Name: Technisch aspect van de geautomatiseerde synthese en real-time kinetische evaluatie van 11C SNAP-7941 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Leer de geautomatiseerde synthese van [11C]SNAP-7941 voor real-time PET-kinetiek op P-gp-expresserende cellen. Deze methode verbetert de evaluatie van receptorexpressie voor metabole aandoeningen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door het Oostenrijkse wetenschaps Fonds (FWF P26502-B24, M. Mitterhauser). We zijn dankbaar voor de technische ondersteuning van T. Zenz en A. Krcal. Verder danken we K. Pallitsch voor de voorbereiding van de AgOTf en H. Spreitzer voor de distributie van de precursor.

<ol><li>Saito, Y., Maruyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+melanin-concentrating+hormone+receptor+and+its+impact+on+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">Identification of melanin-concentrating hormone receptor and its impact on drug discovery.</a> Journal of Experimental Zoology. 305, 761-768 (2006).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+in+vitro+%26+in+vivo+evaluation+of+%5B11C%5DSNAP-7941+-+the+first+PET+tracer+for+the+melanin+concentrating+hormone+receptor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Preclinical in vitro & in vivo evaluation of [11C]SNAP-7941 - the first PET tracer for the melanin concentrating hormone receptor 1.</a> Nuclear Medicine and Biology. 40, 919-925 (2013).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosynthesis+of+%5B+11C%5DSNAP-7941-the+first+PET-tracer+for+the+melanin+concentrating+hormone+receptor+1+%28MCHR1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied.+Radiation+and+Isotopes%22%5BJournal%5D)">Radiosynthesis of [ 11C]SNAP-7941-the first PET-tracer for the melanin concentrating hormone receptor 1 (MCHR1).</a> Applied. Radiation and Isotopes. 70, 2287-2294 (2012).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNAPshots+of+the+MCHR1%E2%80%AF%3A+a+Comparison+Between+the+PET-Tracers+%5B+18+F+%5D+FE+%40+SNAP+and+%5B+11+C+%5D+SNAP-7941%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging+Biology%22%5BJournal%5D)">SNAPshots of the MCHR1 : a Comparison Between the PET-Tracers [ 18 F ] FE @ SNAP and [ 11 C ] SNAP-7941.</a> Molecular Imaging Biology. , 1-12 (2018).</li>
<li>Schirmer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntheses+of+precursors+and+reference+compounds+of+the+melanin-+concentrating+hormone+receptor+1+%28MCHR1%29+Tracers+%5B11C%5DSNAP-7941+and+%5B18F%5DFE%40SNAP+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Syntheses of precursors and reference compounds of the melanin- concentrating hormone receptor 1 (MCHR1) Tracers [11C]SNAP-7941 and [18F]FE@SNAP for positron emission tomography.</a> Molecules. 18, 12119-12143 (2013).</li>
<li>Miller, P. W., Long, N. J., Vilar, R., Gee, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthese+von+11C-%2C+18F-%2C+15O-+und+13N-Radiotracern+f%C3%BCr+die+Positronenemissionstomographie%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">Synthese von 11C-, 18F-, 15O- und 13N-Radiotracern für die Positronenemissionstomographie.</a> Angewandte Chemie. 120, 9136-9172 (2008).</li>
<li>Pichler, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+on+PET+radiochemistry%3A+part+1+-+covalent+labels+-+18+F%2C+11+C%2C+and+13+N%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">An overview on PET radiochemistry: part 1 - covalent labels - 18 F, 11 C, and 13 N.</a> Journal of Nuclear Medicine. 59, 1350-1354 (2018).</li>
<li>Pichler, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molar+activity+-+The+keystone+in+11C-radiochemistry%3A+An+explorative+study+using+the+gas+phase+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Molar activity - The keystone in 11C-radiochemistry: An explorative study using the gas phase method.</a> Nuclear Medicine and Biology. 67, 21-26 (2018).</li>
<li>Larsen, P., Ulin, J., Dahlstrøm, K., Jensen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+%5B11C%5Diodomethane+by+iodination+of+%5B11C%5Dmethane%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Radiation+and+Isotopes%22%5BJournal%5D)">Synthesis of [11C]iodomethane by iodination of [11C]methane.</a> Applied Radiation and Isotopes. 48, 153-157 (1997).</li>
<li>Dahl, K., Halldin, C., Schou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+methodologies+for+the+preparation+of+carbon-11+labeled+radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Translational+Imaging%22%5BJournal%5D)">New methodologies for the preparation of carbon-11 labeled radiopharmaceuticals.</a> Clinical and Translational Imaging. 5, 275-289 (2017).</li>
<li>Raaphorst, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiopharmaceuticals+for+assessing+ABC+transporters+at+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical.+Pharmacollogy+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Radiopharmaceuticals for assessing ABC transporters at the blood-brain barrier.</a> Clinical. Pharmacollogy & Therapeutics. 97, 362-371 (2015).</li>
<li>Nics, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Speed+matters+to+raise+molar+radioactivity%3A+Fast+HPLC+shortens+the+quality+control+of+C-11+PET-tracers%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Speed matters to raise molar radioactivity: Fast HPLC shortens the quality control of C-11 PET-tracers.</a> Nuclear Medicine and Biology. 57, 28-33 (2018).</li>
<li>Zeilinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+approaches+for+the+reliable+in+vitro+assessment+of+binding+affinity+based+on+high-resolution+real-time+data+acquisition+of+radioligand-receptor+binding+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging+%28Research%29%22%5BJournal%5D)">New approaches for the reliable in vitro assessment of binding affinity based on high-resolution real-time data acquisition of radioligand-receptor binding kinetics.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging (Research). 7, 22(2017).</li>
</ol>

We hebben niets te onthullen.

