Name: Extractie en dissectie van het gedomesticeerde varkensbrein (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Leer de extractie en dissectie van het varkensbrein voor neuroanatomisch onderzoek met humane technieken. Deze methode behoudt de integriteit van hersenstructuren voor verdere analyses.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen Jim Knoblauch en Martin-Booth Hodges van het College of Agricultural, Consumer and Environmental Sciences Information Technology and Communication Services erkennen voor hun expertise in het opnemen, opnemen en bewerken van audio en video.

Procedures met betrekking tot dieronderwerpen zijn goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Universiteit van Illinois in Urbana-Champaign
OPMERKING: Voorafgaand aan euthanasie werd het varken verdoofd via intramusculaire injectie met een combinatie van telazol:ketamine:xylazine (50,0 mg tiletamine HCl plus 50,0 mg zolazepam HCl gereconstitueerd met 2,50 ml ketamine HCl (100 g/L) en 2,50 ml xylazine (100 g/L). Eenmaal verdoofd, werd het varken geëuthanaseerd via intracardiale toediening van natriumpentobarbital (390 mg/ml toegediend bij 1 ml/5 kg LICHAAMSGEWICHT). Voor hersendissectie wordt aanbevolen om de methode van euthanasie te kiezen op basis van de gewenste analytische procedure van het weefsel. De methode van euthanasie moet zo min mogelijk schade aan de hersenen veroorzaken.
1. Extractie van het varkensbrein
<ol><li>Na humane euthanasie onthoofdt u het varken door boven de nek van de nek te snijden, tussen de eerste en tweede wervel (respectievelijk atlas en as).</li>
	<li>Zet het hoofd vast in een geïmmobiliseerde bankschroef die is aangepast om spikes op te nemen. Zorg ervoor dat het hoofd volledig geïmmobiliseerd is voordat u verder gaat.<ol>
<li>Maak met behulp van een scalpel een sagittale snede langs de middellijn van de schedel die doorgaat naar de achterste van het hoofd.</li>
		<li>Maak een tweede (dwarse) snede op de achterste van het hoofd.</li>
		<li>Maak een derde (dwars)snede op het achterste uiteinde van de snuit en in lijn met de ogen. Snijd de huid zo ver mogelijk van de schedel af om een gemakkelijke toegang tot de schedel te garanderen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Maak met behulp van een botzaag twee voorste tot achterste sneden zijwaarts naar de middellijn, die zich uitstrekt van de ogen tot de top van de schedelkromming. Schuine de zaag naar de middellijn en snijd net diep genoeg om de schedel te penetreren.<ol>
<li>Herhaal het bovenstaande proces aan de loodrechte zijden, waardoor een rechthoekig "venster" in de schedel ontstaat.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wring met een vleeshaak het rechthoekige deel van de schedel eraf. Begin met het plaatsen van de haak in een van de hoeken van de sectie en oefen opwaartse druk uit om het schedelstuk los te maken. Zorg ervoor dat u de vleeshaak alleen op het niveau van de schedel plaatst om te voorkomen dat het hersenweefsel onbedoeld doordringt.</li>
	<li>Als er meningeale lagen op de hersenen achterblijven, gebruik dan een tang en een stompe schaar (of als alternatief een scalpel) om de lagen voorzichtig te verwijderen zonder in de hersenen te snijden.</li>
	<li>Gebruik een scalpel om spieren en vet aan het achterste deel van het hoofd weg te snijden, waardoor het achterste deel van de schedel wordt blootgelegd.<ol>
<li>Maak twee dwarssneden langs de achterste van de schedel. Zorg ervoor dat je niet in hersenweefsel snijdt.</li>
		<li>Zet het hoofd vast door een stevige hand op de snuit te plaatsen en oefen een achterwaartse druk uit om het achterste deel van de schedel eraf te trekken, waardoor het cerebellum bloot komt te staan.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwijder het hoofd van de bankschroef en plaats het op een chirurgische mat.</li>
