Name: Een Muriene model van dengue virus-geïnduceerde acute virale encefalitis-achtige ziekte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: Leer een ICR-muizenmodel maken voor acute virale encefalitis door denguevirus met lage virusdosis. Dit protocol biedt een platform voor het bestuderen van neuropathogenese en het screenen van therapeutische interventies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd gesteund door subsidies van het ministerie van wetenschap en technologie (MOST107-2321-B-038-001) en de intramurale financiering 106TMU-CIT-01-2, Taipei, Taiwan.

Experimentele protocollen van dierlijke studie werden goedgekeurd door de institutionele Dierenzorg en gebruikerscomité van het National Defense Medical Center (IACUC Number: 16-261), volgens de richtlijnen vastgesteld door het ministerie van wetenschap en technologie, Taiwan.
1. infectie procedure
<ol><li>Bereid niet-aangepaste DENV2 (stam PL046) voorraden9 (oorspronkelijk verkregen uit de centra voor Ziektecontrole in Taiwan, variërend van 2,5 x 107 tot 1 x 109 Pfu/ml).</li>
	<li>Verdun het virus bestand tot 1 x 106 Pfu met Roswell Park Memorial Institute (rpmi) 1640 medium tot een totaal volume van 40 μL.</li>
	<li>Vul één Injectieflacon van 0,3 mL met een naald van 30 G met 10 μL (2,5 x 105 Pfu) van het verdunde virus en vul een andere injectieflacon van 0,3 ml met een 30 g naald met 30 μl (7,5 x 105 Pfu) verdund virus.</li>
	<li>
Houd de 7-daagse ICR speen Mouse vast en voer de volgende stappen uit.
	<ol>
<li>Voor de intracerebrale injectie, houd de muis in een liggende positie door het indrukken van de oorschelp tussen de wijsvinger en duim, en intracerebrally injecteren 10 μL verdund virus in het Lambda-gebied, het punt op de kruising van het sagittale en lambdoïde hechtdraad 16.</li>
		<li>Na de intracerebrale injectie, houd de muis in een liggende positie met behulp van de wijsvinger en duim en intraperitoneaal Injecteer 30 μL verdund virus zachtjes in de Murine abdomenl. Opmerking: om kannibalisme te voorkomen, wordt 75% alcohol gebruikt om een tijdelijk verlies van de olfactorische sensatie van de moeder te creëren. Daarnaast wordt voorgesteld om de nesten met de ontlasting en urine van hun moeder te bedekken.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Leg de speen muizen terug in hun kooien en wacht 5 minuten om hun veiligheids poststimulatie te controleren met de avidity van muizen, inclusief wandelen en moedermelk zuigen. Opmerking: Meestal tonen muizen een normale activiteit poststimulatie en er lijken geen schadelijke effecten te zijn na de technische uitdaging. Tijdens dit experiment werden de dieren onderhouden door het institutioneel Dierenzorg-en gebruikerscomité van het National Defense Medical Center, Taiwan.</li>
	<li>Evalueer de dagelijkse voortgang van de muizen in termen van lichaamsgewicht (door gebruik te maken van een microgram balans), acute virale encefalitis-achtige ziekte (door het scoren van ziekten zoals beschreven in rubriek 2) en overlevingspercentage9,10,11 ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. ziekte Score
<ol><li>Controleer de graad van acute virale encefalitis-achtige ziekten. Wijs een Score van 0 toe aan gezonde muizen; 1 aan muizen met lichte ziektesymptomen, met inbegrip van gewichtsverlies, verminderde mobiliteit, en de oriëntatie van de klokkenluider lichaam; 2 aan muizen die een limbisch beslag vertonen; 3 aan muizen de tentoonstelling limbische zwakte, met inbegrip van bewegen met moeilijkheden en voorste ledematen of zwakte van de achterste ledematen; 4 voor verlamming; 5 voor de dood. Opmerking: Zodra de score 3 bereikt, worden de symptomen van de ziekte geacht snel te evolueren.</li>
	<li>Plot de scoring van de ziekte, volgens stap 2,1, voor elke dag als een curve-gebaseerd cijfer met behulp van de gemiddelde ± SD van de dagelijkse testscores in elke groep.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Denv-infectie is aangetroffen in het CZS van ernstige dengue-patiënten3,17, wat suggereert dat de mogelijkheid van de manifestatie van acute virale encefalitis optrad tijdens dengue-pathogenese. Hier rapporteren we een in vivo muriene model van DENV-infectie voor het bestuderen van de betrokkenheid van CZS dysfunctie in ernstige dengue, vooral met een focus op DENV-geïnduceerde acute virale encefalitis-achtige ziekten. In vergelijking met de vorige modellen, in h...