De radio synthese van [11C] SNAP-7941 werd vastgesteld op een commerciële synthese module. Vanwege de mogelijkheid om de voorbereidingsprocedure volledig te automatiseren, werd de radiosynthese bewezen betrouwbaar te zijn en werden verbeteringen in de stralingsbescherming van de exploitant gerealiseerd. De voorbereiding van de synthesizer heeft een enorme impact op de kwaliteit van de radio Tracer, vooral in termen van molaire activiteit. Het is dus essentieel om constant te werken onder inerte omstandigheden (bijv. helium atmosfeer) en alle lijnen te spoelen die zich vóór het reactie vaartuig bevinden (doellijn, [11C] ch3I productiecyclus en reactor (Zie Figuur 2)). Bovendien, het verwarmen van de respectieve vallen en ovens voor het begin van de synthese om vocht en atmosferische koolstof te verwijderen verhoogt de molaire activiteit op een voordelige wijze. Vooral de AgOTf kolom, geïmpregneerd met graphitized Carbon, is extreem gevoelig voor vochtigheid. Zelfs kleine hoeveelheden van elke bron van vocht verstoren de omzetting van [11c] ch3I naar [11c] ch3otf. Voor aanvang van de synthese moeten de [11c] co2 -trap en de [11c] ch3I-val opnieuw op kamertemperatuur worden afgekoeld om de daaropvolgende overvulling mogelijk te maken. Bovendien, het is aanbevolen om het ontbinden van de voorloper kort voor aanvang van de synthese en de basis rechtstreeks in de precursor oplossing toe te voegen.
De kwaliteitscontrole voor radiotracers van Carbon-11 moet rationeel worden ontworpen voor een continue en snelle workflow. De belangrijkste parameters voor celkweek studies zijn echter radiochemische zuiverheid en molaire activiteit om geldige resultaten te verkrijgen. De juiste beoordeling van de molaire activiteit vereist een robuuste analytische HPLC-methode en de ijkcurve moet het concentratiebereik van het eindproduct bestrijken. Het uitdagende deel voor radiotracers is om een concentratie te bereiken boven de bepaalbaarheidsgrens (LOQ) als gevolg van kleine hoeveelheden, die worden geproduceerd tijdens de radio synthese. Vandaar dat de kunst is om de balans te vinden tussen hoge molaire activiteiten om te voorkomen dat de receptor verzadiging en hoog genoeg concentraties nog in staat zijn om het niet-radioactieve signaal te kwantificeren.
[11C] SNAP-7941 werd bevestigd als een krachtig substraat van de humane P-GP Transporter, omdat er geen accumulatie werd waargenomen in de onbehandelde of door het voertuig behandelde MDCKII-hMDR1 cellen als gevolg van een snelle Efflux. Zowel de experimentele set-ups (MDCKII-WT of voorgeblokkeerde MDCKII-hMDR1-cellen) hadden daarentegen vergelijkbare resultaten (accumulatie van [11C] SNAP-7941), wat de veelzijdigheid van deze in vitro assay ondersteunt. MDCKII-hMDR1 cellen zijn zeer geschikt voor LigandTracer experimenten als gevolg van hun stabiele transfectie, snelle groei en aanhoudende tegen afschuiving stress veroorzaakt door de roterende cel cultuur schotel. Het ontbreken van [11C] SNAP-7941 opname in de rat en muizenhersenen kan daarom optreden veroorzaakt door Efflux door de P-GP Transporter. Vanwege de transfectie van Canine niercellen met de Human multi Drug Resistance proteïne 1 (hMDR-1, P-GP), is de voorspellende waarde van deze methode voor effluxtransporter binding bij de mens hoog, wat gunstig is in termen van een toekomstige klinische toepassing. Tot dusver werd de selectiviteit van andere effluxtransporter echter niet geverifieerd. Daarom kunnen andere cellijnen worden gebruikt, waarbij verschillende prominente effluxtransporters worden uitgesproken als het borstkanker resistentie proteïne (BCRP) of meervoudige resistentie proteïne-1 (MRP-1), om interacties naar deze transporters te bestuderen. De methode is in vergelijking met klassieke accumulatie of transport assays zeer eenvoudig en geeft onmiddellijk kwalitatieve resultaten. Bovendien is het grootste voordeel dat deze technologie de directe interactie van de PET Tracer en het doelwit in real-time kan evalueren, in tegenstelling tot het conventionele experiment met indirecte kwantificering (meestal verplaatsing). Daarnaast biedt de real-time radioassay software experimentele flexibiliteit (bijv. nuclide verval correctie, meet tijd en posities, enz.) en dus een hoge vrijheid voor gebruikers. Aan de andere kant, beperkingen van de methode omvatten een lage monsterdoorvoer, omdat slechts één cel schotel kan worden gemeten op een tijdstip. Bovendien moeten er nog enkele andere technische en operationele kwesties in aanmerking worden genomen: de beschreven technologie is zeer gevoelig voor achtergrondstraling; stralingsbronnen moeten dus op afstand worden bewaard en de nadruk moet worden gelegd op de achtergrond meting voorafgaand aan het experiment. Een andere kwestie met betrekking tot experimenten bij hogere temperaturen dan kamertemperatuur, is de verwarming van de hellende steun: verdamping van het celkweekmedium kan de detector beïnvloeden. In plaats van te verwarmen, wordt het hele apparaat bij voorkeur in de incubator geplaatst. Bovendien is de methode beperkt tot aanhandige cellijnen. Door de rotatie van de cel cultuur schotel, shear stressgevoelige cellen kunnen loskoppelen van het gerecht, wat kan leiden tot ongeldige resultaten.
Niettemin, als de experimenteerder aandacht besteedt aan deze kleine nadelen, levert de methode snelle en betrouwbare resultaten voor de analyse van het kinetische gedrag van preklinische PET-tracers.