	<li>Gebruik een lang slank hulpmiddel, zoals het stompe uiteinde van een scalpel, om de hersenen te verwijderen. Keer het hoofd om en gebruik een zachte schepbeweging om de hersenen uit de schedelholte te halen zonder het oppervlak van de hersenen te beschadigen. OPMERKING: Het zal nodig zijn om schedelzenuwen te doorsnijden om de hersenen te verwijderen. Doe dit voorzichtig en probeer de hersenen er niet met geweld uit te trekken. De hersenen vallen vanzelf uit als ze goed en volledig los zijn van de schedel en wervelkolom.</li>
</ol>2. Dissectie van het varkensbrein
OPMERKING: Het kan nuttig zijn om een hersenatlas of vezeldissectiegids14 te gebruiken als visuele weergave tijdens dissectieprocedures. Zorg ervoor dat ontlede weefselmonsters correct worden opgeslagen volgens projectspecifieke behoeften bij het verwijderen van elk monster (hieronder in meer detail beschreven). Houd er bovendien rekening mee dat voor de doeleinden van deze video alle getoonde hersengebieden zijn ontleed vanaf de rechterhersenhelft, maar dit kan per laboratorium verschillen op basis van experimentele doelstellingen.
<ol><li>Om de hersenstam (voornamelijk de medulla) te verwijderen, maakt u een coronale snee in het cerebellum.</li>
	<li>Om het cerebellum te verwijderen, maak je een coronale snee in de cortex. Isoleer de gewenste gebieden (bijv. vermis, flocculus, enz.) van het cerebellum uit dit monster. Zorg ervoor dat u geen delen van de hersenstam in dit monster opneemt.</li>
	<li>Scheid de twee hersenhelften door een mid-sagittale snede te maken langs de longitudinale spleet. Maak deze snede als een continue beweging om schade aan de cortex te voorkomen.</li>
	<li>Om de middenhersenen te verwijderen, ontleedt u een gewenste hoeveelheid weefsel gewoon ventrale naar de superieure en inferieure colliculi.</li>
	<li>Om de hippocampus te verwijderen, plaatst u het stompe uiteinde van een scalpel in het achterste deel van het corpus callosum en rolt u de hippocampus voorzichtig uit, met behulp van een "J"-beweging vanaf het achterste deel van het corpus callosum; een hele hippocampale hoorn is 'boonvormig'.</li>
	<li>Het striatum (caudate nucleus wordt voornamelijk getoond) is een grijs en witte stof gestreept gebied net onder het corpus callosum en voorste aan de hippocampus. Schuiner de scalpel en verwijder dit gebied, waardoor gerigeerd weefsel bij verwijdering wordt onthuld.</li>
	<li>Om de mediale prefrontale cortex te verwijderen, ontleedt u weefsel van de frontale gyrus naar het corpus callosum en verwijdert u het meest mediale deel van die sectie. De rechterschors moet blijven na verwijdering van de mediale prefrontale cortex.</li>
	<li>Om de thalamus te verwijderen, verwijdert u de bolachtige structuur in het midden van het midnatale oppervlak van de hersenen en rostrale naar de middenhersenen. De thalamus heeft een bolvorm en ziet er iets donkerder uit dan het omliggende weefsel.</li>
</ol>3. Post-dissectie
<ol><li>Bewaar na afloop van de dissectie weefselmonsters goed voor latere analyses. Het weglaten van deze stap zal binnen slechts 20 minuten resulteren in significante autolyse en degradatie.</li>
	<li>Laat elk hersengebied intact op het moment van dissectie als structurele analyses zullen worden uitgevoerd, of gehakt de weefsels om een homogeen weefselmonster te maken voorafgaand aan conservering. De gemeenschappelijke methodes van de steekproefbehoud voor hersenenweefsels omvatten cryopreservation en chemische fixatie gebruikend crosslinking agenten15.</li>
	<li>Voor standaard laboratoriumtests (bijv. gen- of eiwitexpressie) moet u zich onderdompelen in vloeibare stikstof of oplossingen die genetisch materiaal stabiliseren vóór langdurige opslag bij -80 °C om handige en kosteneffectieve conserveringsmethoden te bieden.</li>
	<li>Als het handhaven van de weefselstructuur een prioriteit is, behoud dan hersenweefsels door middel van traditionele fixatiemethoden (bijv. met behulp van op aldehyde gebaseerde fixatieven om eiwitten te kruisen), zonder of met perfusie van het dier of orgaan van belang voorafgaand aan weefseldissectie.</li>
</ol>

