Name: Een eenvoudige droge sectiemethode voor het verkrijgen van hele zaad-sized hars sectie en de toepassingen ervan (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Leer een eenvoudige droge sectiemethode voor zaadmorfologie met LR White hars en kleuringstechnieken. Deze methode maakt gedetailleerde analyse van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen in maïskorrels mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De financiering werd verstrekt door de National Natural Science Foundation of China (32071927), het Talent Project van de Yangzhou University en de Priority Academic Program Development van Jiangsu Higher Education Institutions.

1. Bereiding van in hars ingebed zaad (figuur 1)
<ol><li>Plaats zes maïsrijpe pitten in 10 mL van 2,5% fosfaatgebufferde glutaraldehyde (0,1 M, pH7.2) bij 4 °C voor 48 uur. De onderzoekers kunnen kiezen voor andere fixatieve mengsels, fixatieve concentraties, en fixatie voorwaarden op basis van hun onderzoeksdoelstellingen en weefseltypes.</li>
	<li>Haal de pitten eruit en snijd ze in de lengterichting of dwars door een dikte van 2-3 mm met een scherp dubbelzijdig blad en bevestig ze in 10 mL van 2,5% fosfaatgefferde glutaraldehyde (0,1 M, pH 7.2) opnieuw voor 48 uur.</li>
	<li>Was de monsters drie maal met 10 mL fosfaatbuffer van 0,1 M (pH 7.2) gedurende 30 minuten per keer.</li>
	<li>Dehydrateer de monsters in toenemende soorten ethanol waterige oplossing (10 mL) van 30% tot 50%, 70%, 90% eenmaal, en 100% drie keer voor 30 min elke keer.</li>
	<li>Infiltreren de monsters in 10 mL toenemende kwaliteiten van LR Witte hars oplossing verdund met ethanol van 25% tot 50%, 75% een keer, en 100% tweemaal bij 4 °C voor 12 uur elke keer.</li>
	<li>Bereid de sokkels voor op monsters voordat u insluit. Voeg 0,25 mL LR-witte hars toe aan een 2 mL centrifugebuis en polymeriseer deze bij 60 °C gedurende 48 uur.</li>
	<li>Voeg achtereenvolgens de zuivere LR Witte hars (0,5 mL) en het geïnfiltreerde monster toe aan de centrifugebuis met een voetstuk. Recht de monsters met de anatomische naald, en polymeriseren ze op 60 °C in een oven voor 48 uur.</li>
</ol>2. Droge doorsnede voor de voorbereiding van de gehele gedeelte zaadformaat (figuur 1)
<ol><li>Haal de ingebedde pitten uit de centrifugebuis en knip de overtollige hars rond het monster uit met een scherp mes.</li>
	<li>Klem het harsblok in de monsterhouder van ultramicrotome (EM UC7) en snijd de overbodige hars op het oppervlak van het monster en rond het monster met een mes af.</li>
	<li>Polijst het oppervlak van het monster fijn met een glazen mes tot een volledige sectie kan worden gevormd.</li>
	<li>Plaats een kleine koperen haak ongeveer 2 mm boven de bladrand voor het snijden en snijd het monster in een 2 μm sectie. De rol van de haak is om te voorkomen dat de curling omhoog van de sectie.</li>
	<li>Zet de haak onder de sectie om het te ondersteunen wanneer de sectie lang wordt.</li>
	<li>Voeg 100 μL water toe op een onbehandelde glijbaan en breng het volledige en ongebroken gedeelte voorzichtig met de pincet over naar het water.</li>
	<li>Om het gerimpelde gedeelte glad te strijken, verwarm en droog het monster op de afvlakkingstafel bij 50 °C 's nachts.<ol>
<li>Als de sectie afbrokkelt of scheurt, verlengt u de tijd voor elke harsinfiltratie van het monster van 12 uur tot 24 uur of 48 uur.</li>
		<li>Als de sectie een aantal lijnen parallel aan het mes heeft, klemt u het monsterblok stevig vast. Als de sectie heeft een aantal lijnen verticaal aan het mes, gebruik dan een nieuw mes.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Kleuring en observatie van de sectie
OPMERKING: Om de weefselstructuur en morfologie van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen te observeren, bevlekt u de secties met specifieke vlekken volgens het doel van het onderzoek. Hier gebruiken we de fluorescerende brightener 28, jodiumoplossing en Coomassie briljante blauwe R250 om respectievelijk de celwanden, zetmeelkorrels en eiwitlichamen te bevlekken.
<ol><li>Voor het observeren van de morfologie van cellen, vlek de sectie met 40 mL van 0,1% (w / v) fluorescerende brightener 28 waterige oplossing in een 70 mL compacte glazen kleurpot op 45 °C gedurende 10 minuten, en spoel het vervolgens met stromend water gedurende 5 minuten. Observeer en fotografeer de sectie onder een fluorescentiemicroscoop uitgerust met een CCD-camera.</li>
	<li>Voor het observeren van de morfologie van zetmeelkorrels bevlekt u de sectie met 40 μL jodiumoplossing (0,07% (w/v) I2 en 0,14% (w/v) KI in 25% (v/v) glycerol) gedurende 1 min, en bedek het monster met jodiumoplossing met een dekenslip. Bekijk en fotografeer het monster onder een lichtmicroscoop uitgerust met een CCD-camera.</li>
	<li>Voor het observeren van de morfologie van eiwitlichamen, dompel de sectie met 40 mL van 10% (v/v) azijnzuur in een 70 mL compacte glazen kleurpot gedurende 10 minuten bij 45 °C, en vervolgens vlek in 40 mL van 1% (w / v) Coomassie briljante blauwe R250 in 25% (v / v) isopropanol en 10% (v / v) azijnzuur voor 15 min bij 45 °C. Was de gekleurde delen met stromend water gedurende 5 minuten en droog het. Observeer en fotografeer de sectie onder een lichtmicroscoop uitgerust met een CCD-camera.</li>
</ol>4. Kwantitatieve analyse van morfologieparameters
<ol><li>Proces en kwantitatief analyseren van de gefotografeerde beelden voor gebied, lange / korte as, en rondheid van cellen, zetmeel korrels, en eiwit lichamen in verschillende gebieden van zaad met behulp van morfologie analyse software (Image-Pro Plus 6.0 software) volgens de procedures van Zhao et al.9 precies.</li>
</ol>

