Name: Keuze en nee-keuze Bioassays te bestuderen de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van Ectropis grisescens (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Leer keuze- en nee-keuze bioassays om de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van Ectropis grisescens te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers de ecologie van deze theerups te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij bedanken Yuzhen Wen, Shiping Liang Shengzhe Jian en Li Yanjun (College van bosbouw en landschapsarchitectuur, Zuid-China Agricultural University) voor hun hulp bij de insecten kweek en experimentele opstelling. Dit werk werd gefinancierd door het National Natural Science Foundation of China (Grant nr. 31600516), de Guangdong Natural Science Foundation (Grant No. 2016A030310445), en de wetenschap en de technologie Planning Project van de provincie Guangdong (Grant No. 2015A020208010) .

1. vocht-keuze Bioassays verpopt de voorkeur bepalen van E. grisescens
<ol><li>
Verkrijgen van volwassen laatste-instar-larven van E. grisescens
	<ol>
<li>Gesneden verse scheuten (30-40 cm in lengte) van planten van de thee (Camellia sinensis L.). 25-30 scheuten invoegen in een driehoekige kolf van 250 mL. Vul de maatkolf met leidingwater. 3-4 kolven (met thee scheuten) zet in een kunststof bekken (bovenzijde: 51 cm diameter; onderzijde: diameter 40 cm, hoogte: 16 cm).</li>
		<li>Vrijgeven van 1000 en 2000 larven (tweede tot en met vijfde instar) van de kolonie van de laboratorium van E. grisescens op de bladeren van de scheuten van de thee in elk bekken. Handhaven van deze larven aan gecontroleerde laboratoriumomstandigheden [een fotoperiode van 14 h van licht gevolgd door 10 h van dark (14:10 L:D), 60-90% relatieve vochtigheid (RH) en 24-28 ° C]. Zorgvuldig overbrengen de larven op verse bladeren met de hand elke 1-2 d. Elke dag ontlasting en puin verwijderen vanaf de onderkant van de bekkens.</li>
		<li>Selecteer volwassen laatste-instar-larven die vallen van de bladeren van de thee scheuten en actief wandelen op de bodem van het bekken. Het verkrijgen van ten minste 240 volwassen larven om ervoor te zorgen dat voldoende larven beschikbaar voor de bioassays zijn. Opmerking: Selecteer alleen actief dolende larven voor de experimenten. Selecteer larven die op de bladeren blijven, niet omdat deze zijn niet klaar om te verpoppen. Ook, selecteer niet prepupae met beperkte mobiele activiteiten omdat zij niet actief naar de juiste voorwaarden zoeken zal na wordt vrijgegeven in de bioassay arena's.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van de ondergrond
	<ol>
<li>Verzamelen en 4 soorten substraat te identificeren (bijvoorbeeldzand, zandige leem 1, zandige leem 2 en silt leem) met behulp van de methode hydrometer20. Steriliseren van de bodem en het zand op een föhn voor > 3 d 80 ° C-oven en vervolgens volledig droge bodem en het zand bij 50 ° C gedurende enkele weken totdat het drooggewicht van het substraat monsters niet meer na verloop van tijd verandert.</li>
		<li>Grond van de droge grond met houten pestles en mortieren. Het zand en de geaarde bodem stofdicht door een zeef van 3 mm en ze opslaan in afsluitbare plastic zakken.</li>
		<li>Bereken de inhoud van de verschillende vocht van elke ondergrond (zand, zandige leem 1, zandige leem 2 of silt leem) als volgt2: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58126/58126eq1.jpg">
</li>
		<li>Toevoegen van de vereiste hoeveelheid gedestilleerd water in de afsluitbare plastic zakken met de droge grond of zand te bereiden 5%-, 20%-, 35%-, 50% - 65%- en 80%-vocht substraat. Grondig Meng de gedestilleerd water en de bodem of zand.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bioassay arena voorbereiding
	<ol>
<li>Gelijkelijk verdelen de polypropyleen containers (bovenzijde: 20.0 cm lang x 13,5 cm breed, onderzijde: 17.0 cm in lengte x 10,0 cm in de breedte, hoogte: 6.5 cm) in 6 kamers met waterdichte PVC (polyvinylchloride) bladen (hoogte: 3,5 cm). De PVC-platen bevestigen en verzegel de inbreker met behulp van hete lijm. Opmerking: Volledig zegel ieder spleet om te voorkomen dat water permeatie.</li>
		<li>Voor elke test, vul de 6 kamers met behulp van dezelfde soort substraat met verschillende vocht inhoud (5%-, 20%-, 35%-, 50% - 65%- en 80%-vocht) (Figuur 1a). Opmerking: Gebruik alleen 1 soort substraat van verschillende vocht inhoud in elke test. Willekeurig toewijzen de volgorde van de kamers die het substraat met de 6 vocht inhoud bevatten.</li>
		<li>Plakken van 4-6 stukken van verse theebladeren met behulp van kleine stukjes tape ter dekking van de binnenzijde van de deksels van de polypropyleen containers (Figuur 1b).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58126/58126fig1.jpg"> Figuur 1: voorbeelden van bioassay arenas voor de keuze tests. (een) waterdicht PVC (polyvinylchloride) bladen worden gebruikt om even de polypropyleen containers te verdelen in 6 kamers. PVC-platen worden bevestigd met hete lijm, en ieder inbreker zorgvuldig zijn verzegeld. In dit voorbeeld, zandige leem 2 met verschillende vocht inhoud (5%, 20%, 35%, 50%, 65% en 80% vocht) worden gebruikt voor het vullen van de kamers in de willekeurig toegewezen orders. (b) verse thee bladeren worden geplakt op de binnenkant van de deksels waar de volwassen Ectropis grisescens larven zal worden vrijgegeven. (c) PVC platen worden gebruikt om even de polypropyleen containers te verdelen in 4 kamers, die zijn gevuld met 4 soorten ondergronden (zand, zandige leem 1, zandige leem 2 en silt leem) op 50% vocht. Dit cijfer is gewijzigd van Wang et al. 11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58126/58126fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<ol start="4"><li>
De instelling van de bioassay en opname van de gegevens
	<ol>
<li>Vrij 30 volwassen laatste instar larven (verkregen in stap 1.1.3) op de verse theeblaadjes geplakt op het deksel van de container van polypropyleen. Zorgvuldig omvallen het deksel en strak dekken de polypropyleen container.</li>
