Name: Chronische salmonella infectie veroorzaakte intestinale fibrose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Leer een robuust muismodel voor intestinale fibrose veroorzaakt door chronische Salmonella-infectie. Dit protocol bootst Crohn-ziekte na en helpt onderzoekers fibrotische mechanismen en therapeutische doelwitten bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Ingrid Barta voor histologie diensten.

Alle dier protocollen werden goedgekeurd door het Dierenzorg Comité van de University of British Columbia.
1. bereiding van salmonella typhimurium δaroa-culturen voor orale maagsonde van muizen
<ol><li>Uit een bevroren glycerol kolf van S. Typhimurium δaroa, bereid een streep plaat met behulp van LB agar bevattende 100 μg/ml streptomycine met een steriele enten lus. Inincuberen 's nachts bij 37 °C. Streak-platen kunnen tot een week worden bewaard bij 4 °C.</li>
	<li>Een dag voorafgaand aan de infectie, bereiden antibioticum door het oplossen van 0,5 g van streptomycine in 2,5 mL water. Na filter steriliseren streptomycine oplossing, oraal een maagsonde de muizen met behulp van een lamp getipt 22G maagsonde naald en 1 mL spuit met 100 μL streptomycine oplossing (20 mg streptomycine/dosis). Gebruik een inoculerende lus, inoculeren 3 mL LB Bouillon (50 μg/mL streptomycine) in een cultuur buis met een enkele kolonie. Incuberen de salmonella cultuur aëroob bij 37 °c 's nachts met schudden bij 200 rpm.</li>
	<li>Op de dag van de infectie, de uiteindelijke infectie dosis voorbereiden door het uitvoeren van 2 opeenvolgende 1/10 verdunningen van nachtelijke salmonella culturen in steriele PBS. Dit zou resulteren in een entmateriaal van 100 μL dat ongeveer 3 x 106 kve bevat.</li>
	<li>Gebruik een met een lamp getipt 22g maagsonde naald en een spuit van 1 ml om elke muis te maagsonde met 100 μL van de geprepareerde salmonella. Let op: bereid salmonella culturen met aseptische technieken. De uiteindelijke inoculatie concentratie van salmonella kan worden geverifieerd door seriële verdunningen op LB agar met streptomycine te beplating. De S. typhimurium ΔAroA stam kan worden verkregen door contact op te nemen met professor McNagny (kelly@brc.ubc.ca).</li>
</ol>2. beoordeling van de salmonella lasten in weefsels
<ol><li>Bereid 2 mL Safe-lock, ronde bodemmicro buisjes met 1 mL steriel PBS en een geautoclaveerd RVS kraal. Weeg de buisjes vóór de weefsel inzameling af.</li>
	<li>Resect cecal en milt weefsels van muizen die werden geëerd door blootstelling aan kooldioxide. Verzamel weefsel van individuele dieren in afzonderlijke buisjes. Weeg de buizen af om de weefsel gewichten te bepalen.</li>