<ol><li>Cai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+structure+and+spatial+distribution+in+endosperm+of+high-amylose+rice+starch+granules+with+different+morphologies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).</li>
<li>He, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+defective+effect+of+starch+branching+enzyme+IIb+from+weak+to+strong+induces+the+formation+of+biphasic+starch+granules+in+amylose-extender+maize+endosperm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The defective effect of starch branching enzyme IIb from weak to strong induces the formation of biphasic starch granules in amylose-extender maize endosperm.</a> Plant Molecular Biology. 103 (3), 355-371 (2020).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradually+decreasing+starch+branching+enzyme+expression+is+responsible+for+the+formation+of+heterogeneous+starch+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gradually decreasing starch branching enzyme expression is responsible for the formation of heterogeneous starch granules.</a> Plant Physiol. 176 (1), 582-595 (2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dek35+encodes+a+PPR+protein+that+affects+cis-splicing+of+mitochondrial+nad4+intron+1+and+seed+development+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">Dek35 encodes a PPR protein that affects cis-splicing of mitochondrial nad4 intron 1 and seed development in maize.</a> Molecular Plant. 10 (3), 427-441 (2017).</li>
<li>Hu, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+structure+characteristics+to+form+ultrahigh+oil+content+in+rapeseed%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Seed structure characteristics to form ultrahigh oil content in rapeseed.</a> PLoS One. 8 (4), 62099(2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maize+VKS1+regulates+mitosis+and+cytokinesis+during+early+endosperm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Maize VKS1 regulates mitosis and cytokinesis during early endosperm development.</a> Plant Cell. 31 (6), 1238-1256 (2019).</li>
<li>Xu, A., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+comparison+and+applications+of+different+sections+in+investigating+the+microstructure+and+histochemistry+of+cereal+kernels%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Comprehensive comparison and applications of different sections in investigating the microstructure and histochemistry of cereal kernels.</a> Plant Methods. 16, 8(2020).</li>
<li>Zhao, L., Pan, T., Cai, C., Wang, J., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+whole+sections+of+mature+cereal+seeds+to+visualize+the+morphology+of+endosperm+cell+and+starch+and+the+distribution+of+storage+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cereal+Science%22%5BJournal%5D)">Application of whole sections of mature cereal seeds to visualize the morphology of endosperm cell and starch and the distribution of storage protein.</a> Journal of Cereal Science. 71, 19-27 (2016).</li>
<li>Zhao, L., Cai, C., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+processing+method+for+investigating+the+morphology+of+cereal+endosperm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">An image processing method for investigating the morphology of cereal endosperm cells.</a> Biotech & Histochemistry. 95 (4), 249-261 (2020).</li>
<li>Borisjuk, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+architecture+shapes+embryo+metabolism+in+oilseed+rape%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Seed architecture shapes embryo metabolism in oilseed rape.</a> The Plant Cell. 25 (5), 1625-1640 (2013).</li>
<li>Lott, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+bodies+in+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Nordic+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Protein bodies in seeds.</a> Nordic Journal of Botany. 1, 421-432 (1981).</li>
<li>Jing, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+endosperm+cells+and+starch+granules+in+common+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22Cereal+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Development of endosperm cells and starch granules in common wheat.</a> Cereal Research Communications. 42 (3), 514-524 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De zaden zijn de belangrijkste hernieuwbare hulpbron voor voedsel, veevoer en industriële grondstoffen, en zijn rijk aan opslagmaterialen zoals zetmeel en eiwit. De morfologie en kwantiteit van cellen en de inhoud en configuratie van opslagmaterialen beïnvloeden het gewicht en de kwaliteit van zaden7,12. Hoewel de stereologie- en beeldanalysetechnologie de grootte en hoeveelheid cellen in een weefselgebied kan meten, ontbreekt het in veel laboratoria. De paraffin...

