Name: Een Protocol bij het verwerven van de degeneratieve Tenocyte van de mens (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-09T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Leer een protocol voor het isoleren van menselijke degeneratieve tenocyten tijdens epicondylitis-chirurgie zonder extra letsel. Deze methode ondersteunt onderzoek naar tendinopathie-behandelingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd gesteund door een subsidie van de Korea Health Technology R & D Project via de Korea gezondheid industrie Development Institute (KHIDI), die werd gefinancierd door het ministerie van gezondheid & welzijn, Republiek Korea (verlenen van nummer: HI16C1559).

Het protocol werd uitgevoerd overeenkomstig de verklaring van Helsinki en het protocol is goedgekeurd door de institutionele Review Board in CHA Bundang Medical Center.
1. degeneratieve pees oogst van het weefsel van de patiënt
<ol><li>Diagnosticeren van laterale epikondylitis door een medische geschiedenis nemen en het gebruik van fysieke examen bevindingen: tederheid over de tendinous oorsprong dicht bij de laterale epicondylus; pijn opgeroepen door verzette uitbreiding van het gewricht van de pols.</li>
	<li>Gebruik de volgende criteria: ouder dan 18 jaar; een geschiedenis van laterale epikondylitis gedurende ten minste zes maanden; recalcitrant voor niet-operatieve behandeling; ten minste drie maanden zijn verstreken sinds de injectie van corticosteroïden, platelet rich plasma of Botulinetoxine</li>
	<li>Uitsluiten van het volgende: zwangere vrouwen; patiënten met een geschiedenis van de cervicale wervelkolom ziekte elleboog artritis, reumatologisch ziekte, operatie rond elleboog en zenuw entrapment syndrome; patiënten te weigeren om te doneren van weefsel.</li>
	<li>
Operatietechniek Opmerking: Zie Figuur 124.<ol>
<li>Na narcose door Isofluraan en Endotracheale intubatie, de arm op tafel gelegd en een tourniquet toe te passen. Vervolgens breng betadine agent op de hele arm en draperen met een aseptische chirurgische blad.</li>
		<li>Bloot de laterale elleboog via een incisie van 3 – 5 cm met No. 15 chirurgische scalpel blad slechts anteromedial aan de laterale epicondylus en proximale naar het niveau van het gewricht.</li>
		<li>Visueel identificeren de extensor carpi radialis longus (ECRL) en extensor aponeurosis interface en maak een splitsing incisie van 2-3 mm in diepte tussen de ECRL en extensor aponeurosis met een mes chirurgische scalpel No. 15 op de geïdentificeerde interface.</li>
		<li>Pak de ECRL anteriorly, die zal de pathologische extensor carpi radialis longus brevis (ECRB) oorsprong onder direct zicht.</li>
		<li>Visueel identificeren de pathologische degeneratieve weefsel door de karakteristieke saai grijsachtig kleur en meestal edematous en brokkelige weefsel.</li>
		<li>Na identificatie, resect zorgvuldig alle degeneratieve weefsel scherp met behulp van No. 15 chirurgische scalpel en mini-bladen.</li>
		<li>Het resected weefsel (ongeveer 1 cm3) insluiten in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) onmiddellijk en verwijder alle het omringende weefsel behalve pees weefsel zorgvuldig in ongeveer 10 mL PBS zo spoedig mogelijk.</li>
		<li>In gevallen met bony Exostose op de laterale epicondylus verwijderen van Exostose met behulp van een rongeur en het glad met een rasp. Maken van meerdere boorgaten (diameter 1,6 mm, ongeveer 6-8 gaten) in de condyle anterolateral om vasculaire levering. Dit is optioneel.</li>
		<li>Sluit de wond laag voor laag met behulp van niet-absorbeerbare hechtdraad materiaal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Gezonde controle tenocyte
	<ol>
<li>Gezonde tenocytes verkrijgen bij de resterende pees van de auto-hamstring of auto-patella pees tijdens de voorste cruciate ligament reconstructie en gebruiken als het besturingselement voor de volgende experiment25. Opmerking: Het aantal monsters gebruikt in deze studie waren er drie in elke groep.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. histologie
<ol><li>Bewaar ongeveer de helft van het geoogste weefsel in neutrale gebufferde 10% formaline in een chemische zuurkast of een vergelijkbare groep.</li>
	<li>Het weefsel insluiten in een blok van paraffine (4 – 5 mL) en het punt in 4 – 5 µm secties coronally.</li>
	<li>
Vlek secties van controle en degeneratieve pees met haematoxyline en eosine vlek (H & E) en Alcian blauwe vlek op een pH van 2.5. H & E kleuring in een geautomatiseerde vlek machine als volgt uitvoeren
	<ol>
<li>Deparaffinize met behulp van xyleen (3 keer, 5 min, respectievelijk).</li>
		<li>Hydrateren van graded alcoholen tot water (100% alcohol, 4 min 100% alcohol, 3 min. 95% alcohol, 2 min; 70% alcohol, 1 min; water, 2 min).</li>
		<li>Vlek in de Haematoxyline gedurende 5 minuten wassen goed in water gedurende 2 min.</li>
		<li>Differentiëren in 1% zuur alcohol (1% HCl in 70% alcohol) voor 3 s. Wash goed in water gedurende 3 minuten.</li>
		<li>HCl neutraliseren door dompelen in een 0,5% ammoniak voor 10 s, gevolgd door een 3 min water wassen.</li>
		<li>Vlek in Eosion voor 5 min.</li>
		<li>Uitdrogen door alcoholen (80% alcohol, 30 s; 95% alcohol, 1 min; 100% alcohol 1 min, 100% alcohol 2 min).</li>
		<li>Duidelijk in xyleen (3 keer, 2 min en 2 min 3 min, respectievelijk).</li>
		<li>Monteren met een cover dia.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Uitvoeren van immunohistochemitry (IHC) met behulp van de Bond polymeer verfijnen detectie kit volgens de instructies van de fabrikant met kleine wijzigingen.
	<ol>
<li>Voer na het deparaffinization met behulp van xyleen, een antigeen ophalen procedure met behulp van de oplossing van de gegevensherwinning van Bond epitoop gedurende 30 minuten bij 100 ° C. De oplossing van de gegevensherwinning van Bond epitoop bevat een citraat gebaseerd buffer en oppervlakteactieve stof (1 L, pH 5,9-6.1).</li>