DENV, een geleedpotigen virus van de familie Flaviviridae , bevat een positief-Sense RNA-genoom dat drie virale structurele eiwitten codeert (capsid, premembraan en envelop) en zeven virale niet-structurele eiwitten (ns1, NS2A, NS2B, ns3, NS4A, NS4B en NS5). De vier serotypes van DENV (DENV1-4), die jaarlijks ongeveer 390.000.000 mensen infecteren, veroorzaken een wereldwijde last, ook al hebben overheden substantiële inspanningen gericht op muggen vector en Ziektecontrole1. Momenteel zijn beschermende vaccins en therapeutische antivirale geneesmiddelen in ontwikkeling en vereisen verdere validatie op lange termijn2. In de klinische praktijk, hoewel een dengue patiënt met CZS-infectie zeldzaam is, moet het verder worden onderzocht om de diversiteit van dengue-ziekte ontwikkeling3te begrijpen. Verder onderzoek en validering zijn noodzakelijk; met name de World Health Organization (WHO) heeft de betrokkenheid van CZS-stoornissen, zoals cognitieve stoornissen, convulsies, encefalopathie en encefalitis, opgenomen in de classificatie van ernstige dengue3,4. Het bouwen van diermodellen van DENV-infectie is onmisbaar voor het verkennen van de neuro pathogenese van DENV-infectie.
Voor het genereren van CNS infectie door DENV, verschillende studies hebben verschillende routes van DENV infectie uitgevoerd, met inbegrip van (1) intracerebrale inoculatie van C57BL/6 muizen die 4 x 103 plaque-vormende eenheden (Pfu) van niet-aangepaste DENV35kregen, 6, (2) intraperitoneale inoculatie van Balb/c-muizen die 7 x 104 Pfu kregen van in vitro neuroaangepaste DENV47, (3) intracerebrale inoculatie van Zwitserse muizen die 1 x 105 Pfu kregen van in vivo neuroaangepast DENV18en (4) intracerebrale en intraperitoneale co-inoculatie van ICR speen muizen die 1 x 106 Pfu van niet-aangepaste DENV29ontvingen. Volgens de bevindingen van deze onderzoeken5,6,7,8,9, denv infectie in muizen resulteren in virale replicatie in de hersenen, wat leidt tot acute virale encefalitis-achtige syndromen, gedragsveranderingen gepaard met verlamming van de ledematen en orthostatische instabiliteit, CNS neurotoxiciteit en ontsteking, algemene en gelokaliseerde plasma lekkage door de bloed-hersen barrière (BBB), en letaliteit. Alle resultaten van deze onderzoeken5,6,7,8,9 hebben aangetoond dat denv het CZS heeft kunnen infecteren en de inductie van acute virale encefalitis-achtige ziekte na infectie.
Op basis van onze huidige bevindingen9,10,11,12,13,14,15, hebben we een Murine model van denv-infectie gemaakt als een in vivo platform om de therapeutische werkzaamheid van gerichte agenten/factoren tegen virale replicatie te onderzoeken, evenals neurotoxiciteit. Hier rapporteren we het protocol dat wordt gebruikt om een immunocompetente outbred ICR-muis te maken om CZS-infectie te bestuderen en de ontwikkeling van neuropathieën met verschillende ernstcategorieën te monitoren die worden veroorzaakt door denv. De resultaten tonen de significante progressie van encefalitis-achtige ziekte bij met DENV geïnfecteerde muizen in een tijdafhankelijke manier.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 medium (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>Diluter virus</td></tr><tr><td>0.3 mL Insulin Syringe&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>Intracerebral en intraperitoneal injectie</td></tr><tr><td>Microbalance</td><td>METTLER TOLEDO's LabX</td><td>AL104</td><td>Weeg muis</td></tr><tr><td>Non-adapted DENV2 (strain PL046)</td><td>The Centers for Disease Control of Taiwan</td><td>-</td><td>Muis infecteren</td></tr><tr><td>Institute of Cancer Research (ICR) zuigende muis</td><td>BioLASCO Taiwan Co., Ltd</td><td>-</td><td>Ons muismodel</td></tr></tbody></table>

