Name: Gedeeltelijke hepatectomie bij volwassen zebravissen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Leer een reproduceerbare methode voor partiële hepatectomie bij volwassen zebravissen om leverregeneratie te bestuderen. Dit protocol maakt onderzoek naar moleculaire mechanismen en genetische factoren mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

I.M.O. wordt ondersteund door de NIAAA (F32AA027135). W.G. wordt ondersteund door R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 en het Claudia Adams Barr Program for Excellence in Cancer Research. W.G. is een Pew Scholar in Biomedical Sciences.

Zebravissen werden gefokt volgens standaardprocedures. Experimenten werden goedgekeurd door het Brigham and Women's Hospital's Institutional Animal Care and Use Committee (2016N000405). Volwassen zebravissen werden 24 uur gevast voor het begin van het protocol. Systeemwater verwijst naar het water in zebravishuistanks in de aquatische faciliteit.
1. Voorbereiding en anesthesie
<ol><li>Bereid 0,016% Tricaine-oplossing in systeemwater. LET OP: Tricaine is irriterend als het in contact komt met de ogen, huid of luchtwegen.</li>
	<li>Bereid een spons voor om verdoofde zebravissen vast te houden tijdens het dissectieprotocol. Snijd een volle spons in vieren. Verwijder met een scheermesje een dun sponswigje dat parallel loopt aan de lange as van het sponskwart.<ol>
<li>De spleet moet lang genoeg zijn voor een volwassen vis (dit zal variëren tussen verschillende groottes van vissen). Voor een volwassen vis met een lengte van 35 mm moet de lengte van de spleet bijvoorbeeld 20 mm zijn. Het hoofd en het lichaam worden goed vastgehouden in de spons, maar de staart loopt langs de rand van de spons (Figuur 1B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Week de spons in 0,016% Tricaine-oplossing.</li>
	<li>Plaats volwassen zebravissen (mannelijk of vrouwelijk) in 625 ml 0,016% Tricaine-oplossing.</li>
	<li>Incubeer gedurende 6 minuten of totdat de vis niet reageert om aan te raken.</li>
	<li>Verwijder met een tang de vis voorzichtig uit de Tricainetank en plaats de visventerale kant omhoog in de groef van de spons (afbeelding 1A - B).</li>
	<li>Plaats de spons onder een ontleedmicroscoop met top-down verlichting.</li>
</ol>2. Chirurgie
<ol><li>Knijp met behulp van een fijne tang de huid en schubben mediair, net achter het hart (figuur 1B).</li>
	<li>Maak met een veerbelaste schaar een snede onder de tang om een gat in de lichaamsholte te maken (figuur 1C - D). Zorg ervoor dat u het hart of een groot bloedvat niet verwondt, omdat dit zal leiden tot verhoogde mortaliteit.</li>
	<li>Maak met behulp van een veerbelaste schaar een incisie van 3-4 mm langs de buik, die posterieure verwerking tot de incisie bij de bekkenvinnen aankomt (Figuur 1D - E). Op dit punt kan de ventrale kwab van de lever zichtbaar zijn door de incisie.</li>
	<li>Knijp met één hand in de zijkanten van de spons om de viscerale organen uit de lichaamsholte te dwingen. De ventrale kwab van de lever zal zichtbaar zijn op de top van de darm (Figuren 1F,2A-B). De lever zal verschijnen als een roze of oranje structuur verspreid over de goudbruine darm. Dieren die zijn aangewezen als schijncontroles worden op dit punt teruggevonden.</li>
	<li>Knijp in de fijne tang zodat de twee tanden elkaar raken. Terwijl u druk op de spons houdt, schuift u de tanden van de fijne tang tussen de lever en de darm (figuur 1G). Zorg ervoor dat u de darm niet doorboort, omdat dit zal leiden tot verhoogde mortaliteit.</li>