		<li>Endogene Peroxidasen doven door het weefsel met waterstofperoxide gedurende 5 minuten aan het broeden.</li>
		<li>Incubeer de secties voor 15 min bij een omgevingstemperatuur (21-22 ° C) met primaire antilichamen tegen de vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) (1:200), tenomodulin (1:200) of mohawk (1:200).</li>
		<li>Secundair antilichaam coderen met een polymere Biotine-vrije mierikswortel peroxidase-linker antilichaam geconjugeerde systeem uitvoeren<ol>
<li>Gebruik secundaire konijn anti muis IgG in de dierlijke serum 10% (v/v) in Tris-gebufferd saline/0.09% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one oplossing voor het lokaliseren van muis-antilichamen.</li>
			<li>Gebruik anti-konijn polymeer Poly-HRP-IgG (< 25 µg Mo/mL) met de dierlijke serum 10% (v/v) in Tris-gebufferd saline/0.09% te lokaliseren konijn antilichamen.</li>
			<li>Gebruik 3, 3'-Diaminobenzidine tetrahydrochloride hydraat in een stabilisator-oplossing voor het visualiseren van het complex via een bruin neerslag.</li>
			<li>Counterstain met < 0,1% Haematoxyline (blauw) te visualiseren de celkernen.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Observeren van de dia's gekleurd met H & E, Alcian blauwe vlekken, en IHC voor VEGF, tenomodulin en mohawk onder lichte Microscoop en representatieve microscopische beelden van elke dia onder één hoogvermogen veld (400 X) te verkrijgen.</li>
</ol>3. Tenocyte cultuur
<ol><li>
Weefsel voorbereiding
	<ol>
<li>Bereid het monster van de pees door het verwijderen van alle van het omringende weefsel grondig met micro-schaar en pincet.</li>
		<li>Wassen met PBS en gehakt in kleine stukjes (ongeveer 1 mm3 of minder).</li>
		<li>Het verteren van weefsels voor 1 h in 30 mL Dulbecco van bewerkt Eagle's Medium (DMEM), aangevuld met Collagenase II 30 mg/mL bij 37 ° C.</li>
		<li>Cellen passeren door een zeef van 100 µm cel.</li>
		<li>Deactiveren Collagenase II door toevoeging van 1 mL van foetale runderserum (FBS).</li>
		<li>Centrifugeer bij 196 x g gedurende 5 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Celcultuur
	<ol>
<li>Zaad van 3 x 105 cellen in een schotel van 100 mm en cultuur met DMEM aangevuld met 10% FBS en 1% antibioticum-Antimycotic oplossing bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator voor 1 week.</li>
		<li>Wijzig het kweekmedium elke drie dagen totdat 80% samenvloeiing optreedt. Zowel gezonde controle en degeneratieve celsteekproeven tot passage vier cultuur en gebruiken voor experiment.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. immunocytochemie (ICC)
<ol><li>Breng 200 µL van gekweekte cellen (2 x 105 cellen) aan de acht putjes van de dia van een kamer en de cellen groeien tot de samenkomst met de toevoeging van nieuwe media voor 1 dag.</li>
	<li>De cellen met PBS wassen en op te lossen met 500 µL van 4% formaldehyde per putje.</li>
	<li>Incubeer de dia's met 0,5% Triton X-100 in PBS voor 10 min voor permeabilization van de membranen.</li>
	<li>Blokkeren in PBS met 1% bovien serumalbumine en 0,05% TWEEN-20 voor mohawk en tenomodulin, respectievelijk.</li>
	<li>In het donker met muis anti-mohawk monoklonaal antilichaam (1:100 verdunning) en geit anti-tenomodulin antistof (1:100 verdunning) bij 4 ° C na een nacht bebroeden.</li>
	<li>Incubeer de secundaire antilichamen (Alexa 555-anti geit (1:200) voor tenomodulin; Alexa 488-anti-muis (1:200) voor mohawk) in het donker gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Mount met 0,5 µL van een fluorescentie montage medium.</li>
	<li>Analyseren met behulp van een fluorescentie Microscoop (400 X).</li>
</ol>5. verspreiding Assay
<ol><li>
Maatregel cel viabilities met behulp van in water oplosbare tetrazolium (WST) -1.
	<ol>
<li>Beënt, zowel in gezonde als degeneratieve cellen in 96 goed platen bij een dichtheid van 2 x 103 cellen per putje voor 24, 72 en 120 h.</li>
		<li>Na incubatie, voeg toe 10 µL van de 10% WST-1-oplossing aan elk putje.</li>
		<li>Incubeer de platen gedurende 3 uur bij 37 ° C in 5% CO2.</li>
		<li>Meet de optische dichtheid bij 450 nm met behulp van een microplate-lezer. Lezingen ten minste driemaal op alle tijdstippen voor elk monster nemen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Maatregel cellulaire DNA bedrag met behulp van de BrdU assay.
	<ol>
<li>Beide gezond zaad en degeneratieve cel 96 platen goed bij een dichtheid van 2 x 103 cellen per putje voor 24, 72 en 120 h.</li>
		<li>Na incubatie, voeg toe 10 µL van 10% BrdU-oplossing aan elk putje.</li>
		<li>Incubeer de platen gedurende 3 uur bij 37 ° C in 5% CO2.</li>
		<li>Voeg 100 µL per putje van de Fixing/Denaturing-oplossing (60-70% ethanol, 0,1-0,5% natriumhydroxide) en houd de plaat bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten.</li>
		<li>Voeg 100 µL per putje voorbereid 1 h 1 x detectie antilichaam oplossing en houd de plaat bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Verwijder oplossing en wassen plaat driemaal met 1 x wassen Buffer.</li>
		<li>Voeg 100 µL per putje bereid 1 x HRP-geconjugeerde secundair antilichaam oplossing en houden de plaat bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten.</li>
		<li>Verwijder de oplossing en wassen plaat driemaal met 1 x wassen Buffer.</li>
		<li>Voeg 100 µL van 50% TMB substraat.</li>
		<li>Incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Voeg 100 µL van eindeoplossing.</li>
		<li>Meet de optische dichtheid bij 450 nm met behulp van een microplate-lezer. Opmerking: Neem lezingen ten minste driemaal ten allen tijde punten voor elk monster.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. statistische analyse
<ol><li>Verzamelen en analyseren van gegevens met behulp van SPSS.</li>
	<li>Verbeelden gegevens door gemiddelde ± standaardafwijking van het gemiddelde.</li>
	<li>Gebruik Mann-Whitney U test.</li>
	<li>Overwegen verschillen statistisch significant wanneer de p -waarde kleiner dan 0,05 is (p < 0,05).</li>
</ol>