<ol><li>Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Swine in cardiovascular research.</a> Laboratory Animal Science. 36 (4), 348-350 (1986).</li>
<li>Yen, J. Anatomy of the Digestive System and Nutritional Physiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYen%2C+J+%22Biology+of+the+Domestic+Pig%22">Biology of the Domestic Pig</a>. , 31-63 (2001).</li>
<li>Pond, W. G. Of Pigs and People. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPond%2C+WG+%22Swine+Nutrition%22">Swine Nutrition</a>. , 3-24 (2001).</li>
<li>Odle, J., Lin, X., Jacobi, S. K., Kim, S. W., Stahl, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Suckling+Piglet+as+an+Agrimedical+Model+for+the+Study+of+Pediatric+Nutrition+and+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">The Suckling Piglet as an Agrimedical Model for the Study of Pediatric Nutrition and Metabolism.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 419-444 (2014).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+G%C3%B6ttingen+minipig+as+a+model+of+diabetes%2C+with+special+focus+on+type+1+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of the Göttingen minipig as a model of diabetes, with special focus on type 1 diabetes research.</a> ILAR Journal. 45 (3), 303-313 (2004).</li>
<li>Lehmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minipig+in+general+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">The minipig in general toxicology.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 25, 59-62 (1998).</li>
<li>Richer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sacrococcygeal+and+transsacral+epidural+anesthesia+in+the+laboratory+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Radiologic+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Sacrococcygeal and transsacral epidural anesthesia in the laboratory pig.</a> Surgical Radiologic Anatomy. 20, 431-435 (1998).</li>
<li>Lind, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+Modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 31 (5), 728-751 (2007).</li>
<li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 311, 79-83 (1979).</li>
<li>Aurich, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsurgical+training+model+with+nonliving+swine+head.+Alternative+for+neurosurgical+education%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Microsurgical training model with nonliving swine head. Alternative for neurosurgical education.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 29 (6), 405-409 (2014).</li>
<li>Bassi, T., Rohrs, E., Fernandez, K., Ornowska, M., Reynolds, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+excision%3A+An+easier+method+to+harvest+the+pig%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct brain excision: An easier method to harvest the pig's brain.</a> Interdisciplinary Neurosurgery. 14, 37-38 (2018).</li>
<li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+the+pig+CNS+for+histological+analysis%3A+A+manual+for+decapitation%2C+skull+opening%2C+and+brain+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Exposure of the pig CNS for histological analysis: A manual for decapitation, skull opening, and brain removal.</a> Journal of Visualized Experiments. 122, e55511(2017).</li>
<li>Pascalau, R., Szabo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+dissection+and+sectional+study+of+the+major+porcine+cerebral+white+matter+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomia%2C+Histologia%2C+Embryologia%22%5BJournal%5D)">Fibre dissection and sectional study of the major porcine cerebral white matter tracts.</a> Anatomia, Histologia, Embryologia. 46, 378-390 (2017).</li>
<li>McFadden, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+in+brain+banking%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica+Communications%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146(2019).</li>
<li>Félix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1(1999).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

De hierin beschreven technieken zijn ontworpen voor varkens van ongeveer 4 weken oud. Het is van cruciaal belang om deze stappen onmiddellijk uit te voeren nadat het varken op humane wijze is geëuthanaseerd om ervoor te zorgen dat de integriteit van de hersenweefselstructuur behouden blijft, vooral bij het overwegen van latere biochemische assays. Het is handig om een atlas of vezel16 dissectiegidsen te gebruiken bij het eerste leren van de technieken. Het wordt aanbevolen dat de experimenteerder ...

