Name: Snijden en kweken Varkensharten onder fysiologische omstandigheden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: Leer het snijden en kweken van varkensharten onder fysiologische omstandigheden voor zes dagen. Deze methode maakt testen van hartfalentherapieën en acute cardiotoxiciteit mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

TMAM wordt ondersteund door NIH grant P30GM127607 en American Heart Association grant 16SDG29950012. RB wordt ondersteund door P01HL78825 en UM1HL113530.

Alle dierprocedures waren in overeenstemming met de institutionele richtlijnen van de Universiteit van Louisville en goedgekeurd door het Institutioneel Comité voor dierverzorging en -gebruik.
1. Voorbereiding voor slicing (Een dag voor het snijden)
<ol><li>Bereiding van het trillende microtoom
	<ol>
<li>Plaats het keramische blad in de houder door deze stappen te volgen: plaats na het zorgvuldig uitpakken van het blad de scherpe rand eerst in de sleuf van het bladgereedschap. Dan, plaats het blad in de houder door het losmaken van de twee schroeven op de armen van de houder en schuif het mes onder elke ring en duw het stevig terug tegen de achterste stops. Draai de schroeven om het mes vast te maken. LET OP: De schroeven mogen niet te strak worden gedraaid.</li>
		<li>Kalibreer het mes met behulp van het kalibratieprotocol en de gereedschappen volgens het protocol van de fabrikant. LET OP: Kortom, om de uitlijning van het blad met de as van de reis te vergemakkelijken en om de Z-as afbuigingen te minimaliseren, maakt het trillende microtoom gebruik van een demontabel. Wanneer het kalibratieapparaat op het instrument is aangesloten, wordt de aanwezigheid ervan automatisch gedetecteerd en neemt het trillende microtoom de controle over het aanpassen van de amplitude- en frequentieinstellingen van het blad tot een magnitude die de uitlijningsfout van het blad het beste mogelijk maakt.<ol>
<li>Druk op de slice-knop om het uitlijningsproces te starten dat het blad automatisch verplaatst, zodat de snijkant zich in optimale positie bevindt ten opzichte van het kalibratieapparaat voor de beste uitlijningsevaluatie. Volg de instructies op het scherm om het blad aan te passen met behulp van de meegeleverde schroevendraaier om ervoor te zorgen dat de Z-uitlijning zich binnen 1 μm bevindt.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Autoclave het binnenbad en alle metalen delen van de vibrerende microtoom.</li>
	</ol></li>
	<li>Autoclave de grote metalen trays (voor het verzamelen van de plakjes en het weken van de elektrische stimulatie plaat covers), alle glazen containers, gewone rechthoek bladen, tangen, schaar, printer distributieriem (snijd ze in 6 mm brede stukken), metalen ringen en 5 L van dubbele gedestilleerd water (ddH2O).</li>
	<li>Steriliseer één 1 L-pot, een pot van 500 mL en een plastic lade voor het hart ter plaatse en in vitro perfusie met de cardioplege oplossing.</li>
	<li>Bereid 2 L van de snijdende Tyrode's oplossing in een 2 L beker.
	<ol>
<li>Meng voor 1 L van de oplossing van het snijden van Tyrode 3 g/L 2,3-butanedione monoxime (BDM), 140 mM NaCl (8,18 g), 6 mM KCl (0,447 g), 10 mM D -glucose (1,86 g), 10 mM HEPES (2,38 g), 1 mM MgCl2 (1 mL van 1 M oplossing), 1,8 mM CaCl2 (1,8 mL van 1 M oplossing), tot 1 L van ddH2O. Stel de pH aan op 7,40 met NaOH. Filtreer de oplossing vervolgens met een 1.000 mL, 0,22 μm, vacuümfilter/opslagsysteem en bewaar 's nachts bij 4 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereid 4 L van de cardioplegic oplossing.
	<ol>
<li>Meng voor 1 l van de cardioplegic oplossing 110 mM NaCl (6,43 g), 1,2 mM CaCl2 (1,2 mL van 1 M oplossing), 16 mM KCl (1,19 g), 16 mM MgCl2 (3,25 g), 10 mM NaHCO3 (0,84 g), 1 U/mL heparin, tot 1 L ddH2O. Pas de pH aan tot 7,40 met NaOH. Filtreer de oplossing vervolgens met een 1.000 mL, 0,22 μm, vacuümfilter/opslagsysteem en bewaar 's nachts bij 4 °C. LET OP: Voeg 1.000 U/L heparine toe in cardioplegieoplossing op de dag van het snijden (zie stap 2.1).</li>
	</ol></li>
	<li>Vers bereid 500 mL kweekmiddel in de originele fles in een bioveiligheidskast: meng medium 199, 1x insuline-transferrin-selenium (ITS) supplement, 10% foetaal runderserum (FBS), 5 ng/mL vasculaire endotheelgroeifactor (VEGF), 10 ng/mL FGF-basic en 2x antibioticum-antimycoticus. Filter steriliseren door de 0,22 μm, vacuüm filter / opslag systeem en op te slaan op 4 °C 's nachts. LET OP: Pas de pH niet aan, voeg VEGF en FGF vers toe voor gebruik.</li>
	<li>Bereid 4% agar gel platen.
	<ol>
<li>Voeg 200 mL gesteriliseerde ddH2O toe in een gesteriliseerde kolf van 500 mL. Weeg 8 g agarose en giet voorzichtig in de kolf. Kook gedurende 2 min in een magnetron, koel dan 5 min op kamertemperatuur.</li>
		<li>Giet 25 mL in elke 100 mm petrischaal in een bioveiligheidskast (bereid 6 gerechten) en wacht 1 uur om te stollen. Sluit vervolgens de platen af met paraffinefolie, wikkel met schone wrap en bewaar op 4 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereid 4 L van 70% ethanol door verdunnen van de 200-proof absolute ethanol in autoclaved ddH2O.</li>
