Name: Synthese van Aptamer-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes geladen met Doxorubicine voor gerichte medicijnafgifte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Ontdek de synthese van doxorubicine-geladen aptamer-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes voor gerichte kankertherapie. Deze methode minimaliseert toxiciteit en verbetert therapeutische effectiviteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd gefinancierd door de National Natural Science Foundation of China (31700840); het belangrijkste wetenschappelijke onderzoeksproject van de provincie Henan (18B430013, 18A150049). Dit onderzoek werd ondersteund door het Nanhu Scholars Program for Young Scholars van XYNU. De auteurs willen bachelorstudent Zebo Qu van het College of Life Sciences in XYNU bedanken voor zijn nuttige werken. De auteurs willen graag het Analysis & Testing Center van XYNU erkennen voor het gebruik van hun apparatuur.

LET OP: Zorg ervoor dat u alle relevante materiaalveiligheidsinformatiebladen (MSDS) raadpleegt voordat u alle chemicaliën gebruikt. Verschillende chemicaliën die worden gebruikt voor de bereiding van copolymeer en nanodeeltjes zijn acuut giftig. Nanodeeltjes hebben ook potentiële gevaren. Zorg ervoor dat u alle geschikte veiligheidspraktijken en persoonlijke beschermingsmiddelen gebruikt, waaronder handschoenen, laboratoriumjas, kappen, broeken over de hele lengte en schoenen met een dichte tenen.
1. Synthese van dubbelcarboxyl polyethyleenglycol (CT-PEG)33
<ol><li>Voeg 1,46 g (14,6 mmol) barnsteenanhydride (SA) en 209 mg (1,71 mmol) 4-dimethylamineopyridine (DMAP) toe aan een ronde bodemkolf van 100 ml.</li>
	<li>Voeg 15 ml watervrij tetrahydrofuran (THF) toe aan de kolf die in stap 1.1 wordt gebruikt en plaats een glazen stop. Bewaar de kolf gedurende 30 minuten op 0 °C.</li>
	<li>Voeg 4,28 g (4,28 mmol) polyethyleenglycol (PEG) en 1,8 ml (12,8 mmol) triethylamine (TEA) toe aan een nieuwe kolf.</li>
	<li>Voeg 15 ml watervrije THF toe aan de kolf die in stap 1.3 wordt gebruikt en plaats een glazen stop. Breng de oplossing langzaam over in de kolf die in stap 1.2 wordt gebruikt, met behulp van een spuit onder stikstofatmosfeer.</li>
	<li>Roer de oplossing gedurende 2 uur op 0 °C en zet de reactie vervolgens 's nachts voort bij kamertemperatuur (RT).</li>
	<li>Concentraat van de reactieoplossing met behulp van een roterende verdamper (40 °C, 0,1 MPa) en verwijder het THF-oplosmiddel.</li>
	<li>Los bij RT de reactieoplossing op vanaf stap 1.6 in 15 ml van 1.325 g/ml dichloormethaan (DCM) en voeg vervolgens 15 ml koude diethylether (Et2O) toe om het neerslagproduct (polyethyleenglycoldiacid) te verkrijgen. Verwijder het oplosmiddel via filterpapier. OPMERKING: De neerslagstap kan 3x worden herhaald.</li>
	<li>Droog de neerslag gedurende 48 uur onder vacuüm bij RT.</li>
</ol>2. Synthese van PEI-g-PEG copolymeer
<ol><li>Voeg 305,47 mg CT-PEG uit stap 1.8 en 5 ml dimethylsulfoxide (DMSO) toe aan een kolf en roer bij RT om ervoor te zorgen dat CT-PEG volledig is opgelost in DMSO.</li>
	<li>Los 49,46 mg 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidehydrochloride (EDC) op in 5 ml DMSO, voeg vervolgens de oplossing toe aan de kolf die in stap 2.1 wordt gebruikt en roer gedurende 30 minuten bij RT.</li>
	<li>Los 29,69 mg N-hydroxysuccinimide (NHS) op in 5 ml DMSO en voeg de oplossing toe aan de kolf die in stap 2.1 wordt gebruikt. Blijf roeren bij RT gedurende 3 uur.</li>
	<li>Los 28,6 μL polyethyleenimine (PEI) op in 10 ml DMSO en voeg de oplossing druppelgewijs toe aan de kolf die in stap 2.1 wordt gebruikt. Roer minstens 3 dagen.</li>
	<li>Breng de gereageerde oplossing over van stap 2.4 naar een dialysezak (1.000 moleculaire gewichtsafsnijding [MWCO]). Plaats de dialysezak in een bekerglas van 1 L met 500 ml ultrapure water als dialysaat. Ververs het ultrapure water om de 12 uur gedurende 3 dagen.</li>
	<li>Breng de oplossing in stap 2.5 over naar een andere dialysezak (10.000 MWCO). Plaats de dialysezak in een bekerglas van 1 L met 500 ml ultrapure water als dialysaat. Ververs het ultrapure water om de 12 uur gedurende 3 dagen.</li>
	<li>Concentreer de oplossing vanaf stap 2.6 met behulp van een roterende verdamper (40 °C, 0,1 MPa) en vries het monster in om het PEI-g-PEG-poeder te verkrijgen.</li>
</ol>3. Synthese van PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>Los 5 mg bereide PEI-g-PEG (stap 2.7) op in 5 ml ultrapure water in een nieuwe kolf en plaats deze met een glazen stop.</li>
	<li>Voeg 100 ml 0,3 mM HAuCl4-oplossing toe aan de kolf en roer de oplossing gedurende 3 uur bij RT. OPMERKING: De kleur van de oplossing moet onmiddellijk veranderen van geel naar oranje.</li>
	<li>Voeg 1 ml 1 mg/ml NaBH4-oplossing toe aan de kolf en roer de oplossing gedurende 3 uur bij RT. OPMERKING: De reactieoplossing moet onmiddellijk bordeauxrood worden.</li>
	<li>Dialyseer het reactieproduct met behulp van een dialysezak (1.000 MWCO) gedurende 3 dagen zoals beschreven in stap 2.5 om de PEI-g-PEG@AuNPs oplossing te verkrijgen.</li>