[11C] SNAP-7941 werd geëvolueerd als de eerste positron emissie tomografie (PET)-Tracer gericht op de melinconcentratie hormoonreceptor 1 (MCHR1)-een receptor voornamelijk betrokken bij de centrale regulering van de eetlust en voedselinname1. Koolstof-11-etikettering van Snap-7941, een goed gekenmerkte MCHR1 antagonist, leverde de authentieke Pet-Tracer2,3,4,5op. Volledig geautomatiseerde radio synthese is echter zeer uitdagend in termen van tijd werkzaamheid en reproduceerbaarheid met de kortstondige radionuclide Carbon-11 die een halfwaardetijd van 20 min.6biedt. De totale synthese tijd moet tot een minimum worden beperkt, en als vuistregel mag niet meer dan 2-3 half-Lives (dat wil zeggen, rond 40-60 min voor koolstof-11)7. In het bijzonder moeten synthese procedures voor radiotracers gericht op receptor systemen met lage expressie dichtheden uitgebreid worden geoptimaliseerd om voldoende opbrengsten en bijgevolg hoge molaire activiteit8te verkrijgen. De synthetische strategie volgt vaak de productie van radionuclide binnen een cyclotron en de release van [11C] co2 aan de synthesizer. Daar wordt [11c] co2 voor het eerst gereduceerd tot [11c] ch4 en vervolgens gereageerd met jodium om [11c] ch3I te leveren via de gasfase methode9,10. Verdere behandeling met Silver triflaat rendementen [11C] ch3otf direct on-line. Daarna wordt deze reactieve koolstof-11 gelabelde intermediair geïntroduceerd in een oplossing die het precursor molecuul bevat. Een geautomatiseerde radio synthese omvat bovendien een zuiveringsproces met semi-preparatieve RP-HPLC, inclusief de daaropvolgende formulering van het product dat geschikt is voor preklinisch onderzoek en klinische studies.
Ongeacht de halfwaardetijd van de radionuclide en de tijds inspanning van de radio synthese, is de farmacokinetische component van een radiofarmaceuticum het meest kritische onderdeel dat moet worden geëvalueerd tijdens de ontwikkeling van de PET-Tracer. In termen van neuroimaging, hersenen binnenkomst van de PET-Tracer is de belangrijkste voorwaarde. Echter, de bloed-hersen barrière (BBB), een "veiligheidsgrens" van de hersenen, spreekt sterk uit effluxtransporters die kleine moleculen kunnen lossen (bijv. PET-tracers) en hun toepasbaarheid efficiënt belemmeren.
Een enorm nadeel tijdens preklinische evaluatie zijn onverwachte interacties naar deze effluxtransporters, die vaak niet worden herkend in in vitro experimenten en die leiden tot falen van de PET-Tracer in vivo, zoals waargenomen voor [11C] SNAP-7941. μPET Imaging bij ratten toonde een lage hersen accumulatie aan, die dramatisch toenam na toediening van de P-GP-remmer tariquidar11. Deze gegevens suggereerden dat [11C] SNAP-7941 een substraat is van dit effluxtransporter systeem dat ligand binding met centrale MCHR1 belemmert. Helaas is er nog steeds een gebrek aan adequate in vitro modellen waardoor de voorspelling van BBB penetratie in een vroeg stadium van Tracer ontwikkeling.
Hier beschrijven we de geautomatiseerde synthese van [11C] SNAP-7941 met behulp van een synthesizer voor Carbon-11 methylations. De nadruk van dit werk is om een overzicht te geven over hoe een opeenvolgende experimentele aanpak te organiseren, met inbegrip van de geautomatiseerde synthese, kwaliteitscontrole en opeenvolgende in vitro evaluatie met de zeer kortstondige nuclide Carbon-11.
Ten eerste worden de belangrijkste stappen voor een succesvolle radio synthese met minimale tijd uitgaven en maximale opbrengst beschreven. Vervolgens wordt een betrouwbare kwaliteitscontroleprocedure ingesteld waardoor de radio Tracer beschikbaar is voor potentiële klinische studies en voldoet aan de criteria van de Europese Farmacopee12. Kwantificering van de molaire concentratie en berekening van de respectieve molaire activiteit is een essentiële eis voor de opeenvolgende kinetische metingen.
Ten slotte wordt een nieuwe en eenvoudige in-vitro methode gepresenteerd die de interacties van [11C] snap-7941 naar de effluxtransporter, P-GP (hMDR1), evalueert. Het voorgestelde kinetische model maakt gebruik van een eenvoudig te hanteren apparaat dat een onmiddellijke interpretatie van gegevens mogelijk maakt en minimale celkweek inspanning vereist13.