Plantenzaden bevatten opslagmaterialen zoals zetmeel en eiwitten en zorgen voor energie en voeding voor mensen. De vorm, grootte en hoeveelheid cel- en opslagmaterialen bepalen het gewicht en de kwaliteit van het zaad. De cellen en opslagmaterialen in verschillende gebieden van het zaad hebben aanzienlijk verschillende morfologieën, vooral voor sommige hoog-amylose graangewassen met remming van zetmeel vertakking enzym IIb1,2,3. Daarom is het erg belangrijk om de morfologieën van cellen en opslagmaterialen in verschillende gebieden van zaad te onderzoeken.
Paraffinesectie is een goede methode om de hele zaai-en-kleiningssectie voor te bereiden en kan de weefselstructuur van zaad en de accumulatie van opslagmateriaal vertonen in verschillende gebieden van zaad4,5,6. De paraffinesecties hebben echter meestal een dikte van 6-8 μm met een lage resolutie; het is dus erg moeilijk om de morfologie van cel- en opslagmaterialen duidelijk te observeren en kwantitatief te analyseren. De harssecties hebben meestal een dikte van 1-2 μm en een hoge resolutie en zijn zeer geschikt om de morfologie van cel- en opslagmaterialen te observeren en te analyseren7. De routinematige harssectiemethode heeft echter moeite met de voorbereiding van de hele sectie ter grootte van zaden, met name voor zaden met een groot volume en een hoog zetmeelgehalte; er is dus geen manier om de morfologie van cellen en opslagmaterialen in verschillende gebieden van het zaad te observeren en te analyseren. LR Witte hars is een acrylhars en vertoont een lage viscositeit en sterke doorlaatbaarheid, wat leidt tot de goede toepassingen bij de voorbereiding van de hars sectie van zaden, vooral voor granen volwassen pitten met een groot volume en een hoog zetmeelgehalte. Bovendien kan het monster ingebed in LR Witte hars gemakkelijk worden gekleurd met veel chemische kleurstoffen om duidelijk de morfologie van cellen en opslagmaterialen onder licht of fluorescerende microscoop7tentoon te stellen. In ons vorige artikel hebben we melding gemaakt van een droge sectiemethode voor de voorbereiding van de hele zaad-sized secties van volwassen granen pitten ingebed in LR witte hars. De methode kan ook de hele zaad-sized sectie van de ontwikkeling, ontkiemde en gekookte graanpit8bereiden. De verkregen hele-zaad-sized sectie heeft vele toepassingen in micromorfologie observatie en analyse, met name voor het duidelijk bekijken en kwantitatief analyseren van de morfologie verschillen van cel-en opslagmaterialen in verschillende regio's van zaad8,9.
Deze techniek is geschikt voor onderzoekers die de microstructuur van weefsel en de vorm en grootte van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen in verschillende gebieden van zaad met behulp van lichtmicroscoop willen observeren. De beelden van hele zaad-sized secties gekleurd specifiek voor het tentoonstellen van cellen, zetmeel korrels, en eiwitlichamen kunnen worden geanalyseerd door morfologie analyse software om kwantitatief te meten van de morfologie parameters van cellen, zetmeel korrels, en eiwit lichamen in verschillende gebieden van zaad. Om de technische toepasbaarheid en de hele zaad-sized sectie toepassingen aan te tonen, hebben we onderzocht de volwassen zaden van maïs en koolzaad en de ontwikkeling, ontkiemd, en gekookte pitten van rijst in deze studie. Het protocol bevat vier processen. Hier gebruiken we volwassen maïspit, wat het moeilijkst is bij het voorbereiden van de secties ter grootte van het hele zaad vanwege het grote volume en het hoge zetmeelgehalte, als een monster om de processen stap voor stap tentoon te stellen.