</ol>4. Synthese van DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>Voeg 1 ml DOX-oplossing van 2,2 mg/ml en 20 ml PEI-g-PEG@AuNPs-oplossing toe aan een nieuwe kolf en pas deze aan met een glazen stop.</li>
	<li>Los 0,727 mg EDC op in 1 ml ultrapure water en voeg de EDC-oplossing toe aan de kolf die in stap 4.1 wordt gebruikt.</li>
	<li>Los 0,437 mg NHS op in 1 ml ultrapure water. Voeg de NHS-oplossing toe aan de kolf en roer gedurende 1 uur bij RT.</li>
	<li>Dialyseer het reactieproduct met behulp van een dialysezak (1.000 MWCO) gedurende 3 dagen zoals beschreven in stap 2.5 om de DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs oplossing te verkrijgen.</li>
</ol>5. Synthese van AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>Voeg 20 ml DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs oplossing en 4OD AS1411 (OD = optische dichtheid; 1OD ≈ 33 μg) toe aan een nieuwe kolf.</li>
	<li>Los 28,76 mg EDC op in 1 ml ultrapure water en voeg de EDC-oplossing toe aan de kolf die in stap 5.1 wordt gebruikt.</li>
	<li>Los 17,27 mg NHS op in 1 ml ultrapure water. Voeg de NHS-oplossing toe aan de kolf die in stap 5.1 wordt gebruikt en roer de reactie gedurende 1 uur bij RT.</li>
	<li>Dialyseer het reactieproduct met behulp van een dialysezak (1.000 MWCO) gedurende 3 dagen zoals beschreven in stap 2.5 om AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs te verkrijgen.</li>
</ol>6. Voorbeeldkarakterisering
<ol><li>Los het CT-PEG-polymeer (stap 1.8) en PEI-g-PEG-copolymeer (stap 2.7) op in respectievelijk chloroform-d in nucleaire magnetische resonantiebuizen (NMR). Analyseer de monsters met behulp van een 600 MHz NMR spectrometer uitgerust met een 14,09 T supergeleidende magneet en 5,0 mm 600 MHz breedband Z-gradiënt hoge resolutie sonde om de chemische structuur te bevestigen34.</li>
	<li>Verspreid AuNPs, DOX en AS1411 en bereide PEI-g-PEG@AuNPs (stap 3.4), DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (stap 4.4) en AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (stap 5.4), respectievelijk in ultrapure water. Breng vervolgens over naar cuvetten en registreer ultraviolet-zichtbare (UV-vis) spectra met behulp van een UV-vis spectrofotometer.</li>
	<li>Bevestig een dubbelzijdige lijm (~2 mm x 2 mm) aan de aluminiumfolie en dompel de monsteroplossing (PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs en AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs) gelijkmatig op de hele tape. Analyseer de monsters met behulp van een röntgenfoto-elektrotronspectroscopieanalysator.</li>
	<li>Verspreid PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs en AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs oplossingen, respectievelijk in ultrapure water. Breng vervolgens over naar cuvettes en evalueer de grootteverdeling met behulp van dynamische lichtverstrooiing.</li>
	<li>Verspreid PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs en AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs oplossingen in ultrapure water (één druppel monster per 5 ml ultrapure water voor elk monster). Sonicaat voor 2 uur. Dompel het koperen rooster in monsteroplossingen en droog onder een infraroodlamp. Karakteriseer de morfologie met behulp van een transmissie-elektronenmicroscoop.</li>
	<li>Injecteer 1 mg AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs in een 20 kDa MWCO dialysecassette en plaats vervolgens in 80 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) met 5% runderserumalbumine (BSA). Roer bij 37 °C.</li>
	<li>Verzamel op de vooraf bepaalde tijdstippen 100 μL aliquots en vervang door verse PBS. Gebruik een UV-vis spectrofotometer om de DOX fluorescentie intensiteit van de aliquots te meten.</li>
</ol>7. CCK-8 test van AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs nanodeeltjes
<ol><li>Kweek A549-cellen in Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) aangevuld met 10% foetale runderserum, 100 U/ml penicilline en 100 μg/ml streptomycine onder een bevochtigde atmosfeer van 95% lucht en 5% CO2 bij 37 °C. Vervang het cultuurmedium om de 2 dagen. Gebruik cellen in passage 5 voor de celproliferatie- en cytotoxiciteitstesten om de cytotoxiciteit van bereide AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs nanodeeltjes kwantitatief te evalueren.</li>
	<li>Voeg 100 μL nanodeeltjesoplossing toe aan elke put met 1 ml celmedium. Verwijder na het cultiveren gedurende 24 uur en 48 uur de kweekmedia van celkweekplaten en voeg vervolgens onmiddellijk 300 μL verse kweekmedia en 30 μL celtellingskit-8 (CCK-8) kitoplossingen onmiddellijk toe aan elke put. Incubeer gedurende 4 uur in een CO2 incubator bij 37 °C.</li>
	<li>Breng 200 μL reactieoplossingen over van stap 7.2 naar een putplaat van 96. Lees de optische dichtheid (OD) van elke put bij 570 nm met een microplaatlezer.</li>
	<li>Observeer de morfologie van cellen op 24 uur en 48 uur onder een microscoop.</li>
</ol>

