Name: Impact van Intracardiac neuronen op cardiale electrofysiologie en Arrhythmogenesis in een Ex Vivo Langendorff systeem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Leer hoe je het intracardiale autonome zenuwstelsel analyseert en moduleert met een ex vivo Langendorff-opstelling. Deze methode onderzoekt elektrofysiologie, aritmogenese en cAMP-dynamica in gedecentraliseerde harten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs bedank Hartwig Wieboldt voor zijn uitstekende technische bijstand, en de UKE microscopie Imaging faciliteit (Umif) van de Universiteit medisch centrum Hamburg-Eppendorf voor het verstrekken van microscopen en ondersteuning. Dit onderzoek werd gefinancierd door Förderverein des Universitären Herzzentrums Hamburg e.V. en door de DZHK (Duitse centrum voor cardiovasculair onderzoek) [FKZ 81Z4710141].

Alle procedures waarbij dieren werden goedgekeurd door de lokale autoriteiten van de staat van Hamburg, de commissies van het gebruik en de verzorging van de dieren van de Universiteit van Hamburg.
1. bereiding van het apparaat Langendorff
Opmerking: Een commercieel beschikbare Langendorff perfusie systeem wordt gebruikt.
<ol><li>Bereid een gemodificeerde Krebs-Henseleit-oplossing (119 mM natriumchloride, 25 mM van natriumbicarbonaat, 4.6 mM van kaliumchloride, 1.2 mM van kalium fosfaat monobasisch, 1.1 mM van magnesium-sulfaat, 2.5 mM van calciumchloride, 8.3 van glucose, en 2 mM van het natrium pyruvaat). Een mengsel van 95% oxygen/5% kooldioxide aan de perfusie-oplossing om te voorkomen dat calcium neerslag toevoegen. Het filteren van de buffer met een poriegrootte van 0,22 µm.</li>
	<li>Een farmacologische agent toevoegen aan de buffer te onderzoeken van het effect op cardiale electrofysiologie en arrhythmogenesis zo nodig.</li>
	<li>Start van het waterbad en plaatsen van de oplossing van de perfusie met inbegrip van een mengsel van 95% oxygen/5% kooldioxide in het. De temperatuur van het waterbad, zodanig aanpassen dat de temperatuur van de oplossing perfusie direct vóór de canule ~ 37 ˚C is.</li>
	<li>Start de roller pomp en vul het apparaat met de perfusie oplossing zodra de juiste temperatuur is bereikt.</li>
	<li>De pomp-snelheid aanpassen voordat u het hart, zodat er geen luchtbellen zitten in de canule bij het mounten op het apparaat.</li>
</ol>2. hard - en Software-voorbereiding
<ol><li>Sluit een digitale data-acquisitiesysteem en de bijbehorende software aan het Langendorff toestel voor een ononderbroken registratie van de perfusie druk, debiet en hartslag.<ol>
<li>Stel de gerichte perfusie druk in de algemene instellingen tot 80 mmHg.</li>
		<li>Start de opname.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gebruik een katheter elektrofysiologie (Tabel of Materials) met platina-elektroden, een elektrode oppervlakte van 0,5 x 0,5 mm en een elektrode afstand van 0,5 mm voor de gegevensregistratie en stimulatie met een aangewezen digitale stimulans generator.<ol>
<li>Plaats de katheter dicht bij het gebied waar het hart na de gehechtheid aan het apparaat zal worden geplaatst.</li>
		<li>Voorbereiden van de stimulatie door 2 elektroden in de katheter te selecteren en gebruik de lengte van een cyclus van 100 ms.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. bereiding van het hart
<ol><li>Toevoegen van de kou (~ 2-4 ˚C) perfusie buffer (10-20 mL en 40-50 mL, zodat de hele schotel wordt gedekt) de 2 petrischalen (diameter van 6 cm en 10 cm) en de schotel met de canule en plaats hen op ijs direct volgende en onder de Microscoop. Een dubbele knoop rond de canule voor te bereiden.</li>
	<li>Snel accijnzen het hart na cervicale dislocatie door het openen van de thorax met behulp van Mayo schaar en pincet smalle patroon. Dan greep de aorta en de vena cava boven het diafragma met behulp van de verlostang Londen en accijnzen van de hart-longen-blok door het snijden van alle vaartuigen en bindweefsel dicht bij de wervelkolom met de schaar scheelzien.</li>
	<li>Breng het blok van de hart-Long in de eerste schotel (6 cm diameter) gevuld met de ijskoude buffer en verwijder voorzichtig de longen zonder beschadiging van het hart met behulp van scheelzien schaar en pincet van Londen. Plaats dan het hart onder de Microscoop en verwijder voorzichtig de zwezerik, de slokdarm en luchtpijp met behulp van voorjaar schaar en pincet Dumont SS.</li>
	<li>Gebruik de lente schaar om een gat van 1,5-2 mm in het bovenste gedeelte van het juiste atrium voor het inbrengen van de katheter. Een gat in de longslagader. Vervolgens snijd de aorta direct onder de supraaortic takken en verwijderen van het weefsel van de aorta, zodat de knoop kan gemakkelijk worden aangesloten.</li>
	<li>Houd de atriale vet pads, met inbegrip van de grote atrially gelegen ganglionated plexi, rond de linkerboezem intact of ze volledig verwijderen door zorgvuldige dissectie.</li>
	<li>Overbrengen van het hart naar de schotel met de canule en plaats deze onder de Microscoop. Trek de aorta over de canule met de verlostang Dumont SS en binden de bereid knoop strak rond de aorta. Zorg ervoor dat de canule niet te diep in de aorta is geplaatst, zodat de aortaklep en de coronaire bloedvaten zijn vrij gelaten.</li>
	<li>Snel de canule aan het Langendorff apparaat koppelen. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen links in de canule.</li>
	<li>Schakel de perfusie-druk tot 80 mmHg, waardoor een constante druk perfusie.</li>
	<li>De katheter zorgvuldig in de juiste atrium en rechterventrikel invoegen zonder aan te raken of beschadiging van het hart en bevestig de katheter aan de canule met tape.</li>
	<li>Begin de stimulatie met de lengte van de bereid cyclus van 100 ms voor een periode van de evenwichtsinstelling eerste 20 min.</li>
	<li>Sluit de kamer zodat een stabiele temperatuur.</li>
</ol>4. elektrofysiologische Parameters en Arrhythmogenesis
<ol><li>Een geprogrammeerde stimulatie via de elektroden van de distale of proximale van de katheter op tweemaal de atriale of ventriculaire pacing drempel om te evalueren van de elektrofysiologische parameters zoals beschreven in de volgende stappen zijn van toepassing.<ol>
<li>Bepalen van de sinusknoop hersteltijd als de lengte van het maximale rendement cyclus na 10 s van forfaitaire ijsberen op een lengte van de cyclus S1S1 van 120 ms, 100 ms en 80 ms.</li>
		<li>Het Wenckebach punt bepalen als de langste lengte van de S1S1 cyclus (8 prikkels; S1S1: 100 ms; 2 ms stapsgewijze vermindering) met een verlies van 11 knooppunten AV-geleiding. Bepalen van de atrioventriculaire knooppunten vuurvaste perioden als de langste S1S2 (12 prikkels; S1S1: 120 ms, 110 ms en 100ms; een korte extrastimulus in combinatie met een vermindering van de S1S2 van 2 ms stapsgewijze) met een verlies van knooppunten AV-geleiding.</li>
		<li>Bepalen van de atriale en ventriculaire vuurvaste perioden als de langste S1S2 (12 prikkels; S1S1: 120 ms, 110 ms en 100ms; een korte extrastimulus in combinatie met een vermindering van de S1S2 van 2 ms stapsgewijze) met een afwezig atriale of ventriculaire antwoord10,11.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Uitvoeren van een geprogrammeerde extrastimulation (S1S1: 120 ms, 100 ms en 80 ms, gevolgd door maximaal 3 extra beats; 60-20 ms met een stapsgewijze vermindering van 2 ms) of burst pacing protocollen (5 s bij S1S1: 50-10 ms met een stapsgewijze verlaging van 10 ms) in overeenstemming met de Verdragen Lambeth eva luate de ventriculaire arrhythmogenesis10,11,12.</li>
</ol>5. epicardial geleiding metingen
Opmerking: Opnemen unipolaire epicardial electrograms door middel van een 128-kanaals, computerondersteunde opnamesysteem met een sampling rate van 25 kHz voor hoge resolutie toewijzing. Gebruik een 32 multi elektrodenserie (MEA; tussen elektrode afstand: 300 µm; 1,8 x 1,8 mm). Nota van dat de gegevens bandpass gefilterd (50 Hz werden) en gedigitaliseerd met 12 bits en een signaalbereik van 20 mV.
