Name: Isolatie van atriale Cardiomyocytes van een Rat Model van metabole syndroom-gerelateerde hartfalen met bewaarde ejectie Fractie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Leer een geoptimaliseerde Langendorff-methode voor de isolatie van atriale cardiomyocyten uit een rattenmodel van metabool syndroom-gerelateerd hartfalen. Deze techniek levert een hoge opbrengst van levensvatbare cellen voor excitatie-contractie-koppelingsonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd gesteund door de DZHK (Duitse centrum voor cardiovasculair onderzoek, DB), de EKFS (Else-Kröner-Fresenius Stiftung, F.H.), en door de goedgekeurd (Duitse ministerie van onderwijs en onderzoek), evenals de BIH-Charité klinische wetenschapper programma gefinancierd door de Charité - Universitätsmedizin Berlijn en de Berlijnse Institute of Health (F.H.).

<ol><li>Alberti, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harmonizing+the+metabolic+syndrome%3A+a+joint+interim+statement+of+the+International+Diabetes+Federation+Task+Force+on+Epidemiology+and+Prevention%3B+National+Heart%2C+Lung%2C+and+Blood+Institute%3B+American+Heart+Association%3B+World+Heart+Federation%3B+International+Atherosclerosis+Society%3B+and+International+Association+for+the+Study+of+Obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Harmonizing the metabolic syndrome: a joint interim statement of the International Diabetes Federation Task Force on Epidemiology and Prevention; National Heart, Lung, and Blood Institute; American Heart Association; World Heart Federation; International Atherosclerosis Society; and International Association for the Study of Obesity.</a> Circulation. 120 (16), 1640-1645 (2009).</li>
<li>International Diabetes Federation Task Force on Epidemiology and Prevention. IDF Consensus Worldwide Definition of the Metabolic Syndrome. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.idf.org/e-library/consensus-statements/60-idfconsensus-worldwide-definitionof-the-metabolic-syndrome.html">https://www.idf.org/e-library/consensus-statements/60-idfconsensus-worldwide-definitionof-the-metabolic-syndrome.html</a> (2006).</li>
<li>Melenovsky, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+atrial+remodeling+and+function+in+advanced+heart+failure+with+preserved+or+reduced+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Left atrial remodeling and function in advanced heart failure with preserved or reduced ejection fraction.</a> Circulation: Heart Failure. 8 (2), 295-303 (2015).</li>
<li>Goette, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EHRA%2FHRS%2FAPHRS%2FSOLAECE+expert+consensus+on+atrial+cardiomyopathies%3A+definition%2C+characterization%2C+and+clinical+implication%5BTitle%5D)+AND+%22EP+Europace%22%5BJournal%5D)">EHRA/HRS/APHRS/SOLAECE expert consensus on atrial cardiomyopathies: definition, characterization, and clinical implication.</a> EP Europace. 18 (10), 1455-1490 (2016).</li>
<li>Schotten, U., Verheule, S., Kirchhof, P., Goette, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+mechanisms+of+atrial+fibrillation%3A+a+translational+appraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological mechanisms of atrial fibrillation: a translational appraisal.</a> Physiological Reviews. 91 (1), 265-325 (2011).</li>
<li>Hohendanner, F., DeSantiago, J., Heinzel, F. R., Blatter, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dyssynchronous+calcium+removal+in+heart+failure-induced+atrial+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Dyssynchronous calcium removal in heart failure-induced atrial remodeling.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 311 (6), H1352-H1359 (2016).</li>
<li>Hohendanner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inositol-1%2C4%2C5-trisphosphate+induced+Ca2%2B+release+and+excitation-contraction+coupling+in+atrial+myocytes+from+normal+and+failing+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inositol-1,4,5-trisphosphate induced Ca2+ release and excitation-contraction coupling in atrial myocytes from normal and failing hearts.</a> The Journal of Physiology. 593 (6), 1459-1477 (2015).</li>
<li>Tada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mineralocorticoid+receptor+on+experimental+cerebral+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Role of mineralocorticoid receptor on experimental cerebral aneurysms in rats.</a> Hypertension. 54 (3), 552-557 (2009).</li>
