Name: Beoordeling van Plasma coagulatie op leverweefsel in een grote diermodel In Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Leer plasma-coagulatie beoordelen in leverweefsel in vivo met een varkensmodel. Deze methode omvat laser Doppler, histologische metingen en infraroodthermografie voor chirurgisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben geen bevestigingen.

Regels beheerst door Duitse wetgeving voor dierproeven, alsmede de beginselen van Laboratory Animal Care (National Institutes of Health publicatie ed. 8, 2011) werden gevolgd. Officiële toestemming wordt verleend van de gouvernementele dierenverzorgers kantoor (Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Duitsland).
1. dieren
<ol><li>Het gebruik van vrouwelijke Duitse landras varkens (onder de 25-30 kilo) in open kooien gehuisvest.</li>
	<li>Gebruik 5 dieren per groep (argon en helium).</li>
	<li>Toestaan dat de dieren om te acclimatiseren aan de omgeving voor ten minste één week voor de experimenten. Snelle dieren gedurende 24 uur vóór de operatie met gratis toegang tot water.</li>
</ol>2. anesthesie
<ol><li>Premedicate de dieren met een intramusculaire injectie van atropine (0,1 mg/kg BW), ketamine (15 mg/kg lichaamsgewicht [BW]) en xylazine (10 mg/kg BW) 10 minuten vóór de inductie van de anesthesie.</li>
	<li>Perifeer veneuze toegang is opgericht door plaatsing van een 22-gauge canule in een ader van het oor.</li>
	<li>Induceren narcose door i.v. injectie van propofol 2 mg/kg lichaamsgewicht.</li>
	<li>Plaats het dier in de liggende positie en het uitvoeren van een longitudinaal huid incisie in de jugular groef over een lengte van 2 cm. Locate ader door de botte voorbereiding van het subcutane weefsel. Invoegen canule, vervolgens Seldinger draad.</li>
	<li>Intrekken van de canule en 14 Fr. katheter via de begeleidingskabel invoegen. Intrekken van begeleidingskabel. Katheter verbinden met de uitbreiding en fixeren van de katheter door een riem of een hechtdraad.</li>
	<li>Trek de tong en rechte Laryngoscoop invoegen. Gebruik het puntje van de Laryngoscoop te trekken beneden het strotklepje. Plaats de buis door de stembanden. Plaats van manchet onder glottis en opblazen.</li>
	<li>Ventileer met 40% zuurstof op 20-26 adem/min en een ademhalingsvolume van 10 ml/kg te houden van de einde-getijde gedeeltelijke koolstofdioxide spanning tussen 36 en 42 mm Hg.</li>
	<li>Handhaven van anesthesie met Isofluraan bij een concentratie van 1-1,5% en fentanyl bij een concentratie van 3-4 µg/kg/h.</li>
	<li>Leveren van Ringer's lactaat oplossing met een initiële snelheid van 4 mL/kg/h, en verhogen na de laparotomie aan een constante infusiesnelheid van 8 mL/kg/h.</li>
</ol>3. chirurgie en Plasma Coagulation
<ol><li>Plaats het dier in een liggende positie op een standaard chirurgische tafel.</li>
	<li>Desinfecteren van de huid door het toepassen van een standaard chirurgische ontsmettingsmiddel (2-Propanol 45 g/100 g, 1-Propanol 10 g / 100g, Bifenyl-2-ol 0,2 g/100 g) met een chirurgische doekje voor 3 keer.</li>
	<li>Uitvoeren van een laparotomie breed middellijn van de xiphoid process naar het schaambeen met een scalpel en chirurgische OPROLMECHANISMEN installeren.</li>
	<li>Schakel het apparaat plasma coagulatie, argon of helium gasfles, afhankelijk van het gebruikte dragergas open. Gasstroom te selecteren coagulatie 3 L/min. uitgangsvermogen apparaat desgewenst aanpassen. Opmerking: Beide edelgassen, Argon of Helium, kan worden gebruikt voor plasma coagulatie. Stolling effecten zijn vergelijkbaar. Zie referentie7 voor meer informatie.</li>
	<li>Plasma coagulatie op de linker lever kwab als eerder beschreven7uitvoeren. Gebruik een titanium mal (vierkante diafragma 1 x 1 cm2) op de standaardisering van de stolling zone. Coaguleren voor 5 s met een sonde-afstand van 1 cm. De coagulations met verschillende energie-instellingen kunnen worden uitgevoerd naast een korte afstand tussen de coagulations van 5 mm (Figuur 1).</li>
	<li>Voor het oogsten van de lever, verdeel alle ligamenteuze verbindingen aan de lever. Isoleren en verdeel de hepatische stam boven de superieure duodenale flexure lange delen van portal ader en Galgang verlaten. Verdeel de holle ader boven en onder de lever en het orgel op te halen.</li>
	<li>Na de oogst van de lever, waren de varkens euthanized door i.v. toediening van 0.16 g/kg BW pentobarbital.</li>
	<li>Resect voor de uitbarsting druk experimenten, de helft van de linker mediale lever kwab met een scherpe schaar. Plasma-coaguleren van de cut oppervlakte (100W uitgangsvermogen) of verzegelen het snijvlak met fibrine sealant (Figuur 2).</li>
</ol>4. de microcirculatie meting
Opmerking: Laser Doppler spectroscopie kunt bepalen bloedstroom in weefsel door het meten van de Doppler shift veroorzaakt door het verkeer van erytrocyten. Het signaal van de Laser correleert met het aantal bewegende erytrocyten. Laser Doppler spectroscopie in klinische gebruik (bijvoorbeeld transplantatie geneeskunde) en heeft al meerdere malen15gevalideerd.