<ol><li>Plaats de MEA op het aangewezen gebied van het hart en voeg de aarding naar een ander deel van het hart13,14,15.</li>
	<li>Plaats een epicardial stimulatie katheter dichtbij de MEA en start een constante stimulatie.</li>
	<li>Start de opname na de bevestiging van goed contact van de elektroden door het controleren van de signaalkwaliteit en amplitude.</li>
	<li>Gebruik een off line analyse voor de bepaling van de Golf propagatie snelheid en dispersie in de richting van de geleiding.</li>
</ol>6. Förster Resonance Energy Transfer FRET-gebaseerd cyclisch adenosinemonofosfaat (cAMP) Imaging
Opmerking: Voor FRET gebaseerde metingen, oogst harten van CAG-Epac1-kampen transgene muizen16.
<ol><li>Gebruik een zelfgebouwde imaging systeem rond een stereomicroscoop15,17.</li>
	<li>Plaats de stereomicroscoop voor het hart en het aanpassen aan de gezichtsscherpte.</li>
	<li>Prikkelen van de cAMP sensor met een lichtbron [bijvoorbeeld, gebruik een single-golflengte licht emitterende diode (440 nm)]. Het splitsen van de uitstoot licht in donor en acceptor kanalen met behulp van een straal-splitter (voor een paar cyaan fluorescent proteïne/geel fluorescerende eiwit, gebruik een 565dcxr dichroïde spiegel en D480/30 en D535/40 emissie filters).</li>
	<li>Het waarborgen van een stabiele temperatuur door een plastic wrap rond de kamer.</li>
	<li>Het nemen van beelden met behulp van een camera complementary metal-oxide-semiconductor van de wetenschappelijke (sCMOS). Het coördineren van de lichtbron en de camera vastleggen van het beeld met een open source beeldbewerkingssoftware zoals Micro-Manager.</li>
	<li>Om te beginnen de Beeldacquisitie, duw de Multi-D Acq. knop en het opzetten van een time-lapse, die een afbeelding verwerft elke 10 s, met de juiste belichtingstijd, die afhankelijk van de sterkte het fluorescent signaal (ongeveer 100 ms).</li>
	<li>De eerder beschreven en beschikbaar online FRET en FRET online 2 -plugins-17 voor de afbeelding splitsen in twee kanalen, selecteer de regio's van belang en de verhouding tracering gebruiken</li>
	<li>Perfuse tijdens de verwerving, het hart met de gewijzigde Krebs-Henseleit oplossing die verschillende stoffen bevatten, afhankelijk van de aard van het experiment.</li>
	<li>Aan het einde van het experiment, schakel de overname door het indrukken van de knop stoppen en opslaan van de stack van beelden.</li>
	<li>Het analyseren van de gegevens van de FRET off line met behulp van een speciale analysesoftware die beelden kan worden gesplitst in twee identieke secties voor de donor en acceptor kanalen en FRET analyse kunt uitvoeren in meerdere regio's-of-interest. Opmerking: Een speciale plug-in (off line FRET) nodig is, die wordt verstrekt in Sprenger et al. 17.<ol>
<li>Start de software. De analyse door te gaan naar het Plugins menu openen en klik vervolgens op MicroManager, en vervolgens op Open bestand van de Micro-Manager.</li>
		<li>De FRET off line plugin om de time-lapse opgesplitst in twee identieke images voor het GVB en YFP kanalen kunnen voeren.</li>
		<li>Gebruik het hulpprogramma Freehand selecties ter gelegenheid van de regio van belang in de YFP afbeelding. Druk op de knop toevoegen aan de selectie toevoegen aan de Maatregel van de Multi -venster.</li>
		<li>Kies de regio van belang in de Maatregel van de Multi -venster en druk op Multi te verkrijgen van een tabel met gemiddelde grijs waarden voor elk frame en de regio. Kopieer en plak alle gegevens in een Excel-werkblad.</li>
		<li>Klik op het GVB afbeeldingsstapel. De dezelfde acties zoals in stap 6.10.4 uitvoeren voor de GVB-stack en de gemiddelde grijze waarden in hetzelfde Excel blad plakken.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Juist de onbewerkte gegevens off line voor de factor bloeden-door middel van de donor in de acceptor kanaal17.<ol>
<li>Gebruik de volgende formule, waar B is de afloop-through-factor: Ratio = (YFP - B-x CFP) / GVB</li>
		<li>Bepalen van de afloop-via factor B door imaging een hart alleen uiting van GVB en meten van het percentage van de fluorescentie van de donor in het YFP-kanaal (B = YFP / GVB).</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. Neuromorphology
Opmerking: Analyseren het intracardiac autonome zenuwstelsel met behulp van geheel-mount immunostainings intact lymfkliertest harten. Merk op dat de meerderheid van de intracardiac ganglia zijn gelokaliseerd in de epicardial adipeus weefsel dicht bij de pulmonary aderen.
<ol><li>Gebruik van verschillende technieken voor het afbeelden van neurofilament (algemene neuronale structuren; kip anti-NF-H, 1:3, 000), tyrosine hydroxylase (TH, sympathieke neuronale structuren; konijn α TH, 1:1, 000), en choline acetyltransferase (ChAT, parasympathische neuronale structuren; geit α ChAT, 1:50).</li>
	<li>Na de perfusie in het Langendorff apparaat, de harten van de muis oplossen in 10 mL van formaline gedurende 24 uur en bewaar ze in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) bij 4 ˚C.</li>
	<li>De harten in de deuk bleekmiddel bleekmiddel (4:1:1 methanol: waterstof peroxide oplossing 30% (m/m) in H2O: dimethylsulfoxide (DMSO)) voor 1 week bij 4 ˚C en hydrateren hen vervolgens naar PBS in een reeks van aflopende methanol in PBS (100%, 75%, 50%, 25%; elke 1 h) 18.</li>
	<li>Voer de volgende incubations in een 24-well-plate-formaat met een zachte agitatie bij 4 ˚C:<ol>
<li>Permeabilize van het hart in 1% Triton-X-100/PBS (PBS-T) voor 3 x 1 h bij kamertemperatuur voordat blokkeren ze 's nachts in een buffer met blokkerend [5% bovien serumalbumine (BSA) / PBS-T + 0,2% natriumazide].</li>
		<li>Verdun de antilichamen als volgt: geit α konijn α TH (1:1, 000), ChAT (1:50), kip α neurofilament (1:3, 000); secundaire antilichamen voor fluorescerende etikettering (1:500; of volgens de instructies van de fabrikant); biotinyleerd secundaire antilichamen voor de etikettering van chromogenic (1:200; of volgens de instructies van de fabrikant).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incubeer de specimens in primaire antilichamen verdund in een buffer met blokkerend voor 1 week op 4 ˚C.</li>
	<li>Het wassen van de harten voor 3 x 15 min in PBS-T voordat de incubatie van secundair antilichaam in een buffer met blokkerend voor 4 dagen.</li>
	<li>De harten voor 3 x 15 min in PBS-T wassen en ze opslaan in een medium van de montage voor fluorescerende vlekken gedurende 3 uur bij kamertemperatuur of gebruiken van een avidin-Biotine complexe detectie kit volgens de instructies van de fabrikant.</li>
	<li>Incubeer vooraf de harten gedurende 1 uur in een commerciële buffer voor 3, 3'-diaminobenzidine (DAB), alvorens hen te ontwikkelen onder een visueel besturingselement in een DAB-bevattende buffer volgens de instructies van de fabrikant.</li>
	<li>Bewaar de specimens in dubbel gedestilleerd water.</li>
	<li>Paraffine secties, uitdrogen en de harten inbedden in paraffine.<ol>
<li>Knip 4-µm dik secties en deparaffinize hen volgens het laboratory's routine procedures. Of en hoe herwinning van het antigeen moet worden uitgevoerd dient te worden geschapen voor elke afzonderlijke installatie, aangezien het afhangt van de combinatie van antilichaam.</li>
		<li>De secties gedurende 10 minuten in een 0,2% Triton-X-100/Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS), gevolgd door 3 x 5 min wast in eetlepels permeabilize</li>
		<li>Blokkeren van hen met 3% BSA/TBS gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Incubeer ze 's nachts bij 4 ˚C [primaire antilichamen: geit α ChAT (1:50), konijn α TH (1:500), kip α neurofilament (1:1, 000)] of 2 h bij kamertemperatuur (secundaire antilichamen fluorescentie-geëtiketteerd, 1:500) in 1% BSA/TBS met 3 x 5 min TBS daartussenin wast.</li>
		<li>1 µg/mL bisbenzimide H33342 trihydrochloride toevoegen aan de oplossing van secundair antilichaam of gebruik een verschillende nucleaire kleuringstechniek.</li>