		<li>Herhaal elke test 8 x. Handhaven van de bioassay arena's in de omgeving van een milieu kamer op een 14:10 (L:D) fotoperiode en 26 ° C.</li>
		<li>Op dag 5, het aantal poppen op het oppervlak van de bodem in elke kamer. Ook de bioassays ontmantelen en Tel het aantal poppen in het substraat. Opmerking: Tellen alleen de levende poppen op of in het substraat. Controleer de levensvatbaarheid van de poppen door het observeren van abdominale bewegingen na het aanraken van de poppen met pincet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Data-analyses
	<ol>
<li>Voor elke test, bereken het percentage van poppen die gevonden in elke kamer van elke repliceren. Het percentage gegevens overbrengen naar de log-verhouding met behulp van de methode geboden door Kucera en Malmgren21.</li>
		<li>Vergelijk het percentage van de poppen (getransformeerde gegevens) in elke kamer met behulp van een one-way variantieanalyse (ANOVA). De betekenis niveaus vastgesteldop α = 0,05 voor elke test.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. substraat-keuze Bioassays om te bepalen van de voorkeur van de verpopt van E. grisescens
<ol><li>Herhaal stap 1.1 voor volwassen laatste-instar-larven en stap 1.2 ter voorbereiding van de ondergrond met verschillende vocht inhoud. Ditmaal, slechts 20%, 50% en 80%-vocht substraat nodig zijn.</li>
	<li>
Voorbereiding van de bioassay arena 's
	<ol>
<li>Vergelijkbaar met de stap van 1.3.1, even de polypropyleen containers te verdelen in 4 kamers met PVC vellen. De PVC-platen bevestigen en verzegel de inbreker met behulp van hete lijm.</li>
		<li>Voor elke test, de kamers te vullen met de 4 soorten ondergronden (zand, zandige leem 1, zandige leem 2 en silt leem) die de zelfde vochtgehalte (20%, 50% of 80% vocht) met willekeurig hebben toegewezen bestellingen (Figuur 1 c). Herhaal stap 1.3.3 te bereiden de deksels.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Herhaal stap 1.4 instellen de bioassays en opnemen van de gegevens en stap 1.5 om de gegevens te analyseren.</li>
</ol>3. nee-keuze Bioassays om te bepalen van de bodem-gravende gedrag en het succes van de opkomst van E. grisescens
<ol><li>Herhaal stap 1.1 te verkrijgen van de volwassen laatste-instar-larven en stap 1.2 ter voorbereiding van de 4 substraten (zand, zandige leem 1, zandige leem 2 en silt leem) 3 vocht inhoud (20%, 50% en 80% vocht).</li>
	<li>
Bioassay instelling
	<ol>
<li>Voeg het substraat in een plastic container (bovenzijde: 11,5 cm diameter; onderzijde: diameter 8,5 cm; hoogte: 6.5 cm) tot een diepte van 3 cm. In totaal, zorgt ervoor dat er 12 behandelingen (de combinaties van 4 substraat typen en 3 vocht inhoud). Herhaal elke behandeling 7 x.</li>
		<li>Vrij 15 volwassen laatste-instar-larven op het substraat van elke bioassay-arena. Het zegel van de containers door te strak bedekken de deksels. Handhaven van de bioassays in de omgeving van een milieu kamer op een 14:10 (L:D) fotoperiode en 26 ° C. Opmerking: Zal er geen behoefte om te plakken verse theeblaadjes op de deksels zoals vermeld in de bioassays keuze.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Opname van de gegevens en analyses
	<ol>
<li>Op dag 3, het aantal poppen en eventuele dode larven op het oppervlak van het substraat van elke repliceren. Bereken het percentage van E. grisescens personen die in het substraat als volgt nestelden: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58126/58126eq2.jpg">
</li>
		<li>Registreren van het aantal opkomende volwassenen elke dag totdat niet meer volwassene ontstaan voor 15 d. de opkomst succes als volgt berekenen: <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/58126/58126eq3v2.jpg">
</li>
		<li>Vergelijk het percentage nestelden individuen en het succes van de opkomst onder de behandelingen met one-way ANOVA. De betekenis niveaus vastgesteldop α = 0,05.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Dimou, I., Koutsikopoulos, C., Economopoulos, A. P., Lykakis, J. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1046/j.1439-0418.2003.00686.x">Depth of pupation of the wild olive fruit fly, Bactrocera (Dacus) oleae (Gmel.) (Dipt., Tephritidae), as affected by soil abiotic factors.</a> Journal of Applied Entomology. 127 (1), 12-17 (2003).</li>
<li>Chen, M., Shelton, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+soil+type%2C+moisture%2C+and+depth+on+swede+midge+%28Diptera%3A+Cecidomyiidae%29+pupation+and+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Entomology%22%5BJournal%5D)">Impact of soil type, moisture, and depth on swede midge (Diptera: Cecidomyiidae) pupation and emergence.</a> Environmental Entomology. 36 (6), 1349-1355 (2007).</li>
<li>Holmes, L. A., Vanlaerhoven, S. L., Tomberlin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate+effects+on+pupation+and+adult+emergence+of+Hermetia+illucens+%28Diptera%3A+Stratiomyidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Entomology%22%5BJournal%5D)">Substrate effects on pupation and adult emergence of Hermetia illucens (Diptera: Stratiomyidae).</a> Environmental Entomology. 42 (2), 370-374 (2013).</li>
<li>Renkema, J. M., Cutler, G. C., Lynch, D. H., MacKenzie, K., Walde, S. J. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10340-011-0365-2">Mulch type and moisture level affect pupation depth of Rhagoletis mendax Curran (Diptera: Tephritidae) in the laboratory.</a> Journal of Pest Science. 84 (3), 281(2011).</li>
<li>Ellis, J. D. Jr, Hepburn, R., Luckman, B., Elzen, P. J. <a target="_blank" href="http://www.bioone.org/doi/abs/10.1603/0046-225X-33.4.794">Effects of soil type, moisture, and density on pupation success of Aethina tumida (Coleoptera: Nitidulidae).</a> Environmental Entomology. 33 (4), 794-798 (2004).</li>
<li>Pietrantuono, A. L., Enriquez, A. S., Fernández-Arhex, V., Bruzzone, O. A. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10905-015-9499-z">Substrates preference for pupation on sawfly Notofenusa surosa (Hymenoptera: Tenthredinidae).</a> Journal of Insect Behavior. 28 (3), 257-267 (2015).</li>
