Name: Extractie en analyse van Taiwanese groene Propolis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Leer een betrouwbaar ethanol-extractieprotocol voor Taiwanese groene propolis met karakterisering van antibacteriële eigenschappen. Deze methode zorgt voor nauwkeurige kwaliteitsbepaling van natuurlijke producten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit manuscript werd uitgegeven door Wallace academische bewerken.

1. bereiding van Ethanol-geëxtraheerde verbindingen
<ol><li>Weeg 10 g van bevroren Taiwanese groene propolis, die werd bijeengezocht uit bijenkorven in Taiwan van mei tot juli, en met behulp van de molen kruid vermalen. Bevestigen dat hele stukken van Taiwanese groene propolis grond tot een fijn poeder zonder eventuele grote deeltjes.</li>
	<li>Voeg 100 mL van verschillende concentraties van ethanol (60%, 70%, 80%, 95% en 99,5%) en water te scheiden van de kolven en meng elke concentratie met 10 g van grond propolis.</li>
	<li>Incubeer bij 25 ° C staan en schud de kolf van 250 toeren per minuut gedurende 48 uur.</li>
	<li>Filter de extracten van ethanol door filterpapier met een poriegrootte 25 μm.</li>
	<li>Reconstrueren de filtraten naar hun oorspronkelijke volume (100 mL) met 95% ethanol met behulp van een maatkolf.</li>
	<li>Winkel die de ethanol bij-20 ° C. haalt Opmerking: Het protocol kan hier worden gepauzeerd.</li>
</ol>2. bereiding van extracten van Ethanol voor HPLC
<ol><li>Concentreren 10 mL ethanol extracten door vacuüm verdamping bij 40 ° C gedurende 15 minuten.</li>
	<li>Bak de droge stof bij 45 ° C gedurende 24 uur.</li>
	<li>Het reconstrueren van de droge stof met 10 mL 95% ethanol.</li>
	<li>Filter 1 mL ethanol wordt geëxtraheerd met behulp van een steriele injectiespuit filter met een poriegrootte van 0,45 µm.</li>
	<li>Refilter de extracten van de ethanol met behulp van een steriele injectiespuit filter met een poriegrootte 0,22 µm. Het filtraat wordt verzameld en direct kan worden geanalyseerd met behulp van HPLC.</li>
</ol>3. analyse van de inhoud van de Propolin met behulp van HPLC
<ol><li>
Oprichting van standaard bochten van propolins
	<ol>
<li>1 L van de mobiele fase van methanol: water-oplossing van 88.8:11.2 (v/v) voor te bereiden.</li>
		<li>Maak seriële verdunningen van propolin standaard (C, D, F en G) concentraties (15.625 mg/mL, 31.25 mg/mL, 62,5 mg/mL, en 125 mg/mL, respectievelijk) met behulp van de mobiele fase oplossing als oplosmiddel.</li>
		<li>Injecteren 20 µL van propolin standaard concentraties in de omgekeerde-fasekolom, sequentieel uit de lage concentratie aan de hoge concentratie.</li>
		<li>De HPLC-kolom instellen op 30 ° C en de stroomsnelheid naar 1 mL/min.</li>
		<li>De golflengte van de UV-detector ingesteld op 280 nm en de tijd van de recorder aan 20 min.</li>
		<li>Analyseren van de normen ten minste 3 x.</li>
		<li>De reactie van de meting (y-as) worden uitgezet tegen de concentratie (x-as) met berekening werkblad software, en het maken van een standaard curve met de vergelijking en het R-kwadraat waarde.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analyse van ethanol extract s
	<ol>