<ol><li>Zet de laser Doppler debietmeter en een spectrofotometer. Gebruik een platte sonde.</li>
	<li>Neem basislijnmetingen voor stroom en snelheid. Opslaan of Let op de waardes.</li>
	<li>Stolling zoals beschreven onder 3.5 uitvoeren</li>
	<li>Plaats de vlakke sonde op de sites van de stolling en maatregel flow en snelheid. Nogmaals, opslaan of opmerking waarden.</li>
	<li>Herhaal voor alle instellingen van de macht van het coagulator apparaat.</li>
</ol>5. de temperatuurmeting
<ol><li>Schakel het systeem op (thermografische camera, laptop en infrarood thermometer) en laat het lopen voor ten minste 1 uur vóór het uitvoeren van metingen.</li>
	<li>Focus aanpassen en frame weergeven op de thermografische camera op de stolling-site. Infrarood sequenties kunnen worden opgespoord met de ruimtelijke resolutie van 1024 x 768 pixels met de resolutie van een temperatuur groter dan 20 mK. Rekening, die de regio van coagulatie en het omringende weefsel — beïnvloed door warmteoverdracht — bevindt zich in het midden van de weergave. Opmerking: Het moet zoveel pixels van het frame bevatten mogelijk voor een optimale ruimtelijke resolutie.</li>
	<li>Record coagulatie proces met de plasma-coagulator van de lever ondergrond met de thermografische camera over een periode van 2-min.</li>
	<li>Analyseren van afbeeldingsreeksen met de software van de analyse van de thermografie: definiëren van gebieden van belang. Opmerking: Software berekent de loop van de overeenkomstige gemiddelde temperatuur na verloop van tijd.</li>
</ol>6. coagulatie diepte meting
<ol><li>Oogst de linker mediale lever kwab met een scherpe schaar.</li>
	<li>Accijnzen de coagulatie sites met 1 cm dikte. Snijd in 3 mm dik longitudinale segmenten voor verdere verwerking.</li>
	<li>Fix weefselsteekproeven bij 4 ° C's nachts met neutrale 10% gebufferd formaline. Verwarm paraffine 2 ° C boven het smeltpunt en insluiten van segmenten. Proces 's nachts.</li>
	<li>De Haematoxyline/eosine-kleuring uitvoeren<ol>
<li>Deparaffinize en hydrateren het weefsel door vervolgens dompelen in 2 x xyleen, 100% ethanol (EtOH), 95% EtOH, 70% EtOH, gedeïoniseerd H2O voor elke 2 min.</li>
		<li>Vlek het weefsel monster met Meyers Haematoxyline oplossing gedurende 3 minuten.</li>
		<li>Nu spoel in leidingwater voor 5 min.</li>
		<li>Vlek het weefsel met eosine oplossing gedurende 3 minuten.</li>
		<li>Spoel in 2 x EtOH 95% en vervolgens xyleen gedurende 3 minuten elke. Monteer met de standaard montage medium.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Schakel het systeem in (Microscoop aangesloten camera, beeldbewerkingssoftware). Bekijk alle secties met 40 X vergroting.</li>
	<li>Neem een foto van een object micrometer bij een vergroting van 40 X. Druk op de knop Herkalibreren in het venster doelstellingen. Selecteer Handmatige kalibratie. Trek een lijn op de micrometer afbeelding van 100 µm. Enter 0,1 mm in het dialoogvenster en druk op OK.</li>
	<li>Lengte in de weergave selecteren > analyse besturingselementen > venster aantekeningen en metingen. Meten van de lever oppervlak tot aan de marge van de stolling met de muis. Opmerking het resultaat of exporteren. Herhaal de meting op een andere locatie op dezelfde dia.. Opmerking: Coagulatie diepte kan gemakkelijk worden onderscheiden van de normale lever weefsel door de scherpe marge tussen de normale hepatocyte koorden en de zone van necrose met gekrompen cytoplasma, pyknotische kernen en bloeding zones.</li>
	<li>Berekent gemiddelde uit twee metingen.</li>
</ol>7. de meting van de druk van de burst
<ol><li>Schakel het systeem in (automatische pompen, druk meter). De lever monsters volgens de stap 3.7 voor te bereiden. Opmerking: Gebruik twee parallelle pompen aangesloten via een 3-weg-afsluiter. De maximale druk van 1 500 mm Hg niet kan worden verkregen met een enkele pomp.</li>
	<li>Portal vein, gemeenschappelijke hepatische slagader en gal duct isoleren met een schaar in de haptische stam. Portal vein klem met een pincet overholt en afbinden met een monofil hechtdraad 4-0. Gemeenschappelijke hepatische slagader een pincet overholt klem en afbinden met een monofil hechtdraad 4-0.</li>
	<li>Ch-16 katheter in de Galgang invoegen en afbinden met een 2-0 zijde hechtdraad. De katheter verbinden met de automatische pompen, 3-weg afsluiter installeren met druk meter (Figuur 3).</li>
	<li>Vul de spuit perfusie met zoutoplossing.</li>
	<li>Automatische pompen met een snelheid van de levering van 99 mL/h beginnen.</li>
	<li>Lever gesneden oppervlak en druk meter voor lekkage en record barstdruk controleren. Opmerking: Voor eenvoudiger erkenning van lekkage, patent blauw kan worden toegevoegd aan saline (2 mL patent blauw + 18 mL zoutoplossing). Het is makkelijker om te observeren barstdruk door merken de tijd van het verlies van druk op de druk meter.</li>
</ol>

