Quadruple-Checkerboard: een wijziging van het driedimensionale dambord voor het bestuderen van medicijncombinaties

Het viervoudige dambord is een techniek die alle mogelijke combinaties bestudeert die kunnen worden verkregen door vier geneesmiddelen te combineren, en het is belangrijk om een behandeling te vinden voor resistente micro-organismen, voornamelijk MDR's of ook wel multiresistente micro-organismen genoemd. Deze techniek is niet arbeidsintensief en de resultaten kunnen de volgende dag of na afloop van de incubatietijd worden verkregen. Daarnaast kan het alle mogelijke combinaties bestuderen en niet alleen specifieke en zeer beperkte combinaties die kunnen worden verkregen door deze vier geneesmiddelen en alles in één experiment te combineren.

Daarnaast kan deze techniek in meerdere disciplines worden gebruikt en niet alleen in de microbiologie en zelfs in de microbiologie. Het kan alle mogelijke combinaties bestuderen tussen verschillende antimicrobiële middelen en niet alleen antibacteriële middelen. Naast het microbiologische deel kan het worden gebruikt om combinaties te bestuderen tussen geneesmiddelen tegen kanker, tussen plantenextracten en geneesmiddelen, en zelfs tussen moleculair effectieve moleculaire behandelingspanelen.

Bereiding plaats 4 96, putplaten naast elkaar om een vierkant te vormen met behulp van een tape, plak hun bodem aan elkaar. Herhaal deze stap om vier panelen te krijgen met elk vier platen en noem ze een één, een twee, een drie en een vier. Voeg 50 microliter Mueller toe.

Hint en bouillon naar de putten tussen kolom twee en kolom 11 in de 1696, putplaten van de vier panelen voegen 200 microliter Mueller Hinton-bouillon toe aan de put H 12 die als negatieve controle dient. Welnu, in de 1696 putjes platen van de vier panelen voeg een 50 microliter Mueller Hinton-bouillon toe aan de putjes, A één en H één die dienen als positieve controleputjes in de 1696 putjes van de vier panelen, medicijn één cefotaxime seriële verdunning aan een conische buis van 15 ml. Steriel gedestilleerd water.

Bereken het volume dat uit de stamoplossing van het geneesmiddel moet worden verwijderd volgens de formule C één V één is gelijk aan C twee V twee. Verwijder het berekende volume uit het 15 ml steriel gedestilleerd water en voeg hetzelfde volume van de papieroplossing toe Pipet in de conische buis 50 microliter van de bereide geneesmiddeloplossing in elk putje in kolom 11 en kolom 12, met uitzondering van het putje H 12, begin de seriële verdunning door 50 microliter uit kolom 11 te verwijderen en in de overeenkomstige putjes in kolom 10 te doen. En dan van 10 tot het bereiken van kolom twee, waar de 50 microliter uit kolom twee wordt weggegooid. Herhaal de seriële verdunning voor elk van de platen met 1696 putjes van de vier panelen.

Drug twee amika seriële verdunning tot een conische buis van 10 ml. Steriel gedestilleerd water. Bereken het volume dat uit de stockoplossing van het medicijn moet worden verwijderd.

Verwijder het berekende volume uit de 10 ml steriel gedestilleerd water en voeg hetzelfde volume van de medicijnvoorraadoplossing toe aan de conische buis. Neem een aparte plaat met 96 putjes, voeg honderd microliter steriele Mueller Hinton-bouillon toe aan de putjes tussen roos G en B.In deze plaat voeg je honderd microliter van het eerder bereide medicijn toe. Twee, oplossing voor de putjes Van rij G.Verdun serieel Van rij G naar rij B door honderd microliter uit elke put in RO G te nemen.En ten slotte de honderd microliter uit de putjes van rij B weg te gooien.Herhaal deze stappen om acht afzonderlijke platen met 96 putjes voor te bereiden, breng van medicijn twee naar de vier panelen, pipetteer 50 microliter medicijn twee uit de putjes tussen rijen G en B in de Overeenkomstige putjes in elke plaat in de vier panelen, een geprepareerde plaat met 96 putjes bevat honderd microliter medicijn twee.

Dat is genoeg voor twee platen in één paneelmedicijn. Drie levende lendenen naast vier verschillende conische buizen van 14 ml steriel gedestilleerd water. Bereken het volume dat uit de stockoplossing van het medicijn moet worden verwijderd.