<ol><li>Abad, J. M., Bravo, I., Pariente, F., Lorenzo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-tasking+base+ligand%3A+a+new+concept+of+AuNPs+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Multi-tasking base ligand: a new concept of AuNPs synthesis.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 408 (9), 2329-2338 (2016).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2019%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2019.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li>
<li>Jang, B., Kwon, H., Katila, P., Lee, S. J., Lee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+delivery+of+biological+therapeutics+for+multimodal+and+synergistic+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Dual delivery of biological therapeutics for multimodal and synergistic cancer therapies.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 98, 113-133 (2016).</li>
<li>Gansler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixty+years+of+CA%3A+a+cancer+journal+for+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Sixty years of CA: a cancer journal for clinicians.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 60 (6), 345-350 (2010).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanism+for+Selective+Cytotoxicity+towards+Cancer+Cells+of+Diselenide-Containing+Paclitaxel+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanism for Selective Cytotoxicity towards Cancer Cells of Diselenide-Containing Paclitaxel Nanoparticles.</a> International Journal of Biological Sciences. 15 (8), 1755-1770 (2019).</li>
<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+ratiometric+loading+of+PTX+and+DOX+based+on+redox-sensitive+mixed+micelles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surfaces+B%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Precise ratiometric loading of PTX and DOX based on redox-sensitive mixed micelles for cancer therapy.</a> Colloids Surfaces B: Biointerfaces. 155, 51-60 (2017).</li>
<li>Blum, R. H., Carter, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adriamycin.+A+new+anticancer+drug+with+significant+clinical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adriamycin. A new anticancer drug with significant clinical activity.</a> Annals of Internal Medicine. 80 (2), 249-259 (1974).</li>
<li>de Lima, R. D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+alleviates+the+deleterious+effect+of+doxorubicin+on+rat+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Photochemistry+Photobiology+B%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy alleviates the deleterious effect of doxorubicin on rat adipose tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Journal of Photochemistry Photobiology B. 196, 111512(2019).</li>
<li>Markowska, A., Kaysiewicz, J., Markowska, J., Huczynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxycycline%2C+salinomycin%2C+monensin+and+ivermectin+repositioned+as+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Doxycycline, salinomycin, monensin and ivermectin repositioned as cancer drugs.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 29 (13), 1549-1554 (2019).</li>
<li>Songbo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+injury+in+doxorubicin-induced+cardiotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress injury in doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Toxicology Letters. 307, 41-48 (2019).</li>
<li>Ewer, M. S., Ewer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiotoxicity+of+anticancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiotoxicity of anticancer treatments.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (9), 547-558 (2015).</li>
<li>Gabizon, A., Shmeeda, H., Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+pegylated+liposomal+Doxorubicin%3A+review+of+animal+and+human+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of pegylated liposomal Doxorubicin: review of animal and human studies.</a> Clinical Pharmacokinetics. 42 (5), 419-436 (2003).</li>
<li>Xu, X., Ho, W., Zhang, X., Bertrand, N., Farokhzad, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicine%3A+from+targeted+delivery+to+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicine: from targeted delivery to combination therapy.</a> Trends in Molecular Medicine. 21 (4), 223-232 (2015).</li>
<li>Feng, S., Nie, L., Zou, P., Suo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+drug+and+polymer+molecular+weight+on+drug+release+from+PLGA-mPEG+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of drug and polymer molecular weight on drug release from PLGA-mPEG microspheres.</a> Journal of Applied Polymer Science. 132 (6), 41431(2015).</li>
<li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Temperature-sensitive+Hydrogel+with+VEGF+Loaded+Microspheres+for+Vascularization+and+Bone+Regeneration+of+Femoral+Head+Necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Letters%22%5BJournal%5D)">Injectable Temperature-sensitive Hydrogel with VEGF Loaded Microspheres for Vascularization and Bone Regeneration of Femoral Head Necrosis.</a> Materials Letters. 229, 138-141 (2018).</li>
<li>Abadeer, N. S., Murphy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Progress+in+Cancer+Thermal+Therapy+Using+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+C%22%5BJournal%5D)">Recent Progress in Cancer Thermal Therapy Using Gold Nanoparticles.</a> The Journal of Physical Chemistry C. 120 (9), 4691-4716 (2016).</li>
<li>Riley, R. S., Day, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticle-mediated+photothermal+therapy%3A+applications+and+opportunities+for+multimodal+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticle-mediated photothermal therapy: applications and opportunities for multimodal cancer treatment.</a> WIREs Nanomedicine and Nanobiotechnology. 9 (4), 1449(2017).</li>
<li>Fratoddi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Hydrophilic+Gold+Nanoparticles+as+Carrier+for+Anticancer+Copper%28I%29+Complexes%3A+Loading+and+Release+Studies+for+Biomedical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomaterials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Highly Hydrophilic Gold Nanoparticles as Carrier for Anticancer Copper(I) Complexes: Loading and Release Studies for Biomedical Applications.</a> Nanomaterials (Basel). 9 (5), 772(2019).</li>
<li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-loaded+gold+plasmonic+nanoparticles+for+treatment+of+multidrug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Drug-loaded gold plasmonic nanoparticles for treatment of multidrug resistance in cancer.</a> Biomaterials. 35 (7), 2272-2282 (2014).</li>