<li>Iwasaki, Y. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrial+fibrillation+promotion+with+long-term+repetitive+obstructive+sleep+apnea+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Atrial fibrillation promotion with long-term repetitive obstructive sleep apnea in a rat model.</a> Journal of the American College of Cardiology. 64 (19), 2013-2023 (2014).</li>
<li>Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrial+natriuretic+factor-SV40+T+antigen+transgenes+produce+tumors+and+cardiac+arrhythmias+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Atrial natriuretic factor-SV40 T antigen transgenes produce tumors and cardiac arrhythmias in mice.</a> Science. 239 (4843), 1029-1033 (1988).</li>
<li>Claycomb, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HL-1+cells%3A+a+cardiac+muscle+cell+line+that+contracts+and+retains+phenotypic+characteristics+of+the+adult+cardiomyocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">HL-1 cells: a cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (6), 2979-2984 (1998).</li>
<li>Sartiani, L., Bochet, P., Cerbai, E., Mugelli, A., Fischmeister, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+expression+of+the+hyperpolarization-activated%2C+non-selective+cation+current+I%28f%29+in+immortalized+HL-1+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Functional expression of the hyperpolarization-activated, non-selective cation current I(f) in immortalized HL-1 cardiomyocytes.</a> The Journal of Physiology. 545 (Pt 1), 81-92 (2002).</li>
<li>Louch, W. E., Sheehan, K. A., Wolska, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+in+cardiomyocyte+isolation%2C+culture%2C+and+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 51 (3), 288-298 (2011).</li>
<li>Gunduz, D., Hamm, C. W., Aslam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Isolation+of+High+Quality+Cardiomyocytes%2C+Endothelial+Cells%2C+and+Fibroblasts+from+an+Adult+Rat+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55601(2017).</li>
<li>Li, D., Wu, J., Bai, Y., Zhao, X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiomyocytes+for+cell+signaling+and+in+vitro+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (87), e51357(2014).</li>
<li>Graham, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+functional+characterization+of+adult+mouse+cardiomyoctyes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes.</a> Journal of Visualized Experiments. (79), e50289(2013).</li>
<li>Roth, G. M., Bader, D. M., Pfaltzgraff, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+physiological+analysis+of+mouse+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and physiological analysis of mouse cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51109(2014).</li>
<li>Thum, T., Borlak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+Ca2%2B+tolerant+cardiomyocytes+from+the+adult+rat%3A+improvements+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Xenobiotica%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of Ca2+ tolerant cardiomyocytes from the adult rat: improvements and applications.</a> Xenobiotica. 30 (11), 1063-1077 (2000).</li>
<li>Egorova, M. V., Afanas'ev, S. A., Popov, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+isolation+of+cardiomyocytes+from+adult+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">A simple method for isolation of cardiomyocytes from adult rat heart.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 140 (3), 370-373 (2005).</li>
<li>Kohncke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Kv+channel+recordings+in+murine+atrial+and+ventricular+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Kv channel recordings in murine atrial and ventricular cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50145(2013).</li>
<li>Wagner, E., Brandenburg, S., Kohl, T., Lehnart, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+tubular+membrane+networks+in+cardiac+myocytes+from+atria+and+ventricles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Analysis of tubular membrane networks in cardiac myocytes from atria and ventricles.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e51823(2014).</li>
<li>Hohendanner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+metabolic+syndrome-related+atrial+decompensation+in+a+rat+model+of+HFpEF%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of metabolic syndrome-related atrial decompensation in a rat model of HFpEF.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 115, 10-19 (2017).</li>