<li>Buitenhuis, R., Shipp, J. L. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/j.1439-0418.2007.01250.x">Influence of plant species and plant growth stage on Frankliniella occidentalis pupation behaviour in greenhouse ornamentals.</a> Journal of Applied Entomology. 132 (1), 86-88 (2008).</li>
<li>Zheng, X. L., Cong, X. P., Wang, X. P., Lei, C. L. <a target="_blank" href="http://www.bulletinofinsectology.org/pdfarticles/vol64-2011-209-214zheng.pdf">Pupation behaviour, depth, and site of Spodoptera exigua.</a> Bulletin of Insectology. 64 (2), 209-214 (2011).</li>
<li>Wen, Y., et al. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10905-016-9572-2">Effect of substrate type and moisture on pupation and emergence of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae): choice and no-choice studies.</a> Journal of Insect Behavior. 29 (4), 473-489 (2016).</li>
<li>Wen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.bioone.org/doi/abs/10.18474/JES16-12PT.1">Soil moisture effects on pupation behavior, physiology, and morphology of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae).</a> Journal of Entomological Science. 52 (3), 229-238 (2017).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pupation+behaviors+and+emergence+successes+of+Ectropis+grisescens+%28Lepidoptera%3A+Geometridae%29+in+response+to+different+substrate+types+and+moisture+contents%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Entomology%22%5BJournal%5D)">Pupation behaviors and emergence successes of Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) in response to different substrate types and moisture contents.</a> Environmental Entomology. 46 (6), 1365-1373 (2017).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1226861518300797">No-substrate and low-moisture conditions during pupating adversely affect Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) adults.</a> Journal of Asia-Pacific Entomology. 21 (2), 657-662 (2018).</li>
<li>Ge, C. M., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. Biological characteristics of Ectropis grisescens Warren. Acta Agriculturae Zhejiangensis. 28 (3), 464-468 (2016).</li>
<li>Xi, Y., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. <a target="_blank" href="http://www.insect.org.cn/EN/abstract/abstract13974.shtml">Geographic populations of the tea geometrid, Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae) in Zhejiang, eastern China have differentiated into different species.</a> Acta Entomologica Sinica. 57, 1117-1122 (2014).</li>
<li>Zhang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+deep+divergence+in+seventeen+populations+of+tea+geometrid+%28Ectropis+obliqua+Prout%29+in+China+by+COI+mtDNA+and+cross-breeding%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Detecting deep divergence in seventeen populations of tea geometrid (Ectropis obliqua Prout) in China by COI mtDNA and cross-breeding.</a> PloS One. 9 (6), e99373(2014).</li>
<li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acs.jafc.6b00339">Analysis of tea geometrid (Ectropis grisescens) pheromone gland extracts using GC-EAD and GC× GC/TOFMS.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 64 (16), 3161-3166 (2016).</li>
<li>Zhang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetrical+reproductive+interference+between+two+sibling+species+of+tea+looper%3A+Ectropis+grisescens+and+Ectropis+obliqua%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Asymmetrical reproductive interference between two sibling species of tea looper: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua.</a> Bulletin of Entomological Research. , (2016).</li>
<li>Luo, Z. X., Li, Z. Q., Cai, X. M., Bian, L., Chen, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+premating+isolation+between+two+sibling+moths%3A+Ectropis+grisescens+and+Ectropis+obliqua+%28Lepidoptera%3A+Geometridae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">Evidence of premating isolation between two sibling moths: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae).</a> Journal of Economic Entomology. 110 (6), 2364-2370 (2017).</li>
<li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemosensory+gene+families+in+Ectropis+grisescens+and+candidates+for+detection+of+Type-II+sex+pheromones%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Chemosensory gene families in Ectropis grisescens and candidates for detection of Type-II sex pheromones.</a> Frontiers in Physiology. 8, article no: 953 (2017).</li>
<li>Chen, L. Q. Research on structure of soil particle by hydrometer method. Environmental Science Survey. 29 (4), 97-99 (2010).</li>
<li>Kucera, M., Malmgren, B. A. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/228645955_Logratio_transformation_of_compositional_data-a_resolution_of_the_constant_sum_constraint">Logratio transformation of compositional data: a resolution of the constant sum constraint.</a> Marine Micropaleontology. 34 (1-2), 117-120 (1998).</li>
<li>Hulthen, A. D., Clarke, A. R. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/j.1440-6055.2006.00518.x">The influence of soil type and moisture on pupal survival of Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae).</a> Australian Journal of Entomology. 45 (1), 16-19 (2006).</li>
<li>Alyokhin, A. V., Mille, C., Messing, R. H., Duan, J. J. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1023/A:1007849629409">Selection of pupation habitats by oriental fruit fly larvae in the laboratory.</a> Journal of Insect Behavior. 14 (1), 57-67 (2001).</li>
<li>Torres-Muros, L., Hódar, J. A., Zamora, R. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/afe.12188">Effect of habitat type and soil moisture on pupal stage of a Mediterranean forest pest (Thaumetopoea pityocampa).</a> Agricultural and Forest Entomology. 19 (2), 130-138 (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een paar plagen6,9,22,23zijn verpopt voorkeuren reageren op verschillende bodem variabelen bestudeerd. Bijvoorbeeld om te studeren van de voorkeur van volwassen larven van Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae) onder verschillende bodemgesteldheid vocht, Hulthen en Clarke22 decorontwerp een 3 x 3 Latijn-plein met 9 containers gevuld met bodem bij 0%...