<ol><li>Ackermann, P. W., Renstrom, P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23016086">Tendinopathy in sport.</a> Sports Health. 4 (3), 193-201 (2012).</li>
<li>Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Types+and+epidemiology+of+tendinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Types and epidemiology of tendinopathy.</a> Clinical Sports Medicine. 22 (4), 675-692 (2003).</li>
<li>Lui, P. P., Chan, L. S., Fu, S. C., Chan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+sensory+neuropeptides+in+tendon+is+associated+with+failed+healing+and+activity-related+tendon+pain+in+collagenase-induced+tendon+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Expression of sensory neuropeptides in tendon is associated with failed healing and activity-related tendon pain in collagenase-induced tendon injury.</a> American Journal of Sports Medicine. 38 (4), 757-764 (2010).</li>
<li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+corticosteroid+on+the+expressions+of+neuropeptide+and+cytokine+mRNA+and+on+tenocyte+viability+in+lateral+epicondylitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation+%28London%29%22%5BJournal%5D)">Effects of corticosteroid on the expressions of neuropeptide and cytokine mRNA and on tenocyte viability in lateral epicondylitis.</a> Journal of Inflammation (London). 9 (1), 40(2012).</li>
<li>Uchio, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+neuropeptides+and+cytokines+at+the+extensor+carpi+radialis+brevis+muscle+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Shoulder+and+Elbow+Surgery%22%5BJournal%5D)">Expression of neuropeptides and cytokines at the extensor carpi radialis brevis muscle origin.</a> Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 11 (6), 570-575 (2002).</li>
<li>Lieber, R. L., Loren, G. J., Friden, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurement+of+human+wrist+extensor+muscle+sarcomere+length+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">In vivo measurement of human wrist extensor muscle sarcomere length changes.</a> Journal of Neurophysiology. 71 (3), 874-881 (1994).</li>
<li>Regan, W., Wold, L. E., Coonrad, R., Morrey, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+histopathology+of+chronic+refractory+lateral+epicondylitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Microscopic histopathology of chronic refractory lateral epicondylitis.</a> American Journal of Sports Medicine. 20 (6), 746-749 (1992).</li>
<li>Sharma, P., Maffulli, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tendon+injury+and+tendinopathy%3A+healing+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Joint+Surgery+American+volume%22%5BJournal%5D)">Tendon injury and tendinopathy: healing and repair.</a> Journal of Bone and Joint Surgery American volume. 87 (1), 187-202 (2005).</li>
<li>Lui, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+technology+for+tendon+regeneration%3A+current+status%2C+challenges%2C+and+future+research+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Cloning%22%5BJournal%5D)">Stem cell technology for tendon regeneration: current status, challenges, and future research directions.</a> Stem Cells Cloning. 8, 163-174 (2015).</li>
<li>Dahlgren, L. A., van der Meulen, M. C., Bertram, J. E., Starrak, G. S., Nixon, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-like+growth+factor-I+improves+cellular+and+molecular+aspects+of+healing+in+a+collagenase-induced+model+of+flexor+tendinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopedic+Research%22%5BJournal%5D)">Insulin-like growth factor-I improves cellular and molecular aspects of healing in a collagenase-induced model of flexor tendinitis.</a> Journal of Orthopedic Research. 20 (5), 910-919 (2002).</li>
<li>Schnabel, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+and+insulin-like+growth+factor-I+gene-enhanced+mesenchymal+stem+cells+improve+structural+aspects+of+healing+in+equine+flexor+digitorum+superficialis+tendons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopedic+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells and insulin-like growth factor-I gene-enhanced mesenchymal stem cells improve structural aspects of healing in equine flexor digitorum superficialis tendons.</a> Journal of Orthopedic Research. 27 (10), 1392-1398 (2009).</li>
<li>Durgam, S. S., Stewart, A. A., Sivaguru, M., Wagoner Johnson, A. J., Stewart, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tendon-derived+progenitor+cells+improve+healing+of+collagenase-induced+flexor+tendinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopedic+Research%22%5BJournal%5D)">Tendon-derived progenitor cells improve healing of collagenase-induced flexor tendinitis.</a> Journal of Orthopedic Research. 34 (12), 2162-2171 (2016).</li>
<li>Titan, A., Andarawis-Puri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tendinopathy%3A+Investigating+the+Intersection+of+Clinical+and+Animal+Research+to+Identify+Progress+and+Hurdles+in+the+Field%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Joint+Surgery+Review%22%5BJournal%5D)">Tendinopathy: Investigating the Intersection of Clinical and Animal Research to Identify Progress and Hurdles in the Field.</a> Journal of Bone and Joint Surgery Review. 4 (10), (2016).</li>
<li>Dirks, R. C., Warden, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+the+study+of+tendinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Musculoskeletal+Neuronal+Interaction%22%5BJournal%5D)">Models for the study of tendinopathy.</a> Journal of Musculoskeletal Neuronal Interaction. 11 (2), 141-149 (2011).</li>
<li>de Mos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+platelet-rich+plasma+enhance+tendon+repair%3F+A+cell+culture+study%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Can platelet-rich plasma enhance tendon repair? A cell culture study.</a> American Journal of Sports Medicine. 36 (6), 1171-1178 (2008).</li>
<li>Scherb, M. B., Han, S. H., Courneya, J. P., Guyton, G. P., Schon, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+bupivacaine+on+cultured+tenocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Orthopedics%22%5BJournal%5D)">Effect of bupivacaine on cultured tenocytes.</a> Orthopedics. 32 (1), 26(2009).</li>
<li>Wong, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+dexamethasone+on+cultured+human+tenocytes+and+its+reversibility+by+platelet-derived+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Joint+Surgery+American+Volume%22%5BJournal%5D)">Effect of dexamethasone on cultured human tenocytes and its reversibility by platelet-derived growth factor.</a> Journal of Bone and Joint Surgery American Volume. 85 (10), 1914-1920 (2003).</li>
<li>Tempfer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+crystalline+glucocorticoid+triamcinolone+acetonide+on+cultered+human+supraspinatus+tendon+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Orthopaedics%22%5BJournal%5D)">Effects of crystalline glucocorticoid triamcinolone acetonide on cultered human supraspinatus tendon cells.</a> Acta Orthopaedics. 80 (3), 357-362 (2009).</li>
<li>Menon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+in+extracellular+matrix+remodeling+and+collagen+turnover+related+pathways+in+cultured+human+tenocytes+after+ciprofloxacin+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Muscles+Ligaments+Tendons+J%22%5BJournal%5D)">New insights in extracellular matrix remodeling and collagen turnover related pathways in cultured human tenocytes after ciprofloxacin administration.</a> Muscles Ligaments Tendons J. 3 (3), 122-131 (2013).</li>
<li>Backman, L. J., Fong, G., Andersson, G., Scott, A., Danielson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substance+P+is+a+mechanoresponsive%2C+autocrine+regulator+of+human+tenocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Substance P is a mechanoresponsive, autocrine regulator of human tenocyte proliferation.</a> PLoS One. 6 (11), 27209(2011).</li>
<li>Backman, L. J., Eriksson, D. E., Danielson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substance+P+reduces+TNF-alpha-induced+apoptosis+in+human+tenocytes+through+NK-1+receptor+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Britich+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Substance P reduces TNF-alpha-induced apoptosis in human tenocytes through NK-1 receptor stimulation.</a> Britich Journal of Sports Medicine. 48 (19), 1414-1420 (2014).</li>
<li>Rolf, C. G., Fu, B. S., Pau, A., Wang, W., Chan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+cell+proliferation+and+associated+expression+of+PDGFRbeta+causing+hypercellularity+in+patellar+tendinosis%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Increased cell proliferation and associated expression of PDGFRbeta causing hypercellularity in patellar tendinosis.</a> Rheumatology (Oxford). 40 (3), 256-261 (2001).</li>
<li>Hoppe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tenocytes+of+chronic+rotator+cuff+tendon+tears+can+be+stimulated+by+platelet-released+growth+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Shoulder+and+Elbow+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tenocytes of chronic rotator cuff tendon tears can be stimulated by platelet-released growth factors.</a> Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 22 (3), 340-349 (2013).</li>
<li>Schipper, O. N., Dunn, J. H., Ochiai, D. H., Donovan, J. S., Nirschl, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nirschl+surgical+technique+for+concomitant+lateral+and+medial+elbow+tendinosis%3A+a+retrospective+review+of+53+elbows+with+a+mean+follow-up+of+11.7+years%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nirschl surgical technique for concomitant lateral and medial elbow tendinosis: a retrospective review of 53 elbows with a mean follow-up of 11.7 years.</a> American Journal of Sports Medicine. 39 (5), 972-976 (2011).</li>
<li>Cook, J. L., Feller, J. A., Bonar, S. F., Khan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+tenocyte+morphology+is+more+prevalent+than+collagen+disruption+in+asymptomatic+athletes%27+patellar+tendons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopedic+Research%22%5BJournal%5D)">Abnormal tenocyte morphology is more prevalent than collagen disruption in asymptomatic athletes' patellar tendons.</a> Journal of Orthopedic Research. 22 (2), 334-338 (2004).</li>
<li>Yuan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creating+an+Animal+Model+of+Tendinopathy+by+Inducing+Chondrogenic+Differentiation+with+Kartogenin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Creating an Animal Model of Tendinopathy by Inducing Chondrogenic Differentiation with Kartogenin.</a> PLoS One. 11 (2), 0148557(2016).</li>
<li>Lui, P. P., Maffulli, N., Rolf, C., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+the+validated+animal+models+for+tendinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Medical+Scientific+Sports%22%5BJournal%5D)">What are the validated animal models for tendinopathy.</a> Scandinavian Journal of Medical Scientific Sports. 21 (1), 3-17 (2011).</li>
<li>Wilhelm, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19700079">Lateral epicondylitis review and current concepts.</a> Journal of Hand Surgery American Volume. 34 (7), author reply 1359-1360 1359-1360 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een aantal eerdere studies hebben gemeld hoe om chronische tendinopathic dierlijke modellen met gebruikmaking van verschillende procedures zoals collagenase of kartogenin injectie, loopband lopen en meer26,27te maken. Hoewel talrijke studies veelbelovende therapeutische effecten op basis van deze dierlijke modellen toonden, zou experimenten met behulp van de menselijke degeneratieve tenocyte cruciaal belang op het gebied van de tendinopathie te vervangen en de do...