	<li>Homogeniseren met behulp van een mixer molen apparaat gedurende 15 minuten bij 30 Hz. Breng 900 μL PBS per put over in een 96-well 2 mL megablock. Pipetteer 100 μL weefsel homogenieert in de eerste put, meng goed en voer seriële verdunningen uit door 100 μL toe te voegen aan de volgende putjes totdat een 10-6 verdunning wordt verkregen. Plaat 10 μL van elke verdunning in triplicaten op LB agar bevattende 100 μg/mL streptomcyin.</li>
	<li>Tel en vermenigvuldig de gemiddelde kve met een factor 100 sinds 10 μL van het monster van 1000 μL is geplateerd en de juiste verdunningsfactor. Verdeel het weefsel gewicht totaal CFU door weefsel gewichten om kve per gram weefsel te bepalen. Opmerking: Houd alle monsters op het ijs of bij 4 °C tijdens de weefsel verwerking. Pipetpunten met brede opening gebruiken bij het uitvoeren van seriële verdunningen met weefselhomogenaten. Bereid de 96-well megablock met PBS op voorhand.</li>
</ol>3. picrosirius rode kleuring en kwantificering van collageen.
<ol><li>Los cecal weefsels 's nachts op in 10% gebufferde formaline en bereid je voor op paraffine insluiten. Snijd 5-μm secties voor Picrosirius rode kleuring zoals eerder beschreven25.</li>
	<li>Leg samengestelde beelden van hele cecal-dwarsdoorsneden op een brightfield-Microscoop vast.</li>
	<li>Open Fiji (ImageJ) en sleep het. TIF-afbeeldingsbestand naar de werkbalk.</li>
	<li>Selecteer op de menubalk afbeelding &Gt; Type &GT; RGB-stapel om de afbeelding te splitsen in rode, groene en blauwe kanalen. Schuif de horizontale balk onder in het deelvenster om het kanaal in te stellen op groen.</li>
	<li>Open afbeelding &Gt; pas &Gt; Threshold tool aan . Pas de minimum-en maximumlimieten aan om achtergrond signalen te elimineren. Zodra de gewenste drempelwaarde is ingesteld, sluit u het gereedschap drempel en gaat u naar analyseren &Gt; metingen instellen. Controleer het gebied, de gebieds breuk, de limiet voor de drempel en het weergavelabel.
</li>
	<li>Poort de weefsel sectie met ofwel FreeHand selecties of veelhoek selecties gereedschap en meet de% gebied positief voor collageen door te klikken op analyseren > maatregel.</li>
	<li>Normaliseer het absolute gebied positief voor collageen kleuring op weefselgebied. Opmerking: Fiji (ImageJ) is een open-source programma dat kan worden gedownload op https://fiji.sc. Afbeeldingen met dezelfde opnameomstandigheden (d.w.z. helderheid en focus) moeten identieke grenswaarden hebben voor nauwkeurige kwantificering. Als er achtergrondkleuring binnen het geselecteerde weefsel is, meet u het absolute gebied en trekt u het af van het gebied dat positief is voor collageen uit het hele weefsel.</li>
</ol>