Vergeleken met de larvale en volwassen stadia van insecten, is het popstadium zeer kwetsbaar als gevolg van het beperkte mobiele vermogen van poppen, die niet snel aan gevaarlijke situaties ontsnappen. Verpoppen onder de grond is een gemeenschappelijke strategie gebruikt door diverse groepen van insecten (b.v.in de orders Diptera1,2,3,4, Coleoptera5, Hymenoptera (Vliesvleugeligen)6, Thysanoptera7en Lepidoptera8,9,10,11,12) om hen te beschermen tegen bovengrondse roofdieren en milieurisico's. Velen van hen zijn ernstige land- en bosbouw plagen1,2,3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12. De volgroeide larven van deze insecten bodem-verpoppen meestal verlaten hun gastheren, vallen op de grond, dwalen om een goede website vinden plaatsen ingraven in de bodem en een pop kamer voor verpoppen8,10te construeren.
De thee looper, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: Geometridae, de spanners), is een van de meest significante ontbladeraar plagen van de thee plant Camellia sinensis L.13. Hoewel deze soort voor het eerst in 1894 beschreven werd, het is ten onrechte geïdentificeerd als Ectropis obliqua Prout (Lepidoptera: Geometridae, de spanners) in het verleden decennia14,15. De verschillen in morfologie, biologie en geografische spreiding tussen de twee tweelingsoorten zijn beschreven in sommige recente studies14,15,16. Bijvoorbeeld, Zhang et al. 15 gemeld dat E. schuine voornamelijk op de grenzen van drie provincies (Anhui, Jiangsu en Zhejiang) in China plaatsgevonden, terwijl E. grisescens een veel bredere distributie in vergelijking heeft met E. oblique. Daarom de economische verliezen veroorzaakt door E. grisescens zijn grotendeels over het hoofd gezien, en de kennis van deze plaag moet uitvoerig worden herzien en vernieuwd16,17,18,19 . Onze eerdere studies is gebleken dat E. grisescens liever verpoppen in de grond maar ook wanneer de bodem is niet beschikbaar (neen-verpopt-substraatomstandigheden)11,12kunnen verpoppen.
Dit artikel bevat een stapsgewijze procedure om (1) het bepalen van de voorkeur van de verpopt van E. grisescens in reactie op factoren zoals substraat type en vocht inhoud met behulp van de multiple-choice bioassays en (2) het bepalen van de invloed van abiotische factoren op de verpopt gedrag en het succes van de opkomst van E. grisescens met behulp van bioassays nee-keuze. Alle in deze bioassays zijn uitgevoerd onder goed gecontroleerde laboratoriumomstandigheden. Ook worden deze bioassays aangepast om de invloed van andere factoren op de verpopt gedrag en nabestaanden van uiteenlopende bodem-verpoppen insecten te evalueren.

