Name: Toepassing van Biochip Microfluidic technologie te detecteren Serum allergeen-specifieke Immunoglobulin E (sIgE) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Ontdek een microfluidische biochip-methode voor het detecteren van serum-specifiek IgE bij allergiediagnostiek. Deze kosteneffectieve techniek vereist minder serum en is geschikt voor respiratoire, voedsel- en huidallergieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken Professor Mei Jiang voor haar hulp bij de statistische analyse en Mr. Hammer Tsui bij de voorbereiding van het manuscript. Deze studie werd ondersteund door de Guangzhou Science en technologie Foundation (201804020043) en de nationale Natural Science Foundation van China (NSFC 81572063 en NSFC 81802076). De financiering van de fracties overeengekomen met de studie ontwerp, gegevensanalyse, manuscript voorbereiding en besluit te publiceren. Geen andere financiering werd ontvangen voor deze studie.

Deze studie en het gebruik van menselijk serummonsters werden goedgekeurd door de ethische commissie van de eerste aangesloten ziekenhuis van Guangzhou medische universiteit (GYYY-2016-73). Alle deelnemers hebben hun schriftelijke toestemming gegeven, onafhankelijk of via hun ouders (in het geval van kinderen).
1. basisgegevens van de studiegroep
Opmerking: Het allergie informatie-archief van de Braziliaanse sleutel laboratorium van respiratoire aandoeningen (lucht-SKLRD) is een grote serumbank opgericht binnen het Guangzhou Instituut van respiratoire ziekenhuis (GIRH). In de afgelopen tien jaar werd begonnen, de lucht-SKLRD reeds is begonnen te verzamelen en opslaan van serummonsters van patiënten met allergische aandoeningen, samen met hun klinische informatie (tabel 1)4,5. De huidige studie werd uitgevoerd met de sera van de lucht-SKLRD.
<ol><li>De lucht-SKLRD database voor sera verzameld van januari 2015 tot juni 2018 zoeken en selecteren van de patiënten met allergisch ziekte, die bleken te zijn gevoelig voor de gemeenschappelijke allergenen in de regio.</li>
	<li>Ervoor zorgen dat alle geselecteerde patiënten allergisch-gerelateerde ziekten, zoals allergische rhinitis en astma, allergische dermatitis, en/of urticaria, en dat het serum van deze patiënten bevat meerdere serum allergeen-specifieke immunoglobuline (sIgE) sensitizations van gemeenschappelijke allergenen in deze regio, gedetecteerd door het systeem-1.</li>
	<li>Uitsluiten van patiënten met onvolledige medische dossiers, die verloor van follow-up, degenen die weigeren te geven geïnformeerde toestemming ten aanzien van het gebruik van hun serummonsters voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt, die met een geïdentificeerde immunodeficiëntie, die momenteel op immunotherapie of immunomodulerende agenten, of die gevonden te hebben van parasitaire infecties.</li>
	<li>Ervoor zorgen dat geen behandeling of medicijn voorschrift kreeg voorafgaand aan de serum-collectie om te minimaliseren van de storing van de bevindingen van het laboratorium. Alle serummonsters die de criteria niet vervullen verworpen.</li>
</ol>2. studie van de stroming en metingen van belang
Opmerking: Het microfluidic-systeem moet 100 µL van de serum voor het bepalen van de 19 allergenen. Veneuze bloed (5 mL) werd bijeengezocht uit elke patiënt met behulp van een vacuüm bloedvat bevattende scheiden gel. Na centrifugeren voor 10 min op 1000 x gwordt werd de bovenste laag verzameld voor het testen. Ongebruikte serum werd opgeslagen bij-80 ° C. Vóór het testen, het serum werd gehouden bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten en was geschokt met een vortex-mixer. Herhaalde cycli van bevriezen en ontdooien werden vermeden.
<ol><li>Vooral het serum testopnames voor sIgEs op hele allergenen van de huismijt pteronyssinus (d1), huismijt farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), kat dander (e1), hond huidschilfers (e5), Bermuda gras (g2), timothy grass) G6), kakkerlakken (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), ragweed (w1), eiwit (f1), melk (f2), tarwe (f4), pinda (f13), sojabonen (f14), amandel (f20), krab (f23) en garnalen (f24). Volg de instructies die zijn gegeven in punt 3. Opmerking: sIgE bepaling werd gedaan met het allergeen-specifieke IgE assay kit (Zie de Tabel van materialen) en gemeten door een chemiluminescentie-analysator.</li>
	<li>Willekeurig selecteren drie monsters uit de monsters met genoeg serum (ten minste 900 µL) voor een studie van de reproduceerbaarheid. Houden van alle voorwaarden ongewijzigd, meten de drie sera voor allergeen sIgEs dagelijks voor 9 opeenvolgende dagen (dat wil zeggen, een totaal van 100 x 9 = 900 µL van de serum).</li>
</ol>3. semi-automatisering testprocedure van het microfluidic-systeem