<ol><li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ulcerative+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Ulcerative colitis.</a> New England Journal of Medicine. 365 (18), 1713-1725 (2011).</li>
<li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Crohn's disease.</a> The Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li>
<li>Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+inflammatory+bowel+disease+pathogenesis%3A+linking+host+genetics+and+the+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Advances in inflammatory bowel disease pathogenesis: linking host genetics and the microbiome.</a> Gut. 62 (10), 1505-1510 (2013).</li>
<li>Xavier, R. J., Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 448 (7152), 427-434 (2007).</li>
<li>Cho, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+and+immunopathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature Reviews Immunology. 8 (6), 458-466 (2008).</li>
<li>Ogura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+frameshift+mutation+in+NOD2+associated+with+susceptibility+to+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn's disease.</a> Nature. 411 (6837), 603-606 (2001).</li>
<li>Jostins, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions+have+shaped+the+genetic+architecture+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions have shaped the genetic architecture of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 491 (7422), 119-124 (2012).</li>
<li>Rivas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+resequencing+of+GWAS+loci+identifies+independent+rare+variants+associated+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Deep resequencing of GWAS loci identifies independent rare variants associated with inflammatory bowel disease.</a> Nature Genetics. 43 (11), 1066-1073 (2011).</li>
<li>Rioux, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+association+study+identifies+new+susceptibility+loci+for+Crohn+disease+and+implicates+autophagy+in+disease+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genome-wide association study identifies new susceptibility loci for Crohn disease and implicates autophagy in disease pathogenesis.</a> Nature Genetics. 39 (5), 596-604 (2007).</li>
<li>Uhlig, H. H., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+intestinal+inflammation+as+tools+to+understand+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of intestinal inflammation as tools to understand the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2021-2026 (2009).</li>
<li>Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+the+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD%3A+lessons+from+mouse+infection+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).</li>
<li>Grassl, G. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+enteric+Salmonella+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of enteric Salmonella infections.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24 (1), 22-26 (2008).</li>
<li>Barthel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Enteric+Salmonella+Infection+in+Mice+Leads+to+Severe+and+Persistent+Intestinal+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic Enteric Salmonella Infection in Mice Leads to Severe and Persistent Intestinal Fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Hoiseth, S. K., Stocker, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aromatic-dependent+Salmonella+typhimurium+are+non-virulent+and+effective+as+live+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are non-virulent and effective as live vaccines.</a> Nature. 291 (5812), 238-239 (1981).</li>
<li>Valdez, Y., Ferreira, R. B., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+Salmonella+virulence+and+host+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Microbiology+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of Salmonella virulence and host resistance.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 337, 93-127 (2009).</li>
<li>Valdez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+drives+an+accelerated+inflammatory+response+during+Salmonella-induced+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Nramp1 drives an accelerated inflammatory response during Salmonella-induced colitis in mice.</a> Cellular Microbiology. 11 (2), 351-362 (2009).</li>
<li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+orphan+nuclear+receptor+RORalpha+and+group+3+innate+lymphoid+cells+drive+fibrosis+in+a+mouse+model+of+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Immunology%22%5BJournal%5D)">The orphan nuclear receptor RORalpha and group 3 innate lymphoid cells drive fibrosis in a mouse model of Crohn's disease.</a> Science Immunology. 1 (3), eaaf8864(2016).</li>
<li>Burke, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrogenesis+in+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Fibrogenesis in Crohn's disease.</a> American Journal of Gastroenterology. 102 (2), 439-448 (2007).</li>