		<li>Monteer de dia's in een medium van de montage voor fluorescerende vlekken.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+heart+perfusion%3A+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li>
<li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li>
<li>Hearse, D. J., Sutherland, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+for+the+study+of+cardiovascular+function+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Experimental models for the study of cardiovascular function and disease.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 597-603 (2000).</li>
<li>Valentin, J. P., Hoffmann, P., De Clerck, F., Hammond, T. G., Hondeghem, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+the+predictive+value+of+the+Langendorff+heart+model+%28Screenit+system%29+in+assessing+the+proarrhythmic+potential+of+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Review of the predictive value of the Langendorff heart model (Screenit system) in assessing the proarrhythmic potential of drugs.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49 (3), 171-181 (2004).</li>
<li>Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff-still+viable+in+the+new+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolated heart perfusion according to Langendorff-still viable in the new millennium.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li>
<li>Langendorff, O. Investigation of the living mammalian heart. Pflügers Archiv. 61, 291-332 (1895).</li>
<li>Matsumoto-Ida, M., Akao, M., Takeda, T., Kato, M., Kita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+2-photon+imaging+of+mitochondrial+function+in+perfused+rat+hearts+subjected+to+ischemia%2Freperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Real-time 2-photon imaging of mitochondrial function in perfused rat hearts subjected to ischemia/reperfusion.</a> Circulation. 114 (14), 1497-1503 (2006).</li>
<li>Rassaf, T., Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., Shiva, S., Heusch, G., Kelm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+nitrite+contributes+to+cardioprotection+by+remote+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating nitrite contributes to cardioprotection by remote ischemic preconditioning.</a> Circulation Research. 114 (10), 1601-1610 (2014).</li>
<li>Schechter, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+isolated+working+heart+system+for+large+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An isolated working heart system for large animal models.</a> Journal of Visualized Experiments. 88 (88), 51671(2014).</li>
<li>Stockigt, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+beta-adrenoceptor+knockout+slows+conduction+and+reduces+inducible+arrhythmias+in+the+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Total beta-adrenoceptor knockout slows conduction and reduces inducible arrhythmias in the mouse heart.</a> PLoS One. 7 (11), e49203(2012).</li>
<li>Berul, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+phenotyping+in+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological phenotyping in genetically engineered mice.</a> Physiological Genomics. 13 (3), 207-216 (2003).</li>
<li>Curtis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lambeth+Conventions+%28II%29%3A+guidelines+for+the+study+of+animal+and+human+ventricular+and+supraventricular+arrhythmias%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The Lambeth Conventions (II): guidelines for the study of animal and human ventricular and supraventricular arrhythmias.</a> Pharmacology & Therapeutics. 139 (2), 213-248 (2013).</li>
<li>Schrickel, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+heterogeneity+of+myocardial+conduction+and+severe+cardiac+electrical+instability+in+annexin+A7-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Enhanced heterogeneity of myocardial conduction and severe cardiac electrical instability in annexin A7-deficient mice.</a> Cardiovascular Research. 76 (2), 257-268 (2007).</li>
<li>Rudolph, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloperoxidase+acts+as+a+profibrotic+mediator+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Myeloperoxidase acts as a profibrotic mediator of atrial fibrillation.</a> Nature Medicine. 16 (4), 470-474 (2010).</li>
<li>Jungen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+cardiac+cholinergic+neurons+enhances+susceptibility+to+ventricular+arrhythmias%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Disruption of cardiac cholinergic neurons enhances susceptibility to ventricular arrhythmias.</a> Nature Communications. 8, 14155(2017).</li>
<li>Calebiro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+cAMP-signals+triggered+by+internalized+G-protein-coupled+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Persistent cAMP-signals triggered by internalized G-protein-coupled receptors.</a> PLoS Biology. 7 (8), e1000172(2009).</li>
<li>Sprenger, J. U., Perera, R. K., Götz, K. R., Nikolaev, V. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FRET+microscopy+for+real-time+monitoring+of+signaling+events+in+live+cells+using+unimolecular+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">FRET microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e4081(2012).</li>
<li>Alanentalo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nature Methods. 4 (1), 31-33 (2007).</li>
<li>Whittington, N. C., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+red+blood+cell+autofluorescence+for+immunocytochemistry+on+fixed+embryonic+mouse+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Suppression of red blood cell autofluorescence for immunocytochemistry on fixed embryonic mouse tissue.</a> Current Protocols in Neuroscience. 81, 2.28.1-2.28.12 (2017).</li>
<li>Fukuda, K., Kanazawa, H., Aizawa, Y., Ardell, J. L., Shivkumar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+innervation+and+sudden+cardiac+death%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cardiac innervation and sudden cardiac death.</a> Circulation Research. 116 (12), 2005-2019 (2015).</li>
<li>Wengrowski, A. M., Wang, X., Tapa, S., Posnack, N. G., Mendelowitz, D., Kay, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+release+of+norepinephrine+from+cardiac+sympathetic+neurons+alters+mechanical+and+electrical+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Optogenetic release of norepinephrine from cardiac sympathetic neurons alters mechanical and electrical function.</a> Cardiovascular Research. 105 (2), 143-150 (2015).</li>
<li>Rivinius, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+cardiac+chronotropic+function+in+patients+after+heart+transplantation%3A+effects+of+ivabradine+and+metoprolol+succinate+on+resting+heart+rate+in+the+denervated+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Control of cardiac chronotropic function in patients after heart transplantation: effects of ivabradine and metoprolol succinate on resting heart rate in the denervated heart.</a> Clinical Research in Cardiology. , (2017).</li>
<li>Ajijola, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Augmentation+of+cardiac+sympathetic+tone+by+percutaneous+low-level+stellate+ganglion+stimulation+in+humans%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Augmentation of cardiac sympathetic tone by percutaneous low-level stellate ganglion stimulation in humans: a feasibility study.</a> Physiological Reports. 3 (3), e12328(2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In dit manuscript, wordt de bekende Langendorff ex vivo hart perfusie systeem gepresenteerd als een hulpmiddel om te bestuderen van de impact van intracardiac neuronen op cardiale electrofysiologie en arrhythmogenesis met behulp van verschillende mapping en stimulatie technieken met inbegrip van endocardial en epicardial benaderingen.
Verschillende onderdelen van het protocol zijn cruciaal voor de installatie. Ten eerste is het belangrijk om een voorbereiding techniek waarin de atrial...