<table><tbody><tr><td>Tabel 1: Lijst van materialen en instrumentatie van de volledig geautomatiseerde radiosynthese van [11C]SNAP-7941</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ni-katalysator</td><td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td><td></td><td>Shimalilte Ni gereduceerd, 80/100 mesh</td></tr><tr><td>Jodium</td><td>Merck, Darmstadt, Duitsland</td><td></td><td>1.04761.0100</td></tr><tr><td>Acetonitril</td><td>Merck, Darmstadt, Duitsland</td><td></td><td>voor DNA-synthese, &lt; 10 ppm H2O</td></tr><tr><td>Acetonitril</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS</td><td></td><td>HPLC-kwaliteit</td></tr><tr><td>Ammoniumacetaat</td><td>Merck, Darmstadt, Duitsland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Azijnzuur</td><td>Merck, Darmstadt, Duitsland</td><td></td><td>glashelder</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck, Darmstadt, Duitsland</td><td></td><td>96%</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>B. Braun, Melsungen, Duitsland</td><td></td><td>0.9%</td></tr><tr><td>Tetrabutylammoniumhydroxide</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS</td><td></td><td>HPLC-kwaliteit</td></tr><tr><td>SPE-cartridge</td><td>Waters, Milford, MA, VS</td><td></td><td>SepPak C18plus</td></tr><tr><td>Semi-preparatieve RP-HPLC-kolom</td><td>Merck, Darmstadt, Duitsland</td><td></td><td>Chromolith SemiPrep RP-18e, 100-10 mm</td></tr><tr><td>Prekolom</td><td>Merck, Darmstadt, Duitsland</td><td></td><td>Chromolith Guard RP-18e, 5-4.6 mm</td></tr><tr><td>Precursor</td><td>Universiteit van Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>SNAP-zuur</td></tr><tr><td>Referentieverbinding</td><td>Universiteit van Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>SNAP-7941</td></tr><tr><td>Zilvertrifluormethaansulfonaat</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graphpa GC</td><td>Alltech, Deerfield, IL, VS</td><td></td><td>80/100 mesh</td></tr><tr><td>PET trace 860 cyclotron</td><td>GE Healthcare, Uppsala, Zweden</td><td></td><td></td></tr><tr><td>[11C]CO2 hogedrukdoel</td><td>Air Liquide, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TRACERlabFX2 C</td><td>GE Healthcare, Uppsala, Zweden</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N2 + 1% O2</td><td>Air Liquide, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>Doelgas</td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Tabel 2: Lijst van materialen en instrumentatie van de kwaliteitscontrole van [11C]SNAP-7941.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Merck Hitachi LaChrom, L-7100</td><td>Hitachi Vantara Austria GmbH (Wenen, Oostenrijk)</td><td></td><td>HPLC-pomp</td></tr><tr><td>Merck Hitachi, L7400</td><td>Hitachi Vantara Austria GmbH (Tokio, Japan)</td><td></td><td>UV-detector</td></tr><tr><td>NaI-radiodetector</td><td>Raytest (Straubenhardt, Duitsland)</td><td></td><td>NaI-radiodetector</td></tr><tr><td>Chromolith Performance RP-18e, 100-4.6 mm</td><td>Merck (Darmstadt, Duitsland)</td><td></td><td>HPLC-kolom</td></tr><tr><td>430-GC</td><td>Bruker (Bremen, Duitsland)</td><td></td><td>Gaschromatograaf</td></tr><tr><td>Capillaire kolom ID-BP20; 12 mx0.22 mmx0.25 mm</td><td>SGE Ananlytical Science Pty. Ltd. (Victoria, Australië)</td><td></td><td>Gas capillair</td></tr><tr><td>Wesco, osmolometer Vapro 5600</td><td>Sanoya Medical Systems (Wenen, Oostenrijk)</td><td></td><td>Osmolometer</td></tr><tr><td>g-spectrometer</td><td></td><td></td><td>g-spectrometer</td></tr><tr><td>Gaschromatografie-besturingssoftware</td><td>VARIAN (Palo Alto, Californië, VS)</td><td></td><td>Galaxie versie 1.9.302.952</td></tr><tr><td>Gammaspectrometer-besturingssoftware</td><td>ORTEC (Oak Ridge, Tennessee, VS)</td><td></td><td>Maestro for windows versie 6.06</td></tr><tr><td>Gammaspectrum-herinnersoftware</td><td>ORTEC (Oak Ridge, Tennessee, VS)</td><td></td><td>Winplots versie 3.21</td></tr><tr><td>HPLC-besturingssoftware</td><td>Raytest (Straubenhardt, Duitsland)</td><td></td><td>Gina Star versie 5.9</td></tr><tr><td>inolab 740</td><td>WTW (Weilheim, Duitsland)</td><td></td><td>pH-meter</td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Tabel 3: Lijst van materialen en instrumentatie voor de evaluatie van het realtime kinetische gedrag van [11C]SNAP-7941.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Madin-Darby Canine Kidney-cellijn (MDCKII-hMDR1)</td><td>Nederlands Kanker Instituut (NKI, Amsterdam, Nederland)</td><td></td><td>Expressing the human P-glycoprotein (hMDR1)</td></tr><tr><td>Madin-Darby Canine Kidney-cellijn (MDCKII-WT)</td><td>Nederlands Kanker Instituut (NKI, Amsterdam, Nederland)</td><td></td><td>Wildtype (WT)</td></tr><tr><td>DMEM GlutaMAX</td><td>VWR International GmbH, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>Gibco 61965-026</td></tr><tr><td>Fetaal kalfsserum (FCS)</td><td>VWR International GmbH, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>Gibco 10270-106</td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>VWR International GmbH, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>Gibco 15140</td></tr><tr><td>Celcultuurschaal</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Duitsland</td><td></td><td>Cellstar 100 mm x 20 mm, Mfr.No. 664160</td></tr><tr><td>In vitro experimenten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM GlutaMAX</td><td>VWR International GmbH, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>Gibco 61965-026</td></tr><tr><td>(&plusmn;)-Verapamilhydrochloride</td><td>Sigma Aldrich (St. Louis, Missouri, VS)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich (St. Louis, Missouri, VS)</td><td></td><td>276855-100 mL</td></tr><tr><td>Celcultuurschaal</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Duitsland</td><td></td><td>Cellstar 100 mm x 20 mm, Mfr.No. 664160</td></tr><tr><td>Steriele wegwerpbare plastic pipetten</td><td>VWR International GmbH, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>Sterilin, 5 mL &ndash; 25 mL</td></tr><tr><td>Steriele pipettentips</td><td>VWR International GmbH, Wenen, Oostenrijk</td><td></td><td>Eppendorf epT.I.P.S. Biopur 20 &micro;L &ndash;

technisch aspect van de geautomatiseerde synthese en real-time kinetische evaluatie van [11c] snap-7941