<li>Hogan, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+and+regeneration+of+the+respiratory+system%3A+complexity%2C+plasticity%2C+and+mechanisms+of+lung+stem+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Repair and regeneration of the respiratory system: complexity, plasticity, and mechanisms of lung stem cell function.</a> Cell Stem Cell. 15 (2), 123-138 (2014).</li>
<li>Fiocchi, C., Lund, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Themes+in+fibrosis+and+gastrointestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Themes in fibrosis and gastrointestinal inflammation.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (5), G677-G683 (2011).</li>
<li>Rieder, F., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+fibrosis+in+IBD%E2%80%94a+dynamic%2C+multifactorial+process%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Intestinal fibrosis in IBD—a dynamic, multifactorial process.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 6 (4), 228-235 (2009).</li>
<li>Bouguen, G., Peyrin-Biroulet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgery+for+adult+Crohn%27s+disease%3A+what+is+the+actual+risk%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Surgery for adult Crohn's disease: what is the actual risk?</a> Gut. 60 (9), 1178-1181 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+mechanisms+of+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular mechanisms of fibrosis.</a> The Journal of Pathology. 214 (2), 199-210 (2008).</li>
<li>Junqueira, L. C., Bignolas, G., Brentani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+staining+plus+polarization+microscopy%2C+a+specific+method+for+collagen+detection+in+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections.</a> Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).</li>
<li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-22+Preserves+Gut+Epithelial+Integrity+and+Promotes+Disease+Remission+during+Chronic+Salmonella+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">IL-22 Preserves Gut Epithelial Integrity and Promotes Disease Remission during Chronic Salmonella Infection.</a> Journal of Immunology. 202 (3), 956-965 (2019).</li>
<li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+IL-13+triggers+TGF-beta1-dependent+tissue+fibrosis+in+chronic+2%2C4%2C6-trinitrobenzene+sulfonic+acid+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Induction of IL-13 triggers TGF-beta1-dependent tissue fibrosis in chronic 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid colitis.</a> Journal of Immunology. 178 (9), 5859-5870 (2007).</li>
<li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-13+signaling+via+IL-13R+alpha2+induces+major+downstream+fibrogenic+factors+mediating+fibrosis+in+chronic+TNBS+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">IL-13 signaling via IL-13R alpha2 induces major downstream fibrogenic factors mediating fibrosis in chronic TNBS colitis.</a> Gastroenterology. 135 (6), e2001-e2007 (2013).</li>
<li>Johnson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+fibrosis+is+reduced+by+early+elimination+of+inflammation+in+a+mouse+model+of+IBD%3A+impact+of+a+%26%2334%3BTop-Down%26%2334%3B+approach+to+intestinal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Diseases%22%5BJournal%5D)">Intestinal fibrosis is reduced by early elimination of inflammation in a mouse model of IBD: impact of a &#34;Top-Down&#34; approach to intestinal fibrosis in mice.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 18 (3), 460-471 (2012).</li>
<li>Darfeuille-Michaud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+prevalence+of+adherent-invasive+Escherichia+coli+associated+with+ileal+mucosa+in+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">High prevalence of adherent-invasive Escherichia coli associated with ileal mucosa in Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 127 (2), 412-421 (2004).</li>
<li>Small, C. L., Reid-Yu, S. A., McPhee, J. B., Coombes, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+infection+with+Crohn%27s+disease-associated+adherent-invasive+Escherichia+coli+leads+to+chronic+inflammation+and+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Persistent infection with Crohn's disease-associated adherent-invasive Escherichia coli leads to chronic inflammation and intestinal fibrosis.</a> Nature Communications. 4, 1957(2013).</li>
<li>Imai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flagellin-mediated+activation+of+IL-33-ST2+signaling+by+a+pathobiont+promotes+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Flagellin-mediated activation of IL-33-ST2 signaling by a pathobiont promotes intestinal fibrosis.</a> Mucosal Immunology. , (2019).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen financiële belangenconflicten om te onthullen.