	<li>Bereid 2x antibiotica-antimycotisch in gesteriliseerde ddH2O: meng 980 mL gesteriliseerde ddH2O met 20 mL antibiotica-antimycotisch onder de bioveiligheidskast.</li>
</ol>2. VarkenshartPerfusie
<ol><li>Voeg 1 mL van 1.000 U/mL heparine toe aan elke 1 L cardioplegic oplossing. Houd de oplossing op ijs. LET OP: Ten minste 3 L zijn nodig voor de perfusie en het behoud van het hart tijdens de overdracht naar de weefselkweekkamer.</li>
	<li>Neem de volgende items naar de varkenschirurgie kamer: een grote ijsemmer vol ijs, een gesteriliseerde metalen lade (houd op ijs emmer voor hartperfusie), een gesteriliseerde 500 mL pot, een 1 L pot (om het hart in cardioplegie oplossing terug naar het weefsel cultuur kamer , op ijs), en een gesteriliseerde plastic lade vol ijs (om cardioplegic oplossing op ijs te houden).</li>
	<li>Bereid een in-situ hartperfusiesysteem voor met een 3-wegstopcock, een 60 mL-spuit, een 18 G vlindernaaldkatheter en verlengbuizen naar het reservoir met cardioplegische oplossing.</li>
	<li>Verdoof het mannetjesvarken uit Yorkshire (2−3 maanden oud, 20−25 kg) eerst met een intramusculaire injectie van ketamine (20 mg/kg)/xylazine (2 mg/kg) cocktail. Bevestig een goede anesthesie door het verlies van kaakspanning. Breng het varken vervolgens naar de operatiekamer, intuber en ventileer de longen mechanisch zoals eerder beschreven14.</li>
	<li>Zorg voor anesthesie met (1,5−2%) isoflurane.</li>
	<li>Plaats het dier op de juiste zijdelingse positie en scheer de vacht van het borstgebied. Reinig de huid met alcohol scrub, dan steriliseren van de chirurgische site met 10% (w / v) povidone-jodium oplossing.</li>
	<li>Open de borst door linker thoracotomie incisie met behulp van een scalpel op de4e intercostale ruimte, en gebruik een borst oprolmechanisme tussen ribben om de borst open te houden en bloot het hart. LET OP: Gebruik alle gesteriliseerde instrumenten voor deze procedure.</li>
	<li>Steek de vlindernaaldkatheter in het linkeratrium en bevestig de naald met een tassjesluiting. Na een intraveneuze injectie van een bolusdosis heparine (100 U/kg), begint u het hart in situ te doordringen met 500 mL ijskoude cardioplegic oplossing (om de hartslag te vertragen) via de linker atriumkatheter.</li>
	<li>Verdoof het varken diep met 5% isofluraan. Snel accijns het hart uit de borst met chirurgische schaar. Cannulate de aorta met een aortacanule en doorbloeding het hart in vitro met een andere 1 L van ijskoude cardioplegic oplossing (100 mL/min) te spoelen vasculatuur bloed.</li>
	<li>Na hartperfusie, houd het hart in een 1 L pot gevuld met ijskoude cardioplegie oplossing en houd op ijs tijdens de overdracht naar het weefsel cultuur kamer.</li>
</ol>3. Varkenshartweefsel snijden
<ol><li>Zet het weefsel bad op het vibratome, voeg ijs toe aan het weefsel bad koeljas, voeg dan Tyrode's oplossing in het weefsel bad. Zet 1 L plastic pot om de verwijdering van gesmolten ijs te verzamelen uit het weefsel bad koeljas.</li>
	<li>Breng onder de bioveiligheidskast het varkenshart over naar een bak met 1 L verse koude cardioplegic oplossing.</li>
	<li>Ontleed het hart om de linker ventrikel te isoleren met behulp van intrekbare steriele scalpels. Snijd vervolgens de linker ventrikel in blokken van 1−2 cm3 elk met scheermesjes. Gebruik een stuk voor het snijden en houd de resterende stukken in een 50 mL buis in koude Tyrode's oplossing op ijs voor het snijden later, indien nodig. LET OP: Masseer het weefsel voor het snijden met de handen, vooral als dit het tweede blok is. Masseren helpt om de juiste spiervezel configuratie te herstellen en voorkomt elke stijfheid in het hartblok.</li>
	<li>Voeg 1−2 druppels weefsellijm (Table of Materials)toe aan de metalen monsterhouder en plak een stuk van het 4% agarblok met een oppervlakte van ongeveer 1 cm2.</li>
	<li>Voeg 1−2 druppels weefsellijm toe aan de agar.</li>
	<li>Plak het hartblok aan de agar met de hart-epicardium kant naar beneden op het weefsel lijm en zorg ervoor dat het zo plat mogelijk. Breng vervolgens de weefselhouder met het hartblok naar zijn positie in het snijdende bad van het vibratome.</li>
	<li>Bevestig de zuurstofbuis aan het snijbad en de metalen lade gevuld met Tyrode's oplossing voor het verzamelen van de plakjes (zuurstofrijk Tyrode's bad). Voeg vervolgens 40 μm celstrainers toe in de metalen lade om de plakjes na het snijden te verzamelen.</li>
	<li>De snijpositie aanpassen
	<ol>
<li>Met behulp van de vibratome-werksoftware en het dashboard past u de hoogte van het blad/monster aan. Selecteer de hoogteknop en volg de instructies op het scherm voor het aanpassen van de hoogte. Idealiter, hebben het mes dicht bij de bovenkant van het weefsel, maar onder de papillaire spieren en zorg ervoor dat er vloeistof die het weefsel en het mes voor het snijden.</li>
		<li>Pas aan waar u moet beginnen met het snijden van het weefsel door de knop vooraf te selecteren. Druk op de snijknop en verhoog de snelheid met behulp van de knop om het mes naar de rand van het weefsel te bewegen. Druk vervolgens nogmaals op slice om te stoppen en druk op de knop Vooraf om het proces te activeren.</li>