<ol><li>Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+plasma+scalpel%3A+comparison+of+tissue+damage+and+wound+healing+with+electrosurgical+and+steel+scalpels%5BTitle%5D)+AND+%22ArchSurg%22%5BJournal%5D)">A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels.</a> ArchSurg. 111, 392-397 (1976).</li>
<li>Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+laparoscopic+haemostasis+using+an+argon+beam+coagulator+for+blunt+traumatic+splenic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22EurJSurg%22%5BJournal%5D)">Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury.</a> EurJSurg. 167, 316-318 (2001).</li>
<li>Frilling, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+a+new+carrier-bound+fibrin+sealant+versus+argon+beamer+as+haemostatic+agent+during+liver+resection%3A+a+randomised+prospective+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+ArchSurg%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial.</a> Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).</li>
<li>Raiser, J., Zenker, M. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0022-3727/39/16/S10/pdf">Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art.</a> J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).</li>
<li>Farin, G., Grund, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technology+of+argon+plasma+coagulation+with+particular+regard+to+endoscopic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22EndoscSurgAllied+Technol%22%5BJournal%5D)">Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications.</a> EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).</li>
<li>Grund, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+plasma+coagulation+%28APC%29%3A+ballyhoo+or+breakthrough%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough?</a> Endoscopy. 29, 196-198 (1997).</li>
<li>Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+and+helium+plasma+coagulation+of+porcine+liver+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Int+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue.</a> J Int Med Res. , (2017).</li>
<li>Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+beam+coagulation+is+superior+to+conventional+techniques+in+repair+of+experimental+splenic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22JTrauma%22%5BJournal%5D)">Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury.</a> JTrauma. 31, 717-720 (1991).</li>
<li>Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+argon+beam+coagulator+provides+rapid+hemostasis+of+experimental+hepatic+and+splenic+hemorrhage+in+anticoagulated+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22JTrauma%22%5BJournal%5D)">The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs.</a> JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).</li>
<li>Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+argon+plasma+coagulation+in+skin+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology%22%5BJournal%5D)">Application of argon plasma coagulation in skin surgery.</a> Dermatology. 197, 152-157 (1998).</li>
<li>Carus, T., Rackebrandt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+tissue+damage+by+several+types+of+coagulation+%28monopolar%2C+bipolar%2C+cold+plasma+and+ultrasonic%29+in+a+minimally+invasive%2C+perfused+liver+model%5BTitle%5D)+AND+%22ISRNSurg%22%5BJournal%5D)">Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model.</a> ISRNSurg. , 518924(2011).</li>
<li>Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+measurement+of+gastric+mucosal+microcirculation+using+a+combined+laser+Doppler+flowmeter+and+spectrophotometer%5BTitle%5D)+AND+%22DisEsophagus%22%5BJournal%5D)">Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer.</a> DisEsophagus. , (2008).</li>
<li>Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+the+Micro-Lightguide+O2C+for+the+quantification+of+tissue+ischemia+in+diabetic+foot+ulcers%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers.</a> Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).</li>
<li>Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesive+strength+of+fibrinogen-coated+collagen+patch+or+liquid+fibrin+sealant+in+an+experimental+liver+resection+model+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res+Eur+Chir+Forsch+Rech+Chir+Eur%22%5BJournal%5D)">Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs.</a> Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).</li>
<li>Knobloch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcirculation+of+the+sternum+following+harvesting+of+the+left+internal+mammary+artery%5BTitle%5D)+AND+%22ThoracCardiovascSurg%22%5BJournal%5D)">Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery.</a> ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).</li>
<li>Kanzler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendation+for+severity+assessment+following+liver+resection+and+liver+transplantation+in+rats%3A+Part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I.</a> Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).</li>
<li>Pehböck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+in+swine+optimizing+a+laboratory+model+to+optimize+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Anaesthesist%22%5BJournal%5D)">Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research.</a> Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).</li>
<li>Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomic+Peculiarities+of+Pig+and+Human+Liver%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant+Off+J+Middle+East+Soc+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver.</a> Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).</li>
<li>Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+spectrometry+%28O2C+device%29+of+intraoperative+microperfusion+predicts+organ+function+after+kidney+transplantation%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study.</a> Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).</li>
<li>Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+ablation+of+porcine+liver+in+vivo%3A+effects+of+blood+flow+and+treatment+time+on+lesion+size%5BTitle%5D)+AND+%22AnnSurg%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size.</a> AnnSurg. 227, 559-565 (1998).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Knaagdier modellen voor lever chirurgie vastgesteld voor een lange tijd-16. Niettemin, grote dierlijke modellen bieden bepaalde voordelen: geen microchirurgische apparatuur nodig is als standaard operatieve uitrusting voor de mens kan worden toegepast, chirurgische technieken vergelijkbaar met klinische gebruik zijn en standaard klinische evaluatiemethoden kunnen overgedragen aan de experimenten. Standaard klinische tests van het bloed kan bijvoorbeeld worden uitgevoerd zonder de behoefte aan spec...

