Name: Voorbereiding van Tunable Extracellular Matrix Microenvironments om Schwann Cell Phenotype Specification te evalueren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Leer hoe u tunable extracellulaire matrix-micro-omgevingen voorbereidt om Schwann-celfenotypering te evalueren. Deze kosteneffectieve methode maakt precieze controle over substraatstijfheid en eiwitcompositie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs erkennen dankbaar de financiering steun van de Universiteit van Cincinnati. De auteurs bedanken ook Ron Flenniken van de Universiteit van Cincinnati Advanced Materials Characterization laboratorium voor ondersteuning.

Geen potentiële belangenconflict werd gemeld door de auteurs.

SCs kunnen bevorderen zenuwregeneratie als gevolg van hun fenotypische transformatie en regeneratieve potentieel na zenuwletsel. Echter, hoe ECM cues reguleren deze regeneratieve capaciteit blijft meestal onduidelijk, potentieel belemmeren niet alleen de ontwikkeling van biomaterialen die gericht zijn op zenuwregeneratie te bevorderen, maar ook het begrip van de mechanismen die betrokken zijn bij zenuwregeneratie. Om te beginnen met dit samenspel te onderzoeken, celkweek substraten werden gemaakt waar ECM cues zoals stij...

Perifere verwondingen van het zenuwstelsel (PNS) blijven een belangrijke klinische uitdaging in de gezondheidszorg door de kwaliteit van leven voor patiënten in gevaar te brengen en een significante impact te creëren door een veelheid van sociaal-economische factoren1,2. Schwann cellen (SC), als de belangrijkste gliacellen in de PNS, bieden de nodige moleculaire en fysieke signalen om PNS regeneratie te induceren en hulp bij functionele herstel in korte hiaatletsels. Dit is te wijten aan het opmerkelijke vermogen van SCs om te dedifferentiaat in een "reparatie" cel fenotype van een myelineerend of Remak fenotype3. De repair SC is een onderscheidend celfenotype op verschillende manieren. Na letsel verhogen SC's hun proliferatiesnelheid door de celcyclus opnieuw in te voeren en verschillende transcriptiefactoren uit te voeren om de reinnervatie te vergemakkelijken. Deze factoren, zoals c-Jun en p75 NTR, zijn upregulated terwijl myelinating SC markers, zoals myeline basiseiwit (MBP), zijn downregulated4,5. Bovendien veranderen SCs morfologie om langwerpig te worden en met elkaar uitgelijnd om Büngner-banden te vormen over de letselplaats6. Dit biedt een fysiek geleidingsmechanisme voor de axonen uit te breiden tot de juiste distale doelstelling7. Echter, ondanks het vermogen dat SCs bezitten om zenuwregeneratie te bevorderen in korte kloof verwondingen, het resultaat van functioneel herstel blijft slecht in ernstige verwondingen. Dit is deels te wijten aan een verlies van extracellulaire matrix (ECM) begeleidingssignalen, evenals het onvermogen van SCs om het regeneratieve fenotype gedurende langere perioden te behouden8.
De zenuwregeneratie en het herstelproces zijn nauw verbonden met de toestand van de basale lamina na letsel. De basale lamina is een laag ECM rond de zenuw die begeleiding vergemakkelijkt en biedt ECM-gebonden signalen voor axonen en SCs in gevallen waarin het intact blijft na letsel9. De toestand van de ECM en het vermogen om matrixgebonden signalen aan cellen te leveren is van vitaal belang en is eerder onderzocht in verschillende contexten10,11,12,13,14. Zo is bijvoorbeeld aangetoond dat de stijfheid van de ECM celfuncties zoals proliferatie endifferentiatie 11,15,16kan leiden . Samenstelling van de ECM kan ook leiden tot een duidelijke cellulaire respons en reguleren van celgedrag zoals migratie en differentiatie