Name: Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met 18F Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Leer dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [18F]tetrafluoroboraat PET/CT. Deze methode maakt niet-invasieve tracking van CAR T-celtrafficking en expansie in vivo mogelijk voor immunotherapieonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door de Mayo Clinic K2R-pijplijn (SSK), het Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (SSK) en de Predolin Foundation (RS). Figuren 1, 2 en 4 zijn gemaakt met BioRender.com.

SSK is een uitvinder van patenten in CAR-immunotherapie in licentie gegeven aan Novartis (via een overeenkomst tussen Mayo Clinic, University of Pennsylvania en Novartis) en Mettaforge (via Mayo Clinic). RS, MJC en SSK zijn uitvinders van patenten op het gebied van CAR-immunotherapie die in licentie zijn gegeven aan Humanigen. SSK ontvangt onderzoeksfinanciering van Kite, Gilead, Juno, Celgene, Novartis, Humanigen, MorphoSys, Tolero, Sunesis, Leahlabs en Lentigen. Figuren werden gemaakt met BioRender.com.

Dit artikel beschrijft een methodologie voor het opnemen van NIS in CAR T-cellen en beeldvorming geïnfundeerde CAR T-cellen in vivo via [18F] TFB-PET. Als proof of concept werden NIS+BCMA-CAR T-cellen gegenereerd via dubbele transductie. We hebben onlangs gemeld dat het opnemen van NIS in CAR T-cellen de functies en werkzaamheid van DE CAR T-cel in vivo niet schaadt en CAR T-celhandel en -expansie mogelijk maakt30. Naarmate CAR T-celtherapieën zich blijven u...