Argon plasma coagulatie (APC) is een veelgebruikt instrument in de abdominale chirurgie voor meer dan drie decennia1,2. Het is een standaard techniek voor het bereiken van de secundaire hemostase na grote hepatectomy door het afdichten van de lever oppervlak gesneden om te voorkomen dat latere bloeduitstortingen3. Plasma coagulatie is een gespecialiseerde vorm van radiofrequentie elektrocauterisatie, die de elektrische energie door middel van een boog geïoniseerd gas levert. Biedt monopolaire elektrothermische hemostase en heeft deze noncontact techniek het voordeel van de elektrode te houden aan de weefsel4voorkomen. De lichtbundel geïoniseerd gas automatisch is gericht op het gebied van de laagste elektrische weerstand en is wendde zich af wanneer weerstand als gevolg van uitdroging tot andere gebieden nog niet verdroogde stijgt. Dit levert een uniforme beperkte diepte van stolling5,6. Factoren die het effect van de stolling beïnvloeden zijn de activeren tijd, de instelling van het vermogen van het apparaat van de stolling en de afstand van de sonde naar het weefsel. Helium is een ander draaggas, die kan worden gebruikt voor plasma coagulatie7. De nieuwste klinische studies geconcentreerd op klinische resultaten in plaats van histologische en functionele bevindingen3,8,9, terwijl experimentele studies gericht op in vitro onderzoeken10 of experimenten op geïsoleerde geperfundeerd organen11.
Het onderliggende protocol maakt de studie van de effecten van plasma coagulatie in een grote diermodel dicht bij de klinische toepassing met behulp van menselijke standaarduitrusting op varkens: microcirculatie noninvasively wordt beoordeeld door een laser Doppler debietmeter en spectrofotometer, die een klinische standaardhulpmiddel voor deze indicatie12,13 is. Temperatuurveranderingen tijdens coagulatie worden gecontroleerd met een infrarood thermometer en een thermografische camera. De diepte van stolling wordt gemeten op histologische Haematoxyline/eosine gekleurd secties na de oogst van weefselmonsters. Voor de vergelijking met andere middelen voor secundaire hemostase, worden burst druk experimenten uitgevoerd. In tegenstelling tot de eerder beschreven technieken14, worden deze uitgevoerd op transplanteren van organen uit te sluiten van bloeddruk gerelateerde effecten. Naast de beschreven onderzoek naar de lokale effecten van plasma coagulatie, kan standaard bloedonderzoek ook worden ondernomen in de varkens model.