<table><tbody><tr><td>Azijnzuur</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A501931</td><td></td></tr><tr><td>Compacte glazen kleuringsschaal (5-plaats)</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>E678013</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie briljantblauw R-250</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A100472</td><td></td></tr><tr><td>Dekglas</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>F518211</td><td></td></tr><tr><td>Dubbelzijdig mes</td><td>Gillette Shanghai Co., Ltd.</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>Absoluut ethanol</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A500737</td><td></td></tr><tr><td>Vlaklegtafel</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td>Olympus</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentie versterker 28</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>910090</td><td></td></tr><tr><td>Glazen strips</td><td>Leica</td><td>840031</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde 50% oplossing in water</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A600875</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A600232</td><td></td></tr><tr><td>Jodium</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A500538</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A507048</td><td></td></tr><tr><td>Lichtmicroscoop</td><td>Olympus</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>LR White hars</td><td>Agar Scientific</td><td>AGR1281A</td><td></td></tr><tr><td>Oven</td><td>Shanghai Jing Hong Laboratory Instrument Co.,Ltd.</td><td>9023A</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumjodide</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A100512</td><td></td></tr><tr><td>Glijmiddel</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>F518101</td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>F519022</td><td></td></tr><tr><td>Natriumfosfaat dibasisch dodecahydraat</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A607793</td><td></td></tr><tr><td>Natriumfosfaat monobasisch dihydraat</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A502805</td><td></td></tr><tr><td>Ultramicrotoom</td><td>Leica</td><td>EM UC7</td><td></td></tr></tbody></table>

een eenvoudige droge sectiemethode voor het verkrijgen van hele zaad-sized hars sectie en de toepassingen ervan