Technical Aspect of the Automated Synthesis and Real-Time Kinetic Evaluation of [11C]SNAP-7941

Positron emissie tomografie (PET) is een essentiële moleculaire beeldvormings techniek die inzicht geeft in trajecten en specifieke gerichte radioliganden gebruikt voor in vivo onderzoek. Binnen dit protocol wordt een robuuste en betrouwbare, op afstand bestuurde radio synthese van [11C] SNAP-7941, een antagonist van de melanin-concentratie hormoonreceptor 1, beschreven. De radio synthese begint met de geproduceerde cyclotron [11c] co2 , die vervolgens verder reageert via een gasfase overgang naar [11c] ch3otf. Vervolgens wordt deze reactieve intermediair geïntroduceerd in de precursor oplossing en vormt de respectieve radio Tracer. Chemische en de radiochemische zuiverheid worden bepaald door middel van RP-HPLC, routinematig geïmplementeerd in het radiofarmaceutische kwaliteitscontroleproces. Daarnaast wordt de molaire activiteit berekend omdat het noodzakelijk is voor de volgende real-time kinetische onderzoeken. Bovendien wordt [11C] SNAP-7941 toegepast op MDCKII-WT-en Mdckii-hMDR1-cellen voor het evalueren van de impact van p-Glycoproteïne-expressie (p-GP) op celaccumulatie. Om deze reden wordt de P-GP die de cellijn uitdrukt (MDCKII-hMDR1) gebruikt zonder of met blokkering voorafgaand aan experimenten door middel van het P-GP substraat (±)-verapamil en de resultaten worden vergeleken met de waargenomen voor de wild type cellen. De algehele experimentele aanpak toont het belang aan van een nauwkeurig tijdbeheer dat essentieel is voor elke preklinische en klinisch studie met behulp van PET-tracers radioactief gelabeld met kortstondige nucliden, zoals Carbon-11 (halfwaardetijd: 20 min).

De volledig geautomatiseerde radio synthese van [11c] SNAP-7941 leverde 5,7 ± 2,5 gbq (4,6 ± 2,0% bij EOB, 14,9 ± 5,9% op basis van [11c] ch3otf; n = 10) van het geformuleerde product. De totale synthese duurde ongeveer 40 minuten, waarbij 15 minuten nodig waren voor de bereiding van [11C] ch3otf via de gasfase methode, nog eens 5 minuten nodig waren voor radioactieve labeling van de precursor, gevolgd door 10 min van semi-preparatief RP-HPLC-zuivering en 10 min voor de C18-cartridge Solid phase-extractie en-formulering. Vervolgens werd een kleine hoeveelheid (ca. 100-200 μL) afgeleverd aan de persoon die verantwoordelijk was voor de kwaliteitscontrole, terwijl de originele productflacon met de gebruiksklare Tracer werd doorgegeven aan de experimenteerder van de real-time kinetische analyse.
De kwaliteitscontrole werd binnen 10 minuten na het einde van de synthese voltooid. De molaire activiteit was in een bereik van 72 ± 41 GBq/μmol (n = 10) en de radiochemische zuiverheid was altijd > 95%. Alle andere parameters (pH, osmolaliteit, residuele oplosmiddelen) voldeed aan de vrijgave criteria. Voor de real-time kinetische assay werden drie verschillende experimentele opstellingen gekozen: (A) behandelde en niet-behandelde (voertuig) MDCKII-WT-cellen, (B) niet behandeld of behandeld met voertuig MDCKII-hMDR1 cellen en (C) de laatste cellijn met blokkering voorafgaand aan de real-time kinetische assay van de transporter met (±)-verapamil. Het toepassen van [11C] SNAP-7941 op de wild type CELLIJN MDCKII-WT (p-GP niet-uitdrukken) en Mdckii-HMDR1 (p-GP uitdrukken) toont een ander kinetische gedrag, omdat er een snelle accumulatie is in de wild type cellijn, terwijl er geen accumulatie werd waargenomen voor de MDCKII-hMDR1 cellen. Echter, het blokkeren van de P-GP Efflux Transporter inMDCKII-hMDR1 cellen met (±)-verapamil leidde tot een vergelijkbare real-time kinetische zoals reeds gezien voor de wild type cellijn (Figuur 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig1.jpg"> Figuur 1: overzicht van de werkstroom. Werkstroom van de radio synthese, kwaliteitscontrole en prestaties van de real-time kinetische meting van [11C] SNAP-7941. De zwarte pijlen geven de transportwijze van de radioactiviteit aan. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig2.jpg"> Figuur 2: Radiosynthetische schema van de geautomatiseerde synthesizer. Schakel circuit van de geautomatiseerde synthesizer, beginnend met de circulatie-eenheid voor [11c] ch3I/[11c] ch3otf productie, reactor voor de invoering van de activiteit in de precursor oplossing en SPE-zuivering (SPE = vaste fase extractie; PCV = productverzameling flacon). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig3.jpg"> Figuur 3: representatieve chromatogrammen van de volledig geautomatiseerde radio synthese van [11C] snap-7841. De semi-preparatieve RP-HPLC-chromatogram wordt aan de bovenzijde en de analytische na zuivering op de bodem geïllustreerd. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig4.jpg"> Figuur 4: celkweek schotel voorbereiding voor real-time experimenten. Stap 1 omvat de zaaien van 2,5 x 105 tot 1 x 106 afhankelijk van het celtype en de groeisnelheid. Vervolgens wordt het cultuur gerecht in een schuin vlak (ongeveer 30-45 °) geplaatst. Daarom kan het meegeleverde metalen apparaat of de deksel van een celkweek schotel in de incubator worden gebruikt om de schuine positie van het gerecht te stabiliseren. De dag na (24 h) wordt het schaaltje horizontaal aangepast en wordt er een vers celkweekmedium toegevoegd om het celoppervlak volledig te bedekken. Op de dag van het experiment, cel levensvatbaarheid en samenvloeiing worden onderzocht. Volgens het experimentele protocol worden de cellen gewassen met DPBS, het medium wordt vervangen door serumvrij medium (2 mL), en het cultuur gerecht wordt verplaatst naar een schuine positie tot aan het begin van de experimenten. Voortaan kunnen de cellen met de remmer of het voertuig worden behandeld. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig5.jpg"> Figuur 5: real-time kinetische metingen van [11C] SNAP-7941. Representatieve real-time kinetiek van [11C] snap-7941 worden weergegeven in drie verschillende set-ups: met behulp van mdckii-WT-cellen; MDCKII-hMDR1 cellen zijn vooraf geblokkeerd met (±)-verapamil als P-GP remmer en MDCKII-hMDR1 cellen zonder verstopping. De y-as illustreert de mate van toename van de voorgeblokkeerde MDCKII-hMDR1-en WT-cellen in vergelijking met de resultaten van respectievelijk de onbehandelde of door het voertuig behandelde MDCKII-MDR1 cellen (geen opname, 0%). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig5large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>