door middel van intracellulaire signalering trajecten17,18. Bovendien spelen celmorfologie, met inbegrip van verspreidingsgebied en cellulaire verlenging, een belangrijke rol bij het reguleren van de functie en kan worden beheerst door ECM-gebonden signalen19,20. Veel eerdere studies hebben zich gericht op stamcellen die zich onderscheiden in gedefinieerde afstammingen, maar SC's beschikken over een vergelijkbaar vermogen om fenotype te veranderen van een homeostatische, volwassen SC binnen een gezonde zenuw, tot een reparatie SC die eiwitten en groeifactoren kan afscheiden tijdens het verbouwen van de ECM na zenuwletsel5,21. Daarom is het vooral van cruciaal belang om mechanismen te identificeren die ten grondslag liggen aan de relatie tussen de aangeboren SC-regeneratieve capaciteit en ECM-gebonden signalen voor het inzicht om deze capaciteit uiteindelijk te benutten voor zenuwregeneratie.
Om dit aan te pakken, hebben we een gedetailleerde methodologie ontwikkeld om een celkubstraat te produceren waar mechanische stijfheid en ligand type gemakkelijk kunnen worden afgestemd in fysiologisch relevante bereiken. Polydimethyl siloxaan (PDMS) werd gekozen als substraat vanwege de zeer tunable mechanica in vergelijking met polyacrylamide gel, waar de maximale Young's modulus is ongeveer 12 kPa in tegenstelling tot PDMS op ongeveer 1000 kPa22,23,24. Dit is gunstig voor het werk bij de hand, als recente studies hebben aangetoond dat de Young modulus van een konijn heupzenuw kan meer dan 50 kPa tijdens de ontwikkeling, waardoor suggereert dat het bereik van stijfheid van de zenuwen binnen de PNS is breder dan eerder onderzocht. Verschillende eiwitten zijn in staat om te adsorpteren op PDMS substraten om de combinatorische regulatie van mechanica en liganden op SC gedrag te analyseren. Dit maakt het mogelijk om meerdere micro-milieusignalen te onderzoeken die aanwezig zijn in het PNS-regeneratieproces en een vergelijking van een hoge mate van tunability met het werk dat zich uitsluitend richt op stijfheid van het substraat25. Verder zijn deze ontworpen celkweeksubstraten compatibel met een veelheid aan kwantitatieve analysemethoden zoals immunohistochemie, westelijke vlek en kwantitatieve polymerasekettingreactie (q-PCR).
Dit ontworpen celcultuurplatform is zeer geschikt voor het analyseren van mechanistische paden vanwege het hoge niveau van individuele tunability van elk ECM-gebonden signaal. Bovendien kunnen populaire methoden voor celmicropatterning, inclusief microcontactafdrukken, worden bereikt op de substraten om gecontroleerde cellulaire hechting mogelijk te maken om de celvorm te analyseren ten opzichte van andere ECM-gebonden signalen24. Dit is van cruciaal belang omdat lijn patroon substraten, die de verlenging in celpopulaties te bevorderen, bieden een hulpmiddel om na te bootsen en te bestuderen langwerpige en regeneratieve SCs binnen Büngner bands tijdens zenuwregeneratie. Verder, cellulaire morfologie is een krachtige regulator van meerdere celfuncties en kan mogelijk leiden tot verstorende experimentele resultaten, zo niet gecontroleerd26,27. Er wordt nu veel aandacht besteed aan de mechanismen voor het regeneratieve fenotype van de SC, zoals geregeld door ECM-signalen28,29,30. Dit is essentieel om inzicht te geven in het ontwerp van biomaterialen die kunnen worden toegepast als zenuwgeleidingsleidingen voor hulp bij PNS zenuwregeneratie. Deze gedetailleerde protocollen kunnen uiteindelijk worden toegepast als een potentieel instrument om de mechanismen van SC en andere celtypefunctie te ontcijferen zoals gereguleerd door ECM-gebonden signalen.