Chimere antigeenreceptor T (CAR T) celtherapie is een snel opkomende en potentieel curatieve benadering bij hematologische maligniteiten1,2,3,4,5,6. Buitengewone klinische resultaten werden gerapporteerd na CD19-gerichte CAR T (CART19) of B-celrijpingsantigeen (BCMA) CAR T-celtherapie2. Dit leidde tot de goedkeuring door de Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA) van CART19-cellen voor agressief B-cellymfoom (axicabtagene ciloleucel (Axi-Cel)4, tisagenlecleucel (Tisa-Cel)3 en lisocabtagene maraleucel)7, acute lymfoblastische leukemie (Tisa-Cel)5,8, mantelcellymfoom (brexucabtagene autoleuce)9 en folliculair lymfoom (Axi-Cel)10 . Onlangs keurde de FDA BCMA-gerichte CAR T-celtherapie goed bij patiënten met multipel myeloom (MM) (idecabtagene vicleucel)11. Bovendien bevindt CAR T-celtherapie voor chronische lymfatische leukemie (CLL) zich in een laat stadium van klinische ontwikkeling en zal naar verwachting binnen de komende drie jaar goedkeuring van de FDA krijgen1.
Ondanks de ongekende resultaten van CAR T-celtherapie, wordt het wijdverbreide gebruik ervan beperkt door 1) onvoldoende in vivo CAR T-celuitbreiding of slechte handel naar tumorlocaties, wat leidt tot lagere percentages van duurzame respons12,13 en 2) de ontwikkeling van levensbedreigende bijwerkingen, waaronder cytokine release syndrome (CRS)14,15 . De kenmerken van CRS omvatten niet alleen immuunactivatie die resulteert in verhoogde niveaus van inflammatoire cytokines / chemokines, maar ook massale T-celproliferatie na CAR T-celinfusie15,16. De ontwikkeling van een gevalideerde strategie van klinische kwaliteit om CAR T-cellen in vivo in beeld te brengen, zou dus 1) CAR T-celtracking in realtime in vivo mogelijk maken om hun handel naar tumorlocaties te volgen en potentiële mechanismen van resistentie te ontdekken, en 2) monitoring van CAR T-celuitbreiding en mogelijk hun toxiciteiten voorspellen, zoals de ontwikkeling van CRS.
Klinische kenmerken van mild CRS zijn hoge koorts, vermoeidheid, hoofdpijn, huiduitslag, diarree, artralgie, myalgie en malaise. Bij ernstiger CRS kunnen patiënten tachycardie/hypotensie, capillair lek, hartdisfunctie, nier-/leverfalen en gedissemineerde intravasculaire stolling ontwikkelen17,18. Over het algemeen is aangetoond dat de mate van verhoging van cytokines, waaronder interferon-gamma, granulocyt-macrofaag koloniestimulerende factor, interleukine (IL)-10 en IL-6, correleert met de ernst van klinische symptomen17,19. De uitgebreide toepassing van "real-time" serumcytokinemonitoring om CRS te voorspellen is echter moeilijk vanwege de hoge kosten en beperkte beschikbaarheid. Om de gunstige eigenschappen van CAR T-celtherapie te benutten, kan niet-invasieve beeldvorming van adoptieve T-cellen mogelijk worden gebruikt om de werkzaamheid, toxiciteit en terugval na CAR T-celinfusie te voorspellen.
Verschillende onderzoekers hebben strategieën ontwikkeld om op radionuclide gebaseerde beeldvorming te gebruiken met positronemissietomografie (PET) of single-photon emission computed tomography (SPECT), die een hoge resolutie en hoge gevoeligheid biedt20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30 voor de in vivo visualisatie en monitoring van CAR T-celhandel. Onder die op radionucliden gebaseerde beeldvormingsstrategieën is de natriumjodidesymporter (NIS) ontwikkeld als een gevoelige modaliteit voor beeldcellen en virussen met behulp van PET-scans31,32. NIS+CAR T-celbeeldvorming met [18F]TFB-PET is een gevoelige, efficiënte en handige technologie om CAR T-celuitbreiding, -handel en -toxiciteit te beoordelen en te diagnosticeren30. Dit protocol beschrijft 1) de ontwikkeling van NIS+CAR T-cellen door middel van dubbele transductie met hoge werkzaamheid en 2) een methodologie voor het in beeld brengen van NIS+CAR T-cellen met [18F]TFB-PET-scan. BCMA-CAR T-cellen voor MM worden gebruikt als een proof-of-concept model om NIS te beschrijven als een reporter voor CAR T-celbeeldvorming. Deze methoden kunnen echter worden toegepast op elke andere CAR T-celtherapie.