Het Langendorff ex vivo hart perfusie systeem is nog steeds een relevant instrument voor het uitvoeren van een breed spectrum van morfologische, fysiologische, biochemische en farmacologische studies in Centraal denervated harten1,2 ,3,4,5 sinds de uitvinding in de late 19th eeuw6. Dit systeem wordt tot op heden nog steeds veel gebruikt voor verschillende onderwerpen (bijv., ischemie-reperfusie) of om te studeren cardiale farmacologische effecten7,8, en is een basisinstrument in cardiovasculair onderzoek. De levensduur van deze methode resultaten van verschillende voordelen (bv., metingen zijn uitgevoerd zonder de invloed van het centrale zenuwstelsel of andere organen, systemische circulatie of circulerende hormonen). Indien nodig, kunnen geneesmiddelen worden toegevoegd op een gecontroleerde manier aan de perfusie-buffer of rechtstreeks toegepast op specifieke structuren. Experimenten zijn reproduceerbaar, en een relatief hoog aantal experimenten kan worden uitgevoerd in een korte periode van tijd. Het (gedeeltelijk) open karakter van de instelling kan temperatuurregeling moeilijk en moet rekening worden gehouden. Hoewel de Langendorff systeem ook in de grotere soorten9 gebruikt wordt, kleinere dieren worden voornamelijk gebruikt als de experimentele opzet minder complex en een grotere biologische variabiliteit is (bv., transgene muis modellen) kan worden gebruikt.
In de experimentele opzet van dit protocol is de invloed van het intracardiac autonome zenuwstelsel op elektrofysiologische basisparameters, ventriculaire arrhythmogenesis epicardial geleiding en cyclisch adenosinemonofosfaat (cAMP) dynamiek geëvalueerd. Een groot aantal intracardiac ganglia, die zijn voornamelijk gevestigd in de atriale vet pads en zijn nu goed bekend bij de controle van de cardiale electrofysiologie onafhankelijk van centrale neuraal controle, zijn dat ofwel links intact of handmatig verwijderd met zorgvuldige mechanische dissectie. Een farmacologische modulatie van het autonome zenuwstelsel wordt wereldwijd door farmaceutische producten toe te voegen aan de perfusie buffer of lokaal door gerichte modulatie van de atriale ganglia uitgevoerd. Na de experimenten zijn de harten geschikt voor eenbeoordeling van de immunohistological als alle cellen van het bloed zijn verwijderd als gevolg van de continue perfusie, die de kwaliteit van de kleuring verhogen kan.
Het algemene doel van de beschreven technieken wil bieden nieuwe perspectieven voor gedetailleerde studies over het effect van het autonome zenuwstelsel op cardiale electrofysiologie en arrhythmogenesis in het hart van de muis. Een reden om deze techniek te gebruiken is dat het mogelijk is te bestuderen en te veranderen van het autonome zenuwstelsel zonder de invloed van het centrale zenuwstelsel. Een groot voordeel is de gemakkelijke tewerkstelling van farmacologische experimenten, in welke potentiële pro- of antiarrhythmic eigenschappen van oude en nieuwe agenten kunnen worden getest. Daarnaast zijn transgene en knockoutstadia Muismodellen van verschillende hartziekten beschikbaar voor het onderzoeken van de mechanismen die ten grondslag liggen aan hartritmestoornissen, hartfalen of metabole ziekten. Deze aanpak heeft ons begrip van hoe het autonome zenuwstelsel op atriale niveau invloed op ventriculaire cardiale electrofysiologie als het doen ontstaan van hartritmestoornissen hebben kan verbeterd.