Het varken is goed gedocumenteerd en geaccepteerd als een vertaalbaar diermodel voor onderzoek in cardiovasculaire systemen1, gastro-intestinale systemen2, voeding3,4, diabetes5, toxicologie6, en chirurgische technieken7. Het gebruik van het varken in de neurowetenschappen begint toe te nemen, omdat PubMed zoekt naar de trefwoorden "varkensbreindiermodel" resulteert in vier keer meer resultaten van 1996-2005 dan de voorgaande periode van 10 jaar8, en momenteel nog meer resultaten. Een primaire reden dat de populariteit van het varkensmodel toeneemt, is vanwege de overeenkomsten in groei, structuur en functie van de hersenen in vergelijking met mensen. In vergelijking met het menselijk brein vertoont het varkensbrein vergelijkbare gyrale patronen, vascularisatie en distributie van grijze en witte stof9. Bovendien is het varkensbrein gebruikt bij neuroimagingprocedures, opgeroepen tot potentiële opname en bij het vaststellen van neurochirurgietechnieken8,9. In tegenstelling tot andere diermodellen, echter, het varken en de menselijke ervaring perinatale hersengroei spurt, in tegenstelling tot pre- of postnatale groei spurts. Bij de geboorte wegen het menselijk en varkensbrein respectievelijk ongeveer 27 en 25 procent van hun volwassen hersengewicht, vergeleken met het rattenbrein dat 12 procent van zijn volwassen hersengewicht weegt en het rhesusapenbrein op 76 procent van het volwassen gewicht10.
Een reden waarom het varken slechts langzaam is aangenomen als een diermodel voor neurowetenschappen, is omdat veel onderzoekers in deze context onbekend zijn met het dier. Onderzoekers zijn zich mogelijk niet bewust van het mogelijke gebruik ervan in het veld of kennen mogelijk niet de juiste technieken die nodig zijn om een dergelijk model te gebruiken. Aangezien het gebruik van het varken als biomedisch en preklinisch model aandacht en gebruik in de neurowetenschappen krijgt, is het noodzakelijk om gestandaardiseerde procedures voor weefselverwijdering vast te stellen om een nauwkeurige vergelijking van gegevens tussen studies te garanderen. Hoewel dissectie en chirurgische technieken met betrekking tot het varkensbrein elders zijn gepubliceerd11,12,13, is er behoefte aan eenvoudige en gestandaardiseerde protocollen om varkenshersenweefsel te verzamelen, vooral voor gebruik in biochemische assays. Als zodanig is het doel van deze video om de kennis te bieden die nodig is om onderzoekers in staat te stellen een gestandaardiseerde hersenextractie en dissectie uit te voeren. Deze video illustreert een goede techniek om de varkenshersenen te verwijderen terwijl de cortex en hersenstam intact blijven, en vervolgens methoden te bekijken om verschillende belangrijke hersengebieden te ontleden.