Verwijder het berekende volume van het 14 ml steriel gedestilleerd water uit elke tube en voeg het overeenkomstige volume van het geneesmiddel toe. Neem na het bereiden van de vereiste concentraties van het derde medicijn 50 microliter en voeg deze toe aan de overeenkomstige putjes tussen rij B en G en kolom twee en 12 in de overeenkomstige plaat. In elk paneel, waarbij C één overeenkomt met de vier P, één-platen en de vier panelen, C twee, overeenkomt met de vier P-twee-platen, en de vier panelen, C3 overeenkomt met de vier P, drie-platen, en de vier panelen, en C vier, overeenkomt met de vier P, vier-platen, en de vier panelen, medicijn vier, trimethoprim, sulfamethoxazol, toevoeging aan een conische buis, voeg 14 ml toe.

Streef naar gedestilleerd water. Bereken het volume dat uit de stockoplossing van het medicijn moet worden verwijderd. Verwijder het berekende volume uit het 14 ml steriel gedestilleerd water van elke tube en voeg het vereiste volume van het medicijn toe.

Neem na het bereiden van de vereiste concentraties van het vierde medicijn 50 microliter en voeg het toe aan de overeenkomstige putjes tussen rij B en G en kolom twee en 12. In de vier platen in het corresponderende paneel waar C één overeenkomt met paneel één C twee correspondeert met paneel twee, C3 correspondeert met paneel drie en C vier correspondeert met paneel vier. Bereiding en toevoeging van bacterieel inoculum gelijk aan I-E-S-B-L met behulp van een steriele lusoverdracht.

Eén kolonie van het bacteriële isolaat is gelijk aan eerder op een bord gekweekt tot twee ml steriele Mueller Hinton-bouillon en vortex Controleer op de troebelheid waar deze 0,5 McFarland moet zijn met behulp van een dichtheid voeg een TML steriele Mueller Hinton-bouillon toe aan de steriele urinebeker voeg bacterieel inoculum van het 0,5 McFarland-inoculum toe aan de urinebeker volgens de formule C één V één is gelijk aan C twee V twee waarbij V één gelijk is aan 800 microliter pijp pipette 50 microliter van de inoculumoplossing en naar elke put behalve H 12, dat is de steriliteitscontrole, Goed incubeer de panelen bij 37 graden Celsius 's nachts. Deze figuur stelt paneel A één voor. De kleurwoningen zijn de putjes die bacteriegroei bevatten, en de zwarte pijlen vertegenwoordigen de putjes op de groei.

Geen groei-interface in plaat één, plaat twee en plaat drie. We kunnen zien dat er remming is in rij D met één op acht MIC van Amikacine naast verschillende submicrofoons van cefotaxime en Levofloxacine naast één op acht MIC van Trimethoprim sulfamethoxazol in plaat vier. We merken dat er geen bacteriegroei te zien is in het kwadrant met de combinatie.

Dit komt omdat we in deze plaat de MIC van Levofloxacine hebben die de groei volledig zal remmen. Figuur één B stelt paneel twee voor. In dit paneel kunnen we zien dat remming van de bacteriegroei ook wordt gezien in RD, dat subics van cefotaxime en levofloxacine bevat, naast één over acht MIC van Amikacin en één over vier MIC van trimethoprim sulfamethoxazol, figuur één C vertegenwoordigt paneel A drie.

In deze figuur kunnen we zien dat de remming van de bacteriegroei te zien is in rij C en rij D, met verschillende submicrofoons van cefotaxime en levofloxacine, en naast de helft MIC van trimethoprimsulfamethoxazol, en één over vier MIC van Amikacin in rij C en één over twee MIC van Amikacin in rij D figuur 1D vertegenwoordigt paneel A vier. In dit panel hebben we één MIC van Trimethoprim sulfamethoxazol in combinatie met verschillende concentraties Cefotaxime, amikacine en Levofloxacine. In deze figuur kunnen we zien dat de bacteriegroei volledig wordt geremd in het kwadrant met de combinatie waar deze remming het effect is van de ene MIC van Trimethoprim sulfamethoxazol in blad FIC, allemaal in het Excel-bestand.

De tabel toont de uiteindelijke geluids-FIC, met de interpretatie van de verkregen waarde. Concluderend bestudeert de Q-dambordtechniek alle mogelijke combinaties tussen vier medicijnen in één experiment. De resultaten worden de volgende dag verkregen en op een eenvoudige en snelle manier geïnterpreteerd met behulp van een Excel-sjabloon.