<table><tbody><tr><td>Albumine uit runderserum (BSA), Texas Red-conjugaat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A23017</td><td>BSA-kleuring om micropatronen weer te geven</td></tr><tr><td>Anti-muis IgG, HRP-gekoppeld antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>7076S</td><td>Antilichaam gebruikt voor western blot-analyse</td></tr><tr><td>Anti-konijn IgG, HRP-gekoppeld antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>7074S</td><td>Antilichaam gebruikt voor western blot-analyse</td></tr><tr><td>BrdU</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B23151</td><td>Reagens gebruikt om celproliferatie te meten</td></tr><tr><td>BrdU primaire antilichaam geconjugeerd met Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B35130</td><td>Gebaat om BrdU in celproliferatie-assays te visualiseren</td></tr><tr><td>Collageen I</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10483-01</td><td>Eiwit gebruikt om dekglasjes te coaten</td></tr><tr><td>Compressiekrachttestmachine</td><td>TestResources</td><td></td><td>Instrument om mechanische eigenschappen van polymeren te kwantificeren</td></tr><tr><td>Dulbecco's Gemodificeerd Eagle Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td><td>Celcultuurmedium</td></tr><tr><td>Foetaal runder serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16000044</td><td>Aanvullend celcultuurmedium</td></tr><tr><td>Fibronectine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>33010-018</td><td>Eiwit gebruikt om dekglasjes te coaten</td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti2</td><td>Fluorescentiemicroscoop</td></tr><tr><td>Halt Protease en Fosfatase Inhibitor Cocktail (100X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>78440</td><td>Protease en Fosfatase Inhibitor</td></tr><tr><td>Lamine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017015</td><td>Eiwit gebruikt om dekglasjes te coaten</td></tr><tr><td>Montagemedium met DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36971</td><td>Dekglasjes montage en kernkleuring</td></tr><tr><td>Muis c-Jun primaire antilichaam</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>711202</td><td>Primair antilichaam om c-Jun-eiwit te visualiseren</td></tr><tr><td>Muis &beta;-Actin primaire antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>3700S</td><td>Ladingscontrole voor western blot-experimenten</td></tr><tr><td>Penicilline-Streptomycine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>Aanvullend celcultuurmedium</td></tr><tr><td>Fotoresist SU 2010</td><td>KAYAKU</td><td>SU8-2010</td><td>Fotoresist</td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-2443</td><td>Blokkeer niet-specifiek eiwitbinding</td></tr><tr><td>Konijn c-Jun primaire antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>9165S</td><td>Primair antilichaam voor visualisatie van c-Jun-eiwit</td></tr><tr><td>Konijn myeline basiseiwit primaire antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab40390</td><td>Primair antilichaam voor visualisatie van MBP</td></tr><tr><td>Konijn p75NTR primaire antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>8238S</td><td>Primair antilichaam voor visualisatie van p75NTR</td></tr><tr><td>Rhodamine faloidine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>Visualisatie van celcytoskelet</td></tr><tr><td>RIPA-buffer</td><td>Abcam</td><td>ab156034</td><td>Cellysebuffer</td></tr><tr><td>RT4-D6P2T Schwann cellijn</td><td>ATCC</td><td>CRL-2768</td><td>Cellijn gebruikt in experimenten</td></tr><tr><td>SYLGARD 184 PDMS-basis en verhardingsmiddel</td><td>Sigma Aldrich</td><td>761036</td><td>Aanpasbare polymeer gebruikt om dekglasjes te coaten</td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15090-046</td><td>Celdissociatie reagens</td></tr><tr><td>UV-Ozone cleaner</td><td>Novascan</td><td></td><td>Verhoog de hydrofiliteit van PDMS</td></tr><tr><td>Versene (1x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15040066</td><td>Celdissociatie reagens</td></tr></tbody></table>

voorbereiding van tunable extracellular matrix microenvironments om schwann cell phenotype specification te evalueren

Preparation of Tunable Extracellular Matrix Microenvironments to Evaluate Schwann Cell Phenotype Specification