<li>Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+golden+age%3A+gold+nanoparticles+for+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">The golden age: gold nanoparticles for biomedicine.</a> Chemical Society Reviews. 41 (7), 2740-2779 (2012).</li>
<li>Wei, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+drug+nanomicelles+formed+by+self-assembling+amphiphilic+dendrimer+to+combat+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Anticancer drug nanomicelles formed by self-assembling amphiphilic dendrimer to combat cancer drug resistance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (10), 2978-2983 (2015).</li>
<li>Galluzzi, L., Buque, A., Kepp, O., Zitvogel, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+Effects+of+Conventional+Chemotherapy+and+Targeted+Anticancer+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunological Effects of Conventional Chemotherapy and Targeted Anticancer Agents.</a> Cancer Cell. 28 (6), 690-714 (2015).</li>
<li>Muddineti, O. S., Ghosh, B., Biswas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+trends+in+using+polymer+coated+gold+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Current trends in using polymer coated gold nanoparticles for cancer therapy.</a> International Journal of Pharmaceutics. 484 (1-2), 252-267 (2015).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+Orange+removal+by+a+novel+PEI-AuNPs-hemin+nanocomposite%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Methyl Orange removal by a novel PEI-AuNPs-hemin nanocomposite.</a> Journal of Environmental Sciences. 53, 278-283 (2017).</li>
<li>Gu, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">Targeted nanoparticles for cancer therapy.</a> Nano Today. 2 (3), 14-21 (2007).</li>
<li>Srinivasarao, M., Galliford, C. V., Low, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+in+the+design+of+ligand-targeted+cancer+therapeutics+and+imaging+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Principles in the design of ligand-targeted cancer therapeutics and imaging agents.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (3), 203-219 (2015).</li>
<li>Liu, Z., Shi, Y., Chen, Z., Duan, L., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+towards+the+use+of+aptamers+in+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Science+Bulletin+%28Chinese+Version%29%22%5BJournal%5D)">Current progress towards the use of aptamers in targeted cancer therapy.</a> Chinese Science Bulletin (Chinese Version). 59 (14), 1267(2014).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Vandghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+LNA-loaded+nanoparticles+of+star-shaped+glucose-core+PCL-PEG+copolymer+for+enhanced+inhibition+of+oncomiR-214+and+nucleolin-mediated+therapy+of+cisplatin-resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Antisense LNA-loaded nanoparticles of star-shaped glucose-core PCL-PEG copolymer for enhanced inhibition of oncomiR-214 and nucleolin-mediated therapy of cisplatin-resistant ovarian cancer cells.</a> International Journal of Pharmaceutics. 573, 118729(2020).</li>
<li>Andghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AS1411+aptamer-decorated+cisplatin-loaded+poly%28lactic-co-glycolic+acid%29+nanoparticles+for+targeted+therapy+of+miR-21-inhibited+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">AS1411 aptamer-decorated cisplatin-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles for targeted therapy of miR-21-inhibited ovarian cancer cells.</a> Nanomedicine. 13 (21), 2729-2758 (2018).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+anti-nucleolin+recombinant+immunoagent+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Human anti-nucleolin recombinant immunoagent for cancer therapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (30), 9418-9423 (2015).</li>
<li>Pichiorri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+NCL+targeting+affects+breast+cancer+aggressiveness+through+miRNA+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo NCL targeting affects breast cancer aggressiveness through miRNA regulation.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (5), 951-968 (2013).</li>
<li>Hou, S., McCauley, L. K., Ma, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+erosion+properties+of+PEG-containing+polyanhydrides%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Synthesis and erosion properties of PEG-containing polyanhydrides.</a> Macromolecular Bioscience. 7 (5), 620-628 (2007).</li>
<li>Nie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Vaginal+Hydrogels+as+a+Multi-Drug+Carrier+for+Contraception%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Sciences%22%5BJournal%5D)">Injectable Vaginal Hydrogels as a Multi-Drug Carrier for Contraception.</a> Applied Sciences. 9 (8), 1638(2019).</li>
<li>Zou, P., Suo, J., Nie, L., Feng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-responsive+biodegradable+star-shaped+block+copolymers+for+vaginal+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Temperature-responsive biodegradable star-shaped block copolymers for vaginal gels.</a> Journal of Materials Chemistry. 22 (13), 6316-6326 (2012).</li>
<li>Etrych, T., Šubr, V., Laga, R., Říhová, B., Ulbrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+conjugates+of+doxorubicin+bound+through+an+amide+and+hydrazone+bond%3A+Impact+of+the+carrier+structure+onto+synergistic+action+in+the+treatment+of+solid+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Polymer conjugates of doxorubicin bound through an amide and hydrazone bond: Impact of the carrier structure onto synergistic action in the treatment of solid tumours.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 58, 1-12 (2014).</li>
<li>Safari, F., Tamaddon, A. M., Zarghami, N., Abolmali, S., Akbarzadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyelectrolyte+complexes+of+hTERT+siRNA+and+polyethyleneimine%3A+Effect+of+degree+of+PEG+grafting+on+biological+and+cellular+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Cells%2C+Nanomedicine%2C+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Polyelectrolyte complexes of hTERT siRNA and polyethyleneimine: Effect of degree of PEG grafting on biological and cellular activity.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 44 (6), 1561-1568 (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets bekend te maken.