Tendinopathie is een chronische degeneratieve musculoskeletal aandoening die ontwikkelt zich in verschillende delen van het lichaam. Onlangs, heeft het aantal gevallen van tendinopathie sterk toegenomen in de ontwikkelde wereld als gevolg van groeiende deelname aan recreatieve sporten en toegenomen levensverwachting1,2. De oorzaak van tendinopathie wordt beschouwd als multifactoriële en deze oorzaken omvatten ischemie, zuurstof vrije radicalen verwondingen, een gebrek aan evenwicht tussen vasoconstrictor en vaatverwijdende innervations, interne micro-tranen en wijzigingen van neuro-verordening3 ,4,5,6,7,8. De meeste behandelingen voor tendinopathie alleen de symptomen te verlichten. Bovendien behandelingen zonder weefselregeneratie vereisen een lange tijd voor revalidatie en bereiken een beperkte reactie van benadeelde pezen, die een klinische uitdaging voor artsen9oplegt.
De incompetentie van de huidige behandelmogelijkheden samen met het ontbreken van de degeneratieve pees vermogen om self-heal heeft lood onderzoekers te nemen van belang in het verkennen van alternatieve behandelingsstrategieën. Onlangs, nieuwe studies gerapporteerd veel veelbelovende resultaten voor het verbeteren van de helende werkzaamheid van de pezen van de tendinopathie met behulp van groeifactoren, stamcel gebaseerde therapie en gene therapie10,11,12.
Via een literatuuronderzoek, vonden we dat de betrokken studies kunnen worden onderverdeeld in twee categorieën op basis van hun analyse materialen: diermodellen zoals een rat, een muis of een konijn; en menselijke modellen. Met betrekking tot de diermodel, momenteel zijn er twee populaire technieken voor het genereren van tendinopathie: chemische inductie van letsel of mechanische overbelasting van het model. Elke diermodel werd echter beperkt in het weergeven van de complexe menselijke tendinopathie pathologie13,14.
De meeste papieren met behulp van menselijke specimens histologisch werden geanalyseerd of de in vitro uitgevoerd experiment op basis van een gezonde menselijke tenocyte in plaats van een degeneratieve tenocyte15,16,17,18 , 19 , 20 , 21. alleen een paar papieren gemeld dat zij een menselijke degeneratieve tenocyte gebruikt, maar ze niet in detail het protocol gebruikt beschrijven om de degeneratieve tenocyte van de menselijke22,-23. In dit verband opgemerkt moet worden dat succesvolle resultaten van het dierlijk model of het gezonde weefsel/tenocyte niet noodzakelijkerwijs voorspellen kunnen menselijke werkzaamheid of werkzame dosering omdat degeneratie van de pees een ingewikkeld proces is en de pathogenese nog steeds niet volledig begrepen.
Collectief, is het noodzakelijk om te beschrijven het standaardprotocol voor het verkrijgen van de degeneratieve tenocyte van menselijk weefsel zonder nadelige gevolgen voor de donor. Dit artikel beschrijft een protocol over hoe te verwerven van de menselijke degeneratieve tenocyte. Voor het valideren van het protocol, zijn de geoogste weefsels histologisch geanalyseerd. De gekweekte cel werd vervolgens bevestigd als de degeneratieve tenocyte door middel van immunocytochemie (ICC), een kwantitatieve real-time-polymerase-kettingreactie (qRT-PCR), en een test van de levensvatbaarheid.