<table><tbody><tr><td>Xylazine 20 mg/mL</td><td>Vetoquinol GmbH</td><td>Xylapan</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine 100 mg/mL</td><td>Ceva GmbH</td><td>Ceva Ketamine Injection</td><td></td></tr><tr><td>Atropine 100 mg / 10 mL</td><td>Dr. Franz Köhler Chemie GmbH</td><td>Atropinsulfat Köhler 100mg Amp.</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Fresenius Kabi GmbH</td><td>Propofol 1% MCT Fresenius</td><td></td></tr><tr><td>Fentanyl</td><td>KG Rotexmedica GmbH</td><td>Fentanyl 0,5mg Rotexmedica</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbot GmbH</td><td>Forene 100% (V/V) 250 mL</td><td></td></tr><tr><td>Ringer's lactate solution</td><td>Baxter Deutschland GmbH</td><td></td><td>natrium 131mmol/l, kalium 5 mmol/l, calcium 2 mmol/l, chloride 111 mmol/l, lactaat 29 mmol/l</td></tr><tr><td>Chirurgisch ontsmettingsmiddel</td><td>Schülke & Mayr GmbH</td><td>Kodan Tinktur forte gekleurd 1l 104804</td><td></td></tr><tr><td>Gemotoriseerd microscoop</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Eclipse TE2000-E</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopcamera</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Digitalsight DS-Qi1Mc</td><td></td></tr><tr><td>Beeldvormingssoftware</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>NIS elements Vers. 4.40</td><td></td></tr><tr><td>Plasmacoagulator</td><td>Söring GmbH</td><td>CPC-1000</td><td></td></tr><tr><td>Argongas</td><td>Linde AG</td><td>Argon 4.8&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Heliumgas</td><td>Linde AG</td><td>Helium 4.8</td><td></td></tr><tr><td>O2C</td><td>LEA Medizintechnik GmbH</td><td>O2C Version 1212</td><td>met LF-2 of LF-3 sonde</td></tr><tr><td>Infraroodthermometer</td><td>Voltcraft</td><td>VOLTCRAFT IR 260-8S</td><td></td></tr><tr><td>Thermografische camera</td><td>InfraTec GmbH</td><td>VarioCAM HD head 820</td><td></td></tr><tr><td>Thermografische analysesoftware</td><td>InfraTec GmbH</td><td>IRBIS 3</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Hematoxyline-oplossing</td><td></td><td>Merck 1.09249</td><td></td></tr><tr><td>Eosine-oplossing</td><td>VWR International GmbH</td><td>Merck 1.09844</td><td></td></tr><tr><td>Rollerpomp Masterflex L/S easy Load</td><td>Cole-Parmer Instrument Company</td><td>model 7518-10</td><td></td></tr><tr><td>Perfusiepompen</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>Perfusor secura FT</td><td></td></tr><tr><td>Digitaal drukmeter</td><td>Greisinger electronic</td><td>GMH 3161</td><td></td></tr><tr><td>Perfusie-spuit, 50 mL</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8728810 F</td><td></td></tr><tr><td>Perfusielijn, Type IV Standaard, PVC Luer lock</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8722960</td><td></td></tr><tr><td>3-weg stopkraan, Dicofix C35C</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 16494 C</td><td></td></tr><tr><td>Zijde 2-0. 3 metrisch</td><td>Resorba</td><td>REF H5F</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 Sutupak</td><td>Ethicon</td><td>V1224H</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0,9 %</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