<table><tbody><tr><td>Driehoekige fles</td><td>Bomex Chemical (Shanghai) Co., LTD</td><td>99</td><td>250 mL</td></tr><tr><td>Kunststof wasbak</td><td>Chahua, Fuzhou, China</td><td>100</td><td>bovenzijde: 51 cm in diameter; onderzijde: 40 cm in diameter; hoogte: 16 cm</td></tr><tr><td>Zippy-lock zakjes</td><td>Glad, Guangzhou, China</td><td>126/133</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen containers</td><td>Youyou Plastic Factory, Taian, China</td><td>139/155/160/161/190</td><td>bovenzijde: 20,0 cm [L] &times; 13,5 cm [B], onderzijde: 17,0 cm [L] &times; 10,0 cm [B], hoogte: 6,5 cm</td></tr><tr><td>Waterdichte polyvinylchloride plaat</td><td>Yidimei, Shanghai, China</td><td>141</td><td></td></tr><tr><td>Lint</td><td>V-tech, Guangzhou, China</td><td>VT-710</td><td></td></tr><tr><td>Oven droger</td><td>Kexi, Shanghai, China</td><td>KXH-202-3A</td><td></td></tr><tr><td>Milieukamer</td><td>Life Apparatus, Ningbo, China</td><td>PSX-280H</td><td></td></tr></tbody></table>