Hier vertegenwoordigen we een protocol voor de volautomatische radioactieve labeling van [11C] SNAP-7941 en de analyse van de real-time kinetiek van deze pet-Tracer op P-GP die cellen uitdrukt en niet uitdrukt.

Technisch aspect van de geautomatiseerde synthese en real-time kinetische evaluatie van [11C] SNAP-7941

Positron emission tomography (PET) is an essential molecular imaging technique providing insights into pathways and using specific targeted radioligands ...

Met carbon-11 radiolabeling kunnen kleine verbindingen worden gebruikt voor positronemissietomografie of PET zonder het molecuul te veranderen. Dit is essentieel voor het onderzoeken van receptorexpressieniveaus. Het voordeel van carbon-11 radiolabeling is dat we PET kunnen gebruiken om snap's bindingen kinetiek direct te evalueren naar de melanine-concentraerende hormoonreceptor in real time.SNAP als melanine-concentrating hormoon receptor antagonist zal bijdragen aan een beter begrip van deze receptor en de associatie met metabole aandoeningen zoals obesitas en diabetes. Efflux transporters uitgedrukt op de bloed-hersenbarrière kan het gebruik van radiofarmaceutica voor centrale receptor expressie beeldvorming aanzienlijk belemmeren. Daarom is het belangrijk om sporen in vitro te evalueren.De geautomatiseerde radiosynthese van SNAP is in grote lijnen toepasbaar op radioactief gelabelde verbindingen met een laag moleculair gewicht met een gemakkelijk te beoordelen methylgroep. Eenmaal vastgesteld kan deze procedure worden aangepast voor andere verbindingen. Assisteren bij de demonstratie zijn senior promovendi Sarah Pfaff en Theresa Balber.Om te beginnen koolstof-11 SNAP synthese het opzetten van een schone koolstof-11 geautomatiseerde synthese module met de juiste reagentia en materialen. Start het SNAP syntheseproces op de modulecomputer die begint met systeemcontroles en conditionering. Ongeveer 30 tot 40 minuten voordat de module klaar is voor C-11 levering, selecteer de C-11 kooldioxide doel op de cyclotron en start de bundel op 65 microamperes.Zodra de module klaar is voor levering sluit het binnenraam en de buitendeur. Bevestig dat de CO2-val is afgekoeld tot ten minste 40 graden Celsius en dat de methaanval is begonnen af te koelen. Zodra de cyclotron heeft geproduceerd ongeveer 120 gigabecquerels van C-11 CO2 klik OK in de module software om het pad te openen van het doel door de CO2-val.Op de cyclotron computer beginnen met het leveren van C-11 CO2 aan de module. Controleer de activiteitsoverdracht op de modulecomputer en zorg ervoor dat deze na drie minuten overgaat tot de reductie van CO2 tot methaan. Controleer het proces als het resulterende methaan wordt gespoeld naar de methaanval en omgezet in methyljodide door circulatie door de jodiumoven.Aan het einde van de conversiesequentie wachten als bijproducten worden gespoeld van de methyleodidetrap naar uitlaat en bevestig dan dat de reactor klaar is om activiteit te ontvangen door op OK te klikken. Controleer het systeem als de methyleodide wordt vrijgegeven uit de val, gespoeld door de methylbentriflate oven en gevangen in de reactor. Wanneer de activiteit in de reactorplateaus bevestigt dat het vangen voltooid is. Wacht terwijl het reactiemengsel drie minuten bij 75 graden Celsius reageert.Controleer vervolgens het systeem als het reactiemengsel wordt gekoeld tot minder dan 35 graden Celsius en geblust met 1,5 milliliter water. Controleer het systeem als het reactiemengsel in de HPLC-injectielus wordt geladen en in de semi-voorbereidende HPLC-kolom wordt geïnjecteerd. Bekijk de sporen van de UV- en gammadetector terwijl de chromatografie vordert.Wanneer de productpiek handmatig begint te verschijnen, begint u met het verzamelen van het product in de ronde bodemcollectiekolf in de module. Handmatig beëindigen collectie wanneer het gammasignaal valt onder ongeveer 400 telt per seconde. Let op het vloeistofniveau in de ronde bodemkolf terwijl het product onder heliumdruk op een vaste faseextractiecartridge wordt geladen.Zodra de kolf leeg is en de vloeistof door de SPE-cartridge is gegaan, klikt u op OK om te beginnen met het wassen van de producten die op de cartridge zijn gevangen. Controleer vervolgens de activiteit in de products collection flacon als het product eerst wordt ontkoejel uit de cartridge in de flacon en vervolgens verdund met 0,9% zoutoplossing. Let op hoe de productoplossing via steriele filter onder heliumdruk naar de flacon wordt overgebracht.Wanneer