Traumatisch perifeer zenuwstelsel (PNS) verwondingen momenteel gebrek aan geschikte behandelingen om volledig functioneel herstel te herwinnen. Schwann cellen (SCs), als de belangrijkste gliacellen van de PNS, spelen een vitale rol bij het bevorderen van PNS regeneratie door dedifferentiatie in een regeneratieve cel fenotype na letsel. De gededifferentieerde toestand van SC's is echter een uitdaging om de periode die nodig is voor regeneratie te handhaven en wordt beïnvloed door veranderingen in de omringende extracellulaire matrix (ECM). Daarom is het bepalen van het complexe samenspel tussen SC's en verschillende ECM om signalen te geven van regeneratief potentieel van SC's. Om dit aan te pakken werd een strategie ontwikkeld waarbij verschillende ECM-eiwitten werden geadsorbeerd op een tunable polydimethylsiloxane (PDMS) substraat dat een platform bood waar stijfheid en eiwitsamenstelling kunnen worden gemoduleerd. SC's werden gezaaid op de tunable substraten en kritische cellulaire functies die de dynamiek van SC fenotype werden gemeten. Ter illustratie van het samenspel tussen SC eiwitexpressie en cellulaire morfologie, verschillende zaaien dichtheden van SCs in aanvulling op individuele microcontact gedrukte cellulaire patronen werden gebruikt en gekenmerkt door immunofluorescentie vlekken en westerse vlek. De resultaten toonden aan dat de cellen met een kleiner uitspreiden gebied en hogere omvang van cellulaire verlenging hogere niveaus van SC regeneratieve fenotypictellers bevorderden. Deze methodologie begint niet alleen de significante relatie tussen de ECM en de cellulaire functie van SCs te ontrafelen, maar biedt ook richtlijnen voor de toekomstige optimalisatie van biomaterialen in perifere zenuwreparatie.

Om het samenspel tussen substraatstijfheid en eiwitsamenstelling op SC-fenotype te analyseren en te kwantificeren, werd een tunable PDMS-celkubstraat ontwikkeld(figuur 1A). Compressietesten van het polymeer op verschillende basis: de verhoudingen van het uithardingsmiddel werden gebruikt om de modulus (E) van de Young (E) van het substraat te kwantificeren (figuur 1B). Het resulterende bereik van moduluswaarden vertegenwoordigt fysiologisch relevante substraatco...

Deze methodologie heeft tot doel de mechanismen te illustreren waarmee extracellulaire matrixsignalen zoals substraatstijfheid, eiwitsamenstelling en celmorfologie het fenotype van Schwann-cel (SC) reguleren.

Voorbereiding van Tunable Extracellular Matrix Microenvironments om Schwann Cell Phenotype Specification te evalueren

Traumatic peripheral nervous system (PNS) injuries currently lack suitable treatments to regain full functional recovery. Schwann cells (SCs), as the ...