<li>Seluanov, A., Vaidya, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+primary+adult+fibroblast+cultures+from+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Establishing primary adult fibroblast cultures from rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (44), e2033(2010).</li>
<li>Bootman, M. D., Higazi, D. R., Coombes, S., Roderick, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signalling+during+excitation-contraction+coupling+in+mammalian+atrial+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Calcium signalling during excitation-contraction coupling in mammalian atrial myocytes.</a> Journal of Cell Science. 119 (Pt 19), 3915-3925 (2006).</li>
<li>Smyrnias, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+T-tubule+system+in+adult+rat+ventricular+and+atrial+myocytes%2C+and+its+role+in+excitation-contraction+coupling+and+inotropic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Comparison of the T-tubule system in adult rat ventricular and atrial myocytes, and its role in excitation-contraction coupling and inotropic stimulation.</a> Cell Calcium. 47 (3), 210-223 (2010).</li>
<li>Pritchett, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diastolic+dysfunction+and+left+atrial+volume%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Diastolic dysfunction and left atrial volume: a population-based study.</a> Journal of the American College of Cardiology. 45 (1), 87-92 (2005).</li>
<li>Linz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+A+mediates+susceptibility+to+atrial+tachyarrhythmia+and+impairment+of+atrial+emptying+function+in+Zucker+diabetic+fatty+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Cathepsin A mediates susceptibility to atrial tachyarrhythmia and impairment of atrial emptying function in Zucker diabetic fatty rats.</a> Cardiovascular Research. 110 (3), 371-380 (2016).</li>
<li>Ackers-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simplified%2C+Langendorff-Free+Method+for+Concomitant+Isolation+of+Viable+Cardiac+Myocytes+and+Nonmyocytes+From+the+Adult+Mouse+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A Simplified, Langendorff-Free Method for Concomitant Isolation of Viable Cardiac Myocytes and Nonmyocytes From the Adult Mouse Heart.</a> Circulation Research. 119 (8), 909-920 (2016).</li>
<li>Ramanathan, T., Skinner, H. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/bjaed/article-abstract/5/2/61/422091">Coronary blood flow.</a> Continuing Education in Anaesthesia Critical Care & Pain. 5 (2), 61-64 (2005).</li>
<li>Bond, M. D., Van Wart, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+individual+collagenases+from+Clostridium+histolyticum%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of the individual collagenases from Clostridium histolyticum.</a> Biochemistry. 23 (13), 3085-3091 (1984).</li>
<li>Deel, E. D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28485491">In vitro model to study the effects of matrix stiffening on Ca(2+) handling and myofilament function in isolated adult rat cardiomyocytes.</a> The Journal of Physiology. 595 (14), 4597-4610 (2017).</li>
<li>Wuensch, E., Heidrich, H. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14058277">[On the Quantitative Determination of Collagenase].</a> Hoppe-Seyler's Zeitschrift für physiologische Chemie. 333, 149-151 (1963).</li>
<li>Conceicao, G., Heinonen, I., Lourenco, A. P., Duncker, D. J., Falcao-Pires, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Netherlands+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Animal models of heart failure with preserved ejection fraction.</a> Netherlands Heart Journal. 24 (4), 275-286 (2016).</li>
<li>Horgan, S., Watson, C., Glezeva, N., Baugh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+diastolic+dysfunction+and+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Murine models of diastolic dysfunction and heart failure with preserved ejection fraction.</a> Journal of Cardiac Failure. 20 (12), 984-995 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hier, we voor het eerst beschreven een protocol voor de isolatie van eencellige ACMs van een rat model van MetS-gerelateerde HFpEF die toont atriale remodelleert22gemarkeerd. De procedure is een unieke uitdaging als overmatig vetweefsel de chirurgische voorbereiding, evenals de cannulation van de aorta, steeds moeilijker maken kan. De gids voor probleemoplossing gegeven in tabel 2 adressen de meest voorkomende problemen van de isolatie-procedure.
<table border="1" fo:keep-toge...