beoordeling van plasma coagulatie op leverweefsel in een grote diermodel in vivo

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Plasma coagulatie als een vorm van elektrocauterisatie wordt gebruikt in de lever chirurgie decennialang te verzegelen het grote lever snijvlak geconstateerd na grote hepatectomy ter voorkoming van bloeduitstortingen in een later stadium. De exacte gevolgen van plasma coagulatie op leverweefsel zijn alleen slecht onderzocht. In onze varkens model, kunnen de bloedstolling effecten dicht bij de klinische toepassing worden onderzocht. Een gecombineerde laser Doppler debietmeter en spectrofotometer documenten microcirculatie verandert tijdens coagulatie op 8 mm weefsel diepte noninvasively, kwantificeerbare voorlichting over hemostase buiten de subjectieve klinische indruk. De temperatuur op coagulatie site is beoordeeld met een infrarood thermometer voorafgaande en post stolling en met een thermografische camera tijdens coagulatie, een meting van de temperatuur van de lichtbundel is niet mogelijk vanwege de hogere drempel van de apparaten. De diepte van stolling microscopisch wordt gemeten op Haematoxyline/eosine gekleurd secties na kalibratie met een object micrometer en geeft een exacte informatie over de macht instelling-stolling diepte-relatie. De afdichtende werking wordt onderzocht op de galwegen, want het is niet mogelijk voor een plasma coagulator voor het afdichten van grotere bloedvaten. Burst druk experimenten worden uitgevoerd die op transplanteren organen uitsluiten van bloeddruk gerelateerde effecten.

Microcirculatie: Met behulp van het diagnostisch apparaat voor hemostase na plasma coagulatie kan worden aangetoond door wijzigingen van de microcirculatie. Capillaire bloed stroom (weergegeven als willekeurige eenheden (AU)) daalt van de waarde van een basislijn van 142.7 ± 76.08 AU tot 57.78 ± 49.57 AU op 25 W apparaat uitgangsvermogen, 48.5 ± 7,26 AU 50 W en 5.04 ± 1.31 AU bij 100 W (Figuur 4).
<p class="jove_content" fo:keep-together....

Hier presenteren we een protocol om te beoordelen experimenteel plasma coagulatie in leverweefsel in vivo. In een varkens model, microcirculatie wordt onderzocht door laser Doppler coagulatie diepte wordt gemeten histologisch, temperatuur op coagulatie site door infrarood thermometer en thermografische camera en koker afdichten effect is gedocumenteerd door barstdruk experimenten.

