Protocol voor klinische adipeus weefsel afkomstige stromale vasculaire breuk oplevert potentiële regeneratie van het kraakbeen

Artrose is een van de meest voorkomende slopende aandoeningen onder de oudere bevolking. Op dit moment is er geen duidelijke remedie voor de onderliggende oorzaken van artrose. Dit klinische protocol beschrijft een innovatieve procedure voor een veelbelovende, minimaal invasieve, en alternatieve behandeling van menselijke knieartrose door het regenereren van kraakbeen zoals weefsel.

Artrose is een van de meest voorkomende slopende aandoeningen onder de oudere bevolking. Op dit moment is er geen duidelijke remedie voor de onderstrepende oorzaken van artrose. Dit klinische protocol is een innovatieve procedure voor een veelbelovende, minimaal invasieve, en alternatieve behandeling van menselijke knieartrose door het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel.

Breng de patiënt in een operatiekamer met een biohazard Klasse A kap, en plaats hem of haar in een supine positie. Reinig de buikstreek van de patiënt met 5%betadine-povidine jodium en drapeer de patiënt met behulp van de steriele techniek, waardoor het schone gebied van de buik voor liposuctie wordt bloot. Ongeveer vijf centimeter infero-lateraal van umbilicus, verdoven twee plaatsen, aan de linkerkant en andere aan de rechterkant van de umbilicus van incisie te maken.

Met behulp van twee milliliter van 2% lidocaïne zonder epinephrinum met een 25-gauge 1,5 inch naald in een vijf milliliter spuit door het injecteren van elke site op het epidermale niveau. Verdoven de plaats van incisie te maken met behulp van vijf milliliter van tumescent oplossing en 10 milliliter spuit en de naald 25-gauge 1,5 inch. Maak twee incisies van 0,5 centimeter ongeveer vijf centimeter onder de umbilicus lateraal door knijpen de huid om de diepte van het onderhuidse niveau te verhogen.

Met behulp van een nummer 11 mes, helpen de verhoogde huid door te dringen tot het onderhuidse niveau, maar niet door te dringen door de buikwand. Door het gebruik van 20 centimeter 60-gauge canule, verdoven het onderhuidse niveau van de hele onderbuik gebied dat moet worden liposuctie met 700 tot 800 milliliter van de tumescent oplossing. Na het beëindigen van infiltratie van de hele onderbuik met tumescente oplossing, bereid een liposuctie apparaat door het aansluiten van een 3,0 millimeter canule aangesloten op een 60 milliliter of 30 milliliter spuit voor handmatige liposuctie of speciaal ontworpen 3,0 millimeter canule aangesloten op een centrifuge kit.

Een gesloten systeem spuit ontwikkeld door onszelf en goedgekeurd door FDA CDRH met het oog op het houden van de steriliteit aangesloten op een vacuüm machine voor vacuüm bijgestaan liposuctie. Voer liposuctie uit om 100 tot 110 gram vetweefsel te verkrijgen, met uitzondering van tumescente oplossing. Bij het uitvoeren van liposuctie, vetweefsel zal worden verkregen samen met tumescent oplossing, maar moet worden gescheiden en verwijderd.

Om de tumescente oplossing eerst door de zwaartekracht te scheiden, kan het vetweefsel in de centrifugekit worden overgebracht naar een spuit van 60 milliliter en de spuit naar beneden plaatsen. Het openingsgedeelte van de spuit bevindt zich bijvoorbeeld onderaan. Door vijf tot zes minuten te wachten, worden het vetweefsel en de tumescentoplossing gescheiden.

Verwijder de vloeistof aan de onderkant van de spuit door op de bovenkant van de spuitzuiger te drukken. Voer de bovenstaande stappen negen tot 11 tot het totaal van de 100 gram tot 110 gram vetweefsel lipide aanzuigen per knie is opgehoopt. Na het scheiden van de tumescent oplossing door de zwaartekracht en accumuleren 50 gram tot 55 gram lipide aanzuigen per elke 60 milliliter centrifuge kit steriel gesloten systeem, plaats de twee centrifuge kits in een centrifuge container emmer en spin op 1600 G gedurende vijf minuten, condenseren de lipide aspiraat en het scheiden van vloeistof uit het vetweefsel.