<table><tbody><tr><td>Natriumchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Natriumwaterstofcarbonaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>401676</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Kaliumchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5405</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Kaliumfosfaat monobasicum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Magnesiumsulfaat heptahydraat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1880</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Calciumchloride dihydraat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7902</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Natriumpyruvaat bioXtra</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8574</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Carbogen (95% O2 / 5% CO2)</td><td>SOL-Group, TMG Technische und Medizinische Gas GmbH, Krefeld, Gersthofen, Duitsland</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td><td></td></tr><tr><td>Steriele filter steritop-GP 0.22</td><td>EMD Millipore</td><td>SCGPT05RE</td><td>Gewijzigde Krebs-Henleit-oplossing</td></tr><tr><td>Atropinesulfaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0257</td><td>Neuromodulatie</td></tr><tr><td>Hexamethoniumchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H2138</td><td>Neuromodulatie</td></tr><tr><td>Nicotine vrije base 98-100%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N3876</td><td>Neuromodulatie</td></tr><tr><td>Formaline oplossing neutraal gebufferd 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethaan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252859</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Waterstofperoxide oplossing 30% (w/w) in H2O</td><td>Merck, KGA, Darmstadt, Duitsland</td><td>H1009</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxide</td><td>Merck, KGA, Darmstadt, Duitsland</td><td>D8418</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Fosfaat-gebufferde zoutoplossing tabletten</td><td>Gibco / Invitrogen</td><td>18912-014</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Triton-x-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Albumine bovien fraction V</td><td>Biomol, Hamburg, Duitsland</td><td>11924.03</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Kip anti neurofilament</td><td>EMD Millipore</td><td>AB5539</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Konijn anti tyrosine hydroxylase</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Geit anti choline acetyltransferase</td><td>EMD Millipore</td><td>AP144P</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Ezel &alpha; konijn IgG Alexa 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A21206</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Ezel &alpha; geit IgG Alexa 568</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11057</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Ezel &alpha; kip IgY Alexa 647</td><td>Merck, KGA, Darmstadt, Duitsland</td><td>AP194SA6</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Biotine-geconjugeerd ezel &alpha; konijn igG</td><td>R&amp;D Systems</td><td>AP182B</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Biotine-geconjugeerd ezel &alpha; geit igG</td><td>R&amp;D Systems</td><td>AP192P</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Biotine-geconjugeerd geit &alpha; kip igY</td><td>R&amp;D Systems</td><td>BAD010</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>Vectashield montagemedium</td><td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td><td>H-1000</td><td>Immunohistochemie</td></tr><tr><td>Vectastain ABC kit</td><td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td><td>PK-4000</td><td>Immunohistochemie</td></tr><tr><td>Steady DAB/Plus</td><td>Abcam plc, Cambridge, UK</td><td>ab103723</td><td>Whole mount staining</td></tr><tr><td>HistoClear</td><td>DiaTec, Bamberg, Duitsland</td><td>HS2002</td><td>Immunohistochemie</td></tr><tr><td>BisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td><td>B2261</td><td>Immunohistochemie</td></tr><tr><td>Vectashield HardSet montagemedium</td><td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td><td>VEC-H-1400</td><td>Immunohistochemie</td></tr><tr><td>Perfusiesysteem</td><td>HUGO SACHS ELEKTRONIK - HARVARD APPARATUS GmbH, March-Hugstetten, Duitsland</td><td>&nbsp;73-4343</td><td>Langendorff-apparaat</td></tr><tr><td>Data-acquisitiesysteem en bijbehorende software voor katheter en fysiologische parameter</td><td>Powerlab 8/30 &amp; Labchart, ADInstruments, Dunedin, Nieuw-Zeeland</td><td>PL3508 PowerLab 8/35</td><td>Langendorff-setup</td></tr><tr><td>Octapolair katheter</td><td>CIB&rsquo;ER Muis, NuMed Inc., Hopkinton, NY, USA</td><td>custom</td><td>Langendorff-setup</td></tr><tr><td>Stimulatorgenerator</td><td>STG4002, Multi Channel Systems, Reutlingen, Duitsland</td><td>STG4002-160&micro;A</td><td>Stimulatie-setup</td></tr><tr><td>Stimulatiesoftware</td><td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Duitsland</td><td>MC_Stimulus II</td><td>Stimulatie-setup</td></tr><tr><td>Data-acquisitiesysteem en bijbehorende software voor epicardiale elektrogrammen</td><td>ME128-FAI-MPA-Systeem, Multi Channel Systems, Reutlingen, Duitsland</td><td>USB-ME128-Systeem</td><td>MEA-setup</td></tr><tr><td>Multi-elektrode array</td><td>MEA, EcoFlexMEA36, Multi Channel Systems, Reutlingen, Duitsland</td><td>EcoFlexMEA36</td><td>MEA-setup</td></tr><tr><td>Multi-elektrode array opnamesoftware</td><td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Duitsland</td><td>MC_Rack</td><td>MEA-setup</td></tr><tr><td>Veertang</td><td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Duitsland</td><td>15003-08</td><td>Hartvoorbereiding</td></tr><tr><td>Strabismus-schaar</td><td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Duitsland</td><td>14575-09</td><td>Hartvoorbereiding</td></tr><tr><td>Mayo-schaar</td><td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Duitsland</td><td>14110-15</td><td>Hartvoorbereiding</td></tr><tr><td>Dumont SS-tang</td><td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Duitsland</td><td>11203-25</td><td>Hartvoorbereiding</td></tr><tr><td>London-tang</td><td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Duitsland</td><td>11080-02</td><td>Hartvoorbereiding</td></tr><tr><td>Smal patroontang</td><td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Duitsland</td><td>11003-13</td><td>Hartvoorbereiding</td></tr><tr><td>Kunststoffolie</td><td>Parafilm M, Bemis NA,