Beoordeling van Plasma coagulatie op leverweefsel in een grote diermodel In Vivo

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van klinische leverchirurgie over de energie-instelling, diepte-relatie van argon en helium plasma coagulering en het plasma coagulatieproces zelf. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het grote dierenmodel vergelijkbaar is met de klinische toepassing en dat er geen speciaal apparatuur nodig is. Infrarood thermografie kan worden gebruikt om de temperatuurverdeling en temperatuurverval te monitoren, maar ook om de ademhalingssnelheid en pies te monitoren.Bovendien kunnen ontstekingsprocessen worden gemonitord door middel van infrarood thermografie. Het demonstreren van de procedure zal worden gedaan door Pascal Paschenda, een technicus van onze groep. Schakel ten minste een uur voor het begin van de procedure de thermografische camera notebook en infrarood thermometer in.Wanneer de apparatuur klaar is, plaats een verdoofde vrouwelijke Duitse Landrace varken van 25 tot 30 kilogram in de rugligging op een standaard chirurgische tafel en gebruik een standaard chirurgische doek om het operatiegebied drie keer te desinfecteren met een standaard chirurgisch desinfectiemiddel. Gebruik vervolgens een scalpel om een brede middenlijn laparotomie te maken van het processus xiphoideus tot het schaambeen en installeer chirurgische retractoren om het leverweefsel bloot te leggen. Om baseline microcirculatiemetingen te verkrijgen, schakel de laser doppler flow meter en spectrofotometer in en gebruik een vlakke sonde om de stroom en snelheid te meten.Schakel vervolgens het plasma coagulatie apparaat in, open de juiste fles met dragergas en stel de gasstroom in op drie liter per minuut. Selecteer de geschikte uitgangsvermogen van het coagulatieapparaat en gebruik een titanium mal met een vierkante opening van een bij een vierkante centimeter om de coagulatiezone te standaardiseren. Gebruik vervolgens een sondeafstand van één centimeter om het gebied gedurende vijf seconden te coaguleren.Om de post-coagulatie microcirculatie te meten, plaats de vlakke sonde op elke coagulatieplaats om de stroom en snelheid van elke plaats te meten. Om de temperatuur op elke plaats te meten, pas de focus van de thermografische camera aan en plaats het frame over de eerste coagulatieplaats zodat het coagulatiegebied en het omliggende weefsel dat door de warmteoverdracht wordt beïnvloed, zich in het midden van het gezichtsveld bevinden. Neem het coagulatieproces op met de plasmacoagulator op het leveroppervlak met een thermografische camera gedurende een periode van twee minuten.Analyseer vervolgens de beeldsequenties met de juiste thermografieanalyssoftware. Om de burstdruk te meten, schakel eerst de automatische pompen en drukmeter in. Verdeel vervolgens alle ligamenteuze verbindingen naar de lever en verdeel de leverpedikel boven de superieure duodenale flexuur, waarbij lange delen van de poortader en de gewone galweg intact worden gelaten.Vervolgens verdeel de cava-ader boven en onder de lever om het orgaan te kunnen verwijderen. Gebruik scherpe schaar om de helft van de linker mediale leverkwab te reseceren en coaguleer de snijoppervlakte met plasma. Isoleer de poortader, gewone leverarterie en galweg in de leverpedikel.Gebruik een overhold forceps om de poortader te klemmen. Gebruik vervolgens een monofildraad 4.0 om het vat te binden. Klem de gewone leverarterie met een tweede paar overhold forceps en bind de slagader met een andere monofildraad 4.0.Plaats een Franse katheter 16 in de gewone galweg en bind de buis met 2.0 zijden draad. Verbind de katheter met de automatische pompen. Installeer een drieweg stopkraan met een drukmeter en vul een profusion spuit met zoutoplossing.Start de automatische pompen met een afgiftesnelheid van 99 milliliter per uur. Bewaak vervolgens het snijoppervlak van de lever en de drukmeter op lekkage en noteer de burstdruk. In dit representatieve experiment nam de capillaire bloedstroom met ongeveer 60% af van de baseline bij 25 watt apparaatsuitgangsvermogen, 66% bij 50 watt en bijna 100% bij 100 watt.Er werd geen temperatuurverandering waargenomen tijdens of na plasma coagulering. Plasma coagulering creëert een oppervlakkige zone van necrose die gemakkelijk kan worden onderscheiden van het normale leverparenchym. Na helium plasma coagulering neemt de coagulatiediepte significant toe in directe correlatie met het toegepaste plasma apparaat uitgangsvermogen.Merk op dat burstdrukmetingen uitgevoerd op het snijoppervlak van de explanteerde linker mediale leverkwab geen verschil vertonen na helium of argon plasma coagulering. Met behulp van deze technieken is de laatste die het lokale coagulatoire effect kwantificeert en het effect van galwegverzegelding door plasma coagulering schat. Deze technieken kunnen ook worden gebruikt om verschillende middelen van bilio- en hemostase te vergelijken in een chirurgische omgeving vergelijkbaar met die bij menselijke patiënten.Bovendien kunnen de hemo- en biliostatische effecten van plasma coagulering worden toegepast na grote hepatectomieën in hetzelfde model. Nadat je deze video hebt bekeken, zou je een goed begrip moeten hebben van hoe je de belangrijkste effecten van argon en helium plasma coagulering kunt beoordelen in een groot dierenmodel.

assessment-plasma-coagulation-on-liver-tissue-large-animal-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video describes a procedure for mouse liver perfusion through the portal vein using collagenase solution prior to isolating liver cells.