MetS b eschrijving van een cluster van risicofactoren voor diabetes mellitus type 2 en hart-en vaatziekten en een verhoogde arteriële bloeddruk, dyslipidemia (triglyceriden verhoogd en verlaagd van high-density lipoprotein cholesterol), verhoogd vasten glucose en centrale obesitas1. De wereldwijde prevalentie van MetS wordt geschat op 25-30% en de voortdurend stijgende2. HFpEF is een heterogene klinisch syndroom vaak geassocieerd met MetS. De cardiale remodelleren tijdens HFpEF en de voorafgaande fasen (d.w.z., Hypertensieve hartziekte) gaat ook gepaard met een verbouwing van de atria3. Verminderde contractiele functie en structurele veranderingen in de linkerboezem zijn geassocieerd met verhoogde mortaliteit, boezemfibrilleren en nieuwe-onset hartfalen4. Atriale remodelleren wordt gekenmerkt door veranderingen in het ion kanaal functie, Ca2 + homeostase, atriale structuur, fibroblast activering en weefsel fibrose5. Links atriale remodelleren in MetS-gerelateerde HFpEF en de bijbehorende onderliggende pathologische mechanismen zijn nog slecht begrepen en een meer diepgaand onderzoek vereist is. Dierlijke modellen hebben bewezen een waardevol instrument zijn en leiden tot vele ontwikkelingen op het gebied van atriale hartziekten6,,7,,8,9.
Studies met geïsoleerde eencellige cardiomyocytes worden vaak gebruikt als aanvulling op de in vivo bevindingen te bevestigen. Een isolatie, en de mogelijke latere celcultuur, zorgen voor het onderzoek van signalering van trajecten, Ionische kanaal stromingen en excitatie-contractie-koppeling. Cardiomyocytes onder fysiologische omstandigheden, niet verspreiden. De fusie tussen de transcriptionele regulerende sequenties atrial natriuretic factor en een simian 40 grote T virusantigeen in transgene muizen leidde tot de oprichting van de eerste vereeuwigd ACMs, AT-110genoemd. De verdere ontwikkeling van de cellen van de AT-1 gaf aanleiding tot HL-1 cellen, die niet kunnen alleen serieel worden gepasseerd maar ook contract spontaan11. Ze vertonen echter structurele en functionele verschillen in vergelijking met vers geïsoleerde cellen, zoals een minder georganiseerde ultrastructuur, een hoge voorkomen van de ontwikkeling van myofibrils11, en een hyperpolarisatie-geactiveerde innerlijke huidige12. Het isolement van ventriculaire cardiomyocytes (VCM) bij ratten en muizen uit een verscheidenheid van modellen is goed ingeburgerd13,14,15,16,17,18 , 19. in het algemeen de verwijderde hart is gemonteerd op een Langendorff apparatuur en retrogradely met een Ca2 +geperfundeerd-gratis buffer met spijsverteringsenzymen, zoals collagenases en proteasen. Calcium is vervolgens opnieuw op een stapsgewijze manier aan de fysiologische omstandigheden. Hoewel de protocollen die zijn gewijd aan het isolement van ACMs zijn beschikbaar van20,21, als gevolg van de toegenomen fibrose en druk-gerelateerde verschillen, is hun nut in ziekte modellen met atriale remodelleren echter beperkt.
In dit artikel, hebben we een protocol voor de isolatie van atriale eencellige cardiomyocytes van dieren die atriale remodelleert (dat wil zeggen, in het bijzonder voor de ZFS1 rat model voor MetS-gerelateerde HFpEF)22 vertonenuitgevoerd. Bestaande protocollen van de isolatie waren geoptimaliseerd en aangevuld met een eenvoudige, op maat gemaakte apparaat om te controleren en wijzigen van de intraluminale druk van de cardiale Holten, wat leidt tot hogere opbrengsten van morfologisch en functioneel intact cardiomyocytes. Het volgende protocol biedt de onderzoeker met een stapsgewijze gids, een gedetailleerde beschrijving van de op maat gemaakte apparatuur, een lijst van oplossingen, evenals een uitgebreide gids voor probleemoplossing.