Opmerking: De systeem-2 is de integratie van automatische microfluidic technologie, eiwit microarray analyse van koude licht, parallelle IgE analyse en beeld processing technologie. Het test protocol is verdeeld in vier delen: voorbereiding van de apparatuur, monster laden incubatie en meting.
<ol><li>
Voorbereiding van de apparatuur
	<ol>
<li>Zet de PC en de macht van de analyzer. Opmerking: De aan-uitknop is op de links van de nullijn.</li>
		<li>Start het LabIT programma op de PC. Als de Donkere Frame waarschuwingsvenster opduikt, klik op OK als u wilt uitvoeren van de Test van de lek. Daarna, klik op het logo van de center voor het invoeren van de interface van de operatie. Opmerking: Het systeem herinnert de gebruiker lekkage Test uitvoeren als deze niet gebruikt gedurende meer dan 24 uur wordt.</li>
		<li>Controleer de Temp van de reactie en de CCD (charge - coupled apparaat) Temp in de rechteronderhoek van het scherm. De Temp van de reactie moet stijgen tot 37 ° C ± 1 ° C in ongeveer 10 minuten, en de CCD-Temp moeten dalen tot-15 ° C ± 1 ° C.</li>
		<li>Voer de Test van de lek na de CCD-Temp is gedaald tot-15 ° C ± 1 ° C. Voordat u de test van de lek, Controleer of er zijn geen andere objecten achtergelaten in het instrument en de deur dicht. Klik op extra | Systeem Test | Test van de lek. Niet open de deur tijdens het testen. Wanneer de test is voltooid, wordt het venster zal verschijnen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Monster laden
	<ol>
<li>Voeg 620 µL van was buffer, 120 µL van buffer met blokkerend, 60 µL van geconjugeerde A en B, 60 µL van substraat A en B, en 100 µL van de serummonsters aan de bijbehorende reagens tank op de microfluidic-cartridge.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubatie
	<ol>
<li>Klik op Cartridge-ID, de barcodescanner kunt scannen van het serienummer van de cartridge, steken naar de voorbeeld Legitimatiebewijs, zet de cartridge in de analyzer en sluit de deur en op Analyzer en Voer om te beginnen met de analyse.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Meting
	<ol>
<li>Exporteer de resultaten naar statistische software (bijvoorbeeld Excel) na de meting. Opmerking: Na 30 min van incubatie, de analyzer automatisch voert de meting en rapporteert het resultaat.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Schakelen tussen off van de analyzer
	<ol>
<li>Voor routineonderhoud, na het beëindigen van de test, verwijder de cassette en veeg de analyzer van interne verwarming ijzer en elektromagneet lichtjes met 75% alcohol. Opmerking: Niet hard drukken of schudden van de elektromagneet.</li>
		<li>Sluit het venster LabIT. De temperatuur controle venster zal verschijnen. Het zal automatisch sluiten wanneer de CCD tot de 5 ° C protectie modus opwarmt. Tegen die tijd zal het uitschakelen van de kracht van de analysator en PC. Opmerking: Sluit niet handmatig de temperatuur waterkanon van venster voordat de CCD-Temp is gestegen tot 5 ° C en zet niet uit de macht van de analyzer, noch de PC tijdens de CCD-warming-up.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. definitie van sIgE reactiviteit
Opmerking: Voor een onverdund serum specimen, het detectiebereik van de systeem-2 is 0.21-100 IU/mL.
<ol><li>Gebaseerd op de drempelwaarde voor 0.35 IU/mL, rekening houden met een sIgE meer dan 0,35 IU/mL te positieve6,7. Stem op de reactiviteit van de sIgE tests als8: klasse 1 (≥0.35 en < 0.70 IU/mL), klasse 2 (≥0.70 en < 3,50 IU/mL), klasse 3 (≥3.50 en < 17,50 IU/mL), klasse 4 (≥17.50 en < 50.00 IU/mL), klasse 5 (≥50.00 en < 100.00 IU/mL) , en klasse 6 (≥100.00 IU/mL).</li>
</ol>5. statistische analyse
<ol><li>Gebruik een histogram te tonen de positieve tarief van de 19 allergenen (Figuur 1) en de curve Levey-Jennings gebruiken om aan te tonen van de herhaalbaarheid van de detectie systeem (Figuur 2)9.</li>
	<li>De drie meest voorkomende inhalant allergenen en voedselallergenen (in totaal zes allergenen) selecteren en vergelijken de resultaten naar de I System 1 te evalueren van de klinische diagnostische prestaties10,11. Omvatten de stemmen concordance, gevoeligheid, specificiteit, positieve en negatieve voorspellende waarden en het gebied onder de ontvanger karakteristiek (ROC) curve (AUC) fungeert als de beoordelingscriteria.</li>
	<li>Toepassing van Spearman correlatie analyse12 om correlaties tussen de twee systemen beschrijven en gebruiken van kappa waarde van consistentie. Categoriseren van de kappa waarde als bijna perfect (0.8-1.0), ingrijpende (0,6-0,8), matig (0,4-0,6), fair (0,2-0,4) of armen (< 0.2)13. Gebruik PASW 23,0 en MedCalc 11.0 statistische analyse en definiëren van P < 0.05 als statistische significantie.</li>
</ol>