Het 1H NMR spectrum (Figuur 2) bevestigt de succesvolle synthese van CT-PEG copolymeer en PEI-g-PEG copolymeer. De molecuulgewichten van PEG en PEI waren respectievelijk 1.000 en 1.200. Bovendien werd het EDC/NHS-katalytische systeem gebruikt om PEI-g-PEG-copolymeer te synthetiseren via amidereacties. Opgemerkt moet worden dat als de molecuulgewichten van PEG en PEI veranderen voor het synthetiseren van PEI-g-PEG-copolymeer, de reactietijd en het katalytische systeem opnieuw moete...

Omdat kanker wereldwijd het grootste volksgezondheidsprobleem is, wordt kanker algemeen gekenmerkt als een laag genezingspercentage, een hoog recidiefpercentage en een hoogsterftecijfer 1,2. De huidige conventionele antikankermethoden omvatten chirurgie, chemotherapie en radiotherapie3, waaronder chemotherapie de primaire behandeling is voor kankerpatiënten in de kliniek4. Klinisch gebruikte geneesmiddelen tegen kanker omvatten voornamelijk paclitaxel (PTX)5 en doxorubicine (DOX)6,7. DOX, een antineoplastisch geneesmiddel, is breed toegepast in klinische chemotherapie, vanwege de voordelen van kankercytotoxiciteit en remming van de proliferatie van kankercellen8,9. DOX veroorzaakt echter cardiotoxiciteit10,11, en de korte halfwaardetijd van DOX beperkt de toepassing ervan in de kliniek12. Daarom zijn afbreekbare medicijndragers nodig om DOX te laden en op een gecontroleerde manier op een gecontroleerde manier vrij te geven naar een gericht gebied.
Nanodeeltjes zijn veel gebruikt in gerichte systemen voor het afleveren van geneesmiddelen en hebben verschillende voordelen bij de behandeling van kanker (d.w.z. een aanzienlijke oppervlakte-volumeverhouding, kleine grootte, vermogen om verschillende geneesmiddelen in te kapselen, en afstembare oppervlaktechemie, enz.) 13,14,15. In het bijzonder zijn gouden nanodeeltjes (AuNPs) veel gebruikt in biologische en biomedische toepassingen, zoals fotothermische kankertherapie16,17. De unieke eigenschappen van AuNPs, zoals facile synthese en algemene oppervlakte functionalisatie, hebben uitstekende vooruitzichten op het klinische gebied van kankertherapie18. Ook, AuNPs zijn gebruikt om drug levering strategieën te identificeren, tumoren te diagnosticeren, en weerstand te overwinnen in vele studies19,20.
Desondanks moeten AuNP's verder worden aangepast om de resistentie tegen geneesmiddelen te overwinnen via een hoge lokale afgifte bij tumorlaesies door verbeterde permeatie en retentie (EPR), zoals de targeting- en toegankelijkheidseigenschappen. Polymeer gefunctionaliseerde AuNPs hebben unieke voordelen, zoals verbeterde oplosbaarheid in water van hydrofobe antikanker drugs en verlengde circulatie tijd21,22. Verschillende biocompatibele polymeren zijn gebruikt voor AuNP-coatings, zoals polyethyleenglycol (PEG), polyethyleenimine (PEI), hyaluronzuur, heparine en xanthaangom. Dan wordt de stabiliteit, evenals de lading, van AuNPs goed verbeterd23. Pei is een sterk vertakt polymeer dat bestaat uit vele herhalende eenheden van primaire, secundaire en tertiaire aminen24. PEI heeft een uitstekende oplosbaarheid, lage viscositeit en een hoge mate van functionaliteit, die geschikt is voor coating op AuNPs.
Aan de andere kant moeten antikankermedicijnen rechtstreeks aan kankercellen worden geleverd met een verbeterde laadefficiëntie en met een lagere toxiciteit voor de behandeling van primaire en gevorderde gemetastaseerde tumoren25. Gerichte liganden hebben een groot potentieel voor anti-kanker geneesmiddel gerichte toedieningssystemen26. De selectiviteit voor doelmolecuulbinding verleent antikankermedicijnen die gericht zijn op specificiteit en verhoogt de verrijking van geneesmiddelen in zieke weefsels27. Meer liganden omvatten antilichamen, polypeptiden en kleine moleculen. In vergelijking met andere liganden kunnen nucleïnezuur aptamers in vitro worden gesynthetiseerd en zijn ze gemakkelijk aan te passen. AS1411 is een ongewijzigd fosfodiëster oligonucleotide van 26 bp dat een stabiele dimerische G-tetramerstructuur vormt om zich specifiek te binden aan een overexpressie van nucleaire eiwitreceptor op kankercellen28,29,30. AS1411 remt de proliferatie van veel kankercellen , maar heeft geen invloed op de groei van gezonde cellen31,32. Als gevolg hiervan is AS1411 gebruikt om een ideaal gericht medicijnafgiftesysteem te fabriceren.
In deze studie wordt een PEI-g-PEG copolymeer gesynthetiseerd via een amidereactie, waarna PEI-g-PEG copolymeer gecoate gouden nanodeeltjes (PEI-g-PEG@AuNPs) worden vervaardigd. Bovendien zijn DOX en AS1411 opeenvolgend gekoppeld aan de voorbereide PEI-g-PEG@AuNPs, zoals weergegeven in figuur 1. Dit gedetailleerde protocol is bedoeld om onderzoekers te helpen veel van de gemeenschappelijke valkuilen te vermijden die verband houden met de fabricage van nieuwe PEI-g-PEG@AuNPs geladen met DOX en AS1411.