<table><tbody><tr><td>22 Gauge needle</td><td>Covidien</td><td>8881250206</td><td></td></tr><tr><td>28 gauge insulin syringe</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>96 well plate</td><td>Corning</td><td>3595</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human (ETNL) NIS</td><td>Imanis</td><td>REA009</td><td>ETNL-antilichaam bindt het cytosolische C-terminus van NIS</td></tr><tr><td>Anti-human BCMA, clone 19F2, PE-Cy7</td><td>BioLegend</td><td>357507</td><td>Flow-antilichaam</td></tr><tr><td>Anti-human CD45, clone HI30, BV421</td><td>BioLegend</td><td>304032</td><td>Flow-antilichaam</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD45, clone 30-F11, APC-Cy7</td><td>BioLegend</td><td>103116</td><td>Flow-antilichaam</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG</td><td>R&amp;D</td><td>F0110</td><td>Secundair antilichaam voor NIS-kleuring</td></tr><tr><td>BCMA-CAR construct, tweede generatie</td><td>IDT, Coralville, IA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD&nbsp;Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td><td>BD</td><td>554714</td><td></td></tr><tr><td>CD3 Monoclonal Antibody (OKT3), PE, eBioscience</td><td>Invitrogen</td><td>12-0037-42</td><td></td></tr><tr><td>CTS (Cell Therapy Systems) Dynabeads CD3/CD28</td><td>Gibco</td><td>40203D</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX System&nbsp; B5-R3-V5</td><td>Beckman Coulter</td><td>C04652</td><td>flowcytometer</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>D2650-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Syringes with Luer-Lok Tips</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin, Potassium Salt</td><td>Gold Biotechnology</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (Dulbecco's phosphate-buffered saline)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads MPC-S (Magnetic Particle Concentrator)</td><td>Applied Biosystems</td><td>A13346</td><td></td></tr><tr><td>Easy 50 EasySep Magnet</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>18002</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Human T Cell Isolation Kit</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>17951</td><td>negatieve selectie magnetische kralen; 17951RF omvat tips en buffer</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Millipore Sigma</td><td>F8067</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td><td>Invitrogen</td><td>A-21235</td><td></td></tr><tr><td>Inveon Multiple Modality PET/CT scanner</td><td>Siemens Medical Solutions USA, Inc.</td><td>10506989 VFT 000 03</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane liquid</td><td>Piramal Critical Care</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina S5 Imaging System</td><td>PerkinElmer</td><td>CLS148588</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&reg; Spectrum In Vivo Imaging System</td><td>PerkinElmer</td><td>&nbsp;124262</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td><td>Invitrogen</td><td>L3000075</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td><td>Invitrogen</td><td>L34966</td><td></td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07851</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.22 uM, steriele</td><td>Thermo Scientific</td><td>450-0020</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.45 uM, steriele</td><td>Thermo Scientific</td><td>450-0045</td><td></td></tr><tr><td>NOD.Cg-Prkdcscid&nbsp;Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>Jackson laboratory</td><td>05557</td><td></td></tr><tr><td>OPM-2</td><td>DSMZ</td><td>CRL-3273</td><td>multipel myeloom cel lijn</td></tr><tr><td>pBMN(CMV-copGFP-Luc2-Puro)</td><td>Addgene</td><td>80389</td><td>lentivirale vector die luciferase-GFP codeert</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100x), Liquid</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>PMOD software</td><td>PMOD</td><td>PBAS en P3D</td><td></td></tr><tr><td>Pooled Human AB Serum Plasma Derived</td><td>Innovative Research</td><td>IPLA-SERAB-H-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Puromycin Dihydrochloride</td><td>MP Biomedicals, Inc.</td><td>0210055210</td><td></td></tr><tr><td>RoboSep-S</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>21000</td><td>Volledig geautomatiseerde celseparator</td></tr><tr><td>RPMI (Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium)</td><td>Gibco</td><td>21870-076</td><td></td></tr><tr><td>SepMate-50 (IVD)</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>85450</td><td>dichtheidsgradiënt scheidingsbuizen</td></tr><tr><td>Sodium Azide, 5% (w/v)</td><td>Ricca Chemical</td><td>7144.8-16</td><td></td></tr><tr><td>T175 flask</td><td>Corning</td><td>353112</td><td></td></tr><tr><td>Terrell (isoflurane, USP)</td><td>Piramal Critical Care Inc</td><td>66794-019-10</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Alcohol Prep</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td></td></tr><tr><td>X-VIVO 15 Serum-free Hematopoietic Cell Medium</td><td>Lonza</td><td>04-418Q</td><td></td></tr></tbody></table>

dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor t-cellen met [18f]tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

T-cellen die genetisch gemanipuleerd zijn om chimere antigeenreceptoren (CAR) tot expressie te brengen, hebben ongekende resultaten laten zien in cruciale klinische onderzoeken voor patiënten met B-cel maligniteiten of multipel myeloom (MM). Talrijke obstakels beperken echter de werkzaamheid en verbieden het wijdverbreide gebruik van CAR T-celtherapieën als gevolg van slechte handel en infiltratie in tumorlocaties en gebrek aan persistentie in vivo. Bovendien zijn levensbedreigende toxiciteiten, zoals cytokine release syndrome of neurotoxiciteit, grote zorgen. Efficiënte en gevoelige beeldvorming en tracking van CAR T-cellen maakt de evaluatie van T-celhandel, uitbreiding en in vivo karakterisering mogelijk en maakt de ontwikkeling van strategieën mogelijk om de huidige beperkingen van CAR T-celtherapie te overwinnen. Dit artikel beschrijft de methodologie voor het opnemen van de natriumjodidesymporter (NIS) in CAR T-cellen en voor CAR T-celbeeldvorming met behulp van [18F]tetrafluoroboraat-positronemissietomografie ([18F]TFB-PET) in preklinische modellen. De methoden die in dit protocol worden beschreven, kunnen worden toegepast op andere CAR-constructies en doelgenen naast de methoden die voor deze studie worden gebruikt.