keuze en nee-keuze bioassays te bestuderen de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van ectropis grisescens

Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

Veel insecten als larven en volwassenen boven de grond leven en verpoppen als onder de grond. Vergeleken met de bovengrondse fasen van hun levenscyclus, is minder aandacht betaald op hoe milieu factoren van invloed op deze insecten wanneer ze in de grond verpoppen. De thee looper, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: Geometridae, de spanners), is een ernstige plaag van thee planten en heeft geleid tot enorme economische verliezen in Zuid-China. De protocollen beschreven hier willen onderzoeken, door middel van multiple-choice bioassays, of oudere laatste-instar E. grisescens larven kunnen discrimineren bodem variabelen zoals de substraat-type en vocht-inhoud, en bepalen, via neen-keuze bioassays, de impact van het substraat type en vocht gehalte op verpopt gedrag en het succes van de opkomst van E. grisescens. De resultaten zou het begrip van de ecologie van de verpopt van E. grisescens verbeteren en inzichten in bodembeheer tactieken voor het onderdrukken van E. grisescens populaties kunnen brengen. Daarnaast kunnen deze bioassays worden gewijzigd om te bestuderen van de invloed van verschillende factoren op de verpopt gedrag en nabestaanden van bodem-verpoppen plagen.

De vocht-keuze bioassays bleek dat aanzienlijk meer E. grisescens personen pupated op of binnen de 5% en 35% vocht zand ten opzichte van de 80%-vocht zand (Figuur 2a). Echter aanzienlijk meer individuen de voorkeur gegeven om te verpoppen op of in de bodem (zandige leem 1 en 2 en slib leem) die had een tussenliggende vochtgehalte (cijfers 2b - 2d).
<img alt...

Hier presenteren we een protocol voor het onderzoek naar de voorkeur van de verpopt van volwassen larven van Ectropis grisescens in reactie op de bodem factoren (e.g., substraat type en vocht inhoud) met behulp van bioassays keuze. Wij presenteren ook een protocol van neen-keuze bioassays om te bepalen van de factoren die invloed hebben op het gedrag van de verpopt en nabestaanden van E. grisescens.

Keuze en nee-keuze Bioassays te bestuderen de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van Ectropis grisescens

Many insects live above the ground as larvae and adults and as pupate below the ground. Compared to the above-ground stages of their life cycles, less ...