<li>Injecteren 20 µL van de ethanol extracten stap 2.5 in de omgekeerde-fasekolom is verkregen.</li>
		<li>De HPLC-kolom instellen op 30 ° C en de stroomsnelheid naar 1 mL/min.</li>
		<li>De golflengte van de UV-detector ingesteld op 280 nm en de tijd van de recorder aan 20 min.</li>
		<li>Analyseren van de normen ten minste 3 x.</li>
		<li>Bereken de concentratie van propolin in het ethanolextract, met behulp van de vergelijking voor de kromme van het standaard stap 3.1.7 die gebruikmaakt van de piekoppervlakte voor elke propolin verkregen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. minimale remmende concentratie en Minimum bactericide concentratie analyse
Opmerking: De microdilution-methode wordt gebruikt ter beoordeling van de antibacteriële werkzaamheid van ethanol-geëxtraheerde propolins uit Taiwanese groene propolis.
<ol><li>
Voorbereiding van de testorganismen
	<ol>
<li>Ontdooi de bacteriestammen, Staphylococcus aureus en Escherichia coli, en vervolgens cultuur hen in al soja Bouillon en nutriënten Bouillon, respectievelijk bij 37 ° C gedurende 24 uur.</li>
		<li>Passage van de S. aureus met al soja Bouillon en E. coli met behulp van nutriënten bouillon voor twee generaties en, vervolgens, kolonie-vormende eenheden berekenen door het tellen van afzonderlijke kolonies op een agarplaat.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van ethanol extracten voor antibacteriële activiteit testen
	<ol>
<li>Het concentreren van de ethanol extracten verkregen stap 1.5 door vacuüm verdamping bij 40 ° C gedurende 15 minuten.</li>
		<li>Reconstrueren van de droge stof met dimethylsulfoxide (DMSO) en aanpassen van de concentratie van het extract tot 12,8 mg/mL.</li>
		<li>Maken van een seriële verdunning (concentraties: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 en 640 µg/mL) van ethanol wordt geëxtraheerd met behulp van de Bouillon.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Minimale remmende concentratie proeven
	<ol>
<li>Voeg 10 µL van verdunde ethanol fragmenten, variërend van 0.156 tot 640.0 µg/mL in een 96-wells-plaat.</li>
		<li>Met Bouillon, stel het volume in op 100 µL, en onderhouden van 5% DMSO in alle de verdunningen.</li>
		<li>Inoculeer 100 µL van bacteriecultuur (1 x 106/mL) in de 96-wells-plaat.</li>
		<li>Cultuur entmateriaal met verschillende concentraties van ethanol extraheert bij 37 ° C gedurende 48 uur.</li>
		<li>Analyseren van de bacteriële groei volgens turbiditeit en met behulp van optische dichtheid (microplate-lezer) op 590 nm tot het bepalen van de minimale remmende concentratie (MIC).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Minimum bactericide concentratie proeven
	<ol>
<li>Inoculeer 10 µL van vloeibare cultuur van elk putje van de MIC-test die geen groei op een agarplaat tentoongesteld.</li>
		<li>Incubeer bij 37 ° C gedurende 24 uur.</li>
		<li>Bepaal de bactericide activiteit door het identificeren van de laagste concentratie die bleek geen zichtbare bacteriële groei. De concentratie die volledig celgroei elimineert wordt beschouwd als de minimale bacteriële concentratie (MBC).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te verklaren.