	<li>Ontspan langzaam de druk op de tang, zodat de tanden van elkaar af bewegen (figuur 1H). Deze glijdende werking doorbreekt de talrijke poortaderaanhechtingen tussen de ventrale kwab en de darm (figuur 2B), en is noodzakelijk om de ventrale kwab netjes te verwijderen. Herhaal dit proces totdat alle portalverbindingen tussen de lever en darm zijn verbroken.</li>
	<li>Pel de ventrale kwab terug uit de darm met behulp van een fijne tang en snijd de ventrale kwab vrij van de rest van de lever (figuur 1I).</li>
	<li>Deze procedure resulteert in een derde gedeeltelijke hepatectomie (figuur 1J).</li>
</ol>3. Herstel
<ol><li>Verwijder de vis voorzichtig uit de spons en plaats deze in een tank met systeemwater.</li>
	<li>Pipetsysteem water over de kieuwen gedurende een paar minuten totdat de vis op zichzelf zwemt (Figuur 1K).</li>
	<li>Houd de vis 2-4 uur in de gaten voordat u ze weer op het systeem plaatst. Voer de vis na de operatie niet gedurende 24 uur.</li>
	<li>Controleer vis dagelijks gedurende de duur van het experiment.</li>
	<li>Na verloop van tijd zal de incisie in de lichaamswand op natuurlijke wijze genezen zonder dat hechtingen nodig zijn(figuur 1L,2C).</li>
</ol>4. Ventrale kwab tot darmlengte analyse
<ol><li>Euthanaseer alle dieren die bestemd zijn voor analyse in ijswater gedurende 10 minuten totdat alle operculaire bewegingen stoppen.</li>
	<li>Haal de vis uit het ijswater en plaats hem ventrale kant omhoog in de groef van een spons.</li>
	<li>Maak met behulp van een veerbelaste schaar een incisie in de ventrale lichaamswand in de voorste-achterste positie van het hart. Maak dan nog twee incisies die langs de voorste-achterste as lopen vanaf de eerste incisie helemaal tot aan de bekkenvinnen. (Figuur 2A).</li>
	<li>Pel de huid en spieren terug om de viscerale organen te onthullen (figuur 2A).</li>
	<li>Verkrijg heldere veld- en fluorescerende beelden van de viscerale organen met behulp van een epifluorescentiemicroscoop. Dit gezichtsveld omvat het gebied waar de ventrale kwab werd gereseceerd. Omdat dieren vóór de analyse worden geëuthanaseerd, sluit dit soort analyse langdurige beeldvorming van dezelfde vis uit.</li>
</ol>5. Analyse van de verhouding tussen lever en lichaamsgewicht
<ol><li>Euthanaseer alle dieren die bestemd zijn voor analyse in ijswater gedurende 10 minuten totdat alle operculaire bewegingen stoppen.</li>
	<li>Plaats vis in een conische buis van 50 ml.</li>
	<li>Voeg 25 ml 4% paraformaldehyde in 1x PBS en 0,3% Tween toe aan de buis. LET OP: Formaldehyde is giftig en oplossingen die formaldehyde bevatten, moeten altijd in een chemische kap worden verwerkt.</li>
	<li>Nutate gedurende 48 uur bij 4 °C.</li>
	<li>Voer vier wasbeurten van 10 minuten uit in 1x PBS en 0,3% Tween.</li>
	<li>Haal vis met tang en vlek droog op een papieren handdoek.</li>
	<li>Noteer het gewicht van de hele vis.</li>
	<li>Maak met behulp van een veerbelaste schaar een incisie in de ventrale lichaamswand in de voorste-achterste positie van het hart. Maak vervolgens nog twee incisies die langs de voorste-achterste as lopen vanaf de eerste incisie helemaal tot aan de bekkenvinnen. (Figuur 2A).</li>
	<li>Pel de huid en spieren terug om de viscerale organen te onthullen (figuur 2A).</li>
	<li>Verkrijg heldere veldbeelden van de lever met behulp van een epifluorescentiemicroscoop.</li>
	<li>Ontleed de lever en plaats de stukjes lever op een weegboot.</li>
	<li>Noteer het gewicht van de lever.</li>
</ol>