Figuur 1 geeft de stappen weer voor het genereren van NIS+BCMA-CAR T-cellen. Isoleer pbmc's op dag 0 en isoleer vervolgens T-cellen door negatieve selectie. Stimuleer vervolgens T-cellen met anti-CD3/CD28-kralen. Op dag 1 transduceren T-cellen met zowel NIS- als BCMA-CAR-lentivirussen. Tel op dag 3, 4 en 5 T-cellen en voer met media om de concentratie aan te passen op 1,0 × 106 / ml. Voeg voor NIS-getransduceerde T-cellen 1 μg/ml puromycine toe om NIS+ -celle...

Dit protocol beschrijft de methodologie voor het niet-invasief volgen van T-cellen die genetisch gemanipuleerd zijn om chimere antigeenreceptoren in vivo tot expressie te brengen met een klinisch beschikbaar platform.

Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [18F]Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie

T cells genetically engineered to express chimeric antigen receptors (CAR) have shown unprecedented results in pivotal clinical trials for patients with B ...

Er is tot op heden geen klinisch gevalideerd chimere antigeenreceptor T-cel beeldvormingsplatform. De natriumjodidesymporter vertegenwoordigt een gevoelige en klinisch relevante verslaggever om Car T-cellen in beeld te brengen door PET-scan. TLP PET-beeldvorming van NIS CAR T-cel stelt onderzoekers in staat om niet-invasief geïnfundeerde cellen in vivo te volgen en heeft een potentieel om de werkzaamheid en toxiciteit van CAR T-celtherapie te voorspellen.Efficiënte beeldvorming van CAR T-cellen maakt de evaluatie van T-celhandel en -uitbreiding mogelijk en maakt de ontwikkeling van strategieën mogelijk om de beperkingen te overwinnen. De methode die in dit protocol wordt beschreven, is eenvoudig en kan worden toegepast op andere CAR-constructies dan die welke in deze studie worden getoond. Begin met de isolatie van perifere mononucleaire bloedcellen of PBMC's uit het bloedmonster met behulp van de standaard dichtheidsgradiënttechniek.Voeg hiervoor voorzichtig 15 milliliter dichtheidsgradiëntmedium toe aan een scheidingsbuis van 50 milliliter dichtheidsgradiënt om bubbelvorming te voorkomen. Om celvangst te voorkomen, verdunt u het bloedmonster met PBS met 2% FBS bij een één-op-één volumeverhouding en brengt u het verdunde bloed voorzichtig over op het medium met dichtheidsgradiënt zonder het raakvlak tussen de twee te verbreken. Centrifugeer vervolgens de scheidingsbuis op 1, 200 maal G gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.Verzamel het supernatant in een verse conische buis van 50 milliliter, was de cellen met PBS met 2% FBS door de buis tot 50 milliliter te vullen en de buis gedurende acht minuten bij kamertemperatuur op 300 maal G te centrifugeren. Zuig het supernatant op voordat u de gepelletiseerde cellen resuspendeert in 50 milliliter PBS met 2% FBS. Resuspend de gepelleteerde PBMC's in PBS met 2%FBS tot een concentratie van 50 maal 10 tot de zesde cel per milliliter.Herhaal de was in een verse tube van 50 milliliter. Tel het aantal cellen en centrifugeer de celsuspensie vervolgens gedurende acht minuten bij kamertemperatuur op 300 maal G. Breng voor T-celisolatie geïsoleerde PBMC's over naar een ronde onderbuis van 14 milliliter polystyreen.Gebruik vervolgens een negatieve selectie magnetische kralenkit om T-celisolatie uit te voeren door de PBMC's in negatieve selectie antilichaamcocktail in een volledig geautomatiseerde celscheider te plaatsen. Tel na T-celisolatie de cellen en kweek de cellen in T-cel expansiemedium of TCM in een concentratie van twee keer 10 tot de zesde cel per milliliter. Meng vervolgens de injectieflacon met de anti-CD3/CD28-kralen door te wervelen en pipetteer het vereiste volume kralen in een steriele microcentrifugebuis van 1,5 milliliter.Voor het wassen, resuspend de kralen in een milliliter TCM voordat u de buis gedurende één minuut op een magneet plaatst en het supernatant opzweept. Nadat u de buis uit de magneet hebt verwijderd, resuspendeert u de gewassen kralen in één milliliter TCM en herhaalt u de was twee keer. Resuspend de gewassen kralen in één milliliter TCM om ze over te brengen naar de T-cellencultuur, verdun vervolgens de T-celkraalsuspensie met TCM tot een concentratie van 1,0 maal 10 tot de zesde cel per milliliter voordat u deze overbrengt naar een weefselkweek behandelde zes-well plaat.Incubeer de putplaat bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Om vooruitgang te boeken met de transductie van lentivirussen, ontdooit u de bevroren lentivirussen in coating chimere antigeenreceptoren of natriumjodidesymporter bij vier graden Celsius. Na 24 tot 48 uur