<table><tbody><tr><td>Scalpel</td><td>Kisanbio</td><td>KS-Q0306-15</td><td>No. 15</td></tr><tr><td>Mini-blade</td><td>Beaver</td><td>374769</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11995065</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>fetal bovine serum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>50 mM ascorbic acid-2-phosphate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic-Antimycotic solution</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>4% formaldehyde</td><td>Bio-solution</td><td>BP031</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-100ml</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Rdtech</td><td>C0082</td><td></td></tr><tr><td>TWEEN 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416-100ml</td><td></td></tr><tr><td>MKX (C-5)</td><td>Santa cruz biotechnology</td><td>sc-515878</td><td></td></tr><tr><td>Tenomodulin (N-14)</td><td>Santa cruz biotechnology</td><td>sc-49325</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence Mounting Medium</td><td>DAKO</td><td>S3023</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>WST-1</td><td>Dojindo Molecular Technologies</td><td>CK04</td><td></td></tr><tr><td>BrdU Cell Proliferation Assay Kit</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#6813</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>Invitrogen</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>iScript cDNA Synthesis Kit&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>170-8891</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4369016</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hs02786624_g1</td><td></td></tr><tr><td>COL3A1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hs00943809_m1</td><td></td></tr><tr><td>ACTA2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hs00426835_g1</td><td></td></tr><tr><td>TAC1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hs00243225_m1</td><td></td></tr><tr><td>TACR1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hs00185530_m1</td><td></td></tr><tr><td>PTGS2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hs00153133_m1</td><td></td></tr><tr><td>ACTB</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hs99999903_m1</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainers (100 &micro;m)&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>100mm culture dish</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>8188207</td><td></td></tr><tr><td>8-well Chamber Slide</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>154534</td><td></td></tr><tr><td>96 Well Clear Flat Bottom Polystyrene TC-Treated Microplates</td><td>Corning</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse 50i Microscope&nbsp;</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>VERSA max microplate reader&nbsp;</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CFX96 Real-Time PCR Detection System</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Paraffins</td><td>Leica Biosystems</td><td>3801340</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>JUNSEI CHEMICAL</td><td>90303-2185</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>DAKO</td><td>CS70030-2</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>DAKO</td><td>CS70130-2</td><td></td></tr><tr><td>Alcian blue</td><td>DAKO</td><td>AR16011-2</td><td></td></tr><tr><td>Citric acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>JUNSEI CHEMICAL</td><td>25165-0430</td><td></td></tr><tr><td>Endogenous peroxidases&nbsp;</td><td>DAKO</td><td>S200380-2</td><td></td></tr><tr><td>Canada balsam</td><td>JUNSEI CHEMICAL</td><td>23255-1210</td><td></td></tr><tr><td>Microtome Blade</td><td>FEATHER</td><td>A35</td><td></td></tr><tr><td>Slide glass</td><td>SUPERIOR</td><td>1000612</td><td></td></tr><tr><td>Cover glass</td><td>Marienfeld-Superior</td><td>101050</td><td></td></tr><tr><td>VEGF</td><td>Santa cruz biotechnology</td><td>sc-7269</td><td></td></tr><tr><td>SPSS Software</td><td>IBM</td><td></td><td>Ver. 18.0</td></tr><tr><td>Multi-purpose Centrifuge</td><td>LABOGENE</td><td>1248R</td><td></td></tr></tbody></table>