<table><tbody><tr><td>#22 Scalpel Blades voor #4 Handvatten</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>549-4S-22</td><td></td></tr><tr><td>11 1/2" Satterlee Botzaag</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI13425</td><td></td></tr><tr><td>5 1/2" Skull Breaker met Beitel Einde (Vlees Haak)</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI37636</td><td></td></tr><tr><td>5-inch Heavy Duty Werkbank Klauwstock</td><td>Pony</td><td>29050</td><td></td></tr><tr><td>Slachtermes 25cm</td><td>Victorinox</td><td>5.7403.25</td><td>Vuil voor gebruik</td></tr><tr><td>CM40 Lichte Duty Drop Gesmeed C Klauwstock</td><td>Bessey</td><td>00655BC3120</td><td></td></tr><tr><td>Diamond Hone Mes Vormgever</td><td>Chef&rsquo;s Choice</td><td>436-3</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Roestvrijstalen Scalpel Blad Handvat #4</td><td>ThermoScientific</td><td>5334</td><td></td></tr><tr><td>Weefsel Pincet</td><td>Henry Schein</td><td>101-5132</td><td></td></tr><tr><td>Vinyl Dissectie Pad</td><td>Carolina</td><td>629006</td><td></td></tr></tbody></table>

extractie en dissectie van het gedomesticeerde varkensbrein

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Het gebruik van het varken als een preklinisch en vertaalbaar diermodel is goed gedocumenteerd en geaccepteerd door onderzoeksgebieden die cardiovasculaire systemen, gastro-intestinale systemen en voeding onderzoeken, en het varken wordt steeds vaker gebruikt als een groot diermodel in de neurowetenschappen. Bovendien is het varken een geaccepteerd model om neuroontwikkeling te bestuderen, omdat het hersengroei- en ontwikkelingspatronen vertoont die vergelijkbaar zijn met wat er bij mensen gebeurt. Als een minder gebruikelijk diermodel in de neurowetenschappen, zijn chirurgische en dissectieprocedures bij varkens misschien niet zo bekend of goed geoefend onder onderzoekers. Daarom kan een gestandaardiseerd visueel protocol met consistente extractie- en dissectiemethoden waardevol zijn voor onderzoekers die met het varken werken. De volgende video toont een techniek om de varkenshersenen te verwijderen terwijl de cortex en hersenstam intact blijven en bekijkt methoden om verschillende algemeen onderzochte hersengebieden te ontleden, waaronder de hersenstam, cerebellum, midbrain, hippocampus, striatum, thalamus en mediale prefrontale cortex. Het doel van deze video is om onderzoekers de tools en kennis te bieden die nodig zijn om consequent een hersenextractie en dissectie uit te voeren op het vier weken oude varken.

Deze sectie beschrijft voorbeelden van resultaten verkregen na de juiste extractie en dissectie van een 4 weken oud varkensbrein. Figuur 1 schetst de vorm van elk hersengebied voor gebruik als leidraad tijdens dissectie. Een deel van de hersenstam kan in de schedel achterblijven na verwijdering van het cerebellum (figuur 1B). Dit kan worden verwijderd tijdens het isoleren van het gewenste gebied van het cerebellum. Tabel 1 geeft het gemiddelde g...

Dit protocol beschrijft de techniek voor verwijdering van het varkensbrein in zijn geheel en dissectie van verschillende hersengebieden die vaak in de neurowetenschappen worden bestudeerd.