T-celstimulatie mengt u de T-cellen om de clusters te breken en voegt u het vers ontdooide lentivirus toe aan de cellen bij een veelvoud aan infecties van vijf.Incubeer de getransduceerde T-cellen bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Tel op dag drie, vier en vijf van incubatie de getransduceerde T-cellen en pas de celconcentratie aan tot 1,0 maal 10 tot de zesde cel per milliliter door verse voorverwarmde TCM toe te voegen. Voor NIS-getransduceerde T-cellen die het puromycineresistentiegen dragen, behandel de cellen met één microgram per milliliter puromycinedihydrochloride op dag drie, vier en vijf.Breek op dag zes de T-celclusters op en verwijder de anti-CD3/CD28-kralen uit de getransduceerde T-cellen door de plaat gedurende één minuut op een magneet te plaatsen. Plaats vervolgens de verzamelde cellen terug in de kweek in een concentratie van 1,0 maal 10 tot de zesde cel per milliliter. Was een aliquot van de T-celcultuur met 50.000 cellen met flowbuffer en resuspend de cellen met 50 microliter flowbuffer.Voor het detecteren van CAR-expressie, kleur de T-cellen met één microliter geitenantilichaam tegen muizen. Om de dode cellen uit te sluiten, voegt u 0,3 microliter LIVE/DEAD Aqua toe. Incubeer de gekleurde cellen in het donker bij kamertemperatuur.Was de cellen na 15 minuten met 150 microliter flowbuffer op 650 maal G gedurende drie minuten bij vier graden Celsius. Om de gekleurde cellen te fixeren en te permeabiliseren, incubeer de cellen met 100 microliter fixatiemedium gedurende 20 minuten bij vier graden Celsius. Was de cellen vervolgens tweemaal met 100 microliter van een buffer met daarin een celpermeabilisatiemiddel zoals saponine en centrifuge.Na het wassen resuspend de gepermeabiliseerde cellen in 50 microliter van een permeabiliserende buffer. Voeg vervolgens 0,3 nanogram anti-humaan ETNL NIS-antilichaam toe en incubeer bij vier graden Celsius. Was de cellen na een uur incubatie door 150 microliter flowbuffer en centrifuge toe te voegen, zoals aangetoond.Incubeer vervolgens de cellen met 50 microliter flowbuffer met 2,5 microliter anti-konijn secundair antilichaam gedurende 30 minuten bij vier graden Celsius. Na het wassen van de T-cellen zoals aangetoond, resuspend de cellen in 200 microliter flowbuffer om flowcytometrie uit te voeren. Bepaal vervolgens de transductie-efficiëntie van de cellen.Tel en draai op dag acht de T-cellen gedurende acht minuten bij vier graden Celsius op 300 maal G voordat de celkorrel opnieuw wordt opgeschort met een vriesmedium in een concentratie van 10 keer 10 tot de zesde cel per milliliter. Breng één milliliter van de celsuspensie over naar elke gelabelde cryoflacon om gedurende 48 uur bij een vriezer van min 80 graden Celsius te bewaren. Breng na 48 uur de T-cellen over in vloeibare stikstof.Bereid de muizen geïnjecteerd met NIS-positieve BCMA CAR T-cellen voor op de PET / CT-beeldvorming door de muizen te wegen en metalen oormerken te verwijderen. Injecteer vervolgens 9,25 megabecquerel vers bereid F18-tetrafluorboraat intraveneus in de muis via staartaderinjectie. Na 45 minuten opnameperiode, ga verder met het verkrijgen van statische PET-beelden van een verdoofde muis gedurende 15 minuten, gevolgd door CT-beeldacquisitie gedurende vijf minuten met 360 graden rotatie en 180 projecties.In deze representatieve analyse genereerde co-transductie van twee virussen in T-cellen NIS-positieve BCMA CAR T-cellen waar meer dan 90% van de cellen NIS-positief waren. De analyse van T-celgroeikinetiek van nul tot acht dagen onthulde dat de integratie van BCMA CAR en NIS geen significante invloed had op T-celexpansie in vergelijking met de niet-getransformeerde cellen. In de flowcytometrische analyse van OPM-2 vertegenwoordigden cellen getransduceerd met lentivirus de GFP-expressie na behandeling met puromycine.De muizen die BCMA-positieve luciferasepositieve OPM-2-cellen kregen, werden onderworpen aan bioluminescentiebeeldvorming om de engraftment van OPM-2-cellen te bevestigen. PET-beeldvorming van de met F18 tetrafluorboraat toegediende muis toonde NIS-positieve BCMA CAR T-celverdeling in de verschillende organen en het beenmerg. Bovendien vertoonden de beenmergcellen die uit de muis werden geoogst de engraftment van OPM-2-cellen en de afgifte van de NIS-positieve BCMA CAR T-cellen aan het beenmerg.Voor hoogwaardige beeldvorming van geïnfundeerde CAR T-cellen is het belangrijk om de stappen van het NIS CAR T-cell generation protocol te volgen en de aanwezigheid van dubbele NIS- en CAR-positieve fracties te bevestigen.