een muriene model van dengue virus-geïnduceerde acute virale encefalitis-achtige ziekte

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

Dengue virus, een door arthropod overgedragen virus dat door muggen wordt overgebracht, kan de ernstige ziekte die bekend staat als dengue hemorragische koorts, die wordt gekenmerkt door dodelijke complicaties als gevolg van plasma lekkage, ascites, pleurale effusie, ademnood, ernstige bloedingen en orgaanstoornis. Een paar gevallen van DENV infectie aanwezig neurologische manifestaties; echter, studies hebben niet onderzocht DENV-geïnduceerde neuropathogenese verder. In deze studie presenteren we een protocol voor het gebruik van een immunocompetente buitengefokte ICR (Institute of Cancer Research) Mouse voor het onderzoeken van de inductie van infectie van het centrale zenuwstelsel (CZS) met DENV, gevolgd door de progressie van acute virale encefalitis-achtige Ziekte.

Ernstige dengue-geassocieerde neurologische complicaties zijn gemeld bij patiënten voor dengue-pathogenese4. Hoewel deze gevallen zeldzaam zijn in de kliniek, kan het creëren van een immunocompetente muriene model van DENV-infectie niet alleen worden gebruikt voor het bestuderen van immunopathogenese, maar ook voor het verkennen van de CZS-infectie, neuro ontsteking, neurotoxiciteit en acute virale encefalitis-achtige ziekte. In deze studie werden volgens onze huid...

Hier presenteren we een protocol voor het creëren van een immunocompetente ICR (Institute of Cancer Research) Murine model van infectie van het centrale zenuwstelsel om de ontwikkeling van neuropathie weer te geven. Monitoring van acute virale encefalitische stoornissen door identieke ziekte scores kan worden uitgevoerd voor het tonen van Denguevirus-geïnduceerde neuropathie in vivo.

Een Muriene model van dengue virus-geïnduceerde acute virale encefalitis-achtige ziekte