Extractie en dissectie van het gedomesticeerde varkensbrein

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

De volgende video is een demonstratie van verwijdering en dissectie van het varkensbrein. Het kan nuttig zijn om voor of tijdens de procedure te verwijzen naar een atlas of vezeldissectiegids. Een groot slagersmes is het beste voor onthoofding, omdat het een schone snede tussen de atlas en de as mogelijk maakt.Zorg ervoor dat het mes scherp is voordat u met een nieuw onderwerp begint. Een vleeshaak wordt gebruikt om de schedel te verwijderen. Een lang slank hulpmiddel zoals een scalpelgreep wordt gebruikt om de hersenen van de schedel te verwijderen.Een bankschroef met schroeven of uitsteeksels is nodig om het hoofd vast te maken tijdens het snijden van de schedel. Zodra het dier op humane wijze is geëuthanaseerd volgens vastgestelde protocollen, gaat u als volgt te werk. Snijd net boven de nek van de nek, tussen de schouders en de bovenkant van het hoofd.Beveilig het varken en verplaats de jaren uit de weg tijdens onthoofding. Gebruik een scalpel om incisies te maken om de huid van de schedel te scheiden. Maak een eerste snede in het midden van de schedel die doorgaat naar de achterste van het hoofd.De tweede dwarssnede moet op de achterste van het hoofd zitten. De derde snede ook transversaal zal beginnen bij de posterieure van deze snuit, en inline met de ogen om gemakkelijke toegang tot de schedel te garanderen. Gebruik een botzaag om voorste tot achterste sneden zijdelings naar de middellijn te maken.Begin met het licht markeren van het gebied voor de snede met de zaag en begin dan met zagen totdat je minder weerstand van de schedel tegenkomt. Schuiner de zaag lichtjes naar de middellijn tijdens het zagen, omdat dit ervoor zorgt dat u het dunste deel van de schedel snijdt. Als de snede te dicht bij het oor is, zal het moeilijk zijn om de schedel te verwijderen.Maar als de snede te dicht bij de middellijn ligt, zal de opening te klein zijn om de hersenen te verwijderen. Herhaal dit proces aan de loodrechte zijden om een rechthoekig venster te maken. Zorg ervoor dat elke hoek van het raam volledig is doorgesneden, zodat een deel van de schedel kan worden verwijderd om de hersenen eronder te onthullen.Gebruik vervolgens een vleeshaak of gebogen instrument om het rechthoekige schedelgedeelte uit positie te wrikken. Begin met het plaatsen van de haak in een van de hoeken en druk uit te oefenen om de schedelkap eraf te knallen. In sommige gevallen blijven de hersenvliezen op de hersenen.En als dit zorgvuldig gebeurt, gebruik dan een tang en een stompe schaar, of als alternatief een scalpel om de hersenvliezen te verwijderen zonder de hersenen te snijden. Ter referentie moeten de hersenen er als volgt uitzien voor en nadat de meningeale lagen zijn verwijderd. Snijd door de spier en het vet op de achterste van het hoofd om zich voor te bereiden op blootstelling van het cerebellum.Om het cerebellum bloot te leggen, maakt u twee dwarssneden langs de achterste van de schedel. Let er bij het maken van deze sneden op dat u niet in de blootgestelde hersenen snijdt. Zodra de sneden zijn gemaakt, plaatst u één hand op de snuit en één op de schedel en oefent u achterwaartse druk uit om het achterste deel van de schedel weg te trekken van de rest van het hoofd.Zoals hier benadrukt, is het cerebellum verscholen achter de resterende meningeale lagen. Gebruik het uiteinde van een stomp instrument zoals een scalpelgreep om de hersenen voorzichtig van de schedel te scheiden en zorg ervoor dat de hersenen