impact van intracardiac neuronen op cardiale electrofysiologie en arrhythmogenesis in een ex vivo langendorff systeem

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Sinds de uitvinding in de late 19e eeuw, de Langendorff ex vivo hart perfusie systeem is nog steeds een relevant instrument voor de studie van een breed spectrum van fysiologische, biochemische, morfologische en farmacologische parameters in Centraal denervated harten. Hier beschrijven we een setup voor de modulatie van het intracardiac autonome zenuwstelsel en de beoordeling van de invloed daarvan op fundamentele electrofysiologie, arrhythmogenesis en cyclisch adenosinemonofosfaat (cAMP) dynamiek. Het intracardiac autonome zenuwstelsel wordt gemoduleerd door de mechanische dissectie van atriale vet pads-in welke lymfkliertest ganglia zich voornamelijk bevinden — of door het gebruik van globale evenals gerichte farmacologische interventies. Een octapolar elektrofysiologische katheter wordt binnengebracht in de juiste atrium en het ventrikel rechts en epicardial geplaatste multi elektrode arrays (MEA) voor hoge resolutie toewijzing worden gebruikt om te bepalen van de cardiale electrofysiologie en arrhythmogenesis. Förster resonance energy transfer (FRET) imaging wordt uitgevoerd voor de real-time controle van cAMP in verschillende cardiale gebieden. Neuromorphology wordt bestudeerd door middel van antilichaam gebaseerde kleuring van hele hart met behulp van neuronale markeringen om de identificatie en de modulatie van de specifieke doelstellingen van het intracardiac autonome zenuwstelsel in de uitgevoerde studies te leiden. De ex vivo Langendorff setup zorgt voor een groot aantal reproduceerbare experimenten in een korte tijd. Echter het deels open karakter van de instellingen (bv., tijdens de MEA metingen) constante temperatuurcontrole bemoeilijkt en moet tot een minimum worden beperkt. Deze beschreven methode maakt het mogelijk om te analyseren en het moduleren van het intracardiac autonome zenuwstelsel in gedecentraliseerde harten.

