Murine appendectomie model van chronische colitis geassocieerde colorectale kanker door precieze lokalisatie van caecal patch
August 24th, 2019
Het gepresenteerde protocol beschrijft een facile chirurgische verwijdering van de appendix (caecal patch) in een muis gevolgd door de inductie van inflammatoire darmziekte-geassocieerde colorectale kanker. Dit Murine appendectomie model maakt onderzoek mogelijk naar de biologische rol van de appendix in de pathogenese van menselijke gastro-intestinale aandoeningen.
Het algemene protocol beschrijft gemakkelijk uitgevoerde chirurgische ingrepen van het verwijderen van de appendix bekend als caecal patch in muizen. Het murine appendectomiemodel kan worden gebruikt om de biologische rol van appendix in pathogenese van de menselijke maag-darmziekte te bestuderen. De menselijke bijlage is een betwistbaar orgaan.
Recente studies hebben gesuggereerd dat de appendix een belangrijke rol speelt bij het behoud van de darmgezondheid. Om de biologische functie van appendix te bestuderen, is het genereren van een ziekte-geassocieerde blindedarmziektediermodel van cruciaal belang. In dit protocol beschrijven we een eenvoudige en een veilige chirurgische stappen van het verwijderen van appendix, bekend als caecal patch in muizen.
Om het succes van dit model te garanderen, zijn er drie belangrijke stappen zoals u zult zien in de volgende video. Zoek eerst de caecum van de muizen voor de operatie. Ten tweede, maak een kleine incisie in de buik.
Ten derde, desinfecteren en sluit de caecum stomp. Het eerste deel, muizen appendectomie. Bereid steriele chirurgische instrumenten en reinigingsoplossingen voor de operatie.
Verdoven en zet de muis op een platform in een supine positie door het plaatsen van vier stroken van medische plakband over de ledematen om posturale beweging te voorkomen tijdens de operatie. Raak voorzichtig de hele buik van de muis aan om het gevoel van bult te vinden. Bedek het laken en desinfecteer het geschoren gebied van de muisbuik zo breed mogelijk met behulp van twee keer entoiodine.
Maak een longitudinale incisie variërend van 0,5 centimeter tot een centimeter aan de middellijn van de buik. Volgens de vooraf bepaalde locatie van de caecum, zoek de caecum en voorzichtig exterioriseren voor ongeveer een centimeter lang om de caecal patch te identificeren. Gebruik een voorverwarmde en steriele fysiologische zoutoplossing om de darm te hydrateren.
Om mogelijke complicaties van postoperatieve bloedingen en infectie te voorkomen, ligat de mesenterische bloedvaten van caecum met behulp van de 8-0 hechting. Hydrateer de caecum met de zoutoplossing. Markeer het resectiegebied met behulp van de 4-0 hechting met open lus in de buurt van de top van de caecum bij de proximale dikke darm.
Snijd de caecal patch onder de gemarkeerde resectie met behulp van micro-schaar en veeg het resterende caecal gehalte met medische wattenstaafjes. Desinfecteer de stomp van caecum met entoiodine. Sluit de stomp met lopende hechting met behulp van de 8-0 hechting.
Verwijder voorzichtig de 4-0 draad lus, eerder gebruikt voor het markeren van de resectie op de stomp van caecum. Steriliseer de gehechte positie met behulp van entoiodine. Rehydrateer het snijgebied met de zoutoplossing.
Sluit de spierstelsellaag met lopende hechting met 8-0 hechtdraad. Sluit de huidlagen met behulp van onderbroken hechtingen met 4-0 hechtingsdraad. Desinfecteer de chirurgische snede twee keer met entoiodine.
Verwijder vervolgens jodium met 75% medische alcohol. Draai de muis voorzichtig om. Onderhuids injecteren 0,1 milligram per kilogram lichaamsgewicht van buprenorfine, en 0,4 milliliter fysiologische zoutoplossing.
En rust de muis op de heat pad, totdat het terugkeert naar het bewustzijn. Zet de muis terug naar de steriele kooi, en nauwlettend toezicht op de muis voor de tekenen van pijn voor drie dagen na de operatie om het herstel ervan te garanderen. Het tweede deel: Inductie van Colitis-Geassocieerde Colorectale Kanker met Azoxymetan, AOM, en Dextran NatriumSulfaat, DSS, zeven dagen na de blindedarm.