Deze methode kan belangrijke informatie met betrekking tot de verpopting ecologie van theeblad rupsen, Ectropis grisescens, zoals hun verpoppen gedrag en de poppen overleven in reactie op verschillende omgevingsfactoren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek, het stelt u in staat om een eenvoudige methode te gebruiken, zoals het meten van de pupation voorkeur en opkomst succes van Ectropis grisescens. Om te beginnen, snijd verse scheuten van theeplanten.Vul vervolgens een driehoekige kolf van 250 milliliter met kraanwater en plaats de scheuten in de kolf. Breng drie tot vier kolven over in een plastic bassin. Laat vervolgens 1.000 tot 2.000 larven los uit een laboratoriumkolonie van E.grisescens op de bladeren van de theescheuten.Houd de larven in gecontroleerde laboratoriumomstandigheden. Verkrijg de volwassen, last-instar larven die vallen van de bladeren van de scheuten en actief dwalen langs de bodem van het bekken. Steriliseren grond en zand in een 80 graden Celsius ovendroger voor drie dagen.Droog dan zowel de grond als het zand op 50 graden Celsius voor enkele weken. De substraatmonsters worden voldoende gedroogd wanneer het gewicht na verloop van tijd niet verandert. Gebruik een houten stamper en mortel om de gedroogde grond te malen.Zeef vervolgens het zand en de grond door een drie millimeter zeef. Voeg de benodigde hoeveelheid gedestilleerd water toe aan de verzegelde zakken met de substraten en meng grondig. Gebruik vervolgens PVC-platen om polypropyleencontainers in zes gelijke kamers te verdelen.Bevestig de PVC-platen en verzegel de scheuren met hete lijm. Vul vervolgens de zes kamers met hetzelfde type substraat met een verschillend vochtgehalte. Gebruik kleine stukjes tape om vier tot zes stukken verse bladeren te plakken op het binnenoppervlak van het deksel van de polypropyleencontainer.Laat vervolgens 30 volwassen last-instar larven los op de bladeren geplakt op het deksel van de chambered container. Draai het deksel voorzichtig om en dek de container af. Onderhoud de bioassay arena in een milieukamer met een 14 tot 10 licht/donkere fotoperiode bij 26 graden Celsius.Tel op dag vijf het aantal poppen op het oppervlak van het substraat in elke kamer. Ontmantel de bioassay en tel het aantal poppen. Gebruik eerst PVC-platen om de polypropyleencontainers in vier kamers te verdelen.Bevestig en verzegel vervolgens de PVC-platen met hete lijm. Vul de kamers van de container met vier soorten substraat met hetzelfde vochtgehalte en willekeurig toegewezen orders. Gebruik vervolgens tape om verse theebladeren op het deksel te plakken voordat u deze op de container draait.Breng vervolgens larven over naar de bladeren en registreert en analyseert de gegevens zoals beschreven in het tekstprotocol. Na het bereiden van de 12 substraat vochtgehalte behandelingen, voeg het substraat aan plastic containers. Laat vervolgens 15 volwassen last-instar larven los in het substraat van elke arena.Onderhoud elk van de bioassay arena's in een milieukamer met een 14 tot 10 licht/donker fotoperiode bij 26 graden Celsius. Tel op dag drie het aantal poppen en dode larven op het oppervlak van het substraat van elke arena. Tot slot, noteer het aantal opkomende volwassenen elke dag tot er geen nieuwe volwassenen ontstaan voor 15 dagen.In dit protocol werden vocht- en substraatkeuzebioassays gebruikt om de verpoppende voorkeur van E.grisescens te bestuderen. De vochtkeuze bioassays toonde aan dat meer individuen verpoppen op of binnen de 5% en 35% vocht zand in vergelijking met de 80%vocht zand. Echter, aanzienlijk meer individuen de voorkeur aan verpoppen op of in de bodem met intermediair vochtgehalte.Substraat keuze bioassays bleek dat zand was het meest de voorkeur van E.grisescens onder 20% vochtcondities, en onder 80% vochtcondities. Er werd echter geen verpoppenvoorkeur gevonden bij de vier substraten onder 50% vochtcondities. Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van entomologie om de verpoppende ecologie van veel bodemverpoppende insecten te verkennen.

choice-no-choice-bioassays-to-study-pupation-preference-emergence

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Plant de weerstand tegen kauwen insect herbivoren kunnen worden getest op verschillende manieren. Hier hebben we laten zien hoe je set-up een keuze en een no-keuze-experiment met de modelplant Arabidopsis thaliana te identificeren weerstand tegen de plaagsoorten Pieris rapae.

Keuze en No-keuze Assays voor het testen van de weerstand van A. thaliana te kauwen Insecten

Dit artikel beschrijft een techniek om het puparium van een insect te verwijderen terwijl de binnenpop intact blijft en daarom geschikt is voor verder onderzoek. Het voorbeeldprotocol toont de procedure met Drosophila guttifera; deze techniek is echter van toepassing op andere Drosophila-soorten.

Insect Puparium verwijdering: een methode voor poponderzoek

Drosophila-vrouwtjes kiezen tussen substraten en selecteren locaties die aantrekkelijk zijn voor het leggen van eieren. Deze video beschrijft een gedragstest die hun besluitvorming test, de zogenaamde eierleggingsvoorkeurstest. De aanbevolen clip demonstreert de procedure met een op maat gemaakte opstelling, waarmee onderzoekers niet alleen het gedrag van veel vrouwen tegelijkertijd kunnen testen, maar ook compatibel zijn met video-opname en optogenetische opstellingen.