<ol><li>Kamble, S., Bharmal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incremental+Direct+Expenditure+of+Treating+Asthma+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asthma+Research%22%5BJournal%5D)">Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States.</a> Journal of Asthma Research. 46 (1), 73-80 (2009).</li>
<li>Paganelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+antibodies+in+the+diagnosis+of+atopic+disease.+Clinical+evaluation+of+a+new+in+vitro+test+system%2C+UniCAP%2C+in+six+European+allergy+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics.</a> Allergy. 53 (8), 763-768 (1998).</li>
<li>Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+serum+allergy+%28ige%29+tests+performed+by+different+assay+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (5), 1219-1224 (2008).</li>
<li>Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-sensitization+to+silkworm+moth+%28Bombyx+mori%29+and+9+inhalant+allergens+among+allergic+patients+in+Guangzhou%2C+Southern+China%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China.</a> PLoS ONE. 9 (5), e94776(2014).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component-Resolved+Diagnostic+Study+of+Dermatophagoides+Pteronyssinus+Major+Allergen+Molecules+in+a+Southern+Chinese+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigational+Allergology+%26+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort.</a> Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25 (5), 343-351 (2015).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((grass+pollen+allergens+and+components+detected+in+a+southern+Chinese+cohort+of+patients+with+allergic+rhinitis+and%2For+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma.</a> Molecular Immunology. 78 (2016), 105-112 (2016).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+profiles+of+serum+specific+IgE+and+IgG4+to+Dermatophagoides+pteronyssinus+allergen+and+its+major+components+during+allergen+immunotherapy+in+a+cohort+of+southern+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children.</a> Molecular Immunology. 74 (2016), 1-9 (2016).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+measurement+using+AdvanSure%28R%29+system%3A+comparison+of+detection+performance+with+ImmunoCAP%28R%29+system+in+Korean+allergy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients.</a> Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).</li>
<li>Eckels, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control%2C+analysis+and+secure+sharing+of+Luminex%28R%29+immunoassay+data+using+the+open+source+LabKey+Server+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform.</a> Bmc Bioinformatics. 14 (1), 145(2013).</li>
<li>Bland, J. M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+methods+for+assessing+agreement+between+two+methods+of+clinical+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement.</a> Lancet. 327 (8476), 307-310 (1986).</li>
<li>Carletta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Agreement+on+Classification+Tasks%3A+The+Kappa+Statistic%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+Linguistics%22%5BJournal%5D)">Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic.</a> Computational Linguistics. 22 (2), 249-254 (1996).</li>
<li>Shyur, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multiple+allergen-specific+IgE+by+microfluidic+immunoassay+cartridge+in+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings.</a> Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).</li>
<li>Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+measurement+methods%3A+an+endless+application+of+wrong+statistical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods.</a> Intensive Care Medicine. 37 (6), 1038-1040 (2011).</li>
<li>Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Singleplex+Specific+IgE+Detection+Immunoassays%3A+ImmunoCAP+Phadia+250+and+Immulite+2000+3gAllergy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy.</a> Annals of Laboratory Medicine. 38 (1), 23-31 (2018).</li>
<li>Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+rhinitis+and+asthma+have+generally+good+outcome+and+little+effect+on+quality+of+life+-+a+20-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up.</a> Allergy. 66 (8), 1123-1125 (2011).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+type+I+sensitization+to+alpha-gal+in+forest+service+employees+and+hunters%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters.</a> Allergy. 72 (10), 1540-1547 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicentre+study+assessing+the+prevalence+of+sensitizations+in+patients+with+asthma+and%2For+rhinitis+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China.</a> Allergy. 64 (7), 1083-1092 (2009).</li>
<li>Ahlstedt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+usefulness+of+specific+IgE+blood+tests+in+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 32 (1), 11-16 (2002).</li>
<li>Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+IgE+antibody+laboratory+results%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Allergy+Asthma+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accuracy of IgE antibody laboratory results.</a> Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100 (2), 288-289 (2008).</li>
<li>Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+testing+needs+better+standardization--test+results+from+different+laboratories+lack+comparability+mostly+due+to+missing+effective+standards%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards.</a> International Archives of Allergy & Immunology. 108 (1), 82-88 (1995).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Vergelijkbaar met de resultaten van veel andere studies15,16,17, de resultaten van het systeem van de microfluidic gebaseerd op sera van 293 allergische patiënten bleek dat huis huisstofmijt (met inbegrip van D. pteronyssinus, D. farinae, en B. tropicalis) zijn de belangrijkste inhalant allergenen leiden tot allergische aandoeningen in Zuid-China, terwijl voor voedsel, melk, pinda, garnalen en krab zi...