Ontdooi een aliquot van AOM en verdun het tot de 1 milligram per milliliter met behulp van 0,9% normale zoutoplossing. Het volledige voorbereidingsproces wordt uitgevoerd in de rookkap. Los vier gram DSS poeder op in 200 milliliter autoclaved water oplossing om 2%DSS voor te bereiden.
Elke kooi bevat vijf muizen. Maak een intraperitoneale injectie van AOM met 0,01 milliliter per gram per muis op basis van zijn gewicht. Vervang het autoclaved water gedurende vijf dagen door 2%DSS.
De muizen zullen worden gevoed met autoclaved water voor extra twee cycli. Het derde deel:Resultaten. Flow en ELISA resultaten geven de succesvolle verwijdering van de caecal patch.
Deze procedure kan bijdragen tot een aanzienlijke vermindering van IgA-specifieke plasmacellen, een duidelijke verandering van secretoire IgA in dikke darm, in vergelijking met 3%DSS, die een hoge sterftecijfers en aanzienlijke gewichtsverandering als gevolg van ernstige bloederige ontlasting, anus verzakking, en abdominale abcess heeft. De 2%DSS is geschikt voor het hele proces voor zijn hoge overlevingskans tot bijna 80%en redelijke gewichtsverandering in zowel schijn- als blindedarmgroepen. Zoals getoond in deze beelden, hebben we met succes de colitis-geassocieerde colorectale tumoren geïnduceerd.
In H&E kleuring beelden, zwarte pijl geeft mucosale zweer, pijlpunt geeft adenocarcinoom, en een witte pijl geeft neutrophil infiltratie tussen klieren. Verschillende stadia van adenocarcinoom zijn te zien in zowel schijn- als blindedarmgroepen. Deze kosteneffectieve Murine Appendectomie Model kan worden gebruikt voor het beantwoorden van een aantal belangrijke vragen, zoals: wat is de rol van appendix in de regulering van darmbacteriën en hoe het deelneemt aan de immuunrespons in de darm-geassocieerde lymfeweefsel.
Vergeet niet, om de schade in de hechting van de darm te voorkomen, zijn de pre-locatie van caecum en kleine huidincisie belangrijk. Daarnaast gebruikten we de 2%DSS om colitis te induceren. Maar een hogere concentratie van DSS kan worden gebruikt voor andere muizen stammen.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Overzicht
Dit protocol beschrijft een eenvoudige chirurgische procedure voor het verwijderen van de appendix, ook wel de caecale patch genoemd, bij muizen. Dit muismodel voor appendectomie maakt de studie mogelijk van de biologische rol van de appendix in de ontwikkeling van gastro-intestinale ziekten bij mensen.
Belangrijke studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Gastro-enterologie
- Oncologie
Achtergrond
- De functie van de menselijke appendix wordt onder wetenschappers bediscussieerd.
- Recent onderzoek geeft aan dat de appendix kan bijdragen aan de gezondheid van de darmen.
- Inzicht in de rol van de appendix bij ziekten is cruciaal voor het bevorderen van gastro-intestinale onderzoek.
- Het creëren van een ziekte-geassocieerd appendectomiemodel is essentieel voor deze studies.
Doel van de studie
- Om de biologische functies van de appendix te onderzoeken.
- Om de relatie tussen appendectomie en de pathogenese van gastro-intestinale ziekten te verkennen.
- Om een model te bieden voor het bestuderen van inflammatoire darmziekte-geassocieerd colorectale kanker.
Gebruikte methoden
- Chirurgische verwijdering van de caecale patch bij muizen.
- Inductie van inflammatoire darmziekte-geassocieerd colorectale kanker.
- Gebruik van een muismodel voor biologische onderzoeken.
- Beoordeling van de rol van de appendix bij ziekteontwikkeling.
Belangrijkste resultaten
- Het protocol toont succesvol veilige chirurgische technieken.
- Een model voor het bestuderen van de rol van de appendix bij ziekten wordt gevestigd.
- Inzichten in de pathogenese van gastro-intestinale ziekten.
- Mogelijke implicaties voor het begrijpen van menselijke gastro-intestinale gezondheid.
Conclusies
- Het appendectomiemodel is een waardevol hulpmiddel voor onderzoek.
- Verdere studies kunnen de rol van de appendix bij gezondheid en ziekte verduidelijken.
- Dit onderzoek kan leiden tot een beter begrip van de mechanismen van colorectale kanker.