		<li>Pas de snijparameters aan: voorsnelheid = 0,03 mm/s, trillingsfrequentie = 80 Hz en horizontale trillingsamplitude = 2 mm. Begin vervolgens met snijden door de segmentknop te selecteren.</li>
		<li>Laat het vibratomoom snijden tot het het einde van het weefsel bereikt, maar voordat het de achterkant van de houder van het monster raakt. Druk op dit punt nogmaals op slice om te stoppen. Druk op de knop Terug om terug te gaan naar de startpositie.</li>
		<li>Selecteer automatische herhaling (twee keer klikken) waarmee het trillende microtoom het snijproces tot 99 keer automatisch kan herhalen.</li>
	</ol></li>
	<li>Segmenten verzamelen
	<ol>
<li>Wacht tot plakjes zijn volledige lengte en lijken goed (na het krijgen van langs de papillaire spierlagen), dan beginnen met het verzamelen van de plakjes.</li>
		<li>Verzamel de plakjes met behulp van een plastic Pasteur pipet gevuld met koude Tyrode's oplossing om voorzichtig pak het weefsel uit het bad. Gebruik indien nodig tangen en veerschaar om de schijf van het hartblok te scheiden als het weefsel nog steeds is bevestigd.</li>
		<li>Breng de schijf in een cel zeef in het bad van de zuurstofachtige Tyrode's (zie stap 3.7) en gebruik de vloeistof in de plastic Pasteur pipet om het weefsel plat te liggen op een van de cel strainers, voeg dan een metalen ring op de top om het weefsel naar beneden te houden. LET OP: De plakjes moeten ten minste 1 uur worden geïncubeerd in de oplossing van de Tyrode voor de verwerking (dit is voor de BDM om het weefsel te ontspannen).</li>
	</ol></li>
</ol>4. Het kweken van hartsegmenten
<ol><li>
Het voorbereiden van de plakjes voor cultuur
	<ol>
<li>Knip het segment van de randen om oneffen randen te voorkomen. Lijm het vervolgens van beide uiteinden tot gesteriliseerd polyurethaan 6 mm brede printerdistributieriem met metalen draden ingebed met behulp van weefsellijm.</li>
		<li>Breng de ondersteunde hartplakjes over op 6 putplaten die 6 mL kweekmedium in elke put bevatten.</li>
		<li>Plaats de stimulatieplaatdeksel (Table of Materials) op de bovenkant van de 6 putplaat en sluit de cover aan op de elektrische stimulator van de celcultuur ( Tabel vanmaterialen). Pas de stimulator aan om de hartschijfjes elektrisch te stimuleren bij 10 V, 1,2 Hz continu de hele tijd. OPMERKING: Na het aansluiten van de stimulatie, zullen de hartschijfjes beginnen te kloppen, en deze beweging zal visueel duidelijk zijn.</li>
		<li>Breng de platen naar een couveuse en bewaar de weerstand van 37 °C met bevochtigde lucht en 5% CO2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verander cultuur medium 3x per dag en voeg 6 mL van cultuur medium per goed tijdens elke media verandering. LET OP: Cultuur medium is zuurstofrijk voor 5 min voorafgaand aan elke verandering van de media. Medium moet ten minste 1x per dag worden gewijzigd; dit is oke in het weekend indien nodig. Twee dagen van slechts 1 media verandering per dag is het maximum dat wordt getest.</li>
	<li>
Verander de stimulatieplaatdeksel elke dag om het vrijkomen van giftige grafietdeeltjes in het kweekmedium te voorkomen (meestal tijdens de mediaverandering in het midden van de dag).
	<ol>
<li>Verwijder de stimulatieplaatdeksel uit de kweekschaal en plaats de witte schuimplug waar het deksel verbinding maakt met de kabel voor de elektrische stimulator van de celkweek, om waterschade aan het elektrische circuit te voorkomen.</li>
		<li>Plaats de plaatdeksel in een bad van autoclaved water met 2x antibiotica-antimycotisch. Bewaar het in dit bad (dat wil zeggen, spoelen bad) 's nachts.</li>
		<li>De volgende dag, verplaats de plaat deksel in een 70% ethanol bad voor 5−15 min te ontsmetten. Schud zoveel mogelijk vloeistof uit het apparaat voordat u van bad wisselt.</li>
		<li>Breng vervolgens de plaatdeksel over naar het derde en laatste bad (d.w.z. schoon bad), dat bestaat uit autoclaved water en 2x antibacteriële antimycotische, om eventuele resterende ethanolsporen te spoelen.</li>
		<li>Gebruik na het spoelen van de plaathoes in het schone bad een schoon pluisjesvrije veeg (met ethanol gespoten) om eventueel restwater op de kunststof onderdelen af te drogen, verwijder vervolgens het witte schuimstuk en plaats de plaatdeksel voorzichtig terug op de kweekplaat. LET OP: Raak de zwarte grafietelektroden die in de put gaan niet aan, omdat het apparaat niet langer steriel zal zijn.</li>
		<li>Met behulp van steriele tangen, zorg ervoor dat het weefsel in het midden van de put, zodat de plaat deksel niet het weefsel aante raken. Zorg ervoor dat de gebogen kant van de plaat afte dekken overeenkomt met de schuine kant van de plaat en dat de vierkante hoeken line-up. LET OP: Om de verontreiniging van de stimulatieplaatkappen te minimaliseren, bewaar ze na het beëindigen van het experiment in schone en lege 6 putplaten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Voer een MTT-test, calciummetingen en contractiele functiebeoordelingen uit op verse plakjes varkenshart (dag 0) en na 6 dagen in cultuur volgens Ou et al.13.</li>
</ol>