<table><tbody><tr><td>4-Dimethylaminopyridine</td><td>Macklin</td><td>D807273</td><td></td></tr><tr><td>A549-cel</td><td></td><td>ATCC CCL-185TM</td><td></td></tr><tr><td>AS1411</td><td>BBI Life Sciences Corporation</td><td></td><td>5'-d (TTTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG) FL-AS1411 (fluorofoor-gelabeld AS1411)</td></tr><tr><td>Watervrij tetrahydrofuraan (THF)</td><td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Celtellingskit-8 (CCK-8)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>96992-500TESTS-F</td><td></td></tr><tr><td>Dichloormethaan</td><td>Traditionele Chinese geneeskunde</td><td>80047318</td><td></td></tr><tr><td>Di-ethylether (Et2O)</td><td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxide</td><td>Macklin</td><td>D806645</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's aangepast Eaglesmedium (DMEM)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doxorubicine hydrochloride</td><td>Rhawn</td><td>R017518</td><td></td></tr><tr><td>Absolute ether</td><td>Traditionele Chinese geneeskunde</td><td>80059618</td><td></td></tr><tr><td>Velduitstoottransmissie-elektronenmicroscoop</td><td>FEI Company</td><td>Tecnai G2 F 20</td><td></td></tr><tr><td>Goud(III)chloride trihydraat</td><td>Rhawn</td><td>R016035</td><td></td></tr><tr><td>Laserdeeltjesgrootte-instrument</td><td>Malvern Instruments Ltd</td><td>ZetasizerNanoZS/Masterszer3000E</td><td></td></tr><tr><td>Microplaatlezer</td><td>Molecular Devices</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride</td><td>Macklin</td><td>N808856</td><td></td></tr><tr><td>N-Hydroxysuccinimide</td><td>Macklin</td><td>H6231</td><td></td></tr><tr><td>NMR-software</td><td>Delta 5.2.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kernspinresonantiespectrometer</td><td>JEOL</td><td>JNM-ECZ600R/S3</td><td></td></tr><tr><td>Origin 8.5</td><td>OriginLab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicilline</td><td>Sigma Aldrich</td><td>V900929-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>Poly(ethyleenglycol)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81188</td><td>BioUltra, gemiddelde Mn ~ 1000</td></tr><tr><td>Poly (ethyleenimine) oplossing</td><td>Sigma Aldrich</td><td>482595</td><td>gemiddelde Mn ~ 1200, 50 wt.% in H2O</td></tr><tr><td>Natriumborohydried, poeder</td><td>Acros</td><td>C18930</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>85886-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Bernsteenzuuranhydride</td><td>Traditionele Chinese geneeskunde</td><td>30171826</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuraan</td><td>Traditionele Chinese geneeskunde</td><td>40058161</td><td></td></tr><tr><td>Triethylamine</td><td>Traditionele Chinese geneeskunde</td><td>80134318</td><td></td></tr><tr><td>UV/VIS/NIR-spectrometer</td><td>Lambda950</td><td>Lambda950</td><td></td></tr><tr><td>Röntgenfoto-elektronenspectrometer</td><td>Thermo&ensp;Fisher&ensp;Scientific</td><td>K-ALPHA 0.5EV</td><td></td></tr></tbody></table>

synthese van aptamer-pei-g-peg gemodificeerde gouden nanodeeltjes geladen met doxorubicine voor gerichte medicijnafgifte

Synthesis of Aptamer-PEI-g-PEG Modified Gold Nanoparticles Loaded with Doxorubicin for Targeted Drug Delivery

Vanwege resistentie en toxiciteit van geneesmiddelen in gezonde cellen is het gebruik van doxorubicine (DOX) beperkt in klinische kankertherapie. Dit protocol beschrijft het ontwerpen van poly(ethyleenimine) geënt met polyethyleenglycol (PEI-g-PEG) copolymeer gefunctionaliseerde gouden nanodeeltjes (AuNPs) met geladen aptamer (AS1411) en DOX door middel van amidereacties. AS1411 is specifiek gebonden met gerichte nucleolin receptoren op kankercellen, zodat DOX zich richt op kankercellen in plaats van gezonde cellen. Eerst wordt PEG carboxyleerd en vervolgens geënt op vertakte PEI om een PEI-g-PEG-copolymeer te verkrijgen, wat wordt bevestigd door 1H NMR-analyse. Vervolgens worden PEI-g-PEG copolymeer gecoate gouden nanodeeltjes (PEI-g-PEG@AuNPs) gesynthetiseerd en worden DOX en AS1411 geleidelijk via amidereacties covalent aan AuNPs gebonden. De diameter van de voorbereide AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs is ~39,9 nm, met een zetapotentiaal van -29,3 mV, wat aangeeft dat de nanodeeltjes stabiel zijn in water en celmedium. Celcytotoxiciteitstesten tonen aan dat de nieuw ontworpen DOX geladen AuNPs kankercellen kunnen doden (A549). Deze synthese toont de delicate opstelling van PEI-g-PEG copolymeren, aptamers en DOX op AuNPs die worden bereikt door sequentiële amidereacties. Dergelijke aptamer-PEI-g-PEG gefunctionaliseerde AuNPs bieden een veelbelovend platform voor gerichte medicijnafgifte in kankertherapie.

1 H NMR-spectroscopie werd gebruikt om de succesvolle synthese van CT-PEG-polymeer en PEI-g-PEG-copolymeren te bevestigen (figuur 2). Figuur 2a toont aan dat het methyleenprotonsignaal bij δ = 3,61 ppm en carboxylprotonsignaal bij δ = 2,57 ppm de succesvolle synthese van CT-PEG-polymeren bevestigen. Figuur 2b toont aan dat het methyleenprotonsignaal van PEG bij δ = 2,6 ppm en protonsignaal van P...

In dit protocol worden doxorubicine-geladen AS1411-g-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes gesynthetiseerd via driestapsamidereacties. Vervolgens wordt doxorubicine geladen en afgeleverd om kankercellen te targeten voor kankertherapie.

Synthese van Aptamer-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes geladen met Doxorubicine voor gerichte medicijnafgifte

Due to drug resistance and toxicity in healthy cells, use of doxorubicin (DOX) has been limited in clinical cancer therapy. This protocol describes the ...