Figuur 1 toont een afbeelding van de setup van de Langendorff inclusief 2 multi elektrode-arrays (MEA's). Voordat het experiment, bevindt de intracardiac catheter zich dicht bij de canule te vergemakkelijken van een snelle en gemakkelijke invoeging in het ventrikel rechts atrium/rechts en te zorgen voor een korte periode totdat de evenwichtsinstelling kunt starten. Het onderste gedeelte van de kamer kan worden verhoogd (Zie de pijlen in F...

Hier presenteren we een protocol voor de modulatie van het intracardiac autonome zenuwstelsel en de beoordeling van de invloed daarvan op fundamentele electrofysiologie, arrhythmogenesis en kamp dynamiek met behulp van een ex vivo Langendorff setup.

Impact van Intracardiac neuronen op cardiale electrofysiologie en Arrhythmogenesis in een Ex Vivo Langendorff systeem

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

Het algemene doel van deze ex vivo Langendorff-opstelling is om het intracardiale autonome zenuwstelsel te analyseren en moduleren en de invloed ervan op de basis-elektrofysiologie, aritmogenese en cAMP-dynamica in gedecentraliseerde harten te beoordelen. Het grote voordeel van deze techniek is dat het onderzoekers toestaat het intracardiale zenuwstelsel in gedecentraliseerde harten te analyseren en moduleren. Hoewel deze methode inzicht kan geven in gezonde harten, hebben we aanvankelijk bewijs gekregen dat deze aanpak ook kan worden gebruikt om verschillende vormen van structurele hartaandoeningen te bestuderen.Begin met het starten van het waterbad en het plaatsen van de perfusieoplossing inclusief een mengsel van 95% zuurstof, 5% koolstofdioxide erin. Pas vervolgens de pompsnelheid aan voordat u het hart bevestigt, zodat er geen luchtbellen in de canule achterblijven wanneer u deze aan het apparaat bevestigt. Stel de gewenste perfusiedruk in op 80 millimeter kwik in de algemene instellingen en begin met opnemen.Gebruik een elektrofysiologische katheter met platina-elektroden, een elektrodeoppervlak van 0,5 bij 0,5 millimeter, met een elektrodeafstand van 0,5 millimeter voor de

impact-intracardiac-neurons-on-cardiac-electrophysiology

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Jungen, C., et al. Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System. J. Vis. Exp. (2018).The video demonstrates an ex vivo technique for stimulating the intracardiac nervous system to assess the heart’s susceptibility to arrhythmia. Using a perfusion apparatus, an isolated mouse heart is perfused with an oxygenated buffer. The intracardiac nervous system is then stimulated at a high frequency to induce arrhythmias.