Dit proces condenseert verder de lipide aanzuigen en kan produceren vette olie in bepaalde gevallen. Wees voorzichtig niet te schudden, verwijder de veiligheidsdop en de stekker aan de onderkant van de centrifuge kit. Verwijder de onderste vloeistof door langzaam naar beneden te duwen op de top van de zuiger van de centrifuge kit.

Los op afzonderlijke 60 milliliter spuit, los 10 milligram collagenase, vijf milligram collagenase specifiek voor bindweefsel, en vijf milligram collagenase specifiek voor vetweefsel met 50 milliliter van normale zoutoplossing. Meng ongeveer 25 tot 30 milliliter gecondenseerd lipide aanzuigen met opgeloste collagenase, vijf milligram collagenase specifiek voor bindweefsel, en vijf milligram collagenase specifiek voor vetweefsel bij een verhouding van een op een, volume in volume, door het aansluiten van de 60 milliliter spuit met een centrifuge kit met behulp van een gespecialiseerde connector. Meng grondig om de prep aanzuigen en collagenase te condenseren door het duwen van de inhoud tussen de 60 milliliter spuit en de centrifuge kit met behulp van een staaf of een pusher.

Breng het mengsel van de lipide aanzuigen en de collagenase terug naar de 60 milliliter spuit. Sluit elke 60 milliliter spuit met het mengsel met het weefsel homogenisator die messen bevat. Sluit een lege spuit van 60 milliliter aan de andere kant van de homogenisator aan.

Duw het mengsel naar de andere 60 milliliter spuit door de homogenisator voor vier tot zes keer, wat resulteert in het snijden en snijden van de lipide aanzuigen. Breng de gehomogeniseerde lipide aanzuigen en het collageenmengsel terug naar de 60 milliliter centrifugekit via een gespecialiseerde connector. Plaats de centrifugekits in een container die in een couveuse wordt geplaatst die voorverwarmd is bij 37 graden Celsius.

Incubeer de twee centrifugekits met het gehomogeniseerde mengsel bij 37 graden Celsius gedurende 40 minuten tijdens het draaien bij 45 rpm. Na 40 minuten incubatie, verwijder de container uit de couveuse in steriele wijze. Verwijder vervolgens de centrifugekits en plaats ze in een centrifugemachine.

Centrifugeren de mengsels op 800 G gedurende vijf minuten om het vetweefsel afgeleide SVF te scheiden. Na de centrifuge wordt de supernatant, die collagenase en verteerd vetweefsel bevat, uit elke centrifugekit verwijderd door de spuitdop bovenop de zuiger te verwijderen en een spuit van 30 milliliter op de zuiger te plaatsen die door een spuitslotverbinding opent. Druk langzaam naar beneden op het vat deel van de 30 milliliter spuit voor de supernatant te vullen in de 30 milliliter spuit.

Druk op de 30 milliliter spuit vat helemaal naar de laatste drie tot vier milliliter van de bodem van de centrifuge kit, waardoor alleen de laatste drie tot vier milliliter vetweefsel afgeleide SVF. De supernatant is weggooien. Verwijder de 30 milliliter spuit van de bovenkant van de zuiger en vul de spuit met 5% dextrose lactated ringer oplossing, ook bekend als D5LR.

Door het bevestigen van de 30 milliliter spuit gevuld met D5LR op de top van de zuiger opening, vul de centrifuge kits met drie tot vier milliliter vetweefsel afgeleide SVF met D5LR tot 55 milliliter. Verwijder vervolgens de 30 milliliter spuit, dop de zuiger opening, en centrifuge de centrifuge kits weer op 300 G voor ongeveer vier minuten. Herhaal stap 17 naar nummer 21 voor een totaal van vier wasbeurten.

Na de vierde centrifuge, om de laatste SVF voor injectie te verkrijgen, verwijder de veiligheidsdop en de stekker aan de onderkant opening van de centrifuge kit zonder te schudden of draaien van de centrifuge kit. Bevestig een spuit van 20 milliliter aan de bodemopening van de centrifugekit met behulp van een speciaal ontworpen connector. Trek de zuiger van de 20 milliliter spuit meerdere malen heen en weer te schudden van de cellen die zich hebben gevestigd op de bodem van de centrifuge kit.