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Dit protocol van een ziektemodel zie je dengue virus infectie in de hersenen uitgegroeid tot een in vivo platform voor screening virale en gastheer vectoren geassocieerd met neuropathogenese. In tegenstelling tot eerdere modellen, onze modellen gebruiken instrumenten van de infectie met een lage virale titer, om het immunocompetent Instituut voor Kanker Onderzoek zogende muizen te infecteren voor encefalotische-achtige ziekte voortplanting inductie. Het aantonen van de procedure zal Ting-Jing Shen, een promovendus uit mijn laboratorium.Verdun voor het initiëren van de infectieprocedure het niet-aangepaste denguevirus twee bestands, tot een één keer 10 tot de vijfde plaquevormende eenheden per 40 microliter van RPMI 1640 gemiddelde concentratie. Laad vervolgens een spuit van 0,3 milliliter uitgerust met een naald van 30 meter met 10 microliter verdund virus. En een 0,3 milliliter spuit uitgerust met een 30-meter naald, met 30 microliter virus per dier.Voor intercerebrale levering van het virus, druk op het orakel tussen de duim en wijsvinger om voorzichtig te beperken een zeven dagen oude zogende Institute of Cancer Research muis in een gevoelige positie en injecteren van de 10 microliter volume van verdund virus in de lambda gebied, op het kruispunt van de sagittale en lambdoïde suture. Na de intercerebrale injectie, gebruik de duim en wijsvinger om de muis in een supinepositie te houden, en voorzichtig intraperitoneally, het volume van 30 microliter van verdund virus, in de murinebuik te injecteren. Voor het scoren van de progressie van de ziekte, toewijzen van een score van nul tot vijf aan elke ingeënte muis dagelijks, volgens de rang van acute virale encefalitis-achtige ziekten, en plot de scores voor elke dag als een curve gebaseerde figuur, met behulp van de gemiddelde plus en min de standaard afwijking van de dagelijkse test scores in elke groep.Vergeleken met de veranderingen in het lichaamsgewicht gemeten in mock, medium alleen ingeënt muizen, dengue virus ingeënt dieren vertonen een daling van het lichaamsgewicht op elk moment tijdens de proef. Bovendien, dengue virus besmette dieren tonen een aanzienlijke toename van voorgevoel rughoudingen, limbische aanvallen, limbische zwakte, verlamming, en de dood in vergelijking met de symptomen weergegeven door mock ingeënte dieren. Dengue geïnfecteerde muizen vertonen namelijk een tijdsafhankelijke vermindering van de overlevingskansen die niet wordt waargenomen bij nepgeïnculeerde dieren, wat de oprichting van een besmettelijk model van denguevirus in het centrale zenuwstelsel bevestigt dat de progressie van acute virale encefalitis-achtige ziekten bij muizen aantoont.Punctie van de verkeerde plaats kan leiden tot naaldverstopping door de score en de overloop van de virusoplossing buiten het hoofd, wat resulteert in een mislukte injectie en een mislukte infectie. Na de procedure, hersenmonsters kunnen worden geoogst voor pathologische schade, immuuncel infiltratie, en virale replicatie analyse door hematoxylin en eosine kleuring stroom cytometrie, en plaque vorming test, respectievelijk. Ons immunocompetent murinemodel biedt een platform voor het verkennen van de pathogene mechanismen van denguevirusinfectie, voor de ontwikkeling van denguevirusvaccins of anti-denguevirusmedicijnen.Dengue virus is een bioveiligheid niveau twee ziekteverwekker, en als zodanig, alle experimenteren met dit virus moet worden voltooid in een gekwalificeerde dier bioveiligheid niveau twee laboratorium.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Deze video toont de inductie en de klinische scoren van een diermodel van multiple sclerose: chronisch-recidiverende experimentele auto-immune encephalomyelitis in DA ratten. De ziekte, veroorzaakt door het immuniseren van ratten met een emulsie met hele rat het ruggenmerg en de volledige Freund's adjuvans, presenteert klinische symptomen lijken op de menselijke ziekte.

Inductie en Klinische Scoring van chronische-Relapsing experimentele autoimmune encefalomyelitis

Gebruik makend van luciferase en in vivo imaging-systemen (IVIS) als een roman middel om ziekte-eindpunten identificeren voordat klinische ontwikkelingen voordoen. IVIS heeft ons toegestaan ​​om te visualiseren in real time de invasie van encefalitisch virussen over meerdere dagen, met een meer accurate ziekte model voor toekomstige studie. Het is ook toegestaan ​​om het potentieel beschermende kenmerken van antivirale middelen en vaccins sneller identificeren dan op dit moment gebruikte...