<table><tbody><tr><td>ZSF-1 Obese rat</td><td>Charles River Laboratories, Inc.</td><td></td><td>21 weken oud</td></tr><tr><td>Fine Iris Scissors</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>14001-18</td><td></td></tr><tr><td>Micro Dressing Forceps (gebogen, gekarteld)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>BD312R</td><td></td></tr><tr><td>Weefseltang (recht, 1 x 2 tanden)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>BD537R</td><td></td></tr><tr><td>Bindingtang (gehoekt)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>MA624R</td><td></td></tr><tr><td>Rodent en kleine dier guillotine</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>DCAP</td><td></td></tr><tr><td>Low Cost Inductiekamer 3,0 L</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>SOMNO-0730&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Butterfly Winged Infusion Set 21 G</td><td>Hospira, Inc.</td><td>181106101</td><td></td></tr><tr><td>Abbocath 16 G</td><td>Hospira, Inc.</td><td>0G7149702</td><td></td></tr><tr><td>Microlance Hypodermic Needle</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>301300</td><td>wijzig naald om canule te maken</td></tr><tr><td>Braun Original Perfusor Syringe 50 ml</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>8728810F</td><td></td></tr><tr><td>Braun Inject Solo Syringe 10 ml</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>2057926</td><td></td></tr><tr><td>Beaker 50ml</td><td>Duran Group (DWK Life Sciences GmbH)</td><td>21 106 17</td><td></td></tr><tr><td>Duroplan petrischaal (100 x 20 mm)</td><td>Duran Group (DWK Life Sciences GmbH)</td><td>21 755 48</td><td></td></tr><tr><td>Seraflex Suture USP 3/0</td><td>SERAG-WIESSNER GmbH &amp; Co. KG</td><td>IC208000</td><td></td></tr><tr><td>VWR wegwerp vierkante weegschaal 100ml</td><td>VWR, Inc.</td><td>10803-148</td><td></td></tr><tr><td>Styrofoam oppervlak</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Natriumchloride</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>71380</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchloride</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>P4504</td><td></td></tr><tr><td>Monobasisch kaliumfosfaat</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>P5379</td><td></td></tr><tr><td>Dibasisch natriumfosfaat</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumsulfaat heptahydraat</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>230391</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumchloride</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Taurine</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Butaneedion monoxime</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchloride oplossing (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>21115</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Roche (Sigma-Aldrich, Inc.)</td><td>LIBTM-RO</td><td></td></tr><tr><td>Heparine</td><td>Rotexmedica GmbH</td><td>3862357</td><td></td></tr><tr><td>Forene (Isoflurane)</td><td>Abbvie Deutschland GmbH &amp; Co. KG</td><td>10182054</td><td></td></tr><tr><td>Laminine uit Engelbreth-Holm-Swarm muis-sarcoombeslagmembraan</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>WillCo glasbodemschaal 500&micro;l 0,005mm</td><td>WillCo Wells B.V.</td><td>HBST-3522</td><td></td></tr><tr><td>Fluo4 AM</td><td>Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>F14201</td><td>5&micro;M gedurende 20 min bij RT</td></tr><tr><td>Di-8-ANNEPS</td><td>Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>D3167</td><td>10&micro;M gedurende 45 min bij 37&deg; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Mitotracker RED FM</td><td>Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>M22425</td><td>20nM gedurende 30 min bij 37&deg; C</td></tr><tr><td>Jacketed reactievat 500 ml</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>107024414</td><td></td></tr><tr><td>Jacketed reactievat 1000 ml</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>107025414</td><td></td></tr><tr><td>Jacketed bubble trap</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>134720001</td><td></td></tr><tr><td>ED verwarmingscirculator</td><td>Julabo GmbH</td><td>9116000</td><td></td></tr><tr><td>Reglo Digital MS-2/6 peristaltiekpomp</td><td>Ismatec (Cole-Parmer Gmbh)</td><td>ISM 831</td><td></td></tr><tr><td>Voltcraft Thermometer 302 K/J</td><td>Conrad Electronic SE</td><td>030300546</td><td></td></tr><tr><td>Slang</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSM 700 microscoop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ZEN 2.3 beeldvormingssoftware</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>410135-1011-240&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Single channel heater controller TC-324B</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-2400</td><td></td></tr><tr><td>8 kanaals perfusiesysteem</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-0185</td><td></td></tr><tr><td>8 kanaals Multi-Line In-Line oplossingsverwarmers</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-0105</td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie van atriale cardiomyocytes van een rat model van metabole syndroom-gerelateerde hartfalen met bewaarde ejectie fractie