Een studie gemeld dat maceratie, met behulp van verschillende concentraties van ethanol, kan worden gebruikt voor Braziliaanse propolis extractie17; het proces was echter tijdrovend17. Het duurde ten minste 10 dagen de bioactieve stoffen, zoals fenolische inhoud, om uit te halen Braziliaanse propolis17. Als alternatief, ethanol extractie in combinatie met verwarming op 37 ° C, 50 ° C en 70 ° C gedurende 30 minuten heeft voorgesteld voor het extrahere...

Propolis is een natuurlijke harsachtige mengsel geproduceerd door de bee soorten Apis mellifera. Propolis is wijd verbeid gebruikt sinds de oudheid in folk geneesmiddelen. Een studie heeft onlangs gemeld dat propolis is gunstig voor het voorkomen van microbiële infecties en ontstekingen1. Talrijke studies hebben aangetoond dat de belangrijkste bioactieve stoffen in propolis flavonoïden, fenolische esters van, prenylated p-coumaric zuren en diterpenic zuren2,3. Tot op heden, zijn 10 prenylated flavanone derivaten van Taiwanese groene propolis geïdentificeerd door middel van krachtige vloeibare chromatografie (HPLC)4,,5,,6,7. De meest voorkomende daaronder zijn propolins C, D, F en G5,7. De aanzienlijke biologische effecten van Taiwanese groene propolis zijn gecorreleerd met het hoge gehalte aan propolins8.
De concentraties van bioactieve stoffen in propolis variëren sterk afhankelijk van het seizoen en de geografische locatie waar de propolis is verkregen. Europese propolis bevat voornamelijk de flavonoïde aglyconen en phenolic zuren9. De grote bioactieve stoffen in propolis uit Brazilië zijn prenylated p-coumaric van zuren, zoals artepillin C10. Een studie aangetoond dat het seizoen een kritische factor is voor de vaststelling van de inhoud van de totale propolin in Taiwanese groene propolis11. De inhoud van de propolin in Taiwanese groene propolis is het hoogst in de zomer (mei - juli) en laagste in winter11. De antibacteriële eigendom van propolis heeft zijn algemeen beschouwd als een indicator van biologische activiteit. In het algemeen, de monsters van propolis verzameld uit verschillende regio's zijn tentoongesteld een vergelijkbare antibacteriële woning; bijvoorbeeld, het is in het algemeen effectief tegen bijna alle gram-positieve bacteriën en vertoont een beperkte antibacteriële werking tegen gram-negatieve bacteriën10,12,13. Synergetische interactie tussen de flavonoïden in propolis werden gedemonstreerd hebben een antibacteriële werking14. Taiwanese groene propolis werd ook gemeld te hebben een antimicrobiële werking tegen gram-positieve bacteriën15. Bovendien wordt in een studie ook gebleken dat een antimicrobiële werking van de interacties tussen propolins in Taiwanese groene propolis8.
De karakterisering van de bioactieve stoffen in propolis is moeilijk, omdat de chemische samenstelling kan variëren naar gelang de bron van oorsprong. Het is daarom noodzakelijk een haalbaar en herhaalbare methode voor het bepalen van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis vast te stellen. Echter is geen standaardprocedure opgezet voor de Taiwanese groene propolis extractie en de daaropvolgende functionaalanalyse. Verschillende methoden afwisselend organische en anorganische oplosmiddelen zijn voorgesteld voor propolis extractie16,17,18,19,20. Omdat propolis een lipofiele mengsel is, hebben studies aangetoond dat biologische extractie beter dan de anorganische extractie8,18,19 is. De concentratie van de totale propolin in Taiwanese groene propolis en de antibacteriële eigenschappen zijn belangrijke indicatoren van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis. Dus, is het doel van deze studie te presenteren van een protocol voor het gebruik van ethanol als oplosmiddel te halen en karakteriseren van de antibacteriële eigenschappen van Taiwanese groene propolis.

<table><tbody><tr><td>ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Whatman nr. 4 filterpapier</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>methanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>omkeerfase RP-18 kolom</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>tryptische sojabroodbouillon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>voedingsbouillon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>dimethylsulfoxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>kruidenmolen</td><td>Waring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>microplaatlezer</td><td>Molecular Devices</td><td>EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td>HPLC-systeem</td><td>Agilent</td><td>1200 Series</td><td></td></tr><tr><td>vacuümevaporatie</td><td>B&Uuml;CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

extractie en analyse van taiwanese groene propolis

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Taiwanese groene propolis is rijk aan prenylated flavonoïden en exposeert een breed scala van biologische activiteit, zoals anti-oxidant, antibacteriële, en antikanker ones. De biologische actieve stoffen van Taiwanese groene propolis zijn propolins, namelijk C, D, F en G. De concentratie van propolins in Taiwanese groene propolis is afhankelijk van het seizoen en de geografische locatie. Dus, is het essentieel om een standaard en herhaalbare methode voor het bepalen van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis. Hier presenteren we een protocol dat wordt gebruikt op basis van ethanol extractie, hoge-prestatie vloeistofchromatografie en een analyse van de antibacteriële activiteit te karakteriseren Taiwanese groene propolis kwaliteit. Deze methode geeft aan dat 95% en 99,5% ethanol extracties de maximale droge stof oogsten van Taiwanese groene propolis bereiken, waardoor de opbrengst van de hoogste concentraties van propolins die antibacteriële eigenschappen hebben. Volgens deze bevindingen, wordt dit protocol beschouwd als betrouwbare en herhaalbare voor het bepalen van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis.