<ol><li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+liver+regeneration+and+growth+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Principles of liver regeneration and growth homeostasis.</a> Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).</li>
<li>Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+it+new+again%3A+insight+into+liver+development%2C+regeneration%2C+and+disease+from+zebrafish+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research.</a> Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).</li>
<li>Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+growth+in+the+embryo+and+during+liver+regeneration+in+zebrafish+requires+the+cell+cycle+regulator+uhrf1%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).</li>
<li>Goessling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APC+mutant+zebrafish+uncover+a+changing+temporal+requirement+for+wnt+signaling+in+liver+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development.</a> Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).</li>
<li>Dovey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topoisomerase+II+is+required+for+embryonic+development+and+liver+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish.</a> Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).</li>
<li>Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+growth+mechanisms+regulated+by+BMP+and+FGF+signaling+mediate+liver+regeneration+in+zebrafish+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy.</a> The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).</li>
<li>Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Def+activates+p53-dependent+TGF%CE%B2+signalling+and+causes+scar+formation+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy.</a> PLoS One. 9, (2014).</li>
<li>Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+characterization+of+the+dorsal+lobes+after+hepatectomy+of+the+ventral+lobe+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish.</a> BMC Genomics. 16, 979(2015).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Journal of Cellular Physiology. 213, 286-300 (2007).</li>
<li>Grisham, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+principles+of+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22The+Liver%3A+Biology+and+Pathobiology%3A+Fifth+Edition%22%5BJournal%5D)">Organizational principles of the liver.</a> The Liver: Biology and Pathobiology: Fifth Edition. , 1-15 (2009).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

De anatomische verschillen tussen zebravissen en zoogdiermodellen voor leverregeneratie vormen unieke uitdagingen voor leverresectie. De lever bij zebravissen bevindt zich in de nabijheid van het hart en de darm; onbedoeld beschadigen van beide organen leidt tot verhoogde mortaliteit. De zebravislever is niet ingekapseld, waardoor het moeilijker is om van de darm te scheiden. De lever ontvangt voedingsrijk bloed uit de darm via poortaders. Bij zoogdieren komen aders die de darm verlaten samen op een primaire poortader di...

Onder de vaste organen bij mensen is de lever het enige orgaan dat in staat is tot regeneratie1. Dit is van cruciaal belang, omdat de lever een essentieel orgaan is, verantwoordelijk voor belangrijke metabolische functies, energieopslag, bloedontgifting, afscheiding van plasma-eiwitten en galproductie2. Hepatocyten die verloren gaan als gevolg van toxische of inflammatoire schade worden voornamelijk vervangen door deling van de resterende hepatocyten1. Een klassiek experimenteel model voor het bestuderen van leverregeneratie is gedeeltelijke hepatectomie, waarbij individuele kwabben van de lever worden verwijderd, waardoor de resterende kwabben intact blijven3. Deze procedure werd aanvankelijk ontwikkeld bij ratten, waarbij ongeveer tweederde van de levermassa wordt verwijderd. Na gedeeltelijke hepatectomie bij zoogdieren vindt compenserende regeneratie plaats in de resterende kwabben totdat de lever zijn oorspronkelijke massa herstelt. Met name de zoogdierlever vervangt de ontbrekende kwabben niet.
Zebravis (Danio rerio) vertegenwoordigt een tracteerbaar model voor het bestuderen van volwassen orgaanregeneratie4. De zebravislever, hoewel structureel verschillend van de zoogdierlever, bestaat uit dezelfde celtypen en vervult dezelfde functie als bij zoogdieren2. Het bestaat uit drie lobben, met twee dorsale lobben en een enkele ventrale kwab die langs de darm zijn afgeplat. Gedeeltelijke hepatectomie is eerder uitgevoerd bij zebravissen, met tegenstrijdige rekeningen over de precieze wijze van regeneratie. Meestal wordt een derde gedeeltelijke hepatectomie uitgevoerd door verwijdering van de hele ventrale kwab. Eerste rapporten gaven aan dat na verwijdering van de ventrale kwab, het volledig werd geregenereerd binnen een week5,6,7, wat suggereert dat in tegenstelling tot de zoogdierlever, de zebravislever in staat is tot epimorfe regeneratie. Latere studies toonden aan dat verwijdering van de ventrale kwab resulteerde in compenserende regeneratie in de dorsale kwabben, in plaats van de regeneratie van de ontbrekende ventrale kwab, en uiteindelijk het herstel van levermassa binnen een week8,9. Transcriptomische profilering van de dorsale kwabben na resectie van de ventrale kwab bracht significante veranderingen aan het licht die verband houden met compenserende regeneratie10. Gezien het feit dat de wijze van leverregeneratie kan variëren met de omvang van de verwonding8, speculeerden we dat de verschillen in resultaten te wijten kunnen zijn aan technische variatie in het partiële hepatectomieprotocol tussen onderzoeksgroepen.
Dit protocol beschrijft een procedure voor het uitvoeren van een derde gedeeltelijke hepatectomie op volwassen zebravissen door het verwijderen van de ventrale kwab. Deze techniek zal waardevol zijn voor het beoordelen van mechanismen van leverregeneratie.