De prevalentie van allergieën in de afgelopen decennia gestaag is toegenomen en 20% - 30% van de wereldbevolking1treft. Identificatie van de oorzakelijke allergenen heeft grote betekenis bij het beheer van de ziekten. In China, aangezien geregistreerde in vivo huid lul proeven niet beschikbaar in het land zijn, in vitro bepaling van serum specifieke IgE de belangrijkste is en meest gebruikte hulpmiddel voor type ik allergie diagnoses2. Dit is vergelijkbaar met praktijken in de westerse wereld, maar hoewel ImmunoCAP systeem (systeem 1), een enzyme-linked immunosorbent basissysteem van fluorescentie, wordt beschouwd als de gouden standaard voor in vitro allergie diagnose3, het gebruik ervan in China is zeer beperkt wegens om de hoge prijs van apparatuur en reagens. Vandaar is een nieuwe alternatieve anti diagnose systeem met een hoge prijs / prestatie verhouding hard nodig.
Het BioIC systeem (systeem 2) is een microfluidic cartridge gebaseerde systeem gebaseerd op het beginsel van de Chemoluminescentie voor multiplexed testen van serum specifieke IgE. Met een grootte van 7 cm x 4 cm, de microfluidic-cartridge bestaat uit drie lagen van injectie-gegoten kunststof. Het bovenste deel is 3 mm dik transparant Polycarbonaat die draagt goede stabiliteit tijdens thermische assemblage processen. Samen met de 3 mm dikke onderlaag opgebouwd uit een copolymeer van acrylonitril, butadieen en styreen (ABS), sandwiches het de 0,5 mm dikke middelste laag gemaakt van siliconen rubber. Zwart van kleur biedt, de middelste laag lagere achtergrond tijdens Chemoluminescentie-detectie. Op de top van de silica gel, is een dun laagje nitrocellulose membraan (NC membraan) gespoten op de positie die overeenkomt met de zone van de reactie, waarmee het spotten van verschillende allergene eiwitten. Het doel van deze studie is om de klinische prestaties van het systeem van de microfluidic voor de multiplexed bepaling van allergeen-specifieke IgE in het serum te evalueren.