Positieve representatieve gegevens voor de winning van ethanol zijn opgenomen in tabel 1. De opbrengst van de droge stof van Taiwanese groene propolis werd positief geassocieerd met de concentratie van ethanol. De 95% en 99,5% ethanol extracten had de hoogste droge stof opleveren van Taiwanese groene propolis. De opbrengst van de laagste droge stof van Taiwanese groene propolis is opgetreden wanneer water werd gebruikt als de extractievloeistof. Deze resultaten wijzen ero...

Presenteren we een protocol voor het gebruik van ethanol als oplosmiddel te halen en karakteriseren van Taiwanese groene propolis dat antibacteriële activiteit vertoont.

Extractie en analyse van Taiwanese groene Propolis

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

Hier presenteren we het protocol voor het gebruik van ethanol als oplosmiddel om Taiwanese groene propolis te extraheren en te karakteriseren die antibacteriële activiteit remt. Dit protocol is een betrouwbare en herhaalbare methode voor het bepalen van de kwaliteit van taiwanese groene propolis. Demonstrerende procedure zijn Chun'Ting Chen en Yi'Hsuan Chien, promovendi van mijn laboratorium.Om te beginnen, wegen 100 gram Taiwanese groene propolis. Maal met behulp van een kruidenmolen de propolis om ervoor te zorgen dat de stukken worden vermalen tot een fijn poeder zonder grote deeltjes. Stel vijf kolven en voeg 100 milliliter van verschillende concentraties ethanol in water aan elk.Meng 10 gram gemalen propolis in de ethanoloplossing in elke kolf en broed op 25 graden Celsius met 48 uur schudden bij 250 RPM. Gebruik hierna filterpapier met een poriegrootte van 25 micrometer om de ethanolextracten te filteren. Met behulp van een volumetrische kolf, reconstrueren van de filtrates om hun oorspronkelijke volume van 100 milliliter met 95%ethanol.Bewaar de gereconstitueerde extracten bij min 20 graden Celsius tot ze klaar zijn voor gebruik. Wanneer u klaar bent om de extracten voor HPLC voor te bereiden, gebruikt u vacuümverdamping om 10 milliliter van elk extract gedurende 10 minuten op 40 graden Celsius te concentreren. Bak de droge stof op 45 graden Celsius gedurende 24 uur.Reconstrueren vervolgens elk monster van droge stof met 10 milliliter ethanol. Met behulp van een spuitfilter met een poriegrootte van 0,22 micrometer, filtert u elk extract opnieuw en verzamelt u het filtraat voor directe analyse met HPLC. Om te beginnen met het vaststellen van een standaardcurve, bereidt u een liter van de mobiele fase methanol naar wateroplossing voor bij een verhouding van 88,8 tot 11,2.Met behulp van de mobiele fase oplossing als een oplosmiddel, voor te bereiden seriële verdunningen van de propolin standaard concentraties zoals beschreven in het tekstprotocol. Injecteer 20 microliter van elke standaardconcentratie in de omgekeerde fase kolommen achtereenvolgens van de laagste concentratie naar de hoogste. Stel vervolgens de HPLC-kolom in op 30 graden Celsius, stel de afstandsduur van de UV-detector in op 280 nanometer en de stroomsnelheid op één milliliter per minuut en de recordertijd op 20 minuten.Analyseer de normen ten minste drie keer. Gebruik hierna berekeningsbladsoftware om de meetrespons aan te sluiten op de concentratie, wat resulteert in een standaardcurve met een bepaalde vergelijking en R-kwadraatwaarde. Om te beginnen met het analyseren van de extracten, injecteren 20 microliter van elk extract in de omgekeerde fase kolom.Stel de HPLC-kolom in op een temperatuur van 30 graden Celsius en een stroomsnelheid