de overdracht is voltooid sluit de product uitgangsklep. Wanneer de radiotracer in de product flacon aankomt, meet de absolute radioactieve opbrengst. Gebruik vervolgens een lood afgeschermde spuit om 100 microliters van de tracer over te brengen naar een klein flesje voor kwaliteitscontrole.Breng het kwaliteitscontrolemonster naar een afgeschermd werkgebied voor kwaliteitscontrole. Stel 40 microliter van het QC-monster op in een gasdichte spuit, laad het in een voorbereid HPLC-instrument uitgerust met een analytische kolom en injecteer het product. Voer andere kwaliteitscontrolemetingen uit tijdens de HPLC-run.Zodra de HPLC run klaar is integreren alle pieken in het chromatogram van de radioactiviteit detector om te bepalen of de SNAP radio chemische zuiverheid groter is dan 95%Integreer de pieken in het UV chromatogram om de chemische zuiverheid van het product te bepalen. Gebruik het gebied onder de UV-productpiek om de specifieke activiteit te berekenen. Zodra het product is bevestigd om te voldoen aan de eisen voor gebruik laat de radio tracer naar de real-time kinetische experiment lab.Ten minste 30 minuten voor het experiment was het bereide wilde type of getransfecteerde cellen met DPBS en voeg twee milliliter serumvrij groeimedium toe. Om transfected cellen te blokkeren voeg 0,98 microliter van een 20,4 millimolar oplossing van racemische verapamil hydrochloride in dimethylsulfoxide. Broed de cellen op een schuin vlak gedurende 30 minuten.Schakel vervolgens het real-time testinstrument en de bijbehorende computer in. Open de besturingssoftware en kies één doel. Stel het aantal posities in op twee, de detectietijd op drie seconden, de vertragingstijd van de detectie op twee seconden en de naam van de eerste fase op de basislijn.Plaats de celkweekschotel in de hellende steun van het apparaat met de celpool aan de onderkant. Zorg ervoor dat de celpool is bedekt met celkweekmedium. Start een achtergrondmeting van 10 minuten en stel de bestandsnaam en het pad in.Stel de tijdschaal in op minuten en de nuclide-collectie op carbon-11. Configureer de grafiek om de achtergrond-, doel- en achtergrondondergetrokken doelgegevens weer te geven. Zodra de radiotracer is geleverd en goedgekeurd voor gebruik, neem een klein monster voor de test.Bereken het benodigde volume van de radiotraceroplossing en bereid een pipet voor. In het instrument software pauzeren de run en wacht tot de schotel rotatie te stoppen. Open het deksel van het apparaat, draai de steun 90 graden naar links, voeg de radiotracer toe met de voorbereide pipet en breng het apparaat terug naar de oorspronkelijke positie.Sluit het deksel van het apparaat en hervat het experiment onmiddellijk. Laat het experiment 20 minuten duren voordat u het beëindigt. De gegevens verwerken en analyseren om de opname van SNAP in de cellen te evalueren.Nu kan de procedure worden herhaald voor de DMSO-behandelde controlecelkweekschotel en wilde typecellijn. Real-time kinetische tests werden uitgevoerd met niet-PGP uitdrukken wilde type cellen, PGP-uitdrukken cellen vooraf geblokkeerd met verapamil als een PGP-remmer, en gedeblokkeerde PGP-cellen. Er werd geen significant verschil waargenomen tussen niet-behandelde cellen en met voertuigen behandelde cellen.Carbon-11 SNAP snel opgehoopt in wilde type cellen, terwijl er geen accumulatie werd waargenomen in PGP-uitdrukkende cellen. Het vooraf blokkeren van de PGP-effluxtransporter met verapamil resulteerde in SNAP-accumulatie in de PGP-cellen die vergelijkbaar zijn met die van wilde typecellen. In combinatie met real-time kinetische metingen maakt deze opzet een breed begrip mogelijk van de farmacokinetiek van verbindingen met een laag moleculair gewicht en is daarom van groot belang voor de preklinische ontwikkeling van radiofarmaceutica.Timing en organisatie zijn de belangrijkste ingrediënten voor een succesvolle koolstof-11 radiosynthese met de daaropvolgende real-time kinetische experimenten als de halflevenstijd van koolstof-11 is slechts 20 minuten. Door een korte halflevenstijd van koolstof-11 worden veel delen van deze procedure gelijktijdig uitgevoerd. Het is belangrijk voor alle betrokkenen om de reikwijdte en timing van hun rol te begrijpen.Zowel productveiligheid als stralingsbescherming zijn essentieel voor de bereiding van radiofarmaceutica. Alle experimenten moeten het zo laag als redelijkerwijs haalbare of ALARA-principe volgen om de blootstelling aan straling van de exploitant te beperken.