Dit protocol biedt een celcultuurplatform waar de eigenschappen van extracellulaire matrix zoals stijfheid, eiwitsamenstelling en celmorfologie nauwkeurig kunnen worden gecontroleerd op een kosteneffectieve en facile manier. De methode is kosteneffectief en vereist geen speciale training of faciliteiten. Het is ook compatibel met meerdere cellulaire kwantificering methoden zoals immunofluorescente vlekken en westerse vlek.Deze techniek biedt een mechanistisch begrip van Schwann celbiologie. Met extra inzicht in biomateriaal ontwerp voor het zenuwstelsel regeneratie, kan worden toegepast op elke verankering afhankelijke cellen. Het meest uitdagende deel van dit protocol, is microcontact afdrukken.Voorafgaand aan het begin van het protocol, microcontact afdrukken op substraat met behulp van een florescent om het eiwit tag om visueel te controleren van de uiteindelijke afdruk aan het patroon. Begin met het krachtig mengen van de PDMS base elastomeer en uithardingsmiddelen met een pipetpunt totdat bellen homogeen verspreid zijn in het mengsel. Verwijder vervolgens de bellen met vacuüm uitdroging.Plaats een druppel van het uitgedroogde PDMS-mengsel op een vierkante of cirkelvormige coverslip en draai de coverslip op een spincoater op 2, 500 tpm gedurende 30 seconden. Incubeer de coverslip in een oven op 60 graden Celsius, gedurende een tot twee uur, of bij kamertemperatuur 's nachts. Om een micro patroon substraat voor te bereiden, plaats een patroon silicium wafer in een cirkelvormige 150 millimeter diameter bij 15 millimeter hoogte Petri schotel en giet onverpakte PDMS op de wafer.Gestolde de PDMS in een oven op 60 graden Celsius 's nachts. Laat de PDMS afkoelen tot kamertemperatuur. Gebruik dan een chirurgische scalpel om stempels van 30 bij 30 millimeter vierkanten te snijden die de correcte patronen bevatten die ervoor zorgen om de siliciumwafer niet te beschadigen.Steriliseer de PDMS-stempels en afstembare afdekbonnen door ze gedurende 30 minuten onder te dompelen in 70% ethanol. Om de werkzaamheid van het micropatroon te bevestigen, droogt u het oppervlak van de PDMS-stempels met behulp van een gefilterde luchtstroom en pipet 15 microgram per milliliter BSA-oplossing om de gehele patroonzijde van de stempel te bedekken. Broed de stempels met de BSA-oplossing gedurende een uur bij kamertemperatuur om eiwitad adsorptie mogelijk te maken en droog de stempels vervolgens aan om de BSA-oplossing te verwijderen.Gebruik de gefilterde luchtstroom om het oppervlak van de afstembare afdekslipjes te drogen. Breng de gedesssorimeter van de stempel in overeenstemming met de afstembare coverslip om BSA-adsorptie op het coverlipoppervlak mogelijk te maken en druk de stempel gedurende vijf minuten voorzichtig tegen de coverlip. Bestudeer het micropatroon met behulp van een fluorescentiemicroscoop met een FITC-filter.Om celkleefgebieden af te drukken in plaats van fluorescerende patronen vervangen laminine voor BSA-eiwit. Haal de stempels van de afdekbonen en breng de deksel slips in een gesteriliseerde zes-put plaat. Voeg twee milliliter van 0,2%Pluronic F-127 oplossing in elke put om het oppervlak van de cover slip te dekken en de plaat incubeer voor een uur bij kamertemperatuur.Aspirate de F-127 oplossing en was de cover glijdt vijf keer met PBS, een keer met de cel cultuur medium, dan zaad van de Schwann cellen bij een zaaien dichtheid van 1000 cellen per vierkante centimeter. 