tijdens het proces niet worden beschadigd. Draai het hoofd enigszins om om de hersenen uit de schedel te halen en gebruik een zachte schepbeweging om de schedelzenuwen te doorsnijden en de hersenen te verwijderen.Dit proces vereist geduld en oefening om alle resterende verbindingen tussen de hersenen en de schedelholte te elimineren. Het omkeren van het hoofd van het varken kan nuttig zijn tijdens dit proces. Blijf vegende bewegingen gebruiken met het stompe instrument om de hersenen te bevrijden.Zoals hier benadrukt, kunnen het cerebellum en de hersenstam moeilijk te verwijderen zijn omdat ze in de schedelholte zijn weggestopt. Wees voorzichtig bij het verwijderen van het cerebellum en medulla, of hersenstam. De hersenen moeten vanzelf uitvallen als het volledig los is van de schedel.De schedelholte moet eruit zien zoals getoond na verwijdering van de hersenen. Ter voorbereiding op de ontleding van de hersenregio zorgen ervoor dat voorgelabelde containers worden georganiseerd en in de nabijheid. Voorbeelden van conserveringsmethoden zijn snap freezing samples in vloeibare stikstof, of het onderdompelen ervan in een conserveermiddeloplossing.Eenmaal geëxtraheerd uit de schedelholte moeten de hele hersenen er als volgt uitzien. Om de medulla of hersenstam te verwijderen, maakt u een coronale snee in het cerebellum. Om het cerebellum te verwijderen, maak je een coronale snee in de cortex.Om de hemisferen te scheiden, maakt u een midnatale snede langs de longitudinale spleet met behulp van een continue beweging om schade te voorkomen. Voor de doeleinden van deze video zullen we alleen dissecties van de rechterhersenhelft laten zien. Om de middenhersenen te verwijderen, zoekt u naar de superieure en inferieure colliculi, twee hobbels op het achterste deel van de hersenen.Verwijder de gewenste hoeveelheid hersenweefsel gewoon ventral naar deze regio's. Om de hippocampus te verwijderen plaatst u de scalpelgreep op de achterste van het corpus callosum en rolt u de hippocampus voorzichtig uit. De hele hippocampushoorn zal boonvormig zijn.De hippocampus moet gemakkelijk uitrollen bij het scheppen van je vinger in een j-beweging, beginnend bij het achterste corpus callosum. Om het striatum of de caudatekern te verwijderen, verwijdert u het voorste deel van het corpus callosum. De caudate nucleus is het gestreepte of gestreepte gebied dat grijs en wit gekleurd is en zich net onder het corpus callosum bevindt.Verwijder met de scalpelgreep schuin dit gebied dat voornamelijk de caudatekern omvat. Na het verwijderen van dit weefsel zou u in staat moeten zijn om een gerigeerd patroon te zien waar het hersengebied zich had gevestigd. Om het mediale prefrontale cortex ontleed weefsel van de frontale gyrus naar het corpus callosum te verwijderen, waarbij het meest mediale deel van die sectie wordt genomen.De rechterschors moet blijven na verwijdering van de mediale prefrontale cortex. Om de thalamus te verwijderen, verwijdert u de bolachtige structuur in het midden van het midnatale oppervlak. De thalamus heeft een duidelijke bolvorm en ziet er iets donkerder uit dan het omliggende weefsel.Na voltooiing van de dissectie moeten weefselmonsters naar behoren worden bewaard op basis van specifieke experimentele resultaten. Hier worden de ontlede hersengebieden getoond, inclusief de relatieve grootte en vorm die worden verwacht bij het werken met jonge varkens. Bij het beheersen van deze technieken zal de volledige hersenextractie en dissectieprocedure minder dan 15 minuten per onderwerp duren en consistente resultaten opleveren.