een protocol bij het verwerven van de degeneratieve tenocyte van de mens

A Protocol to Acquire the Degenerative Tenocyte from Humans

Tendinopathie, een pijnlijke aandoening die zich in reactie op de degeneratie van de pees ontwikkelt, is op de stijging in de ontwikkelde wereld als gevolg van toenemende lichamelijke activiteit en de langere levensverwachting. Ondanks de toenemende prevalentie, de onderliggende pathogenese is nog steeds onduidelijk en behandeling is over het algemeen symptomatisch. Onlangs, talrijke therapeutische opties, en factoren die de groei, stamcellen, gentherapie, werden onderzocht in de hoop op verbetering van de helende kracht van de degeneratieve pees. De meeste van deze studies werden echter uitgevoerd alleen op dierlijke modellen of gezonde menselijke tenocytes. Ondanks sommige studies met behulp van pathologische tenocytes, tot de beste van onze kennis is er momenteel geen protocol met een beschrijving van het verkrijgen van menselijke degeneratieve tenocytes. Het doel van deze studie is om te beschrijven een standaardprotocol voor het verkrijgen van menselijke degeneratieve tenocytes. Aanvankelijk was het weefsel van de pees van een patiënt met laterale epikondylitis geoogst tijdens de operatie. Vervolgens werden biopsie monsters genomen uit de extensor carpi radialis brevis pees overeenkomt met structurele veranderingen waargenomen ten tijde van de operatie. Alle van de geoogste pezen bleek te zijn saaie, grijze, brokkelige, en edematous, waardoor ze visueel onderscheiden van de gezonde ones. Tenocytes werden gekweekt en gebruikt voor experimenten. Ondertussen, de helft van de geoogste weefsels histologisch werden geanalyseerd, en werd aangetoond dat zij dezelfde sleutel functies van tendinopathie (angiofibroblastic dysplasie of hyperplasie deelden). Een secundaire analyse door immunocytochemie bevestigd dat de gekweekte cellen waren tenocytes met de meerderheid van de cellen met positieve vlekken voor mohawk en tenomodulin eiwitten. De kwaliteiten van de degeneratieve aard van tenocytes werden vervolgens vastgesteld door vergelijking van de cellen met de gezonde controle met behulp van een proliferatie assay of qRT-PCR. De degeneratieve tenocyte weergegeven een hoger tarief van proliferatie en soortgelijk gen expressiepatronen van tendinopathie die overeenkomen met eerdere verslagen. Dit nieuwe protocol kan over het algemeen een nuttig instrument bieden voor toekomstige studies van tendinopathie.

Histologische analyses bleek dat de geoogste weefsel van laterale epikondylitis had de kenmerken van een tendinopathic pees. H & E gedeelte van tendinopathie degeneratieve pees bleek een ongeorganiseerd collageen bundel met een verlies van polariteit en fijne rechte, sterk verpakt parallelle vezel structuren. Histologische tekenen suggestief van degeneratie zoals hogere buiten en uitgebreide kernen zonder de typische spindle vorm voorkwamen in monsters. Bovendien, collageen bundels van de...

In vitro gebruik van degeneratieve tenocytes is essentieel bij het onderzoeken van de doeltreffendheid van nieuwe behandeling van tendinopathie. Echter de meeste onderzoeken gebruiken alleen het dierlijk model of een gezonde tenocyte. Wij stellen het volgende protocol om te isoleren van de menselijke degeneratieve tenocytes tijdens de operatie.