Drosophila Egg-Laying Preference Assay: een methode om besluitvorming bij vliegen te testen

C. elegans eierleggedrag kan belangrijke informatie bieden in ontwikkelings-, reproductieve en anatomische studies.  Deze video introduceert de belangrijke stappen van een eierlegtest en toont een monsterexperiment waarbij een medicijn wordt getest op reproductietoxiciteit.

Egg Laying Assay: Een methode om het eierleggedrag van C. elegans te kwantificeren

Een verticale, T-doolhof olfactometer beschreven voor het testen van de gedragsreactie van geleedpotigen. De olfactometer kan de experimentator om keuzes te maken die door proefpersonen te meten wanneer het wordt blootgesteld aan twee potentiële geur velden. Zowel aantrekking tot en afstoting van geurstoffen kan worden gemeten met dit apparaat.

Verticale T-doolhof Keuze Test voor geleedpotigen Reactie op odoranten

Dit protocol beschrijft een hoogdoorlaattest voor het testen van ei-legvoorkeuren van Drosophila melanogaster met een nauwkeurigheid per enkel dier. Deze test biedt een eenvoudige, efficiënte en schaalbare platform om genen en circuitonderdelen te identificeren die een eenvoudig besluitvormingsproces controleren.

High Throughput Assay to-eierleggende Voorkeuren van de individuele onderzoeken<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Effectieve vallen aantrekken en vangen van de emerald ash borer (EAB) een sleutelelement voor het opsporen en beheren van deze invasieve pest. Dubbeldekker vallen, geplaatst in de volle zon in de buurt van ash bomen, visuele en olfactorische aanwijzingen nemen en waren meer kans te vangen EAB dan andere val ontwerpen in veldproeven.

Dubbeldekker Traps voor vroegtijdige opsporing van Emerald Ash Borer bouwen

Hier presenteren we protocollen voor 1) het laboratorium in gevangenschap voortplanting van de federaal bedreigde Miami blauwe vlinder(Cyclargus thomasi bethunebakeri), en 2) de beoordeling van elementaire levensgeschiedenis informatie, zoals onvolwassen ontwikkelingstijd en het aantal larve stadia. Beide methoden kunnen worden aangepast voor gebruik met andere ex situ conserveringsprogramma's.

At-Risk Butterfly Captive propagatie programma's ter verbetering van life history kennis en effectieve Ex Situ Conservation Technieken

Hier wordt een protocol gepresenteerd van Helicoverpa armigera (Hübner) embryo micro-injectie en knock-out mutant identificatie gemaakt door CRISPR / Cas9 genoombewerking. Gemuteerde insecten maken verder onderzoek naar genfunctie en interactie tussen verschillende genen in vivo mogelijk.

Embryo Microinjectie en Knockout Mutant Identificatie van CRISPR/Cas9 Genome-Edited Helicoverpa Armigera (Hübner)

Hierin worden twee protocollen beschreven voor het beoordelen van voedselbron- en ovipositievoorkeuren bij larven en vrouwtjes van bromvliegen. Deze bestaan uit vier keuzes met twee factoren die op elkaar inwerken: het type substraat en de temperatuur. De testen maken het mogelijk om de voedselbronvoorkeur van de larven en de voorkeur voor de ovipositieplaats van de vrouwtjes te bepalen.

Onderzoek naar keuzes in de levensgeschiedenis: temperatuur en substraattype gebruiken als op elkaar inwerkende factoren voor voorkeuren van bromvlieglarven en vrouwtjes

Procedures worden beschreven voor het bestuderen van het sonderende en innamegedrag van Culex tarsalis muggen op menselijke handen met behulp van AC-DC elektropenetragrafie.

AC-DC Electropenetrografie voor de studie van sonderend en innamegedrag van Culex tarsalis muggen op mensenhanden

Leer keuze- en nee-keuze bioassays om de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van Ectropis grisescens te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers de ecologie van deze theerups te begrijpen.

Keuze en nee-keuze Bioassays te bestuderen de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van Ectropis grisescens

Meer video's verkennen