<ol><li>Onakpoya, I. J., Heneghan, C. J., Aronson, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-marketing+withdrawal+of+462+medicinal+products+because+of+adverse+drug+reactions%3A+a+systematic+review+of+the+world+literature%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Medicine%22%5BJournal%5D)">Post-marketing withdrawal of 462 medicinal products because of adverse drug reactions: a systematic review of the world literature.</a> BMC Medicine. 14, 10(2016).</li>
<li>Fermini, B., Fossa, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+drug-induced+QT+interval+prolongation+on+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">The impact of drug-induced QT interval prolongation on drug discovery and development.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 2 (6), 439-447 (2003).</li>
<li>Moslehi, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+Toxic+Effects+of+Targeted+Cancer+Therapies%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular Toxic Effects of Targeted Cancer Therapies.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (15), 1457-1467 (2016).</li>
<li>Robertson, C., Tran, D. D., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+maturation+phases+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: maturation phases of human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Stem Cells. 31 (5), 829-837 (2013).</li>
<li>Ronaldson-Bouchard, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+maturation+of+human+cardiac+tissue+grown+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Advanced maturation of human cardiac tissue grown from pluripotent stem cells.</a> Nature. 556 (7700), 239-243 (2018).</li>
<li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+Cardiac+Cellular+Composition%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Revisiting Cardiac Cellular Composition.</a> Circulation Research. 118 (3), 400-409 (2016).</li>
<li>Kanisicak, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+lineage+tracing+defines+myofibroblast+origin+and+function+in+the+injured+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Genetic lineage tracing defines myofibroblast origin and function in the injured heart.</a> Nature Communications. 7, 12260(2016).</li>
<li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+fibroblast+differentiated+states+underlie+scar+formation+in+the+infarcted+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigations%22%5BJournal%5D)">Specialized fibroblast differentiated states underlie scar formation in the infarcted mouse heart.</a> Journal of Clinical Investigations. 128 (5), 2127-2143 (2018).</li>
<li>Kretzschmar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+proliferative+cells+and+their+progeny+in+damaged+murine+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Profiling proliferative cells and their progeny in damaged murine hearts.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (52), E12245-E12254 (2018).</li>
<li>Perbellini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+cardiac+fibroblasts+using+myocardial+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Investigation of cardiac fibroblasts using myocardial slices.</a> Cardiovascular Research. 114 (1), 77-89 (2018).</li>
<li>Watson, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+viable+adult+ventricular+myocardial+slices+from+large+and+small+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of viable adult ventricular myocardial slices from large and small mammals.</a> Nature Protocols. 12 (12), 2623-2639 (2017).</li>
<li>Kang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Organotypic+Cultured+Cardiac+Slices%3A+New+Platform+For+High+Throughput+Preclinical+Human+Trials%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Human Organotypic Cultured Cardiac Slices: New Platform For High Throughput Preclinical Human Trials.</a> Scientific Reports. 6, 28798(2016).</li>
<li>Ou, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+Biomimetic+Culture+System+for+Pig+and+Human+Heart+Slices%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Physiological Biomimetic Culture System for Pig and Human Heart Slices.</a> Circulation Research. 125 (6), 628-642 (2019).</li>
<li>Jones, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NHLBI-sponsored+Consortium+for+preclinicAl+assESsment+of+cARdioprotective+therapies+%28CAESAR%29%3A+a+new+paradigm+for+rigorous%2C+accurate%2C+and+reproducible+evaluation+of+putative+infarct-sparing+interventions+in+mice%2C+rabbits%2C+and+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">The NHLBI-sponsored Consortium for preclinicAl assESsment of cARdioprotective therapies (CAESAR): a new paradigm for rigorous, accurate, and reproducible evaluation of putative infarct-sparing interventions in mice, rabbits, and pigs.</a> Circulation Research. 116 (4), 572-586 (2015).</li>
<li>Crick, S. J., Sheppard, M. N., Ho, S. Y., Gebstein, L., Anderson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+pig+heart%3A+comparisons+with+normal+human+cardiac+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the pig heart: comparisons with normal human cardiac structure.</a> Journal of Anatomy. 193 (Pt 1), 105-119 (1998).</li>
<li>Fischer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+functional+and+structural+preservation+of+precision-cut+human+myocardium+under+continuous+electromechanical+stimulation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Long-term functional and structural preservation of precision-cut human myocardium under continuous electromechanical stimulation in vitro.</a> Nature Communications. 10 (1), 117(2019).</li>
<li>Franke, J., Abs, V., Zizzadoro, C., Abraham, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+the+effects+of+fetal+bovine+serum+versus+horse+serum+on+growth+and+differentiation+of+primary+equine+bronchial+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Comparative study of the effects of fetal bovine serum versus horse serum on growth and differentiation of primary equine bronchial fibroblasts.</a> BMC Veterinary Research. 10, 119(2014).</li>
<li>Vuorenpaa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+in+vitro+cardiovascular+constructs+composed+of+vascular-like+networks+and+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology+-+Animal%22%5BJournal%5D)">Novel in vitro cardiovascular constructs composed of vascular-like networks and cardiomyocytes.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal. 50 (4), 275-286 (2014).</li>
<li>Qiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiparametric+slice+culture+platform+for+the+investigation+of+human+cardiac+tissue+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Biophysics+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Multiparametric slice culture platform for the investigation of human cardiac tissue physiology.</a> Progress in Biophysics and Molecular Biology. 144, 139-150 (2018).</li>
<li>Watson, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+electromechanical+stimulation+to+maintain+adult+myocardial+slices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Biomimetic electromechanical stimulation to maintain adult myocardial slices in vitro.</a> Nature Communications. 10 (1), 2168(2019).</li>
</ol>