Vanwege de resistentie tegen geneesmiddelen en toxiciteit, is het gebruik van doxorubicine beperkt in de kliniek. Dit protocol biedt een afbreekbaar drager voor het behoud van de afgifte van dit therapeutische middel. Het voordeel van deze methode is dat de gesynthetiseerde drager kan worden gebruikt om het medicijn direct naar kankercellen te brengen, waardoor alleen celdood in de kankercellen wordt geïnduceerd.Voor de synthese van CT-PEG, voeg eerst 1,46 gram succine-anhydride en 209 milligram 4-dimethylaminopyridine toe aan een ronde bodemkolf van 100 milliliter. Voeg vervolgens 15 milliliter watervrij tetrahydrofuran toe aan de kolf en plaats een glazen stop in de kolf, voordat u de reactie gedurende 30 minuten incubeert bij nul graden Celsius. Tijdens de incubatie, voeg 4,208 gram PEG, 1,8 milliliter triethylamine en 15 milliliter watervrij tetrahydrofuran toe aan een nieuwe kolf en sluit de kolf met een glazen stop.Aan het einde van de incubatie, gebruik een spuit onder stikstofatmosfeer om langzaam de tweede oplossing over te brengen naar de eerste kolf. Roer de nieuwe oplossing gedurende twee uur bij nul graden Celsius, voordat u de reactie bij kamertemperatuur door laat gaan overnacht. De volgende ochtend, gebruik een roterende verdamper bij 40 graden Celsius en 0,1 megapascal om de reactieoplossing te concentreren en om het tetrahydrofuran-oplosmiddel te verwijderen.Na een uur, lost u de reactieoplossing op in 15 milliliter van 1,325 gram per milliliter dichloromethaan bij kamertemperatuur, voordat u 15 milliliter koude di-ethylether toevoegt om het PEG-diacide precipitaatproduct te verkrijgen. Vervolgens verwijdert u het oplosmiddel via filterpapier en droogt u het precipitaat onder vacuüm gedurende 48 uur bij kamertemperatuur. Voor PEI-g-PEG-copolymeersynthese, voeg 305,47 milligram van het CT-PEG-precipitaat en vijf milliliter DMSO toe aan een nieuwe kolf en roer de reactie bij kamertemperatuur totdat de CT-PEG volledig is opgelost.Los vervolgens 49,46 milligram EDC op in vijf milliliter DMSO en voeg de oplossing toe aan de kolf. Roer de reactie gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur, voordat u 29,69 milligram N-Hydroxysuccinimide en vijf milliliter DMSO oplost en de resulterende oplossing toevoegt aan de kolf. Blijf de reactie drie uur bij kamertemperatuur roeren.Tegen het einde van de incubatie, lost u 28,6 microliter PEI op in 10 milliliter DMSO en voeg de oplossing druppelsgewijs toe aan de kolf. Roer de reactie gedurende ten minste drie dagen bij kamertemperatuur. Aan het einde van de incubatie, brengt u de gereacteerde oplossing over in een dialysezak met een moleculair gewicht van 1000 en plaatst u de zak in een liter beker met 500 milliliter ultrapuur water als het dialysaat.Aan het einde van de dialyse, brengt u de oplossing over in een dialysezak met een moleculair gewicht van 10.000 en plaatst u de zak in een liter beker met 500 milliliter ultrapuur water als het dialysaat. Aan het einde van de tweede dialyse, gebruikt u een roterende verdamper bij 40 graden Celsius en 0,1 megapascal om de oplossing te concentreren en om het monster te vriesdrogen om het PEI-g-PEG-poeder te verkrijgen. Voor de coating van gouden nanodeeltjes met het PEI-g-PEG-product, lost u vijf milligram van het bereide PEI-g-PEG op in vijf milliliter ultrapuur water in een nieuwe kolf en plaatst u de kolf met een glazen stop.Voeg 100 milliliter van een 0,3 millimolair oplossing van aurischloor op in de kolf en roer de oplossing gedurende drie uur bij kamertemperatuur. De kleuren zouden onmiddellijk moeten veranderen van lichtgeel naar donkergeel. Aan het einde van de incubatie, voegt u één milliliter van een milligram per milliliter natriumborohydride-oplossing toe aan de kolf.De kleur zou onmiddellijk moeten veranderen van donkergeel naar goudgeel, en roer de oplossing gedurende nog eens drie uur bij kamertemperatuur. Dialyseer vervolgens het reactieproduct met een dialysezak met een moleculair gewicht van 1000 gedurende drie dagen, zoals gedemonstreerd, om de PEI-g-PEG-gecoate gouden nanodeeltjesoplossing te verkrijgen. Voor het aanbrengen van doxorubicine op de PEI-g-PEG-gecoate gouden nanodeeltjes.Voeg één milliliter van 2,2 milligram per milliliter doxorubicine-oplossing en 20 milliliter van de PEI-g-PEG-gecoate gouden nanodeeltjesoplossing toe aan een nieuwe kolf en plaats de kolf met een glazen stop. Los vervolgens 0,727 milligram EDC op in één milliliter ultrapuur water en voeg de EDC-oplossing toe aan de kolf. Los 0,437 milligram N-Hydroxysuccinimide op in één milliliter ultrapuur water en voeg de N-Hydroxysuccinimide-oplossing toe aan de kolf voor een incubatie van een uur met roeren bij kamertemperatuur.Aan het einde van de incubatie, dialyseer het reactieproduct in een dialysezak met een moleculair gewicht van 1000 gedurende drie dagen, zoals gedemonstreerd, om de doxorubicine g-PEI-g-PEG-gecoate gouden nanodeeltjesoplossing te verkrijgen. Voor het aanbrengen van de AS1411-aptamer op de DOX-g-PEI-g-PEG. Voeg 20 milliliter van de doxorubicine DOX-g-PEI-g-PEG-gecoate gouden nanodeeltjesoplossing toe aan een concentratie van ongeveer vier optische dichtheid van AS1411.Los 28,76 milligram EDC op in één milliliter ultrapuur water en voeg de EDC-oplossing toe aan de kolf. Los 17,27 milligram N-Hydroxysuccinimide op in één milliliter ultrapuur water en voeg de N-Hydroxysuccinimide-oplossing toe aan de kolf voor een incubatie van een uur met roeren bij kamertemperatuur. Dialyseer vervolgens het reactieproduct in een dialysezak met een moleculair gewicht van 1000 gedurende drie dagen, zoals gedemonstreerd, om AS1411-g-Doxorubicine-g-PEI-g-PEG-gecoate gouden nanodeeltjes te verk