Ons begrip van de pathogenese van IBD is sterk verbeterd door Muismodellen van darmontsteking. Hoewel dergelijke individuele modellen niet alle kenmerken van de complexe en multifactoriële menselijke ziekte recapituleren, ze zijn nuttig bij het identificeren van de belangrijkste kenmerken van ziekteprogressie. Fibrotische stricturen geassocieerd met IBD blijven een belangrijke onvervulde klinische behoefte, aangezien de huidige behandelingen niet effectief zijn bij het omkeren van de ziekte ontwikkeling. Bovendien is int...

Colitis ulcerosa (UC) en de ziekte van Crohn (cd) zijn de twee belangrijkste vormen van IBD en worden gekenmerkt als chronische en relapsing inflammatoire aandoeningen van het maagdarmkanaal 1,2. Deze aandoeningen hebben een grote invloed op de kwaliteit van leven van patiënten. Symptomen van IBD omvatten abdominale pijn, diarree, misselijkheid, verlies van het gewicht, koorts, en vermoeidheid3. Recente studies hebben genetische en omgevingsfactoren geïdentificeerd die bijdragen aan pathogenese van ziekten; Er wordt gedacht dat dergelijke risicofactoren bijdragen tot de verstoring van de epitheliale barrière die resulteert in de translocatie of oversampling van luminal antigenen4. Als gevolg daarvan initieert dit een afwijkende ontstekingsreactie op de commensaal flora gemedieerd door intestinale immuuncellen4. Kenmerken van IBD-geassocieerde complicaties kunnen zich uitstrekken tot plaatsen buiten het GI-tractus die verschillende organen, met inbegrip van gewrichten, huid, en lever1,2. Kenmerken van UC omvatten ernstige en diffuse ontsteking meestal gelokaliseerd in de dikke darm1. Ziekte pathologie beïnvloedt de mucosa en het de van de darm resulterend in oppervlakkige mucosale ulceraties1. Daarentegen kan CD elk deel van het GI-tractus beïnvloeden, hoewel bewijs van ziekte vaak wordt aangetroffen in de dikke darm en distale ileum2. Bovendien, de ontsteking in de CD is transmural, invloed op alle lagen van de darmwand2.
Verschillende IBD-gevoeligheids genen die zijn geïdentificeerd, duiden erop dat disregulatie van de epitheliale barrière of immuniteit essentieel is voor ziekteprogressie5. Mutaties in nucleotide oligomerisatie domein 2 (NOD2), uitgedrukt door monocyten, bleken geassocieerd te zijn met verhoogde gevoeligheid voor CD; Dit wijst op een verband tussen veranderde aangeboren immuundetectie van bacteriële componenten en de ziekte6. Meer recente genoom-brede associatie studies (GWAS) hebben aanvullende trajecten onthuld die mogelijk betrokken zijn bij de pathogenese van IBD, waaronder genetische variaties in: STAT1, NKX2-3, IL2RA, IL23R afhankelijke trajecten gekoppeld aan adaptieve immuniteit, MUC1, MUC19en PTGER4 bij onderhoud van de intestinale barrière en ATG16Lgemedieerde autophagy7,8,9. Terwijl deze populatie gebaseerde genetica studies hebben ons begrip van IBD verbeterd, gevoeligheid allelen alleen zijn waarschijnlijk onvoldoende bij het initiëren en het ondersteunen van chronische ziekte3. Andere niet-genetische factoren, met inbegrip van wijzigingen in de samenstelling van de darm-microbiome en een afname van de diversiteit zijn in verband gebracht met intestinale ontsteking. Echter, het is onduidelijk of gut dysbiosis voorafgaat aan of is het gevolg van disgereguleerde immuunresponsen3. Hoewel de etiologie van IBD onduidelijk blijft, is ons begrip van de pathogenese van de ziekte verbeterd door experimentele Muismodellen van darmontsteking10,11. Deze modellen vertegenwoordigen individueel niet volledig de complexiteit van de ziekte van de mens, maar ze zijn waardevol voor het verhelderende pathophysiologische trajecten die relevant kunnen zijn voor IBD en voor de validering van voorlopige therapeutische strategieën10, 11. Dergelijke Muismodellen zijn meestal afhankelijk van de initiatie van ontsteking door chemische inductie of infectie, immuunceloverdracht of genetische manipulatie. Bovendien, deze strategieën omvatten vaak verstoringen in de epitheliale integriteit of modulatie van aangeboren of adaptieve immuniteit.