Isolation of Atrial Cardiomyocytes from a Rat Model of Metabolic Syndrome-related Heart Failure with Preserved Ejection Fraction

In dit artikel beschrijven we een geoptimaliseerd, Langendorff gebaseerde procedure voor de isolatie van eencellige atriale cardiomyocytes (ACMs) van een rat model van metabool syndroom (MetS)-gerelateerde hartfalen met bewaarde ejectie fractie (HFpEF). De prevalentie van MetS-gerelateerde HFpEF stijgt en atriale hartziekten atriale remodelleren en boezemfibrilleren is gekoppeld zijn klinisch relevant als atriale remodelleren een onafhankelijke voorspeller voor mortaliteit is. Studies met geïsoleerde eencellige cardiomyocytes worden vaak gebruikt als aanvulling op de in vivo bevindingen te bevestigen. Bloedsomloop vaartuig rarefication en interstitiële weefsel fibrose vormen een potentieel beperkende factor voor de succesvolle eencellige isolatie van ACMs uit dierlijke modellen van deze ziekte.
Wij hebben deze kwestie behandeld door gebruik te maken van een apparaat staat handmatig het reguleren van de intraluminale druk van cardiale Holten tijdens de procedure van de isolatie, de opbrengst van morfologisch en functioneel intact ACMs aanzienlijk te verhogen. De verworven cellen kunnen worden gebruikt in een verscheidenheid van verschillende experimenten, zoals de celcultuur en functionele beeldvorming van de Calcium (d.w.z., excitatie-contractie-koppeling).
Wij bieden de onderzoeker met een stapsgewijze protocol, een lijst van geoptimaliseerde oplossingen, grondige instructies ter voorbereiding van de nodige apparatuur en een uitgebreide gids voor probleemoplossing. Terwijl de eerste uitvoering van de procedure zou nogal moeilijk zijn, kan een succesvolle aanpassing de lezer voor het uitvoeren van state-of-the-art ACM isolatie in een rat model van MetS-gerelateerde HFpEF voor een breed spectrum van experimenten.

Op 21 weken leeftijd, kunnen 60-90% van levensvatbare ACMs (geschat zoals beschreven in stap 6.1), na de kalk opnieuw aanpassing (stap 5.4 – 5.7), worden geïsoleerd uit ZSF-1 zwaarlijvige ratten door deze methode (figuur 4A). Bij ratten, worden ACMs gekenmerkt door een andere en meer heterogene fenotype t.o.v. VCMs24,25. Figuur 4B toont een individuele ACM met bewaarde me...

Hier beschrijven we een geoptimaliseerd, Langendorff gebaseerde procedure voor de isolatie van eencellige atriale cardiomyocytes van een rat model van metabole syndroom-gerelateerde hartfalen met bewaarde ejectie Fractie. Een handmatige regulering van de intraluminale druk van cardiale Holten is geïmplementeerd om de opbrengst van functioneel intact myocytes geschikt voor excitatie-contractie-koppeling studies.

Isolatie van atriale Cardiomyocytes van een Rat Model van metabole syndroom-gerelateerde hartfalen met bewaarde ejectie Fractie

In this article, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes (ACMs) from a rat model of ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van individuele cardiomyocytefunctie en maakt het mogelijk om excitatie-contractiekoppeling te bestuderen. Het grote voordeel van deze techniek is dat een hoog rendement van levensvatbare atriale cardiomyocyten uit harten met atriale cardiomyopathie kan worden geïsoleerd en gebruikt voor volgende experimenten. Begin door een canule met de lange, scherpe punt verwijderd op de top van het Langendorff-apparaat te plaatsen en de stroom te starten.Schakel het verwarmingsmodule in en pas aan zodat de perfusiebuffer aan de punt van de naald de gewenste temperatuur voor perfusie handhaaft. Zodra de temperatuurafstemming voltooid is, breng de canule over naar een 10 ml spuit gevuld met ijskoude canuleringsbuffer. Plaats twee klaargemaakte dubbele dubbele knopen over de canule voor snelle vervolgcanulering van de aorta.Verwijder het hart uit de geëuthanasieerde, heparine-geïnjecteerde rat door de basis van het hart met een pincet te knijpen en voorzichtig naar de staart van het dier te trekken. Snijd over de aorta terwijl u een trek op het hart houdt, waardoor een 5 mm lang segment van de aorta aan het hart ver

isolation-atrial-cardiomyocytes-from-rat-model-metabolic-syndrome

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Wij beschrijven de isolatie van menselijke atriale myocyten die kunnen worden gebruikt voor intracellulaire...

Isolatie van Human atriale Myocyten voor gelijktijdige metingen van Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Transients en Membraan Currents

Huidige kennis over de cellulaire basis van hartziektes vertrouwt vooral op studies op diermodellen. Hier beschrijven we en validatie van een nieuwe methode om enkele levensvatbare hartspiercellen te verkrijgen van kleine chirurgische monsters van menselijk ventriculair myocard. Menselijke hartspiercellen en kan worden gebruikt voor elektrofysiologische studies en drugstesten.