45 minuten na het zaaien van cellen, verwijder de cel cultuur medium en was de cover glijdt twee keer met PBS om te voorkomen dat meerdere cellen zich aan hetzelfde patroon. Houd cellen in de gewenste celkweekomgeving gedurende 48 uur voor kwantificering.Als u celkubstraten met lijnpatroon wilt maken voor het onderzoeken van uitgelijnde cellen, maakt u de stempels volgens de handschriftrichtingen en snijdt u ze naar de gewenste afmetingen. Bereid twee petrischaaltjes bedekt met een tuneable PDMS-oppervlak zoals eerder beschreven, en voer microcontactafdrukken uit om cellijmgebieden met lijnpatroon op een van de gerechten af te drukken. Vul na het verwijderen van de stempels de petrischaal met vier milliliter van 0,2%Pluronic F-127-oplossing en incubbate het een uur lang uit.Spoel elke kant van de PDMS-stempel drie keer af met 70% ethanol en droog deze met lucht. Draai de PDMS-stempels en druk het niet-gepatterde celkleefgebied af op de tweede petrischaal zoals eerder beschreven. Na het uitbroeden van de gerechten met de F-127 oplossing, verwijder de oplossing en was de gerechten drie keer met PBS en eenmaal met verse celkweek medium.Dan zaadcellen op de gerechten, en onderhouden ze op de gewenste omstandigheden voor 48 uur voor de voorbereiding van lysates. Om lysates voor te bereiden, was de cellen met ijskoude PBS gedurende twee minuten, voeg vervolgens 80 microliter ripa-oplossing, bereid volgens de handschriftaanwijzingen, toe aan elk celkleefgebied en broed de cellen gedurende 25 minuten uit op een ijsblok. Schraap de Schwann cellen vijf minuten met de celschraper en verzamel het lysaat in een gelabelde 1,5 milliliter microcentrifugebuis.Centrifuge het lysaat gedurende 15 minuten op 12 duizend keer G en vier graden Celsius. Verzamel de supernatant en breng het naar een schone microcentrifuge buis. Laminin gecoate substraten resulteerde in een hogere proliferatie tarief in vergelijking met collageen en fibronectin gecoate substraten.Schwann cellen op substraten met laminine coating en verschillende moduli toonde aan dat relatief zachtere substraten verminderde celproliferatie tarieven. De cellen werden ook geanalyseerd voor eiwitexpressie. Transcriptional factor c-Jun expressie werd upregulated als substraten werd zachter.Echter, het was aanzienlijk downregulated op de zachtste substraten. Op stijve substraten resulteerden collageengecoate substraten in de hoogste c-Jun expressie, omdat substraten zachter werden, laminine toonde de hoogste niveaus van c-Jun. De cellen werden vervolgens bevlekt met rhodamine-phalloidin om de rol van cel verspreiding en gebied in c-Jun expressie te verkennen.Toen celkleeflijnen werden gecreëerd op de substraten van de celkweek, nam de nucleaire beeldverhouding van cellen die op het patroonsubstraat waren gezaaid, toe ten opzichte van die van cellen op niet-gepaste substraten. Expressie van zowel c-Jun en p75 neurotrofine receptor waren upregulated in dichte cellen met een kleiner verspreidingsgebied. Line-patroon cellen resulteerde ook in een hogere expressie van zowel c-Jun en p75 NTR in vergelijking met niet-gepaterde cellen.Microcontact geprinte celkleefgeometrieën zijn gemaakt om het verspreidingsgebied en de rek van cellen nauwkeurig te controleren en tegelijkertijd cel- en celinteracties te elimineren. Het verhogen van de cellulaire aspect ratio veroorzaakt nucleaire verlenging te verhogen. De uitdrukking van c-Jun werd upgereguleerd door zowel cellulaire rek als celsprekende remming.Immunofluorescentie kleuring voor zowel kernen als actine bevestigde dat cel verspreiding gebied en rek werden precies gecontroleerd door middel van deze micropatterning methode. Deze techniek maakte een manier om onze tunable substraten te gebruiken als methode om de celbiologie van Schwann en de signalering in de context van regeneratie en kanker mechanistisch te analyseren.

