200 microliter pipet tip.Verzamel voor elk dier 450 tot 500 eilandjes en breng over op een steriele 1,5 milliliter snap topbuis met 100 microliter CMRL 10 66 medium. Zet de buis op ijs tot klaar om te transplanteren. Zodra de eilandjes zijn geoogst, dooi kelder membraan matrix hydrogel op ijs.Weeg en tag alle diabetische ontvanger muizen. Na het verdoven van de eerste muis volgens een institutioneel goedgekeurd protocol, test u de diepte van anesthesie door een teensnufje toe te dienen. Als er geen ontwenningsreflex is, is het niveau van anesthesie correct voor een operatie.Toediening van de zalf aan de ogen om droogte te voorkomen, terwijl onder narcose. Watsmelten de buik met 70%ethanol. Scheer dan het haar van de operatieplaats.Bedek het dier met een steriele gordijnen en ontsmet het gebied met een jodiumscrub. Na het gebruik van oogheelkundige schaar om een 4 tot 5 centimeter incisie langs de middellijn van de buik te creëren, beweeg de darmen naar de linkerkant en bedek je met zout geweekt gaas om uitdroging tijdens de operatieprocedure te voorkomen. Gebruik dan wattenstaafjes om de maag volledig bloot te stellen en het omentum onder de maag te lokaliseren.Op dit punt moet de hydrogel volledig ontdooid zijn. Draai de buis met de eilandjes op 200 keer g gedurende 30 seconden. Verwijder na de spin de supernatant.Dan aspirate 50 microliters van de hydrogel toe te voegen aan de buis met de eilandjes en meng zachtjes het vermijden van de vorming van bellen. Gebruik vervolgens twee paar tangen om de randen van het omentum op te rapen en voorzichtig op te heffen om een groef tussen de maagwand en de darmen te vormen. Op dit punt in de operatie is een tweede persoon nodig om het opnieuw op te hangen is van hydrogel met een 200 microliter pipetpunt en deze in de groef te leveren.Zorg ervoor dat het mengsel goed in de groef is geplaatst door de randen van het omentum voorzichtig te verhogen of te verlagen. Voltooi de positionering van het mengsel binnen drie minuten voordat de hydrogel stolt. Vouw na de hydrogelsets het omentum om het transplantaat te bedekken.Het omentum zal zich aan de omliggende maagwand hechten als de hydrogel stolt. Wanneer de hydrogel volledig gestold is, gebruik wattenstaafjes om de darmen in de buikholte te herpositioneren, waarbij u ervoor zorgt dat de plaats van transplantatie niet wordt aangeraakt. Vervolgens 200 microliter van een geschikt antibioticum in de buikholte om infectie te voorkomen.Gebruik vervolgens 4 O hechting om de buik te sluiten. Over het algemeen individuen nieuw op deze methode zal worstelen, omdat de sites van het omentum in muizen is klein en vermoeiend om te beoordelen. Plaats de muis in een opgewarmde herstelkooi totdat deze volledig weer uitwendig is.De volgende dag en elke dag daarna voor een week, injecteren antibioticum als post-chirurgie profylaxe. Ook, meet niet-nuchtere bloedsuikerspiegel van een staart ader bloedmonster met behulp van een bloedglucose meter een keer per dag na de transplantatie. Bij het transplanteren naar het omentum kan het eilandjetransplantatie een vertraagde functie hebben en gedurende twee tot drie weken geen volledig normale bloedglucose bereiken.Het geënte weefsel werd 14 dagen na transplantatie uit de geëuthanaseerde muis gehaald. Hier is het transplantaat zichtbaar als een cluster van kernen na DAPI-kleuring. De functionaliteit van het geënte weefsel wordt onthuld door immunofluorescentie kleuring met anti-insuline antilichamen.H&E kleuring toont de geënte weefsels omgeven door de adipocyten van het omentum. Eenmaal onder de knie, kan deze techniek worden gedaan in een uur als het goed wordt uitgevoerd. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden ook de muis omentum is kwetsbaar.Na deze procedure, andere methoden zoals gebruikt in verschillende middelbare school, MB prestaties in alles wat bepaalde vragen zal beantwoorden, zoals de verspreiding van eilandje in vascuolisatie en de prestaties. Na deze ontwikkeling, deze techniek maakte de weg vrij voor onderzoekers in hun en transplantatie om de behandeling voor type I diabetes te verkennen in meer dan een fragment. Na het bekijken van deze video, moet u een goed begrip van hoe de eilandjes transplanteren naar het omentum in de muis.

a-method-for-islet-transplantation-to-the-omentum-in-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ons protocol is ontwikkeld om zuiver en eenvoudig eilandjes of cellen te leveren onder de nier capsule van muizen. Cellen zijn geconcentreerd in pellets in de finale slangen worden gebruikt voor het transplanteren van de cellen onder de nier capsule. Het gemak van deze techniek vermindert de belasting van de cellen en de muis.