<table><tbody><tr><td>Agnitio BioIC Analyzer</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(Taiwan, China)</td><td>BA-G2000</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Allergen specific-IgE Detection Kit</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(Taiwan, China)</td><td>DR17A12</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Cartridge Plaatsingsplaat</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(Taiwan, China)</td><td>T20SET</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Reagent Dispenser</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(Taiwan, China)</td><td>DS-1</td><td></td></tr><tr><td>Afbeelding twee-dimensionale streepjescodemachine</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(Taiwan, China)</td><td>NLS-HR200</td><td></td></tr><tr><td>Softwarepakket, LabIT</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(Taiwan, China)</td><td>Versie 2.4.12</td><td></td></tr><tr><td>VORTEX-5 Vortex Mixer</td><td>Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd.</td><td>VORTEX-5</td><td></td></tr></tbody></table>

toepassing van biochip microfluidic technologie te detecteren serum allergeen-specifieke immunoglobulin e (sige)

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Allergische ziekte komt voor bij zowel volwassenen als kinderen. Identificatie van de oorzakelijke allergenen is belangrijk in het beheer van de ziekte en preventie. Een specifieke immunoglobulin E (IgE) meetsysteem met een hoge prijs / prestatie verhouding ontbreekt echter in vasteland China, vooral in de eerstelijnszorg ziekenhuizen. Deze paper beschrijft de procedures van het beginsel en de werking van het gebruik van een cartridge gebaseerde Chemoluminescentie-systeem van microfluidic te detecteren allergeen-specifieke IgE in het serum. De resultaten werden vergeleken met die van ImmunoCAP (systeem 1), de industriële standaard, en de reproduceerbaarheid van het systeem voor het detecteren van patiënten voor deze gemeenschappelijke allergenen gesensibiliseerde personen wordt geëvalueerd. De resultaten toonden aan dat in vergelijking met ImmunoCAP (systeem 1), het BioIC systeem (systeem 2) heeft goede precisie en gevoeligheid voor het opsporen van serum specifieke IgE tegen verschillende inhalant en voedsel allergenen, maar met een aanzienlijk lagere kosten. Het kan dienen als een goed alternatief voor System 1 in eerstelijnszorg ziekenhuizen in vasteland China hebben lagere financiële betaalbaarheid.

Positieve tarieven voor 19 gemeenschappelijke allergenen De resultaten op 293 sera zijn afgebeeld in Figuur 3. Onder alle inhalant allergenen, D. farinae had de hoogste positieve percentage (80.89%, 273/293), gevolgd door D. pteronyssinus (78.84%, 231/293). Onder de voedselallergenen, krab heeft het hoogste percentage van de positieve (20.48%, 60/293), gevolgd door 13.65% (40/293) voor garnalen. De totale positie...

Dit document stelt een protocol voor het opsporen van serum specifieke immunoglobuline met een cartridge gebaseerde Chemoluminescentie-systeem van microfluidic en de evaluatie van het nut ervan in allergie diagnoses.

Toepassing van Biochip Microfluidic technologie te detecteren Serum allergeen-specifieke Immunoglobulin E (sIgE)