dynamic-imaging-chimeric-antigen-receptor-t-cells-with

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

De compartimentering van eiwitten, hetzij binnen het plasma membraan of in de intracellulaire locaties is een regulerend mechanisme die sterk kunnen beïnvloeden signalering resultaten, vandaar dat te begrijpen signalering is het van belang het bestuderen van de ruimtelijke en temporele gedrag van de betrokken eiwitten. We beschrijven hier een TIRF microscopie gebaseerde systeem om signaaltransductie in T-cellen te bestuderen, maar is breed toepasbaar.

Een TIRF Microscopie Techniek voor Real-time, gelijktijdige beeldvorming van de TCR en de bijbehorende signaaleiwitten

Diffuse fluorescentie tomografie biedt een relatief goedkope en potentieel hoge hele benadering van de...

Computed Tomography-begeleide tijd-domein Diffuus fluorescentie tomografie in kleine dieren voor het lokaliseren van Cancer Biomarkers

De bioorthogonale inverse elektrone-vraag Diels-Alder cycloadditie is gebruikt om een effectieve en modulaire pretargeted PET-beeldvormingsstrategie voor kanker te creëren. In dit protocol worden de stappen van deze methodologie beschreven in de context van een modelsysteem dat gebruikmaakt van het op colorectale kanker gerichte antilichaam huA33 en een 64Cu-gelabelde radioligand.