TMAM bezit aandelen in Tenaya Therapeutics. De andere auteurs melden geen conflicten.

Hier beschrijven we de gedetailleerde video protocol voor onze onlangs gepubliceerde methode voor vereenvoudigde medium doorvoer (processen tot 48 plakjes / apparaat) methode die cultuur van varkenshart plakjes mogelijk maakt voor een periode die voldoende lang is om acute cardiotoxiciteit te testen13. De voorgestelde omstandigheden bootsen de omgeving van het hart na, inclusief de frequentie van elektrische stimulatie, beschikbaarheid van voedingsstoffen en intermitterende oxygenatie. We schrijve...

Drug geïnduceerde cardiotoxiciteit is een belangrijke oorzaak van de terugtrekking van de markt1. In het laatste decennium van de20e eeuw werden acht niet-cardiovasculaire geneesmiddelen uit de markt genomen omdat ze resulteerden in een plotselinge dood als gevolg van ventriculaire hartritmestoornissen2. Bovendien kunnen verschillende anti-kankertherapieën (hoewel in veel gevallen effectief) leiden tot verschillende cardiotoxische effecten, waaronder cardiomyopathie en hartritmestoornissen. Zo kunnen zowel traditionele (bijvoorbeeld anthracyclines en bestraling) als gerichte (bijvoorbeeld trastuzumab) borstkankertherapieën leiden tot cardiovasculaire complicaties bij een subgroep van patiënten3. Een nauwe samenwerking tussen cardiologen en oncologen (via het opkomende veld van "cardio-oncologie") heeft geholpen om deze complicaties beheersbaar te maken ervoor te zorgen dat patiënten effectief kunnen worden behandeld2. Minder duidelijk zijn de cardiovasculaire effecten van nieuwere stoffen, waaronder Her2- en PI3K-remmers, vooral wanneer therapieën in combinatie worden gebruikt. Daarom is er een groeiende behoefte aan betrouwbare preklinische screening strategieën voor cardiovasculaire toxiciteit in verband met opkomende anti-kanker therapieën voorafgaand aan menselijke klinische proeven. Het gebrek aan beschikbaarheid van kweeksystemen voor menselijk hartweefsel dat functioneel en structureel levensvatbaar is voor meer dan 24 uur is een beperkende factor voor betrouwbare cardiotoxiciteitstests. Daarom is er een dringende noodzaak om een betrouwbaar systeem te ontwikkelen voor het kweken van menselijk hartweefsel onder fysiologische omstandigheden voor het testen van toxiciteit van geneesmiddelen.
De recente stap naar het gebruik van door de mens geïnduceerde pluripotente cardiomyocyten (hiPSC-CMs) in cardiotoxiciteitstests heeft een gedeeltelijke oplossing geboden om dit probleem aan te pakken; echter, de onrijpe aard van de hiPSC-CMs en het verlies van weefsel integriteit in vergelijking met meercellige aard van het hartweefsel zijn belangrijke beperkingen van deze technologie4. Een recente studie heeft deze beperking gedeeltelijk overwonnen door de fabricage van hartweefsels van hiPSC-CMs op hydrogels en hen te onderwerpen aan een geleidelijke toename van elektrische stimulatie in de loop van de tijd5. Echter, hun elektromechanische eigenschappen niet bereiken van de volwassenheid gezien in de volwassen menselijke myocardium. Bovendien is het hartweefsel structureel ingewikkelder, dat bestaat uit verschillende celtypen, waaronder endotheelcellen, neuronen en verschillende soorten stromale fibroblasten die zijn gekoppeld aan een zeer specifiek mengsel van extracellulaire matrixeiwitten6. Deze heterogeniteit van de niet-cardiomyocyte celpopulatie7,8,9 in het volwassen zoogdierhart is een belangrijk obstakel bij het modelleren van hartweefsel met behulp van individuele celtypen. Deze belangrijke beperkingen benadrukken het belang van het ontwikkelen van methoden om de kweek van intact hartweefsel mogelijk te maken voor optimale studies met fysiologische en pathologische aandoeningen van het hart5.
Het kweken van menselijke hartplakken is een veelbelovend model van intact menselijk myocardium. Deze technologie biedt toegang tot een compleet 3D meercellig systeem dat vergelijkbaar is met het menselijk hartweefsel dat betrouwbaar de fysiologische of pathologische omstandigheden van het menselijke myocardkanon kan weerspiegelen. Het gebruik ervan is echter ernstig beperkt door de korte periode van levensvatbaarheid in de cultuur, die niet verder reikt dan 24 uur met behulp van de meest robuuste protocollen die tot 201810,11,12worden gemeld . Deze beperking was te wijten aan meerdere factoren, waaronder het gebruik van lucht-vloeistof interface om de cultuur van de plakjes, en het gebruik van een eenvoudige cultuur medium dat niet ondersteunt de hoge energetische eisen van het hartweefsel. We hebben onlangs een ondergedompeld kweeksysteem ontwikkeld dat in staat is om continue elektrische stimulatie te bieden en de componenten van de cultuurmedia te optimaliseren om hartweefselplakjes tot 6 dagen13levensvatbaar te houden. Dit cultuursysteem heeft het potentieel om een krachtig voorspellend human in situ-model te worden voor acute cardiotoxiciteitstests om de kloof tussen preklinische en klinische testresultaten te dichten. In het huidige artikel, we zijn detaillering het protocol voor het snijden en kweken van het hart plakjes met behulp van een varkenshart als voorbeeld. Hetzelfde proces wordt toegepast op menselijke, hond, schapen of kattenharten. Met dit protocol hopen we de technologie te verspreiden naar andere laboratoria in de wetenschappelijke gemeenschap.