van één milliliter per minuut. Stel de afstandsduur van de UV-detector in op 280 nanometer en de recordertijd op 20 minuten. Analyseer de extracten ten minste drie keer.Gebruik vervolgens de standaardcurve om de concentratie propolin in elk ethanolextract te bepalen. Voeg na het bereiden van de testorganismen en ethanolextracten 10 microliter verdunde ethanolextract toe, variërend van 0,156 tot 640 microgram per milliliter in de putten van een 96 putplaat. Gebruik bouillon om het volume in elke put aan te passen aan 100 microliters om ervoor te zorgen dat 5%DMSO in alle verdunningen te behouden.Vervolgens inenten 100 microliter van bacteriële cultuur in elke put van de 96 put plaat. Cultuur op 37 graden Celsius gedurende 48 uur. Gebruik een microplatelezer op 590 nanometer om de bacteriële groei te analyseren op basis van troebelheid en om de minimale remmende concentratie te bepalen.Na deze, inenten 10 microliter van vloeibare cultuur van elke put die tentoongesteld aan de groei op een agar plaat. Incubeer op 37 graden Celsius gedurende 24 uur. Identificeer de laagste concentratie die geen zichtbare bacteriële groei aan het licht bracht om de bacteriële activiteit te bepalen.De concentratie die volledig geëlimineerd celgroei wordt beschouwd als de minimale bacteriële concentratie. In deze studie wordt Taiwanese groene propolis gewonnen met ethanol. De droge stof opbrengst lijkt het hoogst te zijn wanneer een hoge concentratie ethanol wordt gebruikt, en het laagst wanneer water wordt gebruikt.Deze resultaten geven aan dat een organisch oplosmiddel het beste presteert tijdens deze extractie en dat de opbrengst positief geassocieerd is met de ethanolconcentratie. Evenzo lijkt de concentratie propolins positief geassocieerd te zijn met de ethanolconcentratie tijdens de extractie, waarbij de hoogste opbrengst van propolins werd verkregen in de 95% en 99,5% ethanolextracten. De antibacteriële invloed van de ethanolextracten tegen de S aureus en E coli wordt vervolgens onderzocht.De gemiddelde minimale remmende concentratie voor S aureus lijkt tussen de 10 en 20 microgram per milliliter te liggen en de gemiddelde bacteriële concentratie lijkt 20 microgram per milliliter te zijn. Waterextracten hadden echter geen antibacteriële invloed op S aureus. Er wordt geen antibacteriële invloed waargenomen voor E coli bij het gebruik van de water- of ethanolextracten.Een van de belangrijkste experimentele procedure is het vermijden van de uniformiteit van de Taiwanese groene propolis tijdens het slijpen.

extraction-and-analysis-of-taiwanese-green-propolis

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Plantaardige biomassa biedt een hernieuwbare grondstof voor meerdere producten, waaronder brandstof, diervoeders, levensmiddelen en een verscheidenheid aan materialen. In deze paper onderzoeken we de eigenschappen van de boom tabak (Nicotiana glauca) en populier als geschikte bronnen voor een bioraffinage pijplijn.

Transcript en Metabolite Profiling voor de Evaluatie van de Boom en Poplar Tabak als grondstof voor de bio-gebaseerde industrie

Microbiële consortia binnen bumble bee-hives verrijken en behouden van pollen voor larven van de honingbij. Met behulp van de volgende generatie sequencing, samen met laboratorium en veld gebaseerde experimenten, dit manuscript wordt beschreven protocollen gebruikt om te testen van de hypothese dat fungicide residuen veranderen de stuifmeel microbiome, en de kolonie demografie, uiteindelijk leidde tot de kolonie verlies.