technical-aspect-automated-synthesis-real-time-kinetic-evaluation

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

De Ugi reactie is gebleken dat een handige manier om snel diverse bibliotheken van verbindingen. Het gaat om de reactie van een amine, een aldehyde, een carbonzuur en een isonitril doorgaans in methanol bij kamertemperatuur. In deze video maken we gebruik van een 48-slot Mettler-Toledo MiniBlock uitgerust met filtratie buizen en een Mettler-Toledo MiniMapper geautomatiseerde vloeibare handler werd gebruikt om de reagentia en oplosmiddelen te leveren. De parameters die van belang waren de...

Optimalisatie van de Ugi reactie met behulp van parallelle synthese en geautomatiseerde Liquid Handling

Fotostabiele cyanine kleurstoffen worden aan oligonucleotiden gekoppeld om hybridisatie te controleren door energieoverdracht.

Synthese van golflengteverschuivende DNA hybridisatie sondes met behulp Fotostabiele Cyanine Dyes

We demonstreren de semi-geautomatiseerde radiochemische synthese van [ 18 F] 3F4AP en kwaliteitscontroles.

Geautomatiseerde Radiochemische Synthese van [<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP: Een nieuwe PET Tracer voor het imiteren van demyeliniserende ziekten

Een protocol voor de synthese van een 1,2-dithiolane gemodificeerde peptide en de karakterisatie van de supramoleculaire structuren die voortvloeien uit de peptide zelf-assemblage.

Synthese en karakterisering van 1,2-Dithiolane gemodificeerde zelfassemblerende Peptides

Positron-emissie tomografie (PET) imaging sites die bij meerdere vroege proeven van het klinisch onderzoek betrokken zijn moet robuust en veelzijdig radiotracer productie mogelijkheden. Met behulp van de radiotracer [18F] Clofarabine als voorbeeld illustreren we hoe te automatiseren de synthese van een radiotracer met behulp van een flexibele, cassette gebaseerde radiosynthesizer en valideren van de synthese voor klinisch gebruik.

Automatisering van een Positron-emissie tomografie (PET) Radiotracer synthese Protocol voor klinische productie

We rapporteren een efficiënte Carbon-11 radiolabeling-techniek om klinisch relevante tracers te produceren voor positron emissie tomografie (PET) met behulp van Solid phase-extractie cartridges. 11 C-methylating agent wordt doorgegeven via een patroon vooraf geladen met precursor en opeenvolgende elutie met waterige ethanol biedt chemisch en radiochemisch zuivere PET tracers in hoge radiochemische opbrengsten.

Solid phase 11C-methylering, zuivering en formulering voor de productie van Pet-tracers

Hier beschrijven we een bioassay met behulp van 3-(4′,5′-dimethylthiazol-2′-yl)-2,5- difenyltetrazoliumbromide (MTT) om eerder gesynthetiseerde spirocyclische oximen te testen.

Gefunctionaliseerde spirocyclische heterocyclussynthese en cytotoxiciteitstest

Deze methode beschrijft het gebruik van een nieuwe high-throughput methodologie, gebaseerd op druppelchemische reacties, voor de snelle en economische optimalisatie van radiofarmaceutica met nanomole hoeveelheden reagentia.

Optimalisatie van radiochemische reacties met behulp van droplet arrays

Hier beschrijven we een protocol voor de optimalisatie en parametrisering van aminozuurresiduen gemodificeerd met reactieve carbonylsoorten, aanpasbaar aan eiwitsystemen. De protocolstappen omvatten structuurontwerp en -optimalisatie, ladingstoewijzingen, parameterconstructie en voorbereiding van eiwitsystemen.

Synthese van aminozuren gemodificeerd met reactieve carbonylen in silico om structurele effecten te beoordelen met behulp van moleculaire dynamica-simulaties 

Dit protocol bevat een gedetailleerde procedure voor de bereiding van vier koolstof-11 radiotracers door middel van de "lusmethode" [11C] methylering. We beschrijven de procedure om [11C]ER-176 te synthetiseren, met gegevens voor drie extra radiotracers: [11C]MRB, [11C]m HED en [11C]PiB. De lusmethode zorgt voor een efficiënte synthese met verhoogde radiochemische opbrengsten tegen traditionele methylering van reactievaten [11C].

Verbetering van de efficiëntie en radiolabelingopbrengsten van koolstof-11 radioliganden voor klinisch onderzoek met behulp van de lusmethode

Dit onderzoek beschrijft het geautomatiseerde proces voor de productie van [68Ga]Ga-3BP-3940 met de GAIA V2-synthesizer, voor PET-beeldvorming van fibroblastactiveringseiwit. Ook worden de resultaten gepresenteerd van kwaliteitscontroletests die zijn uitgevoerd op drie testbatches.

Geautomatiseerde bereiding van [68Ga]Ga-3BP-3940 op een synthesemodule voor PET-beeldvorming van de tumormicro-omgeving

Leer de geautomatiseerde synthese van [11C]SNAP-7941 voor real-time PET-kinetiek op P-gp-expresserende cellen. Deze methode verbetert de evaluatie van receptorexpressie voor metabole aandoeningen.

Technisch aspect van de geautomatiseerde synthese en real-time kinetische evaluatie van [¹¹C] SNAP-7941

Meer video's verkennen