Salmonella heliobacter variëteiten zijn intestinale pathogenen die mensen en muizen kunnen infecteren. Na inname kan salmonella de darm koloniseren door directe invasie van Epitheelaan, M-cellen of antigeen die cellen12presenteren. Muizen besmet mondeling met S. Typhimurium resulteert in de kolonisatie voornamelijk van systemische sites zoals de milt en mesenterische lymfeklieren met een relatief lage overvloed in de GI Tract12. Echter, voor behandeling van muizen met streptomycine verhoogt de efficiëntie van salmonella kolonisatie van de darm door het verminderen van de gastheer beschermende effecten van de normale microbiota13. Pathologische kenmerken van dit model zijn de verstoring of ulceratie van de epitheliale barrière, granulocyt rekrutering en ernstig oedeem13. Als alternatief, infectie met het vaccin grade S. Typhimurium ΔAroA Mutant leidt tot chronische kolonisatie van de blindedarm en Colon die tot dag 40 na infectie14blijft. De S. Tyhimurium ΔAroA stam heeft een defect in de biosynthese van aromatische aminozuren; Dit maakt de Mutante stam Avirulente en kan worden gebruikt als een zeer effectief vaccin15. Orale infectie bij muizen leidt tot een Th17-cytokine geassocieerde ontstekingsreactie, uitgebreide weefsel remodellering en collageen depositie. Weefsel pathologie wordt geassocieerd met verhoogde niveaus van Pro-fibrotische factor zoals TGF-β1, CTGF, en IGF14. De Transmurale fibrotische littekenvorming die in dit model wordt gerapporteerd, doet denken aan strictuur formaties die vaak in IBD worden waargenomen. De inductie van fibrose door salmonella vereist virulentie gecodeerd door salmonella pathogeniciteitseilanden (SPI)-1 en 2 12. Belangrijk is dat dit S. Tymphimurium ΔAroA infectie model is een nuttig systeem voor de studie van fibrotische reacties in Mutante muizen onderhouden op een C57/Bl6 achtergrond. De C57/Bl6-stam is extreem gevoelig voor S. Typhiumurim SL1344 infectie als gevolg van een verlies-van-functie-Mutatie in het gen coderen van de natuurlijke resistentie-geassocieerde macrofaag eiwit (nramp)-116,17. We hebben geconstateerd dat IL-17A en RORα-afhankelijke aangeboren lymfoïde cellen belangrijke bijdragers zijn aan pathogenese in dit model18.
Een belangrijke complicatie van cd is de disgereguleerde en overmatige depositie van extracellulaire matrix (ECM), inclusief collageen2,19. Hoewel de GI tractus een relatief hoge capaciteit voor regeneratie heeft, fibrotische littekens kan ontstaan als gevolg van onopgeloste wondgenezing reacties die worden geassocieerd met chronische en ernstige ontsteking20,21. In CD, dit resulteert in schadelijke effecten op weefsel architectuur leidt tot significante orgaanstoornis21,22. De Transmurale aard van de ontsteking waargenomen in CD uiteindelijk voorafgaat aan de verdikking van de darmwand geassocieerd met symptomatische stenose of strictuur vorming21. Ongeveer een derde van de CD-patiënten vereisen intestinale resectie voor deze complicatie22. Er zijn geen effectieve anti-fibrotische therapieën in IBD, aangezien het gebruik van immunosuppressiva zoals Azathioprine of anti-tnfα-Biologics geen invloed heeft of slechts bescheiden de eis van chirurgische ingrepen heeft verlaagd19,23 . Terwijl fibrose wordt beschouwd als het gevolg van chronische ontsteking, cellen van mesenchymale oorsprong zoals fibroblasten en pericytes worden verondersteld te zijn de primaire cellulaire bronnen van ecm in fibrotische littekens21,24. Chronische S. Typhimurium ΔAroA-infectie is een robuust muismodel van intestinale fibrose dat inzicht kan bieden in de pathogenese van CD-achtige functies.