preparation-tunable-extracellular-matrix-microenvironments-to

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Laten we zien hoe te ontleden en cultuur chick E4 statoacoustic ganglion en E6 ruggenmerg explantaten. Explantaten worden gekweekt onder serum-vrije omstandigheden in 3D collageen gels voor 24 uur. Neurieten responsiviteit is getest met de groei factor-aangevuld medium en met eiwit-gecoate kralen.

Dissectie en Cultuur van Chick Statoacoustic Ganglion en Spinal Cord Explantaten in Collageen Gels voor neurietuitgroei Assays

Een combinatorische functionele screening methode voor het verkrijgen van inzicht in de effecten van de moleculaire samenstelling van micro-omgevingen op cellulaire functies beschreven. De methode maakt gebruik van bestaande micro-array gebaseerde technologieën voor het genereren van arrays van gedefinieerde combinatorische micro-omgevingen die ondersteuning bieden voor celadhesie en functionele analyse.

Fabricage en gebruik van micro-omgeving microarrays (MEArrays)

This video demonstrates a method for obtaining Schwann cell-like cells from multipotent bone marrow stromal cells (BMSCs). Initially, the BMSCs undergo hypoxia treatment, followed by directed differentiation into neuronal progenitor cells. Subsequently, specific media and culture conditions are employed to induce the transformation of these progenitor cells into Schwann cell-like cells.

Generating Schwann Cell-Like Cells from Bone Marrow Stromal Cells

The video demonstrates the co-culturing of dorsal root ganglion (DRG) neurons with Schwann cells. DRG neurons are first grown on a pre-stretched membrane for aligned axon growth. Schwann cells are then introduced, which attach to the axons, insulating them and promoting neural cell survival and function.

Co-Culture of Schwann Cells with DRG Neurons on a Pre-Stretched Membrane

The video describes the preparation of a micropatterned substrate to study cell phenotype specification. A protein-coated micropatterned PDMS stamp is used to transfer the micropattern on a PDMS-coated coverslip. The coverslip is then treated with a surfactant to hinder cell adhesion at the unwanted surfaces. Cells are then added to settle in the pattern and incubated for further analysis.

Preparation of a Micropatterned Substrate to Study Schwann Cell Phenotypes

Hier beschrijven we een Schwann-cellen (SC) migratie assay waarin SC kunnen ontwikkelen langs axonen verlenging.

Het analyseren van Murine Schwann Cell Development Samen Groeien Axonen

Epitheliële naar mesenchymale overgang (EMT) maakt het mogelijk dat kankers invasief worden. Om EMT te onderzoeken, wordt een op neurale stamcellen (NSC) gebaseerd in vitro model beschreven dat vrij is van serum en enzymen. Dit gestandaardiseerde systeem maakt een kwantitatieve en kwalitatieve beoordeling van celmigratie, gen- en eiwitexpressie mogelijk. Het model is geschikt voor geneesmiddelontdekking.

Een enzym en Serum-free neurale stamcel Cultuur Model voor EMT Investigation Geschikt voor Drug Discovery

Dit protocol beschrijft de isolatie van dorsale wortelganglion (DRG) neuronen geïsoleerd uit ratten en de kweek van DRG neuronen op een statisch voorgerekt celkweeksysteem om de uitlijning van axonen te verbeteren, met daaropvolgende co-cultuur van Schwann-cellen (SC's) om myelinisatie te bevorderen.

Een aanpak ter verbetering van Alignment en Myelination van dorsale wortel ganglion Neuronen

Spiercellen (MSC's) met neurale potentieel bestaan ​​in het beenmerg. Ons protocol verrijkt deze populatie van cellen via hypoxische preconditioning en wijst hen vervolgens op om volwassen Schwann cellen te worden.

Hypoxische preconditioning van merg-afgeleide progenitorcellen als bron voor de generatie van volwassen Schwann-cellen

Dit artikel beschrijft de gedetailleerde methodologie ter voorbereiding van een Multiplexed kunstmatige cellulaire communicatie (MACME)-array voor high-throughput manipulatie van fysische en chemische cues nabootsen in vivo cellulaire microenvironments en aan het identificeren van de optimale cellulaire omgeving voor menselijke pluripotente stamcellen (hPSCs) met eencellige profilering.

Fabricage van een Multiplexed kunstmatige cellulaire communicatie Array

Hier bieden wij een methode voor het analyseren van het gedrag van de groeiende axonen in 3D-matrices, het nabootsen van hun natuurlijke ontwikkeling.

Generatie van 3-D collageen-based hydrogels om axonale groei en gedrag te analyseren tijdens de ontwikkeling van het zenuwstelsel

Leer hoe u tunable extracellulaire matrix-micro-omgevingen voorbereidt om Schwann-celfenotypering te evalueren. Deze kosteneffectieve methode maakt precieze controle over substraatstijfheid en eiwitcompositie mogelijk.

Voorbereiding van Tunable Extracellular Matrix Microenvironments om Schwann Cell Phenotype Specification te evalueren

Meer video's verkennen