Een Protocol bij het verwerven van de degeneratieve Tenocyte van de mens

Tendinopathy, a painful condition that develops in response to tendon degeneration, is on the rise in the developed world due to increasing physical ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van sleutelvragen over de biologie van menselijke degeneratieve tenocyten, omdat slechts weinig onderzoeken de isolatie en het kweken van menselijke degeneratieve tenocyten in detail hebben beschreven. Het grote voordeel van deze techniek is dat we menselijke degeneratieve tenocyten kunnen verkrijgen zonder aanvullende schade aan de patiënt, omdat het degeneratieve weefsel wordt verkregen tijdens standaard epicondylitis-chirurgie. De procedure wordt gedemonstreerd door Dr. Soo-Hong Han, Minjung Baek en Hyung Kyung Kim van mijn niveau drie.Om een degeneratief tendocytweefselmonster te verkrijgen, gebruikt u een chirurgisch scalpel nummer 15 om een huidsnede van drie tot vijf centimeter te maken, net vooraan mediaal ten opzichte van de laterale epicondyle en proximaal van het gewrichtsniveau om de laterale elleboog bloot te leggen en de extensor carpi radialis longus in de extensor aponeurosis-interface visueel te lokaliseren. Gebruik het scalpel om een splitsende insnijding van twee tot drie millimeter diep te maken tussen de extensor carpi radialis longus en de extensor aponeurosis op het interface. Na anteriore retractie van de extensor carpi radialis longus, lokaliseer het pathologische degeneratieve weefsel door zijn karakteristieke doffe grijze kleur en typisch oedemaatse en broze weefsel, en gebruik het scalpel en mini-blades om voorzichtig, maar scherp, al het degeneratieve weefsel te reseceren.Wanneer al het weefsel is geoogst, sluit u de wond met niet-absorbeerbaar hechtmateriaal volgens standaardprotocollen en verwijdert u voorzichtig al het omliggende weefsel van een ongeveer een kubieke centimeter groot weefselmonster, waarbij u het schone peesweefsel in 10 milliliter PBS plaatst zodra het is bijgesneden. Fixeer vervolgens ongeveer de helft van het geoogste weefsel in neutraal gebufferd 10% formaline in een chemische fume hood gedurende 12 uur. Om een tenocytencultuur op te zetten, brengt u de andere helft van de geoogste controle- en gedegenereerde weefselmonsters over in afzonderlijke weefselkweekschalen met vers PBS en snijdt de weefsels in een kubieke meter of kleinere stukken, verteer de weefselfragmenten in 30 milliliters DMEM aangevuld met 30 milligram per milliliter collageenase twee per weefselgroep bij 37 graden Celsius gedurende één uur.Aan het einde van de vertering, filter de celoplossingen door individuele 100 micron celstrainers en deactiveer de collageenase met één milliliter FBS per buis. Verzamel de tenocyten door centrifugatie en suspendeer de pellets op drie keer 10 tot de vijfde cellen per 10 milliliters DMEM aangevuld met 10% FBS en 1% antibioticum, antimycotische oplossingconcentratie. Zaai vervolgens de cellen in één 100 centimeter kweekschaal per conditie en kweek de tenocyten in een 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide-incubator gedurende één week, waarbij het kweekmedium om de drie dagen wordt ververst totdat een 80% confluëntie is bereikt.Voor immunocytochemische analyse, breng twee keer 10 tot de vijfde cellen in 200 microliters vers medium over naar elke put van één acht-putkamerschaal per experimentele groep en laat de cellen gedurende 24 uur naar confluëntie groeien. De volgende dag, was de cellen met PBS, gevolgd door fixatie met 500 microliters van 4% formaldehyde per put, en permeabilisatie met 0,5% triton X 100 in PBS gedurende 10 minuten. Om niet-specifieke binding te blokkeren, incubeer de cellen met 1% bovien serumalbumine en 0,05% Tween 20 in PBS, zoals experimenteel gepast, gevolgd door incubatie met de fluorescerend gelabelde primaire antilichamen van belang bij vier graden Celsius gedurende de nacht beschermd tegen licht.De volgende ochtend, label de cellen met de juiste secundaire antilichamen gedurende één uur bij kamertemperatuur beschermd tegen licht en monteer de monsters met 0,5 microliter van een geschikt fluorescentie montagemedium per kamer. Beeld vervolgens de monsters af op een fluorescentiemicroscoop onder een 400-voudig objectief. Voor pathologische analyse van het weefsel, bedden de formele en gefixeerde controle- en gedegenereerde peesweefselmonsters in vier tot vijf milliliter paraffine en verwerf vier tot vijf micrometer secties van elke paraffineblok.Voor hematoxyline in eosina, of H&E-kleuring, deparaffiniseer de monsters met drie vijf-minuten-onderdompeling in xyleen gevolgd door hydratatie met gegradueerde ethanolonderdompeling en een twee-minuten-tapwaterwas. Label vervolgens de monsters met hematoxyline gedurende vijf minuten, gevolgd door nogmaals een twee-minuten waterwas. Dompel de gespoelde monsters drie seconden in 1% zoutzuur en 70% ethanol, gevolgd door een drie-minuten waterwas.Neutraliseer het zuur met een 10-seconden-dip in 0,5% ammoniak, gevolgd door nogmaals een drie-minuten waterwas. Label de geneutraliseerde monsters met de eosina gedurende vijf minuten, en dehydrateer de H&E-gekleurde monsters met gegradueerde ethanolonderdompeling. Na drie xyleenonderdompelingen, monteer de monsters met een geschikt montagemedium en een dekglas.Voer immunohistochemische analyse van de weefselmonsters uit met behulp van de bond-polymeer verfijnde detectiekit volgens de instructies van de fabrikant met de volgende kleine wijzigingen. Na deparaffinisatie met xyleen zoals gedemonstreerd, dompel de monsters gedurende 30 minuten in bond-epitoop-retrieval-oplossing bij 100 graden Celsius voor antigeenretrieval, gevolgd door een vijf-minuten-incubatie in waterstofperoxide om eventuele endogene peroxidase te dempen. Label vervolgens de secties gedurende vijftien minuten bij kamertemperatuur met de primaire antilichamen van belang.Aan het einde van de incubatie, label de monsters met het geschikte biotin-vrije polymeerpaardenradenzymperoxidase-linker secundaire antilichaamconjugaatsysteem gedurende 50 minuten bij kamertemperatuur. Monteer vervolgens de secties met een dekglas in het geschikte montagemedium en beeld de monsters af op een lichtmicroscoop bij een 400-voudig vergroting. H&E-analyses onthullen dat weefsel dat is geoogst uit de gedegenereerde laterale epicondylitis disorganiseerde collageenbundels met een verlies van

a-protocol-to-acquire-the-degenerative-tenocyte-from-humans

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Hier presenteren we een protocol voor de directe omzetting van muis embryonale fibroblasten in volledig functionele en stabiele trofoblast-stamcellen door tien dagen overexpressie van Tfap2c, Gata3, Eomes en Ets2.