Isolatie en functionele karakterisering van Human ventriculaire cardiomyocyten van Fresh Chirurgische Samples

Verscheidene protocollen zijn ontwikkeld en beschreven voor de isolatie van verschillende hartcel typen uit een rat hart. Hier wordt een geoptimaliseerd protocol beschreven dat de isolatie van hoge kwaliteit grote hartcellen (cardiomyocyten, endotheelcellen en fibroblasten) van een enkel preparaat mogelijk maakt, waardoor de experimentele kosten worden verminderd.

Gelijktijdige isolatie van hoogwaardige cardiomyocyten, endothelcellen en fibroblasten uit een volwassen rat hart

Dit protocol wordt gebruikt om enkelvoudige atriale cardiomyocyten van het volwassen muis hart te isoleren met behulp van een Brok digestie benadering. Deze aanpak wordt gebruikt om te isoleren van rechts of links atriale myocyten die kunnen worden gebruikt voor het karakteriseren van Atrium myocyten elektrofysiologie in Patch-clamp studies.

Isolatie van atriale Myocyten van volwassen muizen

Gepresenteerd is een protocol voor de isolatie van menselijke en dierlijke ventriculaire cardiomyocyten van vibratome-cut myocardische plakjes. Hoge opbrengsten van calciumtolerante cellen (tot 200 cellen/mg) kunnen worden verkregen uit kleine hoeveelheden weefsel (&lt;50 mg). Het protocol is van toepassing op myocardium dat tot 36 uur aan koude ischemie wordt blootgesteld.

Isolatie van human ventriculaire cardiomyocyten van Vibratome-Cut Myocardial Slices

Een methode wordt beschreven voor de gelijktijdige isolatie van myocyten en niet-myocyten van zowel de atria als ventrikels van een enkel volwassen muizenhart. Dit protocol resulteert in consistente opbrengsten van zeer levensvatbare cardiale myocyten en niet-myocyten en beschrijft optimale celspecifieke kweekomstandigheden voor fenotyping en in vitro analyse.

Gelijktijdige isolatie en cultuur van atriale myocyten, ventriculaire myocyten en niet-myocyten uit een volwassen muizenhart

We ontwikkelden een simple-methode voor het isoleren van hoogwaardige individuele muishartcellen door de antegrade perfusietechniek. Deze methode is Langendorff-vrij en nuttig voor het isoleren van ventriculaire en atriale myocyten of interstitiële cellen, zoals hartfibroseblasten of voorlopers.

Een Antegrade Perfusie methode voor Cardiomyocyt isolatie van muizen

Muismodellen maken het mogelijk om belangrijke mechanismen van aritmogenese te bestuderen. Voor dit doel zijn cardiomyocyten van hoge kwaliteit nodig om patchklemmetingen uit te voeren. Hier wordt een methode beschreven om murine atriale en ventriculaire myocyten te isoleren via retrograde enzymgebaseerde Langendorff-perfusie, die gelijktijdige metingen van calciumtransiënten en L-type calciumstroom mogelijk maakt.

Isolatie van hoogwaardige murine atriale en ventriculaire myocyten voor gelijktijdige metingen van Ca2+ transiënten en L-type calciumstroom

Dit protocol beschrijft modificaties van de Langendorff-methode, waaronder de diepte van aorta-cannulatie voor gelijktijdige isolatie van atriale en ventriculaire myocyten van volwassen muizen.

Modificaties van de Langendorff-methode voor gelijktijdige isolatie van atriale en ventriculaire myocyten van volwassen muizen

De gouden standaard in de cardiologie voor cellulaire en moleculaire functionele experimenten zijn cardiomyocyten. Dit artikel beschrijft aanpassingen aan de niet-Langendorff-techniek om cardiomyocyten bij muizen te isoleren.

Een eenvoudige en effectieve methode om cardiomyocyten van muizen consequent te isoleren

Leer een geoptimaliseerde Langendorff-methode voor de isolatie van atriale cardiomyocyten uit een rattenmodel van metabool syndroom-gerelateerd hartfalen. Deze techniek levert een hoge opbrengst van levensvatbare cellen voor excitatie-contractie-koppelingsonderzoek.

Isolatie van atriale Cardiomyocytes van een Rat Model van metabole syndroom-gerelateerde hartfalen met bewaarde ejectie Fractie

Meer video's verkennen