Stimulation of the Intracardiac Nervous System to Assess Susceptibility to Arrhythmia

Hier beschrijven we de voorbereiding van levensvatbare ventriculaire plakjes van volwassen muizen en hun gebruik voor scherpe elektrodeactiepotentiële opnamen. Deze multicellulaire preparaten leveren een geconserveerde in vivo weefselstructuur, waardoor ze in vitro een waardevol model vormen voor elektrofysiologische en farmacologische studies.

Murine Korte As Ventriculaire Hartschijven voor Elektrofysiologische Studies

Het doel van deze studie was het vaststellen van een methode voor het onderzoeken van de cardiale dynamiek met behulp van een translationeel diermodel. De beschreven experimentele aanpak omvat Dual-emission optocardiografie in combinatie met een elektrofysiologisch onderzoek om elektrische activiteit te beoordelen in een geïsoleerd, intact varkens hart model.

Optocardiografie en elektrofysiologie studies van ex vivo Langendorff-perfused Hearts

Dit protocol beschrijft de procedure voor het doorsnijden en kweken van menselijke cardiale plakjes voor preklinische geneesmiddelentesten en beschrijft het gebruik van optische mapping voor het opnemen van transmembranespanning en intracellulaire calciumsignalen gelijktijdig van deze plakjes.

Preklinische Cardiale Elektrofysiologie Beoordeling door Dual Voltage en Calcium Optical Mapping van human organotypic cardiale plakjes

Dit protocol heeft tot doel een nieuwe methodologie te beschrijven om de intrinsieke cardiale vuursnelheid te meten met behulp van micro-elektrode array-registratie van het hele sinoatriale knoopweefsel om pacemaking-defecten bij muizen te identificeren. Farmacologische middelen kunnen ook in deze methode worden geïntroduceerd om hun effecten op intrinsieke pacemaking te bestuderen.

Micro-elektrode array-opname van de vuursnelheid van de sinoatriale knoop om intrinsieke cardiale pacemakingdefecten bij muizen te identificeren

Het huidige protocol beschrijft methoden voor transgene expressie in ratten- en muizenharten door directe intramyocardiale injectie van het virus onder echocardiografiebegeleiding. Methoden voor de beoordeling van de gevoeligheid van harten voor ventriculaire aritmieën door de geprogrammeerde elektrische stimulatie van geïsoleerde, langendorff-doordrenkte harten worden hier ook uitgelegd.

Virale transgene expressie in knaagdierharten en de beoordeling van het risico op hartritmestoornissen

De combinatie van laserporosatie en micro-elektrode arrays (MEA) maakt actiepotentiaalachtige opnames van gecultiveerde primaire en stamcel-afgeleide cardiomyocyten mogelijk. De golfvorm biedt superieur inzicht in het werkingsmechanisme van teststoffen dan standaardopnamen. Het koppelt patch-clamp en MEA-uitlezing om cardioveiligheidsonderzoek in de toekomst verder te optimaliseren.

Laser-geïnduceerde actiepotentiaal-achtige metingen van cardiomyocyten op micro-elektrode arrays voor verhoogde voorspelbaarheid van veiligheidsfarmacologie

Dit protocol illustreert een methode voor optogenetische stimulatie van intrinsieke hartneuronen in transgene muizenharten. De beschreven benadering wordt gebruikt voor het onderzoeken van de kinetiek van plotselinge activering van hartneuronen in ex vivo geperfuseerde harten en de interacties tussen cholinerge en catecholaminerge activiteit.

Optogenetische activering van intrinsieke cardiale autonome neuronen in uitgesneden geperfuseerde muizenharten

We beschrijven een protocol voor spinale meerkanaals extracellulaire registratie naast het registreren en analyseren van de hartfunctie van de spinale dorsale hoornneuronen. Deze methode biedt een tijdelijk gesynchroniseerd kader voor het bestuderen van spinale mechanismen die ten grondslag liggen aan thoracale viscerale functionele veranderingen veroorzaakt door acupunctuur.

Studie van de coderende profielen van somatische stimulatie op cardiaal-vergrendelde neuronale responsen in de ruggengraatwervelkolom van de rat

Dit protocol schetst geavanceerde materiaalfabricage en ex vivo rattenhartmethoden voor optische en elektrische bidirectionele bio-interfacing, waardoor nauwkeurige hartstimulatie, registratie en infarctmodellering voor bio-elektronicaonderzoek mogelijk zijn.

Bidirectionele elektrische en opto-elektronische interfaces in gezonde en ischemische ex vivo rattenharten

Leer hoe je het intracardiale autonome zenuwstelsel analyseert en moduleert met een ex vivo Langendorff-opstelling. Deze methode onderzoekt elektrofysiologie, aritmogenese en cAMP-dynamica in gedecentraliseerde harten.

Impact van Intracardiac neuronen op cardiale electrofysiologie en Arrhythmogenesis in een Ex Vivo Langendorff systeem

Meer video's verkennen