Het inducerende apicale periodontitis bij muizen

Ons protocol maakt het mogelijk om periapische parodontitis te bestuderen in een toegankelijk en gecontroleerd muismodel. Daarom heeft dit protocol voordelen ten opzichte van patiëntmonsters of in-vitro modellen. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat de muis goed is bestudeerd en dat de methode technisch eenvoudig is in termen van faciliteitsvereisten en kosteneffectief is.

Aangezien deze procedure uitdagend is vanwege de kleine afmetingen van de tanden, is het nuttig om de procedure te visualiseren om meer te weten te komen over de positionering en prestaties van de techniek. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op teen knijpen, plaats de muis aan de dominante kant van de hand op een gesloten cel geëxtrudeerd polystyreen schuim oppervlak en zet de poten met tape. Met behulp van een enkele rubberen band per paar snijtanden, en lange naalden vastgemaakt aan de gesloten cel geëxtrudeerd polystyreen schuim oppervlak, prop de mond open.

Gebruik gesloten tangen geplakt op het schuim om de rechter wang in te trekken. En plaats het schuim en de muis onder een microscoop en een lichtbron. Trek vervolgens de tong in met een tandspatel en gebruik een 27-meterige naald om 25 tot 50 microliters lokale verdoving in de slijmvliesplooi te injecteren naast de eerste mandibulaire molar.

Weefsel zwelling rond de injectieplaats moet worden waargenomen. Om de pulp bloot te leggen, gebruik dan elke geschikte tandmotor uitgerust met een ronde, hoge snelheid diamant 0,8 millimeter tandheelkundige bur met een snelheid van 800 rondes per minuut, om het occlusale deel van de eerste juiste mandibulaire molar boren totdat de pulp hoorns zichtbaar zijn door het dentine. Gebruik een K of H bestand, nummer acht of nummer 10 om de pulp te doorboren en breek de dentine die de mesial en distal pulp hoorns om het inbrengen van het bestand in de hoorns.

Doorgaan met het werken met de bestanden in de pulp zo diep mogelijk, terwijl de verbreding van de openingen met de bestanden, bloeden uit de pulp wordt meestal waargenomen rond de scherpe randen van de tand met de boer en verwijder de tand uit de afzondering om pijn te verminderen tijdens het experiment. Gebruik een micro borstel om vuil schoon te maken. En laat de contralaterale linker eerste mandibulaire kies als een controle.

Gedurende de eerste drie dagen na de procedure, gewicht van de dieren en injecteren 0,1 milligram per kilogram buprenorfine intraperitoneally eenmaal per dag. Blijf de dieren de komende 42 dagen monitoren door twee tot drie keer per week te wegen en te beoordelen. En lever voedselpellets verzacht met water in een petrischaaltje op de vloer van de kooi gedurende de follow-up periode.

Gebruik aan het einde van het experiment een chirurgische schaar en tangen om het deel van de kaak te verzamelen dat de drie kiezen aan zowel de behandelde als niet-behandelde zijden omvat. En gebruik tangen af te pellen zo veel van het zachte weefsel mogelijk, waardoor meestal bot en tanden op de monsters. Spoel het weefsel kort in PBS.

Vóór fixatie in vier procent paraformaldehyde gedurende 24 tot 48 uur. Spoel de monsters vervolgens drie keer in verse PBS. Voor Micro-Computed Tomography, of Micro-CT analyse plaats de geoogste weefsels in een 12 millimeter diameter buis met 1,5 milliliter PBS op de scanner stadium.

Met de monsters georiënteerd, zodat de buccale of linguale oppervlakken van de tand en wortel parallel aan de onderkant van de buis leggen. Gebruik een spons om de monsters te scheiden. En bedek de bovenkant van de buis met flexibele film.

Selecteer het controlebestand en stel de energie in op 70 kilovolt, de intensiteit op 114 microversterkers en de resolutie op een voxel-grootte van zes micrometer. Klik op Scout-View. Wanneer de afbeelding wordt weergegeven, klikt u op Referentielijn en markeert u het gebied van de monsters voor scannen en klikt u na elk voorbeeld op Scannen toevoegen.