In vivo Imaging Systems (IVIS) Detectie van een neuro-invasieve encefalitisch Virus

The video demonstrates the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in a mouse model by injecting a combination of myelin oligodendrocyte glycoproteins and inactivated Mycobacterium tuberculosis. The model enables researchers to study disease mechanisms and test therapeutic interventions.

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

This video demonstrates the generation of a mouse model with a CNS infection. A suckling pup is injected with the virus both intracranially and intraperitoneally. The virus spreads, infecting the CNS causing neuronal cell death and inflammation. The pup is assessed for symptoms of infection as the disease progresses.

Generation of a Murine Model with a Central Nervous System Infection

In this video, a mouse model of multiple sclerosis is established using experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The mouse is injected with an emulsion containing a neuronal peptide and an adjuvant, triggering an immune response that activates autoreactive T cells. This is followed by an injection of pertussis toxin (PTX) to increase blood-brain barrier permeability, allowing the autoreactive T-cells to infiltrate the brain. This infiltration initiates a signaling cascade that...

This video demonstrates the induction of handling-induced seizures in a mouse infected with Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV). The infected mouse, which has hyperexcitable neurons, is exposed to external physical stimuli. This exposure causes stress, leading to abnormal electrical activity in the neurons, which results in seizures.

Handling-Induced Seizures in a Mouse Model

Influenza A virussen (IAVs) zijn belangrijke menselijke respiratoire pathogenen. Om te begrijpen van de pathogeniteit van IAVs en om de preklinische testen van nieuwe vaccin benaderingen, zijn diermodellen nabootsen menselijke fysiologie vereist. Hier beschrijven we technieken om IAV pathogenese, humorale reacties en vaccin werkzaamheid met behulp van een muismodel van infectie te evalueren.

Influenza-A Virus Studies in een muismodel van infectie

Hier beschrijven we een methode voor de vaststelling van een model voor Zika virus-geïnduceerde microcefalie in muis. Dit protocol bevat methoden voor embryonale, Neonatale en volwassene-fase intracerebrale inoculatie van de Zika-virus.

Tot vaststelling van Muismodellen voor Zika-Virus-geïnduceerde neurologische aandoeningen met behulp van intracerebrale injectie strategieën: embryonale, Neonatale en volwassen

Het hier gepresenteerde protocol maakt de reproductie mogelijk van een wijdverspreide demyelinatie van grijze stof van beide corticale hemisferen bij volwassen mannelijke Dark Agouti-ratten. De methode bestaat uit intracerebrale implantatie van een katheter, subklinische immunisatie tegen myeline oligodendrocyt glycoproteïne en intracerebrale injectie van een pro-inflammatoir cytokinemengsel via de geïmplanteerde katheter.

Rat model van wijdverspreide cerebrale corticale demyelinatie geïnduceerd door een intracerebrale injectie van pro-inflammatoire cytokinen

Het doel van het protocol is om de technieken aan te tonen die worden gebruikt om virale ziekten te onderzoeken door het Zikavirus te isoleren en te kwantificeren, van meerdere organen in een muis na infectie.

Isolatie en kwantificering van het Zikavirus van meerdere organen in een muis

Intracerebrale infectie met het Theiler's murine encephalomyelitis virus (TMEV) in C57BL/6 muizen repliceert veel van de vroege en chronische klinische symptomen van virale encefalitis en daaropvolgende epilepsie bij menselijke patiënten. Dit artikel beschrijft de virusinfectie, symptomen en histopathologie van het TMEV-model.

Een model voor epilepsie van infectieuze etiologie met behulp van Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus

Leer een ICR-muizenmodel maken voor acute virale encefalitis door denguevirus met lage virusdosis. Dit protocol biedt een platform voor het bestuderen van neuropathogenese en het screenen van therapeutische interventies.

Een Muriene model van dengue virus-geïnduceerde acute virale encefalitis-achtige ziekte

Meer video's verkennen