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

De biochip microfluïde technologie systeem is een microfluïde cartridge gebaseerde sectie die gebruik maakt van de chemiluminescence principe voor assage van serum specif IGE. In vergelijking met andere detectiemethoden hebben de bioIC-systemen de voordelen van lage kosten en vereisen ze minder serum om serum IGE te detecteren. De implicaties van deze techniek is de neiging naar de diagnose van allergieziekten zoals rhinitis en astma, omdat veel van deze patiënten zijn gevoelig voor gemeenschappelijke detecteerbare allergenen.Hoewel deze methode inzicht kan geven in aandoeningen van de ademhalingsallergie, kan het ook worden toegepast op andere situaties, zoals voedsel- en huidallergieën. Aangezien deze techniek is gemakkelijker te gebruiken, en heeft een verlaagde methode voor de exploitant opleiding, individuen die nieuw zijn in het systeem kan leren om het snel te gebruiken. Levendige demonstratie van deze kwestie is van cruciaal belang als de bepaalt of de test succesvol is en vereist bekwame handmatige werking.Om serummonsters te testen op serumimmunline E-antilichamen tegen hele allergenen, selecteert u willekeurig drie monsters met ten minste 900 microliter serum en neemt u de chip uit de kit en nummert deze. Schakel vervolgens de computer en de analysekracht in. Start het Lab IT-programma op de computer.Als het waarschuwingsvenster voor donker frame opduikt, klikt u op OK om een lektest uit te voeren en klikt u vervolgens op het middelste logo om de bewerkingsinterface in te voeren. Controleer de reactietemperatuur en de lading gekoppeld apparaat of CCD temperatuur, de reactie temperatuur moet stijgen tot 37 plus of min een graad celsius in ongeveer tien minuten en de CCD temperatuur moet dalen tot min 15 plus of min een graad Celsius. Wanneer de CCD-temperatuur is gedaald tot min 15 plus of min een graad Celsius, bevestigen dat er geen andere items links in het instrument, en sluit de deur.Klik vervolgens op gereedschappen, systeemtest, lektest. Wanneer de test is voltooid, verschijnt het rapportvenster. Laad vervolgens 620 microliter wasbuffer, 120 microliter blokkeerbuffer, 60 microliter conjugaten van conjugaten A en B, 60 microliter substraten A en B en 100 microliter van elk serummonster in de overeenkomstige reagenstanks op de microfluïde cartridge.Nadat u op cartridge-id hebt geklikt, gebruikt u de streepjescodescanner om het serienummer van de cartridge te scannen en de voorbeeld-ID in te voeren.Plaats vervolgens de cartridge in de analyzer, sluit de deur en klikt u op analyzer en voert deze uit om de analyse te starten. Aan het einde van de analyse exporteer je de resultaten naar een geschikt statistisch softwareprogramma en verwijder je de cartridge uit de analyzer. Veeg het interne verwarmingsijzer en de elektromagneet van de analyzer licht af met 75 procent alcohol en sluit het Lab IT-venster.Het temperatuurbewakingsvenster verschijnt en sluit automatisch wanneer de CCD opwarmt tot de vijf graden celsius-beschermingsmodus, waarna het veilig is om de analyzer en de computer uit te schakelen. Het microfluïde systeem produceert herhaalbare resultaten, zoals blijkt uit deze gegevens voor kattenhuidschilfers, hondenhuidschilfers en kakkerlak na negen testrondes. Zoals waargenomen, alle gegevens zijn binnen het bereik van twee standaarddeviaties, die in overeenstemming is met de maximaal toegestane klinische fout.Zoals verwacht van de positiviteitspercentages voor de allergenen, zijn alle evaluatieresultaten voor inhalante allergenen superieur aan de voedselallergenen. Aangezien het gebied onder de curvewaarden een bereik van 0,613 tot 0,984 aantoont en het gebied onder de curvewaarden voor de drie inhalerende allergenen groter is dan 0,950, kan worden geconcludeerd dat systeem twee een hoge nauwkeurigheid heeft met betrekking tot systeem één. Consistentieanalyse voor de twee systemen toont aan dat de kappa-waarden voor de drie inhalanten allemaal groter zijn dan de kappa-waarden voor de voedselallergenen die over het algemeen onder 0,4 vallen.In deze strooipercelen die met systeem twee resultaten langs de x-as en systeem één langs de y-as worden geconstrueerd, kan de distributie van de concentratie van serumimmunline E van de twee systemen voor zes verschillende allergenen worden waargenomen. Controleer voor aanvang van de detectie altijd de reactie en CCD-temps, omdat deze gekoppeld zijn aan de nauwkeurigheid van de test. Na deze procedure kunnen andere methoden zoals een opgeloste diagnose van componenten worden uitgevoerd om aanvullende vragen over allergeenoverschrijdende standaardisatie en co-sensibilisatie te beantwoorden.Microfluidic chip technologie is met succes toegepast op het gebied van allergie diagnose om problemen zoals onvoldoende serum aan te pakken, en hoge medische kosten Als werken met menselijk serum, symptomen kunnen worden bepalend gevaarlijk. Het dragen van de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen en andere voorzorgsmaatregelen moet altijd worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.

application-biochip-microfluidic-technology-to-detect-serum-allergen

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

The video demonstrates a cell-based assay for detecting anti-aquaporin-4 immunoglobulin G using a biochip containing untransfected cells and transfected cells expressing aquaporin-4. This method has applications in diagnosing neuromyelitis optica spectrum disorders, confirmed by strong green fluorescence on the biochip.

An Assay to Detect Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G

This video showcases the electrochemiluminescence detection of islet autoantibodies in human serum. The antibodies in the serum bridge the ruthenium-conjugated antigen to the biotinylated capture antigen, forming complexes that are detected by electrochemiluminescence measurements.