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

De morfologie, grootte en kwantiteit van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen in zaad bepalen het gewicht en de kwaliteit van zaad. Ze zijn aanzienlijk verschillend tussen de verschillende gebieden van zaad. Om de morfologieën van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen duidelijk te bekijken en hun morfologieparameters nauwkeurig te analyseren, is de sectie van hele zaadformaat nodig. Hoewel de hele zaad-sized paraffine sectie kan de accumulatie van opslagmaterialen in zaden te onderzoeken, is het zeer moeilijk om kwantitatief te analyseren de morfologie parameters van cellen en opslagmaterialen als gevolg van de lage resolutie van de dikke sectie. De dunne hars sectie heeft een hoge resolutie, maar de routine hars sectie methode is niet geschikt voor de hele zaad-sized sectie van volwassen zaden met een groot volume en een hoog zetmeelgehalte voor te bereiden. In deze studie presenteren we een eenvoudige droge sectiemethode voor het voorbereiden van de hele harssectie ter grootte van zaden. De techniek kan de dwars- en longitudinale hele-zaad-sized secties van ontwikkelende, rijpe, ontkiemde, en gekookte zaden ingebed in LR Witte hars, zelfs voor grote zaden met een hoog zetmeelgehalte. De hele-zaad-sized sectie kan worden gekleurd met fluorescerende brightener 28, jodium, en Coomassie briljante blauwe R250 om specifiek vertonen de morfologie van cellen, zetmeel korrels, en eiwit lichamen duidelijk, respectievelijk. Het verkregen beeld kan ook kwantitatief worden geanalyseerd om de morfologieparameters van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen in verschillende gebieden van het zaad te tonen.

Eenvoudige droge doorsnedemethode voor het verkrijgen van een hele zaai-gedekte sectie We stellen een eenvoudige droogsectiemethode vast voor de voorbereiding van een hele zaadvormige sectie zaad die is ingebed in LR-witte hars(figuur 1). De methode kan transversale en langs-zaadsecties voorbereiden met een dikte van 2 μm (figuur 2-5, aanvullende figuur 1-4). Bijvoorbeeld, het rijpe zaad van kool...

Deze techniek maakt het mogelijk voor de snelle en eenvoudige voorbereiding van hele zaad-sized hars sectie voor de observatie en analyse van cellen, zetmeel korrels, en eiwitlichamen in verschillende regio's van het zaad.

Een eenvoudige droge sectiemethode voor het verkrijgen van hele zaad-sized hars sectie en de toepassingen ervan

The morphology, size and quantity of cells, starch granules&#160;and protein bodies in seed determine the weight and quality of seed. They are ...