<table><tbody><tr><td>2 ml round bottom safe lock tubes</td><td>Eppendorf</td><td>22363344</td><td></td></tr><tr><td>Roestvrijstalen kralen</td><td>Qiagen</td><td>69989</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>Large-Orifice Pipet Tips</td><td>Fisher</td><td>2707134</td><td></td></tr><tr><td>2 mL megablock platen</td><td>Sarstedt</td><td>82.1972.002</td><td></td></tr><tr><td>Gavage naalden</td><td>FST</td><td>18061-22</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycinesulfaat</td><td>Sigma</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>Mixermolen</td><td>Retsch</td><td>MM</td><td></td></tr></tbody></table>

chronische salmonella infectie veroorzaakte intestinale fibrose

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

Weefsel fibrose gekenmerkt door de pathologische accumulatie van extracellulaire matrix zoals collageen is het resultaat van aanhoudende ontsteking en disgereguleerde reparatie. In inflammatoire darmziekte (IBD), fibrose leidt tot terugkerende strictuur formaties waarvoor er geen effectieve therapie anders dan chirurgische resectie. Door zijn late aanvang zijn de processen die fibrose aandrijden minder bestudeerd en grotendeels onbekend. Daarom vormen fibrotische complicaties een grote uitdaging in IBD. In dit protocol wordt een robuust in vivo model van intestinale fibrose beschreven waarbij de pre-behandeling van streptomycine van C57Bl/6 muizen gevolgd door orale maagsonde met vaccin kwaliteit salmonella typhimurium δaroa Mutant leidt tot aanhoudende pathogenen kolonisatie en fibrose van de blindedarm. Methoden voor de voorbereiding van S. Typhimurium ΔAroA voor het inenten, kwantificeren van pathogenen in de blindedarm en milt, en het evalueren van de collageen afzetting in intestinale weefsels worden uitgelegd. Dit experimentele ziekte model is nuttig voor het onderzoeken van gastheerfactoren die CD-achtige intestinale fibrose verbeteren of verergeren.

Streptomycine behandeling gevolgd door orale infectie met S. Typhimurium ΔAroA leidt tot robuuste intestinale ontsteking en fibrose, vooral in de blindedarm (Figuur 1). Typische pathogeen lasten van 108 tot 109 kve per 1 g blindedarm en 104 kve per 1 g milt kunnen worden teruggewonnen uit besmette dieren (Figuur 2). Beoordeling van fibrose in picrosirius rood gekleurd gekleurde cecal-secties duiden op piek fibrose 21 dag...

Dit protocol beschrijft een muismodel van door salmonella gedreven intestinale fibrose dat lijkt op belangrijke pathologische kenmerken van de ziekte van Crohn, waaronder Transmurale ontsteking en fibrose. Deze methode kan worden gebruikt om gastheerfactoren te evalueren die fibrotische uitkomsten veranderen met Mutant muizen gehandhaafd op een C57Bl/6 genetische achtergrond.

Chronische salmonella infectie veroorzaakte intestinale fibrose

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...

Weefselfibrose is de primaire manier waarop organen na verloop van tijd falen, in reactie op chronische ontsteking of veroudering. En in feite zou ik zeggen dat als je niet sterft aan een besmettelijke agent of kanker, je waarschijnlijk zal sterven aan orgaanfibrose naarmate je ouder wordt. Helaas zijn er niet veel geweldige muismodellen om menselijke weefselfibrose na te bootsen.Wat we hebben ontwikkeld is een muismodel van de ziekte van Crohn, dat is een ziekte bij de mens die fibrose van de darm veroorzaakt en grotendeels onbehandelbaar is. In feite is de enige manier waarop je het behandelen is door chirurgische verwijdering van het fibrotische weefsel en re-ligatie van de darm. Het voordeel van ons model is dat het volledig penetrant is in alle muizenstammen en het zeer nauw de ziekte van de mens nabootst en de fibrose langer dan een maand aanhoudt, wat echt een robuust model is.Het meest uitdagende deel van deze procedure is de behandeling van de muizen en vooral de orale gavage, omdat dat veel van de praktijk speciale certificering vereist. Bij het uitvoeren van deze procedure voor de eerste keer, moet men zich ervan bewust dat het werken met Salmonella vereist de juiste vei

chronic-salmonella-infection-induced-intestinal-fibrosis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Stel een chronische bacteriële infectie muismodel met...

Chronisch Salmonella Infected Muis Model

Experimentele modellen van inflammatoire darmziekte hebben ons de complexe aangeboren en adaptieve immuunrespons geassocieerd met pathogenese te onderzoeken. Met behulp van histologische scoring, kwantificering van pro-inflammatoire cytokines en myeloperoxidase activiteit, kan men beginnen met deze reacties gezien bij inflammatoire darmziekten te beoordelen.

Onderzoeken darmontsteking in DSS-geïnduceerde Model van IBD

Source: Lo, B. C., et al. Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the quantification of bacterial load in a mouse model of chronic infection with streptomycin-resistant Salmonella typhimurium. Following euthanasia and sterile dissection, cecal and splenic tissues are harvested, homogenized with steel beads to release bacteria, and serially diluted. Dilutions are plated on selective agar, and visible colonies are counted to estimate...