Detection of Human Islet Autoantibodies Using an Electrochemiluminescence Assay

This video demonstrates a protocol for detecting serum-specific immunoglobulin E using a microfluidic cartridge-based chemiluminescence system. Serum IgEs interact with distinct allergens immobilized in the reaction zone of the cartridge, which are subsequently detected with peroxidase-conjugated anti-IgE antibodies and a chemiluminescent substrate, allowing simultaneous detection of multiple allergen-specific IgEs.

A Microfluidic Cartridge-Based Detection System for Allergen-Specific Immunoglobulin E

De voorgestelde werk beoordeelt het diagnostische potentieel van directe en geamplificeerd surface plasmon resonance imaging (lent) assays, met name voor de detectie van recombinant humaan groeihormoon bij spiked humaan serum door vergelijking lent resultaten direct met commercieel verkrijgbare enzym-gekoppelde immunosorbent assay (ELISA) kit.

Vergelijkende analyse van menselijk groeihormoon in het serum met behulp spri, Nano-SPRI en ELISA assays

We beschrijven hier een methode om aanpasbare antigeen-microarrays te genereren die kunnen worden gebruikt voor de gelijktijdige detectie van serum IgG en IgM auto-antilichamen van mensen en muizen. Deze arrays maken een doorvoer en kwantitatieve detectie mogelijk van antilichamen tegen willekeurige antigenen of epitopen van belang.

Genereren van tweekleurige Antigen Microarrays voor de simultane detectie van IgG en IgM Autoantistoffen

Dit werk beschrijft een protocol dat gebruik maakt van een component-opgeloste aanpak om sensibilisatie te bestuderen bij grasspollenallergene in een cohort van patiënten uit zuidelijk China met allergische rhinitis en / of astma.

Een component-opgeloste diagnostische aanpak voor een studie over grap pollen allergenen in Chinese zuidelijke landen met allergische rhinitis en / of astma

Hier voorgesteld hebben we de methoden voor het detecteren van menselijke islet autoantilichamen met behulp van electrochemiluminescence (ECL) testen. Het protocol, gebruikt voor het voorspellen van type 1 diabetes, kan worden uitgebreid om te detecteren autoantilichamen voor andere auto-immune ziekten.

Electrochemiluminescence testen voor menselijke Islet autoantilichamen

Dit werk toont het potentieel van gedrukte glycan matrix (PGA) technologie voor de analyse van de circulerende anti-koolhydraten antistoffen bij kleine dieren.

Gedrukte Glycan Array: Een gevoelige techniek voor de analyse van het Repertoire van circulerende anti-koolhydraten antilichamen in kleine dieren

Cel-gebaseerde bepaling is een veel gebruikte methode om te detecteren serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin G. Deze methode kan worden toegepast op de klinische diagnose en wetenschappelijk onderzoek van neuromyelitis optisch spectrum stoornissen.

Menselijk Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G detectie van cel-gebaseerde Assay

Hier presenteren we de mediator release assay, met behulp van een rat basofiele leukemie cellijn getransfecteerd met de menselijke IgE receptor, om de degranulatie van effectorcellen te simuleren die typisch worden waargenomen bij type 1 allergische reacties. Deze methode onderzoekt de biologische activiteit van allergenen op een zeer gevoelige, reproduceerbare en aanpasbare manier.

Gestandaardiseerde Mediator Release Assay als een uitlezing voor allergeen potentie

In lijn met de dringende behoefte aan screening op type 1 diabetes, coeliakie en coronavirusziekte 2019, hebben we een high throughput 6-Plex elektrochemiluminescentietest ontwikkeld om tegelijkertijd alle vier de eilandjesautoantilichamen, weefseltransglutaminase autoantilichamen en antilichamen tegen het receptorbindingsdomein van ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 te detecteren.

Een high-throughput multiplexed screening voor type 1 diabetes, coeliakie en COVID-19

Ontdek een microfluidische biochip-methode voor het detecteren van serum-specifiek IgE bij allergiediagnostiek. Deze kosteneffectieve techniek vereist minder serum en is geschikt voor respiratoire, voedsel- en huidallergieën.

Toepassing van Biochip Microfluidic technologie te detecteren Serum allergeen-specifieke Immunoglobulin E (sIgE)

Meer video's verkennen