De morfologiewetenschap en de kwaliteit van cellen, zetmeelkorrels en de eiwitlichamen in de kernel bepalen het gewicht en de kwaliteit van zaad. In deze studie presenteren we als een eenvoudige populatie van een hele kernel ingebed in LR Witte hars en stellen we een eenvoudige droge zuigmethode van hele pitten. We kiezen LR White hars als embedded medium om twee belangrijke redenen.Ten eerste is het lage viscositeit en sterke doorlaatbaarheid, wat leidt tot zijn goede toepassingen bij het bereiden van deze machtige zadensecties, vooral voor graanrijpe pitten met een groot volume en een hoog zetmeelgehalte. Ten tweede kan het monster ingebed in LR Witte hars gemakkelijk worden gekleurd met veel chemische kleurstoffen om duidelijk de morfologie van monsters onder licht met fluorescerende microscoop tentoon te stellen. De voorbereide secties kunnen specifiek worden gekleurd om de cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen duidelijk tentoon te stellen in de opkomst van hele kernel, en de morfologieparameters kunnen ook kwantitatief worden geanalyseerd.De methode bevat studies. Hier gebruiken we volwassen maïskorrels met een groter volume en een hoog zetmeelgehalte als voorbeeld om de processen stap voor stap tentoon te stellen. Om te beginnen, clips pitten in een eenvoudige fles.Voeg ongeveer 10 millimeter 2,5% fosfaatgebufferde glutaraldehyde toe. nog een pH 7.2 en plaats het op 4 graden Celsius voor 48 uur om ze allebei vast te stellen. Haal deze pitten eruit en snijd ze in de lengterichting of transversaal, met een dikte van twee tot drie millimeter.Je hebt een scherp dubbelzijdig mes nodig. En repareer ze nog 48 uur. Was vervolgens uw monsters drie keer met ongeveer 10 millimeter, dus 0,1 M fosfaatbuffer, pH 7.2 gedurende 30 minuten elke keer.Om de monsters stap voor stap te hydrateren, week ze in ongeveer 10 millimeter van 30%ethanol waterige oplossing voor 30 minuten eerst, en achtereenvolgens weken ze in 10 millimeter, dus 50%70%90%eenmaal, en 100% drie keer. Om stap voor stap een monster te infiltreren, haal ze achtereenvolgens op met 10 millimeter LR Witte harsoplossing verdund met ethanol van 25%50%75%, en 100% tweemaal bij vier graden Celsius gedurende 12 uur elke keer. Voordat we de sokkels voorbereiden op monsters.Voeg 250 microliter pure LR Witte hars in twee millimeter centrifuge buis en polymeriseren op zes graden Celsius gedurende 48 uur. Voeg vervolgens achtereenvolgens 500 microliters zuivere LR Witte hars toe en infiltreer het monster in de centrifugebuis met een voetstuk. Na het rechttrekken van de monsters met anatomische naald, zet de hars op zes graden Celsius in een oven voor 48 uur.Haal die ingebedde pitten uit de centrifugebuis en knip overtollige hars rond een monster uit met een scherp mes. Plaats het harsblok in de monsterhouder van microtoon en snijd de overbodige hars met het blad op het oppervlak van het monster en rond het monster. Polijst het oppervlak van het monster uiteindelijk verder met een glazen mes tot een volledige sectie kan worden gevormd.Nu is het tijd om deze geweldige sectie voor te bereiden met twee micron dikte. Voordat snijden, zet een klein koper sprak over twee millimeter boven de rand van het blad om te voorkomen dat een sectie van curling. Als de sectie elongates, zet een spaak onder de sectie om het te ondersteunen.Voeg vervolgens de 100 microliter water toe op de onverprokte glijbaan en breng het volledige en ongebroken gedeelte voorzichtig over naar het water met de treaters. Verwarm en droog ze op 50 graden Celsius om de gerimpelde sectie glad te maken. Tot slot hebben twee belangrijke tips aandacht nodig.Ten eerste, als de sectie afbrokkelt of scheurt, verleng de tijd voor elke hars infiltratie van het monster. Ten tweede, als de sectie heeft een aantal lijnen parallel aan het mes, klem het monster blok stevig. Als de sectie heeft een aantal lijnen verticaal aan het mes, gebruik dan een nieuw mes.Om de morfologie van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen te observeren, kunnen we de secties bevlekken met fluorescerende brightener 28, jodiumoplossing en Coomassie