extraction-and-dissection-of-the-domesticated-pig-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

We beschrijven een rat model van post-traumatische stress-stoornis (PTSS) dat de aanhoudende veranderingen in neuro-endocriene functie en de vertraagde lange termijn, overdreven angst reactie, kenmerkend voor PTSS-patiënten laat zien. Het diermodel en de hier beschreven methoden zijn nuttig voor het correleren van biomarkers in hersenkernen, die mechanisch maar kan niet worden gemeten in patiënten met biomarkers in perifere witte bloedcellen, die kan.

Biomarkers in een diermodel voor het openbaren van Neural, hematologische, en gedragsmatige correlaten van PTSS

This video demonstrates a method for preparing organotypic hippocampal slice cultures from the brain of a rat pup. It outlines the steps involved in the dissection of the hippocampus, slicing, and culture conditions required to promote cell viability and growth in the hippocampal slices, ultimately generating organotypic slice cultures.

Preparation of Organotypic Slice Cultures from a Rat Pup&#39;s Hippocampus

This video demonstrates the process of neurosphere formation and their expansion from hippocampal tissue. Neural stem and progenitor cells from the postnatal mouse dentate gyrus tissue proliferate and form primary neurospheres, which are then reseeded to form secondary neurospheres.

Formation and Expansion of Neurospheres from a Hippocampal Tissue

Anesthesie-geïnduceerde ontwikkelingsneurotoxiciteit (AIDN) onderzoek heeft zich gericht op knaagdieren, die niet breed van toepassing zijn op mensen. Niet-menselijke primatenmodellen zijn relevanter, maar zijn kosteloos en moeilijk te gebruiken voor experimenten. Het piglet is daarentegen een klinisch relevant, praktisch diermodel dat ideaal is voor de studie van anesthetische neurotoxiciteit.

Gebruik van een varkensmodel voor de studie van anesthesie-geïnduceerde ontwikkelingsneurotoxiciteit (AIDN): een vertaal-neuroscience-benadering

Het doel van dit document en instructie video te beschrijven hoe bloot en verwijder de pig postmortem hersenen en hypofyse in intacte toestand, geschikt voor daaropvolgende macroscopische en histologische analyse.

Blootstelling van het varken voor CNS Histologische analyse: A Manual voor onthoofding, Schedel openen en Brain verwijdering

Dit artikel beschrijft een gedetailleerde methodologie voor het verkrijgen van afgevlakte tangentiële secties van zoogdieren afkomstig cortices en visualiseren van corticale modules met behulp van histochemische en immunohistochemische methoden.

Visualisatie van corticale Modules in afgeplatte zoogdieren Cortices

We presenteren een hands-on, stap-voor-stap, snel protocol voor het verwijderen en ontleden van discrete gebieden van vers hersenweefsel bij muizen. Het verkrijgen van hersengebieden voor moleculaire analyse is routine geworden in veel neurowetenschappelijke laboratoria. Deze hersengebieden worden onmiddellijk bevroren om transcriptomische gegevens van hoge kwaliteit te verkrijgen voor analyse op systeemniveau.

Microdissectie van muizenhersenen in functioneel en anatomisch verschillende regio's

Dit artikel presenteert een stap-voor-stap protocol voor de directe canule implantatie in de cisterna magna van varkens.<br...

Directe canule-implantatie in de Cisterna Magna van varkens

Hier presenteren we een methode voor de prestatie- en veiligheidsbeoordeling op lange termijn van zachte subdurale elektrode-arrays in een minivarkensmodel, waarbij chirurgische methoden en hulpmiddelen, postoperatieve magnetische resonantiebeeldvorming, elektrofysiologie van de auditieve cortex, elektrochemische eigenschappen van het implantaat en postmortale immunochemie worden beschreven.

Subdurale zachte elektrocorticografie (ECoG) array-implantatie en langdurige corticale opname bij minivarkens

Dit protocol beschrijft het uitvoeren van een craniectomie met behulp van een pneumatische boor met hoge snelheid op een 3 maanden oud Deens Landras-varken. De toegang wordt gemaakt door het voorhoofdsbeen en onthult de ventrale dura mater en de onderliggende hersenhelften. Deze procedure geeft toegang tot een groot deel van de varkenshersenen.

Toegang tot het varkensbrein via high-speed pneumatische boorcraniectomie

Een innovatieve methode om uitbreidbare hersenmatrices te bouwen om zowel coronale als sagittale sneden te snijden, wordt beschreven voor toepassing op neonatale biggen. Deze budgetvriendelijke aanpak maakt gebruik van acrylplaten die zijn gesneden met sjablonen uit agarosegel-hersenvormen, wordt toegepast op meerdere soorten en maakt uitbreiding mogelijk om hersengroei mogelijk te maken.

Fabricage van een uitbreidbare hersenmatrix die aanpasbaar is over ontwikkelingsstadia

Leer de extractie en dissectie van het varkensbrein voor neuroanatomisch onderzoek met humane technieken. Deze methode behoudt de integriteit van hersenstructuren voor verdere analyses.

Extractie en dissectie van het gedomesticeerde varkensbrein

Meer video's verkennen