Het benutten van de Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloadditiereacties voor Pretargeted PET Imaging

We beschrijven een protocol voor hybride beeldvorming, dat fluorescentie-gemedieerde tomografie (FMT) combineert met micro-computertomografie (µCT). Na fusie en reconstructie voeren we interactieve orgaansegmentatie uit om kwantitatieve metingen van de fluorescentieverdeling te extraheren.

Hybride μCT-FMT beeldvorming en beeldanalyse

We demonstreren de semi-geautomatiseerde radiochemische synthese van [ 18 F] 3F4AP en kwaliteitscontroles.

Geautomatiseerde Radiochemische Synthese van [<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP: Een nieuwe PET Tracer voor het imiteren van demyeliniserende ziekten

Positron-emissie tomografie (PET) imaging sites die bij meerdere vroege proeven van het klinisch onderzoek betrokken zijn moet robuust en veelzijdig radiotracer productie mogelijkheden. Met behulp van de radiotracer [18F] Clofarabine als voorbeeld illustreren we hoe te automatiseren de synthese van een radiotracer met behulp van een flexibele, cassette gebaseerde radiosynthesizer en valideren van de synthese voor klinisch gebruik.

Automatisering van een Positron-emissie tomografie (PET) Radiotracer synthese Protocol voor klinische productie

De synthese van fluor-18 (18F) gelabelde radiofarmaceutica voor positron emissie tomografie vereist meestal maanden ervaring. Wanneer de siliconen-fluoride acceptor (SiFA) in een radio Tracer wordt verwerkt, is een eenvoudig 18F-labeling protocol mogelijk dat onafhankelijk is van kostbare apparatuur en voorbereidende training, terwijl de precursor hoeveelheid die nodig is en mildere reactie condities worden verminderd.

18 F-labeling van Radiotracers Functionaliseerde met een Siliciumfluoride acceptor (SiFA) voor positron emissie tomografie

Dit artikel beschrijft de methodologie voor het radioactief labelen van een mensspecifiek anti-CD19 monoklonaal antilichaam en hoe het kan worden gebruikt om B-cellen in het centrale zenuwstelsel en perifere weefsels van een muismodel van multiple sclerose te kwantificeren met behulp van in vivo PET-beeldvorming, ex vivo gammatelling en autoradiografiebenaderingen.

Beeldvorming van CD19+ B-cellen in een experimenteel muismodel met auto-immuun encefalomyelitis met behulp van positronemissietomografie

Dit artikel beschrijft de radiosynthese, formulering, kwaliteitscontrole van een nieuwe radioactief gelabelde sonde (d.w.z. 68Ga-gelabelde nanobody NM-02) en het gebruik ervan voor PET/CT-beeldvorming bij kleine dieren in een xenotransplantaatmodel.

Radiosynthese, kwaliteitscontrole en positronemissietomografie bij kleine dieren Beeldvorming van 68Ga-gelabelde nanomoleculen

Dit onderzoek beschrijft het geautomatiseerde proces voor de productie van [68Ga]Ga-3BP-3940 met de GAIA V2-synthesizer, voor PET-beeldvorming van fibroblastactiveringseiwit. Ook worden de resultaten gepresenteerd van kwaliteitscontroletests die zijn uitgevoerd op drie testbatches.

Geautomatiseerde bereiding van [68Ga]Ga-3BP-3940 op een synthesemodule voor PET-beeldvorming van de tumormicro-omgeving

Leer dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [18F]tetrafluoroboraat PET/CT. Deze methode maakt niet-invasieve tracking van CAR T-celtrafficking en expansie in vivo mogelijk voor immunotherapieonderzoek.

Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met 18F Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie (Video) | JoVE Journal

Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [^18F]Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie

Meer video's verkennen