Quantification of Tissue Bacterial Load in a Mouse Model of Chronic Intestinal Infection

Citrobacter rodentium infectie biedt een waardevol model voor enterische bacteriële infecties te bestuderen, evenals het hosten immuunreacties en colitis bij muizen. Dit protocol beschrijft de meting van de barrière integriteit, pathogeen belasting en histologische schade waardoor de grondige karakterisering van pathogeen en gastheer bijdragen aan murine infectieuze colitis.

De<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Muis Model: Studeren pathogeen en gastheer Bijdragen aan infectieuze colitis

Verstoring van de galstroom resulteert in ernstige inflammatoire cholestatische leverbeschadiging met een karakteristieke tijdsafhankelijke sequentie van morfologische veranderingen. Hier presenteren we een protocol voor de chirurgische ligatie van de gemeenschappelijke galgang bij muizen die het mogelijk maakt om een sterke fibrotische respons te induceren na 21 tot 28 dagen.

Bile-duct Ligatie in Muizen: Inductie van Inflammatoire leverschade en Fibrosis door Obstructive Cholestase

In deze studie beschrijven we een gedetailleerde procedure van TNBS-gemedieerde intestinale fibrose, die vergelijkbare pathofysiologie vertoont voor de fibrose van Crohn. We bespreken deze aanpak ook in het licht van rapamycine vergemakkelijkt remmende effecten op intestinale fibrose.

Mechanistisch inzicht in de ontwikkeling van TNBS-gemedieerde intestinale fibrose en evaluatie van de remmende effecten van Rapamycine

We ontwikkelden een model van chorioamnionitis om foetale blootstelling aan maternale ontsteking (FEMI) te simuleren zonder complicaties van levende organismen om de effecten van FEMI op de ontwikkeling van het darmkanaal van het nageslacht te onderzoeken. Dit maakt het mogelijk om mechanistische oorzaken voor de ontwikkeling van darmletsel na chorioamnionitis te bestuderen.

Een murien model van foetale blootstelling aan maternale ontsteking om de effecten van acute chorioamnionitis op de ontwikkeling van pasgeborenen te bestuderen

Het huidige protocol beschrijft de ontwikkeling van een Crohn-achtig colitismodel bij knaagdieren. Transmurale ontsteking leidt tot stenose op de TNBS-instillatieplaats en mechanische vergroting wordt waargenomen in het segment proximaal met de stenose. Deze veranderingen maken het mogelijk om mechanische stress bij colitis te bestuderen.

Een TNBS-geïnduceerd knaagdiermodel om de pathogene rol van mechanische stress bij de ziekte van Crohn te bestuderen

Dit protocol beschrijft de inductie van Gram-negatieve monobacteriële sepsis in een muismodelsysteem. Het model is nuttig bij het onderzoeken van de inflammatoire en dodelijke gastheerreacties tijdens sepsis.

Karakterisering van Salmonella Typhimurium-geïnduceerde septische peritonitis bij muizen

Dit protocol laat zien hoe het Src-homologie 2-domeinbevattende 5'-inositolfosfatase (SHIP)-deficiënte muismodel van de ziekte van Crohn (CD)-achtige ileale ontsteking en fibrose kan worden gebruikt om nieuwe therapieën voor CD te testen.

Evaluatie van therapeutische interventies in het SHIP-deficiënte muismodel van de ziekte van Crohn, zoals ileitis en fibrose

Leer een robuust muismodel voor intestinale fibrose veroorzaakt door chronische Salmonella-infectie. Dit protocol bootst Crohn-ziekte na en helpt onderzoekers fibrotische mechanismen en therapeutische doelwitten bestuderen.

Chronische salmonella infectie veroorzaakte intestinale fibrose

Meer video's verkennen