Transplantatie van pancreaseilandjes Into the Kidney Capsule van diabetische muizen

Transplantatie van geïsoleerde eilandjes is voorgesteld om een ​​potentiële behandeling voor diabetes type 1 zijn. Hier beschrijven we een methode om de eilandjes van de muis pancreata isoleren en transplantatie ze aan de subcapsulaire ruimte van de nier.

Een methode voor Murine Islet Isolatie en subcapsulaire Niertransplantatie

This video describes the protocol for grafting human pancreatic islets into the anterior chamber of the mouse’s eye to monitor revascularization of human islet grafts in vivo. It also helps to understand the contribution of recipient versus donor cells in promoting the encapsulation and vascularization of the graft.

Grafting Pancreatic Islets: A Method to Implant Pancreatic Islets into the Anterior Chamber of the Mouse Eye for In Vivo Imaging

In this video, we describe a procedure to infuse pancreatic islet cells into the hepatic portal vein, followed by application of gel foam to successfully prevent bleeding. Postoperative bleeding is a common cause of high mortality during islet transplantation.

Murine Model of Islet Transplantation: A Surgical Method to Infuse Pancreatic Islets in Portal Vein and Prevention of Postoperative Bleeding

Dit protocol demonstreert het isoleren van muizen eiland en zaait op een decellularized steiger. Steigergesteunde eilandjes werden getransplanteerd in het epididymale vetpaneel van streptozotocine (STZ) geïnduceerde diabetische muizen. Islets overleefden op de transplantatieplaats en reverseerde de hyperglycemische conditie.

Steiger-gesteunde transplantatie van eilanden in het epididymale vetpaneel van diabetische muizen

Alvleesklier islet transplantatie is een manier om normoglycemia bij type 1 diabetes. Dit artikel richt zich op de transplantatie-techniek via de intraportal route om normale glucoseniveaus in diabetesmuizen te handhaven.

Intraportal transplantatie van de alvleesklier eilandjes in Mouse Model

Hier presenteren we een protocol voor in vivo validatie van hydrogel gebaseerde celtherapie, geïllustreerd door het voorbeeld van islet transplantatie. h-Omental Matrix Islet vullen (hOMING) implantatie kunt implantatie van een cel-hydrogel mengsel tussen de omental lagen, in de buurt van bloedvaten, engraftment in een juiste metabole omgeving te maximaliseren.

Intra-Omental Islet Transplantatie met behulp van h-Omental Matrix Islet vulling (hOMING)

In dit protocol wordt een methode van murineeilandisolatie en transplantatie in het inguinal onderhuids wit vetweefsel beschreven. Geïsoleerde synogenische murine eilandjes worden getransplanteerd in een murine ontvanger met behulp van een kelder membraan hydrogel. De bloedsuikerspiegel van de ontvangers wordt gecontroleerd en de histologieanalyse van de levensperie-transplantaties wordt uitgevoerd.

Inguinal Subcutane white Adipose Tissue (ISWAT) Transplantatie Model van Murine Eilandjes

Deze met vet bedekte eilandjestransplantatiemethode is geschikt voor de detectie van geënte eilandjes in de intraperitoneale holte. Met name vereist het niet het gebruik van biobindingsmiddelen of hechten.

Met vet bedekte eilandjestransplantatie met behulp van epididymaal wit vetweefsel

Hier presenteren we verfijnde chirurgische procedures voor het succesvol uitvoeren van intraportale eilandjestransplantatie, een klinisch relevante maar technisch uitdagende chirurgische procedure, bij muizen.

Minimalisering van post-infusie portale aderbloedingen tijdens intrahepatische eilandtransplantatie bij muizen

In dit protocol bespreken we de implementatie van een model van succesvolle orthotope levertransplantatie (OLT) bij muizen. Daarnaast worden ook adjuvantia besproken om de doorgankelijkheid van het transplantaat verder te analyseren na succesvolle OLT in een muis, met name met behulp van microcomputertomografie (microCT)-scans.

Succesvolle orthotope levertransplantatie bij muizen met behulp van microcomputertomografie-angiografie

Leer een methode voor eilandje-transplantatie naar het omentum bij diabetische muizen met behulp van hydrogel. Deze techniek verbetert de overleving en functie van eilandjes voor diabetesonderzoek.

Een methode voor Islet transplantatie aan de majus in muis

Meer video's verkennen