briljante blauwe R250 respectievelijk. Voor andere specifieke vlekken, baseren op het voorstel onderzoek. Hier gebruiken we jodiumoplossing om zetmeelkorrels als voorbeeld te geven.Voeg 40 microliter jodiumoplossing toe om de sectie onder te dompelen. En hou het een minuut in de pot. En bedek het monster met een hoes.En de overtollige agent oplossing eromheen depren. Observeer en fotografeer het monster onmiddellijk onder een verlichte microscoop uitgerust met een CCTV-camera. We kunnen de gefotografeerde beelden verwerken en kwantitatief analyseren voor gebieds-, lange of korte toegang en rondheid van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen in verschillende regio's voor kernel met behulp van morfologieanalysesoftware.We stellen een eenvoudige droge sectiemethode op voor het behouden van hele kernelsized secties in LR Witte hars. De methode kan dwars- en longitudinale secties van de hele kernel voorbereiden met twee micron. of voorbeelden, kan het rijpe gehele zaad van koolzaad dwars en in de lengterichting worden doorsneden.De delen van een volwassen hele maïskorrel met een groter volume kunnen ook met succes worden bereid. Daarnaast kunnen de zich ontwikkelende kernel, gekookte kernel en de ontkiemde kernel ook met behulp van de methode worden onderzocht. De voorbereide secties van hele kernels hebben de onderstaande toepassingen.Ten eerste kunnen de secties van de hele kernel worden gebruikt om de weefselstructuur van zaden te observeren. Bijvoorbeeld, de secties van hele embryo van oliehoudende verkrachting gekleurd met safranin kan duidelijk vertonen dat het een radicale, hyper casual, binnenste en buitenste De secties van de hele kernel kan worden gebruikt om te observeren en analyseren van de morfologie van cellen. Bijvoorbeeld, de transversale delen van hele embryo van oliehoudende koolzaad zijn gekleurd met fluorescerende brightener 28, en de celoliën zijn specifiek gekleurd.De micromorfologie van cellen in alle gebieden van het hele embryo kan worden weergegeven bij een hoge vergroting. De morfologieparameters van parenchymale cellen kunnen kwantitatief worden geanalyseerd met behulp van morfologieanalysesoftware en tonen enkele verschillen in verschillende embryogebieden. De transversale delen van de hele maïskorrel bevlekt met fluorescerende brightener 28 kunnen ook worden tentoongesteld als morfologie van cellen, en de morfologieparameters van cellen zijn verschillend in diverse gebieden van endosperm.delen van de hele kernel kunnen worden bevlekt met jodiumoplossing om zijn morfologie van zetmeelkorrels tentoon te stellen, bijvoorbeeld de transversale en de langssecties van maïskorrels bevlekt met jodium kunnen zijn morfologie van zetmeelkorrels duidelijk tentoonstellen. De zetmeelkorrels in diverse gebieden tonen beduidend verschillende morfologie, grootte, en hoeveelheid in endospermcellen. Dus kwantitatieve analyse van morfologische parameters van zetmeelkorrels toont aan dat ze aanzienlijk verschillen in verschillende regio's voor endosperm.De secties kunnen worden gebruikt om de morfologie van eiwitlichamen te observeren en te analyseren. Bijvoorbeeld, het zetmeel eiwit is blauw gekleurd met behulp van Coomassie briljante blauwe R250. De ruimtelijke verdeling van zetmeeleiwit in het hele embryo van koolzaad kan worden waargenomen in het is een lage vergroting, en de microstructuur kan duidelijk worden tentoongesteld bij hoge vergroting.Daarnaast kunnen de getallenfoutindex en morfologieparameters van eiwitlichamen in gekozen gebieden ook kwantitatief worden geanalyseerd. Deze techniek biedt de eerste en eenvoudige voorbereiding van harssecties van hele pitten uit ontwikkelende en rijpe zaden. De sectionele toepassingen in weefselstructuur van hele kernel en vervolgens het onderzoeken van de morfologie van cellen, zetmeelkorrels, en de eiwitlichamen in verschillende regio's van een hele kernel.De verworven beelden kunnen kwantitatief worden geanalyseerd om de morfologieparameters van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen weer te geven en verder te vergelijken in verschillende regio's van de hele kernel.

