Een Model Interface menselijke Blood-Brain barrière kruisingen door ziekteverwekkers of geneesmiddelen en hun interacties met de hersenen bestuderen

Dit menselijke bloed-hersenen interface model is nuttig voor het bestuderen van de overdracht van moleculen in het neurosysteem. Evenals voor het bestuderen van microben bereiken een geïnfecteerde hersenpijn tumor. De toevoeging van de mini-hersenen aan deze bloed-hersenbarrière of BBB-model maakt de studie van onze ziekteverwekkers en moleculen die ervoor zorgen dat de BBB zich gedragen in de hersenen.

Het degraderen van de procedure zal Florian Bakao zijn, de promovendi voor mijn laboratorium. Voor het opzetten van een BBB mini hersenen polyester membraan cultuur insert apparaat, verdunnen van de cellen tot een vijf keer 10 tot de vierde cellen per insert concentratie onvolledige endotheelcel medium en voeg de juiste hoeveelheid cellen aan elke polyester membraan cultuur invoegen in een 12 put plaat. Plaats vervolgens de wisselplaten en de celkweek incubator totdat de cellen 100% samenvloeiing bereiken.

Houd een 12 put plaat met een milliliter poly-D-lysine haar put voor vier uur bij kamertemperatuur. Gevolgd door een milliliter laminine per goed 's nachts. Vervang de laminine door één milliliter endotheelcelmedium aangevuld met 5%foetaal runderserum of FBS.

Plaats de plaats in een couveuse voor een uur. Ter voorbereiding van de mini-korrel voorzichtig trypsinize de menselijke neuronen astrocyten in CHME kloon vijf cellen. Associëren de cel pellets met volledige endotheelcel medium.

Na het tellen op 3,6 keer 10 tot de vijfde neuronen en astrocyten tot 0,4 keer 10 tot de vijfde CHME-kloon hebben vijf cellen per put een 12 putplaat. En zaad de 12 put plaat. Voor de bouw van de BBB mini hersenen 24 uur na het zaaien vervang het gebruikte medium met verse volledige endotheelcel medium en de overdracht van de cerebrale micro vasculaire endotheelcel gecoate polyester membraan cultuur inserts over de mini hersencellen.

Plaats vervolgens de BBB veel hersenapparaat in de incubator. Om de BBB mini brain endotheel doorlaatbaarheid te valideren voeg 1,5 milliliter transport buffer per put toe aan een nieuwe 12 put plaat. En draai elk filter ondersteboven om het medium zorgvuldig te verwijderen zonder de endotheelcelbarrière te beïnvloeden.

Plaats elk filter in een put van het transport buffer gevulde plaat, en voeg 0,5 milliliter Lucifer geel in elke put. Plaats de plaat vervolgens 10 minuten in de couveuse voordat u de filters overzet in een nieuwe transportbuffer gevuld 12 putplaat. Na het opzetten van een BBB veel hersenen apparaat zoals aangetoond, voeg 3500 platforming eenheden van de Franse neurotrofische virus stam van gele koorts virus verdund en 50 microliters van 2% FPS endotheelcel medium, zeer zorgvuldig, op de top van luminale compartiment.

Inenting de controle BBB mini hersenen met 50 microliters van 2%FBS endotheelcelmedium zonder virus. Plaats vervolgens het virus bloot BBB veel hersenapparaat in de incubator voor 24 uur. De volgende dag, verwijder de inserts om de endotheelcel doorlaatbaarheid en een metgezel te bepalen, net zoals aangetoond.

Sla een milliliter monster van elke put om het virus titer in het middelste compartiment te bepalen. Onder de wisselplaat voorzichtig om lekkage van het luminale compartiment in de abluminale compartimenten te voorkomen. Om het transport van een neuron gericht op biomoleculaire over de bloed-hersenbarrière te bestuderen, voeg het biomolecuul van belang aan de inserts en de plaat terug te keren naar de celcultuur incubator.

Na 24 uur op afstand voegt en bepalen endotheliale doorlaatbaarheid. Dan vlek de vele hersencellen met de juiste antilichaam voor het opsporen van de aanwezigheid van de bio molecuul van belang in de mini-hersenen. Menselijke cerebrale micro vasculaire endotheelcellen drukken alle subsets van rececptors, Efflux transporters of transporteurs uit die belangrijke relevante eiwitten zijn voor hun biologische functies.

Sommige Franse neuro tropen virus stam van gele koorts virus kan de bloed-hersenbarrière kruisen op 24 uur. De virussen versterken dan voor de komende twee dagen door de vermenigvuldiging van het virus in de hersencellen. Verder wordt de expressie van specifieke virale biomarkers gestimuleerd wanneer deze neuro invasieve virale populatie serieel wordt doorgegangerd op de mini-hersencellen en strikt correleert met de virale belasting.

Na te zijn toegevoegd aan de limiet van compartiment cel penetrerende molecuul Neuro-Tag Neurovita kruist de bloed-hersenbarrière en is in staat om menselijke neuronen richten. Cel penetrerende molecuul neuro tag Delta neurovita kruist de endotheelcelbarrière, maar richt zich minder efficiënt op de menselijke neuronen. Na te zijn toegevoegd aan het kleine middelste compartiment, cel penetrerende molecuul Neuro-Tag Neurovita kruist de bloed-hersenbarrière en is in staat om de axonen van menselijke neuronen regenereren, na het verwonden.

In tegenstelling tot celdondervormingsmolecuul Neuro-Tag Neurovita Delta, de inactieve vorm van Neurovita. Wanneer toegepast na de axon krassen cel doordringende molecuul Neuro-Tag Neurovita triggers de neuro bescherming van de gewonde neuronen en de x zonale regeneratie. Strikt in het belang van de praktijken.

niet over het gebruik van I-cel passages. Probeer een schijn van medium en regio's te behouden en controleer op de afwezigheid van mycoplasma. Interacties tussen de mini-hersenen en de drugs zijn microben van belang kan verder worden bestudeerd door transcript dat deze of klassieke biologie genaamd technieken chemischeiseren.