Verwijder het gewenste totale volume van de SVF met zowel AST's als ECM samen met andere cellen en weefsels. Meestal ongeveer drie tot vier milliliter van elke centrifuge kit voor knie gewrichtsinjecties. We deden 30 milliliter autoloog bloed samen met 2,5 milliliter antistollingsmiddel citraat dextrose oplossing.

Toen werd het getrokken bloed overgebracht naar de 60 milliliter centrifuge vat kits. Het werd toen gecentrifugeerd bij 730 zwaartekracht gedurende vijf minuten. En de supernatant werd verwijderd en in een nieuwe 60 milliliter centrifuge vat kit.

De supernatant werd gecentrifugeerd op 1350 zwaartekracht gedurende vier minuten, het verkrijgen van 4,4 milliliter PRP. Reinig de knie van de patiënt met 5% betadine en drapeer het op een steriele manier. Palpate de voorste van de knie voor de gezamenlijke ruimte tussen scheenbeen en dijbeenbotten.

Verdoof de injectieplaats oppervlakkig met verdunde lidocaïne, een milliliter van 1%lidocaïne verdund met vier milliliter normale zoutoplossing, van de huid tot net buiten de gewrichtscapsule. Verdoven vervolgens de binnenkant van de gewrichtscapsule met verdunde ropivacaine, een milliliter 0,75%ropivacaine verdund met drie milliliter normale zoutoplossing. Meng twee milliliter HA tot de zes tot acht milliliter SVF in een spuit van 20 milliliter door een spuit naar spuitconnector.

Door het gebruik van een spuit om spuit connector, voeg 0,4 milliliter calciumchloride aan de drie tot vier milliliter van autologe PRP die al is voorbereid en klaar in een vijf milliliter spuit. Combineer 3,5 tot 4,5 milliliter PRP calciumchloride in een spuit van vijf milliliter met acht tot 10 milliliter HA-SVF mengsel in een 20 milliliter spuit door een spuit naar spuitconnector. Injecteer het mengsel onmiddellijk, ongeveer 12 tot 15 milliliter, langzaam in het voorste scheenbeen-dijbeengewricht van de knie, met behulp van 38 millimeter 18-gauge naald met of zonder de echografie begeleiding.

Na de injectie, verband de injectie plaats met druk door het vouwen van 4x4 katoenen gaas vier keer en het plaatsen van tapes over de gevouwen 4x4 gaas. Instrueer de patiënt om 60 minuten stil te blijven staan om celbevestiging mogelijk te maken. Instrueer de patiënt om activiteiten te beperken voor minimaal een week na ontslag uit de kliniek.

Terug naar de kliniek voor drie extra injecties van PRP geactiveerd door calciumchloride gedurende drie weken. Patiënt met stadium drie OA ontving de behandeling zoals beschreven in de protocolsectie. Na de tweede week van de ASV-ECM mengsel injectie, de pijn van de patiënt en ROM verbeterd.

Tegen de 16e week verbeterden de pijn en ROM van de patiënt aanzienlijk meer dan 70%Na de behandeling mri, genomen na de 16e week, toonde de verhoogde dikte van kraakbeenachtig weefsel aan de mediale kant van de knie. Een andere patiënt met stadium drie OA ontving de behandeling zoals beschreven in de protocolsectie. Na de tweede week van de ASV-ECM mengsel injectie, de pijn van de patiënt en ROM verbeterd.

Tegen de 18e week, de pijn en ROM aanzienlijk verbeterd tot 80%Herhaalde MRI genomen na de 18e week toonde een toename van de hoogte van kraakbeen-achtig weefsel aan de voorste-mediale kant van de knie. De derde patiënt met stadium drie OA ontving de behandeling zoals beschreven in de protocolsectie. Na de tweede week van ASV-ECM mengsel injectie, de pijn van de patiënt en ROM verbeterd met ongeveer 50%Door de 22e week, de pijn en ROM aanzienlijk verbeterd meer dan 80%Herhaalde MRI genomen na de 22e week toonde een toename van de hoogte van het kraakbeen-achtige weefsel aan de mediale kant van de knie.

Momenteel is er geen curatieve therapie beschikbaar voor de behandeling van OA. Echter, percutane injectie van stamceltherapie met ASC's en gehomogeniseerde ECM samen met HA en analoge PRP geactiveerd met calciumchloride kan een alternatief vormen voor de huidige behandeling therapie van de behandeling van knie OA.