Empirische, Metagenomic en computationele technieken verlichten de mechanismen door welke fungiciden compromis Bee gezondheid

Voorbijgaande heterologe expressie van biosynthetic enzymen in Nicotiana benthamiana bladeren kunt doorschakelen endogene leveringen van 2,3-oxidosqualene op de productie van nieuwe producten van hoogwaardige triterpene. Hierin is beschreven van een gedetailleerd protocol voor snelle (5 dagen) preparative-schaal productie van triterpenen en analogen met behulp van dit krachtige plantaardige platform.

Voorbijgaande expressie in Nicotiana Benthamiana verlaat voor de productie van de Triterpene op een voorbereidende schaal

Hier, hanteren wij een drukkend warm water (PHWE) extractiemethode, die gebruik maakt van een ongewijzigde huishoudelijke espressomachine om studenten kennismaken met natuurproducten chemie in het laboratorium. Twee experimenten worden gepresenteerd: PHWE van eugenol en acetyleugenol van kruidnagel en PHWE van seselin en (+)-epoxysuberosin van de Australische plant Correa reflexa.

Drukkend warm Water extractie (PHWE) om te verkennen van natuurproducten chemie in het Undergraduate laboratorium in dienst

Het huidige protocol beschrijft de besmetting van pyrrolizidine alkaloïden (PA's) in theemonsters van PA-producerend onkruid in theetuinen.

Bron en route van pyrrolizidine alkaloïde besmetting in thee monsters

Het huidige protocol beschrijft het gebruik van DNA-barcoderingstechnologie om plantaardige medicinale materialen te authenticeren, en de medicinale plant Angelica sinensis (Oliv.) Diels werd als voorbeeld aangewezen.

Toepassing van DNA-barcodering om geneeskrachtige planten te identificeren

Deze studie vergeleek het polysacharidegehalte van Hippophae rhamnoides subsp. sinensis Rousi en Hippophae gyantsensis (Rousi) Y. S. Lian verkregen door warmwaterextractie en gekwantificeerd door fenol-zwavelzuurcolorimetrie. We onderzochten ook in vitro antioxidante activiteiten van polysacchariden van deze twee Hippophae-soorten door middel van 2,2-difenyl-1-picrylhydrazyl vrije radicalen opruimingsexperimenten.

Vergelijkende studie van het gehalte aan polysachariden en de antioxiderende werking van Hippophae rhamnoides subsp. sinensis en Hippophae gyantsensis

Dit manuscript beschrijft hoe om te screenen op thermostabilizing mutaties, zuiveren de menselijke serotonine transporter, het genereren van antilichamen met hoge affiniteit, en kristalliseren de serotonine transporter antilichaam-complex gebonden aan het antidepressivum citalopram S. Dit protocol kan worden aangepast aan de studie van andere uitdagende membraantransporteiwitten, receptoren en kanalen.

Thermostabilization, expressie, zuivering en kristallisatie van het Human serotonine transporter Gebonden aan<em&gt; S</em&gt; citalopram

Een protocol voor de uitgebreide extractie van lipiden, metabolieten en eiwitten uit biologische weefsels met behulp van een monster wordt gepresenteerd.

Een eenvoudige gefractieerde extractie methode voor de uitgebreide analyse van metabolieten, lipiden en proteïnen uit een enkele monster

Dit protocol beschrijft een efficiënte methode voor de extractie en kwantificering van cafeïne in cel suspensies van C. arabica L. en een experimentele proces voor de evaluatie van de enzymatische activiteit van cafeïne synthase met het niveau van de expressie van het gen dat dit enzym codeert.

Cafeïne-extractie, enzymatische activiteit en genexpressie van cafeïne Synthase uit plantaardige cel schorsingen

Leer een betrouwbaar ethanol-extractieprotocol voor Taiwanese groene propolis met karakterisering van antibacteriële eigenschappen. Deze methode zorgt voor nauwkeurige kwaliteitsbepaling van natuurlijke producten.

Extractie en analyse van Taiwanese groene Propolis

Meer video's verkennen