Wanneer alle voorbeelden zijn gemarkeerd, gaat u naar de takenlijst en selecteert u Taaktaken starten. Voor het contouren van de Micro-CT-segmenten selecteert u het segment dat het benaderende midden van de tand vertegenwoordigt, waarin de coronale pulp, radiculaire pulp van beide kanalen en beide apicale foramens aanwezig zijn. Klik op het contourpaneel en klik vanaf het distale punt van de distale wortel apex, markeer de apicale randcorrond aan het radiale paque apicale gebied, door de mesiële rand van de mesiale wortel top, na de distale grens van de mesiale wortel, en de mesiale rand van de distale wortel, door het furcation gebied.

Kopieer en plak de resulterende contour en pas de contour dienovereenkomstig aan op vijf segmenten die aan weerszijden van het middelste segment zijn geplaatst. Als u het weefselvolume van de contour wilt berekenen die voor elk monster is gemarkeerd, selecteert u onder Micro-CT-evaluatie Taak en klikt u op 3D-evaluatie. Klik vervolgens in het venster van 3D-evaluatie op Selecteren en selecteer een filter om het weefselvolume te berekenen.

Breng aan het einde van de Micro-CT-analyse de weefsels van de scanner over naar een microcentrifugebuis met een milliliter EDTA gedurende 10 dagen. Plaats aan het einde van de ontkalking de monsters gedurende één uur per concentratie in histologische cassettes met toenemende ethanolconcentraties. Na de tweede ethanol onderdompeling, breng de monsters in xyleen voor twee een uur onderdompeling, Voordat u de cassettes in 60 graden Celsius vloeibare paraffine in een chemische kap 's nachts om de xyleen te verdampen.

De volgende ochtend, plaats de uitgedroogde monsters met de kroon en wortels georiënteerd parallel aan de bodem van de mal, in een histologische blokkering machine om de monsters in te bedden in paraffine. Om secties te verkrijgen, zet u het blokmonster van het paraffineblok op het microtonsnijblok en trim het monster totdat het weefsel van belang is bereikt. Wanneer een deel van de tand zichtbaar is, beginnen met het verkrijgen van zes micrometer dikke secties, het aanpassen van de snijhoek tot sagittale secties die de coronale en radiculaire pulp en de apicale foramen zijn verkregen.

Hier wordt een hele behandelde onderkaak getoond. Vergroting van de behandelde eerste rechter kies, maakt observatie van de blootstelling van zowel de mesial en distal pulp hoorns en de ingang van de kanalen. Micro-CT beeldvorming maakt visualisatie van de blootstelling aan mesiële pulp en de mesiële en distale periapische radiolucente gebieden van botresorbtie mogelijk.

Inderdaad, een significante periapische botresorbtie van het weefselvolume wordt gemeten in de behandelde tanden, in vergelijking met de controles. Histologische analyse geeft aan dat in de behandelde tand de tandpulp zelf necrose vertoont, die duidelijk kan worden waargenomen na H- en E-kleuring in vergelijking met het controlegeorganiseerde pulpweefsel. Bovendien, en belangrijk, in het periapische gebied van de behandelde tand, wordt een periapische laesie bestaande uit immuuncellen waargenomen, die afwezig is in de controletanden.

Het is van vitaal belang om de muis correct te positioneren tijdens de blootstelling aan de pulp, omdat een correcte positionering een goede toegang tot de mond van het dier en optimale resultaten mogelijk maakt. Aanvullende methoden van periapische ontstekingsanalyse zoals immunohistochemische weefselvlekken en fax en gedetailleerde moleculaire analyse van de cellen kunnen volgens dit protocol worden uitgevoerd. Dit protocol is belangrijk, niet alleen voor tandonderzoek, maar ook voor immunologisch onderzoek, omdat het een model biedt voor lokale geïnduceerde ontsteking met een ingebouwde interne controle.