In Vivo Murine Liver Perfusion: A Method to Infuse the Rodent Liver with Solution via the Portal Vein

Het is een uitdaging om stabiele, intravitale, hoogwaardige beelden van immuuncellen in de lever te maken. Hier bieden we een zeer gevoelige en betrouwbare methode om migratie en cel-cel-interacties van immuuncellen in de muizenlever gedurende langere perioden (ongeveer 6 uur) te bestuderen door middel van intravitale multifoton laser scanning microscopie in combinatie met intensieve zorg monitoring.

Long Term intravitale Multiphoton Microscopie Beeldvorming van immuuncellen in gezonde en zieke lever behulp CXCR6.Gfp Reporter Muizen

Ongecontroleerde bloeding, een belangrijke oorzaak van sterfte onder traumapatiënten, kan gemodelleerd worden met behulp van een standaard leverlaceratie in een muizen model. Dit model resulteert in consistent bloedverlies, overleving, en maakt het mogelijk om hemostatische stoffen te testen. Dit artikel geeft de stap voor stap het uitvoeren van dit waardevolle model.

Ongecontroleerde hemorragische shock, gemodificeerd via leverlakeratie in muizen met realtime hemodynamische monitoring

Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor invasieve meting van hemodynamische parameters, met inbegrip van portal druk, splanchnic doorbloeding en systemische hemodynamica teneinde het karakteriseren van de portal hypertensieve syndroom bij ratten.

Invasieve hemodynamische karakterisering van de Portal-hypertensieve syndroom bij Cirrhotic ratten

Er is een belangrijke donor van lever tekort, en criteria voor lever donoren hebben uitgebreid. Normothermic ex vivo lever perfusie (NEVLP) is ontwikkeld om te evalueren en wijzigen van orgaanfunctie. Deze studie toont een model van de rat van NEVLP en test het vermogen van gepegyleerde-katalase, te verzachten lever behoud letsel.

Een kleine diermodel van Ex Vivo Normothermic lever perfusie

We stellen een nieuwe chirurgische techniek voor een in vivo één lever kwab perfusie model in rat als een voorwaarde voor de verdere studie van in vivo gedeeltelijke lever techniek in de toekomst.

Een nieuwe chirurgische techniek als een fundament voor In Vivo gedeeltelijke lever Engineering in Rat

Dit protocol biedt een eenvoudige en betrouwbare methode voor de productie van levensvatbare precisiegesneden leverschijfjes van muizen. De ex vivo weefselmonsters kunnen meerdere dagen onder laboratoriumweefselkweekomstandigheden worden bewaard, wat een flexibel model biedt om leverpathobiologie te onderzoeken.

Murine Precision-Cut Lever Plakjes als een Ex Vivo Model van leverbiologie

Het refined tail vein transection (TVT) bloedingsmodel bij verdoofde muizen is een gevoelige in vivo methode voor de beoordeling van hemofiele bloedingen. Dit geoptimaliseerde TVT-bloedingsmodel gebruikt bloedverlies en bloedingstijd als eindpunten, verfijnt andere modellen en vermijdt de dood als eindpunt.

Staartaderdoorsnede bloeden model bij volledig verdoofde hemofilie A muizen

Een gedetailleerde methodologie voor het opstellen van een minimaal invasief rattenmodel van longembolie met behulp van autologe bloedstolsels wordt beschreven. Er worden ook aanvullende methoden geboden voor het kwantificeren van het infarctgebied en het visualiseren van de pulmonale arteriële boom.

Opstelling van een minimaal invasief rattenmodel van longembolie met behulp van autologe bloedstolsels

De meeste studies met het Langendorff-apparaat gebruiken kleine diermodellen vanwege de verhoogde complexiteit van systemen voor grotere zoogdieren. We beschrijven een Langendorff-systeem voor grote diermodellen dat gebruik mogelijk maakt voor een reeks soorten, inclusief mensen, en relatief eenvoudige gegevensverzameling.

Een GeÃ ¯ soleerde Werken Hart voor grote Animal Models

Leer plasma-coagulatie beoordelen in leverweefsel in vivo met een varkensmodel. Deze methode omvat laser Doppler, histologische metingen en infraroodthermografie voor chirurgisch onderzoek.

Beoordeling van Plasma coagulatie op leverweefsel in een grote diermodel In Vivo

Meer video's verkennen