<table><tbody><tr><td>1,000 mL, 0.22 &micro;m, Vacuum Filter/Storage Systems</td><td>VWR</td><td>28199-812</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Butanedione monoxime (BDM)</td><td>Fisher</td><td>AC150375000</td><td></td></tr><tr><td>500 mL, 0.22 &micro;m, Vacuum Filter/Storage Systems</td><td>VWR</td><td>28199-788</td><td></td></tr><tr><td>6-well C-Dish Cover (electrical-stimulation-plate-cover)</td><td>Ion Optix</td><td>CLD6WFC</td><td></td></tr><tr><td>6-well plates</td><td>Fisher</td><td>08-772-1B</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Bioline USA</td><td>BIO-41025</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic-Antimycotic</td><td>Thermo</td><td>15-240-062</td><td></td></tr><tr><td>C-Pace EM (cell-culture-electrical-stimulator)</td><td>Ion Optix</td><td>CEP100</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Chloride (CaCl2)</td><td>Fisher</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>Ceramic Blades for Vibrating Microtome</td><td>Campden Instruments</td><td>7550-1-C</td><td></td></tr><tr><td>Cooley Chest Retractor</td><td>Millennium Surgical</td><td>63-G5623</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Fisher</td><td>D16-1</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Scalpel #20</td><td>Biologyproducts.com</td><td>DS20X</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Cell Strainers, Sterile, Corning</td><td>VWR</td><td>21008-952</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo</td><td>A3160502</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>Fisher</td><td>NC9475675</td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3149-50KU</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher</td><td>BP310-1</td><td></td></tr><tr><td>Histoacryl BLUE Tissue glue</td><td>Amazon</td><td></td><td><a href="https://www.amazon.com/HISTOACRYL-FLEXIBLE-1051260P-Aesculap-Adhesive/dp/B074WB5185/" target="_blank">https://www.amazon.com/HISTOACRYL-FLEXIBLE-1051260P-Aesculap-Adhesive/dp/B074WB5185/</a></td></tr><tr><td>Iris Spring scissors</td><td>Fisher</td><td>NC9019530</td><td></td></tr><tr><td>Iris Straight Scissors</td><td>Fisher</td><td>731210</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Piramal</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>ITS Liquid Media Supplement</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine HCl (500 mg/10 mL)</td><td>West-Ward</td><td>NDC 0143-9508</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium Chloride (MgCl2)</td><td>Fisher</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>Mayo SuperCut Surgical Scissors</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>AROSuperCut&trade; 07.164.17</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199, Earle's Salts</td><td>Thermo</td><td>11-150-059</td><td></td></tr><tr><td>Oxygen regulator</td><td>Praxair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxygen tanks -</td><td>Praxair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic Pasteur pipettes</td><td>Fisher</td><td>13-711-48</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Chloride (KCl)</td><td>Fisher</td><td>AC193780010</td><td></td></tr><tr><td>Printer Timing Belt</td><td>Amazon</td><td></td><td><a href="https://www.amazon.com/Uxcell-a14081200ux0042-PRINTER-Precision-Timing/dp/B00R1J3KDC/" target="_blank">https://www.amazon.com/Uxcell-a14081200ux0042-PRINTER-Precision-Timing/dp/B00R1J3KDC/</a></td></tr><tr><td>Razor rectangle blades</td><td>Fisher</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human FGF basic</td><td>R&amp;D Systems</td><td>233-FB-025/CF</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human VEGF</td><td>R&amp;D Systems</td><td>293-VE-010/CF</td><td></td></tr><tr><td>Retractable scalpels</td><td>Fisher</td><td>22-079-716</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate (NaHCO3)</td><td>Fisher</td><td>AC217125000</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride (NaCl)</td><td>Fisher</td><td>AC327300010</td><td></td></tr><tr><td>Vibrating Microtome</td><td>Campden Instruments</td><td>7000 SMZ-2</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine HCl (100 mg/mL)</td><td>Heartland Veterinary Supply</td><td>NADA 139-236</td><td></td></tr></tbody></table>

snijden en kweken varkensharten onder fysiologische omstandigheden

Slicing and Culturing Pig Hearts under Physiological Conditions

Veel nieuwe geneesmiddelen mislukken in klinische studies als gevolg van cardiotoxische bijwerkingen als de momenteel beschikbare in vitro tests en in vivo diermodellen slecht voorspellen menselijke hartverplichtingen, die een multi-miljard dollar last voor de farmaceutische industrie. Vandaar, is er een wereldwijde onvervulde medische behoefte aan betere benaderingen om drugcardiotoxiciteit te identificeren alvorens dure en tijdrovende 'eerst in de mens' proeven aan te gaan. Momenteel worden alleen onrijpe hartcellen (door de mens geïnduceerde pluripotente cardiomyocyten uit stamcellen [hiPSC-CMs]) gebruikt om therapeutische efficiëntie en medicijntoxiciteit te testen, omdat ze de enige menselijke hartcellen zijn die langdurig kunnen worden gekweekt nodig is om de werkzaamheid en toxiciteit van geneesmiddelen te testen. Een enkelceltype kan echter het fenotype van het complexe 3D-hartweefsel dat wordt gevormd uit meerdere celtypen niet repliceren. Belangrijk is dat het effect van geneesmiddelen moet worden getest op volwassen cardiomyocyten, die verschillende kenmerken en toxiciteitreacties hebben in vergelijking met onrijpe hiPSC-CMs. Het kweken van menselijke hartschijfjes is een veelbelovend model van intact menselijk myocardium. Deze technologie biedt toegang tot een compleet meercellig systeem dat het menselijk hartweefsel nabootst en de fysiologische of pathologische omstandigheden van het menselijke myocardium weerspiegelt. Onlangs, door optimalisatie van de cultuur media componenten en de cultuur voorwaarden aan continue elektrische stimulatie op 1,2 Hz en intermitterende oxygenatie van de cultuur medium op te nemen, ontwikkelden we een nieuwe cultuur systeem setup die levensvatbaarheid behoudt en functionaliteit van mens en varken hart plakjes voor 6 dagen in de cultuur. In het huidige protocol geven we als voorbeeld de methode voor het snijden en kweken van varkenshart. Hetzelfde protocol wordt gebruikt om plakjes uit menselijke, honden-, schapen- of kattenharten te kweken. Dit cultuursysteem heeft het potentieel om een krachtig voorspellend human in situ-model te worden voor acute cardiotoxiciteitstests die de kloof tussen preklinische en klinische testresultaten dichten.

Met behulp van een commercieel beschikbare celcultuur elektrische stimulator die plaats biedt aan acht 6 goed platen tegelijk, we geëmuleerd de volwassen hart-milieu door het induceren van elektrische stimulatie op de fysiologische frequentie (1,2 Hz), en gescreend op de fundamentele medium componenten om de duur van functionele varkenshart plakjes in cultuur te verlengen13. Aangezien varkens en menselijke harten zijn vergelijkbaar in grootte en anatomie<sup class=...

Dit protocol beschrijft hoe hartweefsel te snijden en te kweken onder fysiologische omstandigheden gedurende 6 dagen. Dit cultuursysteem kan worden gebruikt als een platform voor het testen van de werkzaamheid van nieuwe harthartfalen therapieën evenals betrouwbare testen van acute cardiotoxiciteit in een 3D-hartmodel.