Protocol voor de directe omzetting van muizen embryonale fibroblasten in Trofoblast Stamcellen

Dit manuscript bevat informatie over de fabricage van micro-tissue-gemanipuleerde neurale netwerken: driedimensionale micron-grootte constructies die bestaan ​​uit lange uitgelijnd axonale tracten die de geaggregeerde neuronale populatie (n) in een buisvormige hydrogel bekleden. Deze levende steigers kunnen dienen als functionele relais om neurale circuits te reconstrueren of te moduleren of als biofidelische testbedden die grijze-witte materie-neuroanatomie nabootsen.

Anatomisch Geïnspireerde Driedimensionale Microweefsel Geanimeerde Neurale Netwerken voor Nervous System Reconstructie, Modulatie en Modellering

Wij presenteren hier een protocol voor de differentiatie van menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen in elke Somiet derivaat (myotome, sclerotome, dermatoom en syndetome) in chemisch gedefinieerde voorwaarden, die toepassingen heeft in de toekomst ziekte modellering en cel-gebaseerde therapieën in orthopedische chirurgie.

In Vitro generatie van Somiet derivaten uit menselijk geïnduceerde pluripotente stamcellen-cellen

We presenteren technieken voor het isoleren, kweken, karakteriseren en differentiëren van menselijke primaire spier voorlopercellen (Hmpc's) verkregen uit skeletspieren biopsie weefsel.  hmpc's verkregen en gekenmerkt door middel van deze methoden kunnen worden gebruikt om vervolgens onderzoek vragen met betrekking tot menselijke myogenese en skeletspier regeneratie aan te pakken.

Isolatie, cultuur, karakterisering, en differentiatie van menselijke spier voorlopercellen van de skeletspier biopsie procedure

Een driedimensionaal uniaxiale mechanische stimulatie bioreactorsysteem is een ideale bioreactor voor tenogeen-specifieke differentiatie van pees-afgeleide stamcellen en neo-peesvorming.

Toepassing van een drie-dimensionale uniaxiale mechanische stimulatie bioreactor systeem om tenogene differentiatie van pees-afgeleide stamcellen induceren

Dit protocol beschrijft de omzetting van huidfibbroblasten in myoblasten en hun differentiatie in myotubes. De cellijnen zijn afgeleid van patiënten met neuromusculaire aandoeningen en kunnen worden gebruikt om pathologische mechanismen te onderzoeken en therapeutische strategieën te testen.

Directe herprogrammering van menselijke fibroblasten in myoblasten om therapieën voor neuromusculaire aandoeningen te onderzoeken

Hier beschrijven we een protocol voor de transplantatie en het volgen van gelabelde neurale cellen in menselijke cerebrale organoïden.

Een menselijk cerebraal organoïdemodel van neurale celtransplantatie

Dit artikel beschrijft een procedure om iTenocyten te produceren door iPSC-afgeleide mesenchymale stromale cellen te genereren met gecombineerde overexpressie van Scleraxis met behulp van een lentivirale vector en uniaxiale rek via een 2D-bioreactor.

Generatie van geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide iTenocyten via gecombineerde scleraxis-overexpressie en 2D uniaxiale spanning

Hier presenteren we een assembloid-modelsysteem om peescellulaire overspraak na te bootsen tussen het dragende peeskernweefsel en een extrinsiek compartiment met celpopulaties die worden geactiveerd door ziekte en letsel. Als belangrijke use case laten we zien hoe het systeem kan worden ingezet om ziekterelevante activering van extrinsieke endotheelcellen te onderzoeken.

Engineering Tendon Assembloids om cellulaire overspraak bij ziekte en reparatie te onderzoeken

Hierin demonstreren we een organoïdemodel in drie stappen (tweedimensionale [2D] expansie, 2D-stimulatie, driedimensionale [3D] rijping) dat een veelbelovend hulpmiddel biedt voor fundamenteel peesonderzoek en een potentiële steigervrije methode voor peesweefselmanipulatie.

Demonstratie van zelf-geassembleerde celbladcultuur en handmatige generatie van een 3D-pees/ligament-achtige organoïde met behulp van menselijke dermale fibroblasten

We presenteren een geoptimaliseerd protocol voor het verwerken van hele menselijke nieren om primaire renale proximale tubulule-epitheelcellen te isoleren en te kweken en de toepassing van deze cellen in een driedimensionaal, microfluïdisch, microfysiologisch platform om de proximale niertubulus te recapituleren.

Isolatie van primaire menselijke proximale tubule-epitheelcellen en hun gebruik bij het maken van een microfysiologisch model van de proximale niertubuli

Leer een protocol voor het isoleren van menselijke degeneratieve tenocyten tijdens epicondylitis-chirurgie zonder extra letsel. Deze methode ondersteunt onderzoek naar tendinopathie-behandelingen.

Een Protocol bij het verwerven van de degeneratieve Tenocyte van de mens

Meer video's verkennen