a-simple-dry-sectioning-method-for-obtaining-whole-seed-sized-resin

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol beschrijft hoe hars ingebed hersenweefsel kan worden voorbereid en afgebeeld in de drie dimensies in de gerichte ion beam, scanning electronen microscoop.

Gericht Ion Beam Frezen en Scanning Electron Microscopy van hersenweefsel

Hier presenteren we een protocol dat beschrijft hoe houten exemplaren moeten worden bemonsterd voor de algehele beoordeling van hun groeistructuren. Macro- en microscopische bereidings- en visualisatietechnieken die nodig zijn om een goed gerepliceerd en zeer gedetailleerd houtanatomisch en dendro-ecologisch dataset te genereren, worden beschreven.

Een technisch perspectief in Modern Boom-ring Onderzoek - Hoe Dendroecological en houtanatomische uitdagingen te overwinnen

Kristalline cellulose is een belangrijk bestanddeel van de plantencelwand. De kwantificering ervan op cellulair niveau is echter technisch uitdagend. Hier beschrijven we het gebruik van gepolariseerd lichttechnologie en worteldoorsneden om informatie te verkrijgen over de samenstelling van de celwand met een spatie-temporelle resolutie.

Hoge resolutie Kwantificering van kristallijne cellulose accumulatie in<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Roots aan Tissue-specifieke celwand Wijzigingen Monitor

Dit protocol beschrijft een eenvoudige Hybrid-Cut methode voor weefselsecties die nuttig is voor moeilijk verwerkbare plantweefsels. Goede kwaliteit weefselsecties maken anatomische studies en andere biologische studies mogelijk, inclusief in situ hybridisatie (ISH).

Hybride-Cut: een verbeterde Sectioning Methode voor Recalcitrante plantenweefsel Samples

Hier geven we een eenvoudige, goedkope en tijdbesparende protocol chemisch fixeren primaten hersenweefsel met acroleïne fixatief, waardoor langdurig bewaren die compatibel zijn met pre-inbedding immunohistochemie voor transmissie elektronenmicroscopie is.

De bereiding van niet-menselijke primaten Brain Tissue voor Pre-embedding immunohistochemie en elektronenmicroscopie

Deze studie geeft betrouwbare en eenvoudige procedures voor het verkrijgen van seriële uiterst dunne secties van een micro-organisme zonder dure apparatuur in transmissie-elektronenmicroscopie.

Een methode voor het verkrijgen van seriële uiterst dunne secties van micro-organismen in transmissie-elektronenmicroscopie

Hier presenteren we een protocol om paraffine segmenteren. Deze methode combineert snijden en zwevende met behulp van een eenvoudige thermostatische kamer om te voorkomen dat het proces van de overdracht vereist met de conventionele methode. Dientengevolge, waren de efficiëntie en het aantal intact paraffine secties sterk verbeterd.

Het snijden en drijvende methode voor paraffine-ingebedde weefsel voor het segmenteren

Dit protocol maakt de bereiding van dwarse delen van graanzaden (bijv. Rijst) mogelijk voor de analyse van endosperm en zetmeelkorrelmorfologie met behulp van scanning elektronenmicroscopie.

Dwarsdoorsnede van rijpe rijst(Oryza sativa L.) Kernels voor scanning elektronenmicroscopie beeldvorming met behulp van pipet tips als immobilisatie ondersteuning

Dit protocol is bedoeld om gedetailleerde procedures te bieden voor het verzamelen, fixeren en onderhouden van mycoheterotrofe plantenmonsters, waarbij verschillende microscopietechnieken worden toegepast, zoals scanning- en transmissie-elektronenmicroscopie, licht-, confocale en fluorescentiemicroscopie om schimmelkolonisatie te bestuderen in plantenweefsels en zaden ontkiemd met mycorrhizaschimmels.

Microscopietechnieken voor het interpreteren van schimmelkolonisatie in mycoheterotrofe plantenweefsels en symbiotische kieming van zaden

Het beoordelen van de anatomische verschillen tussen C3 en C4 bladdoorsneden helpt de efficiëntie van fotosynthese te begrijpen. Dit artikel beschrijft de voorbereiding en het onderzoek van dwarsdoorsneden uit de vrije hand en halfdunne bladeren, samen met de kanttekeningen bij de voorbereiding voor de gewassoorten Triticum aestivum en Zea mays.

Beoordeling van structurele kenmerken in Triticum aestivum en Zea mays voor C3 en C4 fotosynthetische differentiatie met behulp van vrije hand en halfdunne secties

Leer een eenvoudige droge sectiemethode voor zaadmorfologie met LR White hars en kleuringstechnieken. Deze methode maakt gedetailleerde analyse van cellen, zetmeelkorrels en eiwitlichamen in maïskorrels mogelijk.

Een eenvoudige droge sectiemethode voor het verkrijgen van hele zaad-sized hars sectie en de toepassingen ervan

Meer video's verkennen