Snijden en kweken Varkensharten onder fysiologische omstandigheden

Many novel drugs fail in clinical studies due to cardiotoxic side effects as the currently available in vitro assays and in vivo animal models poorly ...

Dit protocol is voor het snijden en kweken van hartweefsel secties gedurende zes dagen onder fysiologische omstandigheden die kunnen worden gebruikt voor acute cardiale toxiciteit testen en het testen van de werkzaamheid van hartfalen therapieën. Dit cultuursysteem heeft het potentieel om een krachtig voorspellend mens in situ-model te worden voor acute cardiale toxiciteitstests die de kloof tussen preklinische en klinische testresultaten dichten. Het aantonen van de procedures zal Qinghui Qu, een lab manager van ons laboratorium.Om varkenshartweefselplakjes te verkrijgen, voegt u eerst ijs toe aan het tissuebadkoelingsvest van een vibratome en voegt u Tyrode-oplossing toe aan het bad. Gebruik een een liter plastic pot om de gesmolten ijs afvloeiing te verzamelen van het weefsel bad koeljas en breng het varkenshart naar een lade met een liter verse koude cardioplegic oplossing in een bioveiligheid kabinet. Gebruik intrekbare steriele scalpels om het hart te ontleden om de linker ventrikel te isoleren en gebruik rechthoekige scheermesjes om de linker ventrikel in één tot twee kubus centimeter blokken te snijden.Zet een weefselblok opzij om te snijden en plaats de resterende stukken van het weefselblok in een 50 milliliter buis van koude Tyrode-oplossing op ijs. Masseer het gereserveerde weefselblok voorzichtig en voeg één tot twee druppels weefsellijm toe aan de metalen monsterhouder van het vibratome. Plak een stuk van 4% agar blok met een oppervlakte van ongeveer een vierkante centimeter aan de lijm en voeg een tot twee druppels weefsel lijm aan de agar.Bevestig het hartblok aan de agar cardiale epicardium kant naar beneden met het weefsel zo plat mogelijk tegen de houder en plaats de weefselhouder met het hartblok in het snijden bad van het vibratome. Het is van cruciaal belang om het hartblok aan de agar te plakken met de cardiale epicardium kant naar beneden gericht op de weefsellijm en om ervoor te zorgen dat het weefsel zo plat mogelijk is. Bevestig vervolgens de zuurstofbuis aan het snijbad en de metalen lade gevuld met Tyrode-oplossing en plaats 40 micrometercel strainers op de metalen lade om de hartweefselsecties te verzamelen terwijl ze worden gesneden.Gebruik de vibratome-besturingssysteemsoftware om de hoogte van het blad en het monster aan te passen, zodat het mes dicht bij de bovenkant van het weefsel ligt, maar onder de papillaire spieren en vloeistof het weefsel en het mes bedekt. Selecteer vooraf om aan te passen waar te beginnen snijden van het weefsel. Druk op slice om de snelheid te verhogen en gebruik de knop om het blad te verplaatsen naar de rand van het weefsel.Druk nogmaals op segment om te stoppen en verder te gaan om het proces te activeren. Pas vervolgens de snijparameters aan zoals aangegeven en druk op de plak om te beginnen met het snijden van het weefsel. Wanneer het mes het einde van het weefsel bereikt, maar voordat het raakt het einde van het monster houder, druk nogmaals op slice om te stoppen en druk op terug te keren naar de startpositie.Wanneer de plakjes de volledige lengte bereiken en van goede kwaliteit lijken te zijn, gebruik dan een plastic Pasteur pipet gevuld met koude Tyrode-oplossing om het weefsel voorzichtig uit het bad te verzamelen met behulp van tangen en een veerschaar om het plakje zo nodig uit het hart te halen. Plaats elk verzameld plakje in een enkele celzeef in het zuurstofrijk Tyrode-bad en gebruik de oplossing in de pipet om het weefsel op het celzeefoppervlak te drukken. Plaats dan een metalen ring op de bovenkant van het weefsel om het ingekapsjt.Na ten minste een uur in zuurstofrijk Tyrode oplossing, trim de buitenkant van elk segment om eventuele ongelijke randen te verwijderen en lijm het einde van elk segment op een zes millimeter breed stuk van gesteriliseerde polyurethaan printer distributieriem met ingebedde metalen draden. Plaats de ondersteunde hartplakjes in zes-put platen met zes milliliter cultuurmedium per goed en gebruik steriele tangen om ervoor te zorgen dat het weefsel in het midden van de put. Zorg ervoor dat de plaat deksel niet zal raken het weefsel en plaats de plaat op de cultuurplaat, zodat de gebogen kant van de plaat deksel overeenkomt met de schuine kant van de plaat en dat de vierkante hoeken line-up.Plaats de plakjes in een 37 graden Celsius en 5% kooldioxide incubator. Vervang de cultuursupernatants drie keer per dag door zes milliliter vers zuurstofrijk kweekmedium. Sluit de cover aan op de elektrische stimulator van de celcultuur en pas de stimulator aan om continu 10 volt elektriciteit en een 1,2 hertz-frequentie op de hartsegmenten te leveren.Na het aansluiten van de stimulatie, zal het hart plakjes beginnen te kloppen. Elke dag tijdens de middag media verandering, vervang de stimulatie plaat deksel van de cultuur schotel om het vrijkomen van giftige grafiet deeltjes in het cultuurmedium te voorkomen. Plaats de witte schuimplug waar de gebruikte dekking verbinding maakt met de kabel voor de elektrische stimulator van de celkweek om waterschade aan het elektrische circuit te voorkomen en plaats de plaatbedekking in een bad van autoclaved water aangevuld met 2X antibioticum/antimycotic.De volgende dag ontsmet u de plaatbedekking in een 70%ethanol bad gedurende vijf tot 15 minuten voordat u de cover in een vers autoclaved waterbad wordt aangevuld met 2x antibioticum/antimycotic gedurende drie minuten. Gebruik na het spoelen van de plaatdeksel een door ethanol gespoten schoon lintvrij doekje om eventueel restwater uit de kunststof onderdelen te verwijderen en de witte schuimplug te verwijderen. De hoes is dan klaar om terug te worden geplaatst in de cultuurplaat.Met behulp van deze nieuwe biomimetische cultuur setup zoals aangetoond, varkenshart plakjes levensvatbaarheid werd gehandhaafd voor zes dagen, zoals beoordeeld door MTT test. In de eerste zes dagen, vergelijkbaar met de reacties waargenomen voor verse hartplakjes, zijn er geen spontane calciumtransiënten in het varkenshart slice cardiomyocyten. De cardiomyocyten reageerden wel op externe elektrische en bèta-adrenerge stimulatie.Bovendien werden de contractiele kracht en de reacties op isoproterenol gehandhaafd in de hartsnijcultuur gedurende maximaal zes dagen vergelijkbaar met die waargenomen in verse hartschijfjes. Verschillende structurele en functionele beoordelingen kunnen worden uitgevoerd op de hartsegmenten, waaronder MTT-levensvatbaarheidstesten, immunosmeting, elektronenmicroscopie, calcium voorbijgaande metingen, contractielfunctiebeoordelingen, metabole beoordelingen en analyse. We gebruiken dit cultuursysteem momenteel om de acute cardiale toxiciteit en werkzaamheid van geneesmiddelen en gentherapieën van belang in varkens- en menselijke hartsplakjes te testen.