<table><tbody><tr><td>16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15700</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile</td><td>Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance</td><td>Bay State Scale &amp; Systems, INC.</td><td>WL-104-1051</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72997-07</td><td></td></tr><tr><td>Epifluorescence microscope</td><td>Zeiss</td><td>Discovery.V8</td><td></td></tr><tr><td>Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge</td><td>Amazon</td><td>B07CBSM53Z</td><td></td></tr><tr><td>PBS10X Liquid Conc 4L</td><td>EMD Millipore</td><td>6505-4L</td><td></td></tr><tr><td>Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight</td><td>Biomedical Research Instruments</td><td>11-1020</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine methanesulfonate</td><td>Syndel</td><td>TRIC-M-GR-0010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20, Fisher BioReagents</td><td>Fischer Scientific</td><td>BP337-500</td><td></td></tr></tbody></table>

gedeeltelijke hepatectomie bij volwassen zebravissen

Partial Hepatectomy in Adult Zebrafish

Leverfalen is een van de belangrijkste doodsoorzaken wereldwijd, en de sterfte aan chronische leverziekte neemt sterk toe in de Verenigde Staten. Gezonde levers zijn in staat om te regenereren van toxische schade, maar bij gevorderde leverziekte is het natuurlijke vermogen van de lever om te regenereren aangetast. Zebravissen zijn ontstaan als een krachtig experimenteel systeem voor het bestuderen van regeneratie. Ze zijn een ideaal model voor het bestuderen van leverregeneratie van gedeeltelijke hepatectomie, een procedure met directe klinische relevantie waarbij een deel van de lever chirurgisch wordt verwijderd, waardoor de rest intact blijft. Er is geen standaardprotocol voor gedeeltelijke hepatectomie; eerdere studies met dit model hebben iets verschillende protocollen gebruikt en ongelijksoortige resultaten gerapporteerd. Hier beschreven is een efficiënt, reproduceerbaar protocol voor het uitvoeren van een gedeeltelijke hepatectomie bij volwassen zebravissen. We gebruiken deze techniek om aan te tonen dat zebravissen in staat zijn tot epimorfe regeneratie van de gereseceerde kwab. Dit protocol kan worden gebruikt om de mechanismen die nodig zijn voor leverregeneratie bij zebravissen verder te ondervragen.

Om het regeneratieve potentieel van de volwassen zebravislever te onderzoeken, voerden we gedeeltelijke hepatectomie (PHX) uit bij volwassen zebravissen. Over het algemeen werden grote volwassenen (30-40 mm lang) geselecteerd, variërend van 1,5-2,5 jaar oud. Binnen individuele experimenten werden dieren uit dezelfde tank geselecteerd en waren ze qua leeftijd en grootte op elkaar afgestemd. Als een geschikte controle maakten we gebruik van schijnoperaties waarbij het dier zowel verdoofd was als een grote incisie kreeg in ...

Dit protocol beschrijft de procedure voor het verwijderen van de ventrale kwab van de lever bij volwassen zebravissen om de studie van leverregeneratie mogelijk te maken.