synthesis-aptamer-pei-g-peg-modified-gold-nanoparticles-loaded-with

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Type B gelatine-based ontworpen nanovectors systeem (Gens) is ontwikkeld voor systemische genafgifte en transfectie in de behandeling van alvleesklierkanker. Door modificatie met epidermale groeifactor receptor (EGFR) specifieke peptide op het oppervlak van nanparticles, kunnen ze gericht zijn op de EGFR-receptor en laat plasmide onder reducerende omgeving, zoals een hoge intracellulaire glutathion-concentraties.

Gene Levering en Transfectie in Human alvleesklierkankercellen met epidermale groeifactor receptor-gerichte Gelatine-Based Engineered Nanovectors

Dit artikel beschrijft de procedures voor optische beeldvorming analyse van de tumor-gerichte nanodeeltjes, HerDox. In het bijzonder wordt gebruik van de gedetailleerde multimode beeldvormingsinrichting voor het detecteren en beoordelen van tumor targeting tumorpenetratie beschreven.

Analyse van Gerichte Viral Eiwit Nanodeeltjes Geleverd aan HER2 + Tumoren

Een voorbeeld van een nano geneesmiddel op basis polymalic zuur gepresenteerd naar het rationele ontwerp van gepersonaliseerde geneeskunde die voor kanker. Het beschrijft de synthese van een nano geneesmiddel Her2-positieve menselijke borst kanker in naakt muizen.

Polymalic Acid-gebaseerde Nano Biopolymeren voor Targeting van Multiple Tumor Markers: een kans voor Gepersonaliseerde Geneeskunde?

Hier beschrijven we een protocol voor de synthese van magneto-plasmon nanodeeltjes met een sterk magnetisch moment en een sterke nabij-infrarood (NIR) absorptie. Het protocol omvat ook antilichaam conjugatie aan de nanodeeltjes door de Fc eenheid voor diverse biomedische toepassingen die moleculaire specifieke targeting vereisen.

Synthese van Immunotargeted Magneto-plasmonische Nanoclusters

We tonen de voorbereiding en bespreken de haalbaarheid van cellulaire voertuigen die gouden nanostaven bevatten voor de foto-akoestische beeldvorming van kanker.

Voorbereiding en Fotoakoestisch Analyse van Cellular Voertuigen die goud nanorods

Een protocol voor de bereiding en karakterisering van lipofiele doxorubicine pro-geneesmiddel beladen 1,2-distearoyl- sn glycero-3-phosphoethanolamine- N - [amino (polyethyleenglycol) -2000] (DSPE-PEG) micellen wordt beschreven.

Bereiding en karakterisering van lipofiele doxorubicine Pro-drug micellen

Vloeibaar kristal nanodeeltje (LCNP) Nanodrager wordt benut als middel voor de gecontroleerde afgifte van een hydrofoob lading naar de plasmamembraan van levende cellen.

Gerichte plasmamembraan Levering van een hydrofobe Cargo ingekapseld in een Liquid Crystal nanodeeltjes Carrier

Dit protocol beschrijft een efficiënte en handige analytische proces van extractie van het monster en gelijktijdige bepaling van meerdere drugs, Doxorubicine (DOX), mitomycine C (MMC) en een cardio-toxisch DOX metaboliet, doxorubicinol (DOXol), in de biologische monsters uit een preklinische borst tumor model behandeld met nanoparticle formuleringen van synergetische drug combinatie.

Monster extractie en gelijktijdige chromatografische kwantificatie van Doxorubicine en mitomycine C na Drug Delivery van de combinatie in nanopartikels met Tumor-dragende muizen

Beschrijven we een methode voor de synthese van biocompatibel 10-nm gouden nanodeeltjes, matiemaatschappij door poly-ethyleen-glycol coating op het oppervlak. Deze deeltjes kunnen worden gebruikt in vitro en in vivo voor het leveren van therapeutics nanoschaal cellulaire en extracellulaire ruimten die zijn moeilijk toegankelijk met conventionele nanoparticle maten.

Synthese van matiemaatschappij 10-nm polymeer beklede gouddeeltjes voor endotheel Targeting en Drug Delivery

Wij hebben vroeger een gouden nanoparticle peptide hybride intraveneus leveren een synthetische peptide, proteïne kinase C-delta Inhibitor van de omwenteling, die verminderd acute lung ischemie-reperfusie-veroorzaakte schade. Hier laten we het gedetailleerde protocol van de formulering van de drug. Andere intracellulaire peptiden kunnen ook worden geformuleerd.

Protein Kinase C-delta remmer Peptide formulering met gouden nanodeeltjes

Ontdek de synthese van doxorubicine-geladen aptamer-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes voor gerichte kankertherapie. Deze methode minimaliseert toxiciteit en verbetert therapeutische effectiviteit.

Synthese van Aptamer-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes geladen met Doxorubicine voor gerichte medicijnafgifte

Meer video's verkennen