slicing-and-culturing-pig-hearts-under-physiological-conditions

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In dit artikel beschrijven we een typische manier om te isoleren en cultuur volwassen ratten hart myocyten. Collagenase en protease worden gebruikt voor het verteren en te isoleren single myocyten. Myocyten gekweekte volgen van dit protocol voldoen aan de meeste eisen experiment.

Primaire Cultuur van volwassen ratten Heart myocyten

This video demonstrates a vibratome-based procedure to generate viable, ultra-thin sections of pig heart. The prepared tissue slices can be cultured and used as model systems for pharmacological testing.

Generation of Porcine Ventricular Slices: A Vibratome-based Technique to Prepare Ultra-thin Slices of Pig Heart Tissue

In this video, we describe a step-by-step protocol to extract the heart from a porcine model for cardiac transplantation.

Porcine Heart Excision: A Protocol to Extract Porcine Heart for Cardiac Transplant

This video describes an ex situ technique for preserving an isolated porcine heart by perfusing it with an oxygenated nutrient-rich perfusate solution. The technique allows the comprehensive evaluation of cardiac performance under physiological conditions.

Ex Situ Heart Perfusion: A Technique to Preserve Isolated Porcine Heart Function

Verscheidene protocollen zijn ontwikkeld en beschreven voor de isolatie van verschillende hartcel typen uit een rat hart. Hier wordt een geoptimaliseerd protocol beschreven dat de isolatie van hoge kwaliteit grote hartcellen (cardiomyocyten, endotheelcellen en fibroblasten) van een enkel preparaat mogelijk maakt, waardoor de experimentele kosten worden verminderd.

Gelijktijdige isolatie van hoogwaardige cardiomyocyten, endothelcellen en fibroblasten uit een volwassen rat hart

Hier beschrijven we de voorbereiding van levensvatbare ventriculaire plakjes van volwassen muizen en hun gebruik voor scherpe elektrodeactiepotentiële opnamen. Deze multicellulaire preparaten leveren een geconserveerde in vivo weefselstructuur, waardoor ze in vitro een waardevol model vormen voor elektrofysiologische en farmacologische studies.

Murine Korte As Ventriculaire Hartschijven voor Elektrofysiologische Studies

Het doel van deze studie was het vaststellen van een methode voor het onderzoeken van de cardiale dynamiek met behulp van een translationeel diermodel. De beschreven experimentele aanpak omvat Dual-emission optocardiografie in combinatie met een elektrofysiologisch onderzoek om elektrische activiteit te beoordelen in een geïsoleerd, intact varkens hart model.

Optocardiografie en elektrofysiologie studies van ex vivo Langendorff-perfused Hearts

Dit protocol beschrijft de procedure voor het doorsnijden en kweken van menselijke cardiale plakjes voor preklinische geneesmiddelentesten en beschrijft het gebruik van optische mapping voor het opnemen van transmembranespanning en intracellulaire calciumsignalen gelijktijdig van deze plakjes.

Preklinische Cardiale Elektrofysiologie Beoordeling door Dual Voltage en Calcium Optical Mapping van human organotypic cardiale plakjes

Een methode wordt beschreven voor de gelijktijdige isolatie van myocyten en niet-myocyten van zowel de atria als ventrikels van een enkel volwassen muizenhart. Dit protocol resulteert in consistente opbrengsten van zeer levensvatbare cardiale myocyten en niet-myocyten en beschrijft optimale celspecifieke kweekomstandigheden voor fenotyping en in vitro analyse.

Gelijktijdige isolatie en cultuur van atriale myocyten, ventriculaire myocyten en niet-myocyten uit een volwassen muizenhart

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor het behoud van de vasculaire contractiliteit van PCLS-muizenlongweefsel, wat resulteert in een geavanceerd driedimensionaal beeld van de pulmonale vasculatuur en de luchtwegen, die tot 10 dagen kunnen worden bewaard en die vatbaar zijn voor tal van procedures.

Precisie gesneden longplakken als een efficiënt hulpmiddel voor ex vivo longvatstructuur en contractiliteitsstudies

Myocardiale gentherapie voor ischemische hartziekten is veelbelovend voor toekomstige therapieën. Hier introduceren we een groot diermodel voor het evalueren van de werkzaamheid van gentherapie in het ischemische hart.

Groot diermodel voor het evalueren van de werkzaamheid van de gentherapie in ischemisch hart

Leer het snijden en kweken van varkensharten onder fysiologische omstandigheden voor zes dagen. Deze methode maakt testen van hartfalentherapieën en acute cardiotoxiciteit mogelijk.

Snijden en kweken Varkensharten onder fysiologische omstandigheden

Meer video's verkennen