Gedeeltelijke hepatectomie bij volwassen zebravissen

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy ...

Dit protocol stelt onderzoekers in staat om gebruik te maken van beschikbare chemische en genetische hulpmiddelen om de mechanismen van leverregeneratie bij zebravissen te bestuderen. Gedeeltelijke hepatectomie maakt de nauwkeurige verwijdering van weefsel mogelijk om leverregeneratie te stimuleren zonder de lichaamsbrede effecten van toxisch leverletsel. Alleen door de moleculaire en cellulaire mechanismen van leverregeneratie te begrijpen, kunnen we nieuwe therapieën ontwerpen om patiënten met gevorderde leverziekte te behandelen.Verwijder om te beginnen de vis uit de Tricaine-tank met een tang en sluit ze in de groef van een door Tricaine doordrenkte spons met de ventrale kant naar boven. Plaats de spons vervolgens onder een ontleedmicroscoop met top-down verlichting. Knijp de huid en schubben net achter het hart met fijne tang en maak een gat in de lichaamsholte door een snee onder de tang te maken met de veerbelaste schaar.Draai de spons en maak een incisie van drie tot vier millimeter langs de buik door posteriaal naar de bekkenvinnen te snijden. Draai vervolgens de spons terug. Knijp met één hand in de zijkanten van de spons om de viscerale organen uit de lichaamsholte te dw

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Transplantatie van Whole nier Marrow in Adult zebravis

De zebravis nier is de thuisbasis van zowel de nier-en hematopoietische volwassen stamcellen / progenitorcellen, en vormt een uitstekende gelegenheid om deze celtypen en hun nakomelingen studie in een gewerveld modelorganisme. Hier tonen we een gedetailleerde dissectie procedure die de onderzoeker in staat stelt te identificeren en chirurgisch te verwijderen van de volwassen zebravissen nieren, die kunnen worden gebruikt voor toepassingen zoals celisolatie, transplantatie, en expressie studies...

Dissectie van de Adult zebravis Kidney

Het artikel beschrijft gerichte leverablatie, een methode voor het induceren van hepatocytdood met metronidazol in transgene zebravislarven. Het monsterprotocol beschrijft het proces voor het genereren, manipuleren en beoordelen van gerichte leverablatie bij zebravissen.

Gerichte leverablatie: inducerende hepatocytdood met metronidazol in transgene zebravislarven

Het gebruik van zebravissen voor cardiovasculair onderzoek breidt zich uit naar onderzoek naar volwassen harten. Voor deze toepassingen is snelle en eenvoudige isolatie van hartweefsels essentieel om postmortale veranderingen te voorkomen en om een voldoende aantal monsters te verkrijgen. Hier beschrijven we een snelle en reproduceerbare methode voor het dissecteren van harten van volwassen zebravissen.

Herstel van de Adult zebravis Harten voor High-throughput Toepassingen

Om de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de door de galgangen gestuurde leverregeneratie bij zebravis te helpen beoordelen, hebben we een leverbeschadigingsmodel opgesteld waarin de nitroreductase-expresserende hepatocyten genetisch worden afgebroken na behandeling met metronidazol. In dit protocol beschrijven we hoe we op bekwame wijze hepatocytenafbraak en door galgangen gestuurde leverregeneratie kunnen manipuleren, bewaken en analyseren.

Hepatocyt-specifieke Ablation in zebravis-Biliary gedreven leverregeneratie Studie

Aanhoudende fibrose met afzetting van overmatige extracellulaire matrix-eiwitten leidt tot cirrose. Alcoholmisbruik is een van de belangrijkste oorzaken van ernstige leverziekten. We hebben een ethanol-geïnduceerde zebravis model van een fibrotische lever opgezet om de mechanismen en strategieën van het bevorderen van hepatocytenregeneratie bij alcohol-geïnduceerde schade te bestuderen.

Ontwikkeling van een ethanol-geïnduceerde fibrotische lever Model in zebravis om te studeren Progenitor Cell-gemedieerde Hepatocyt Regeneration

Dit protocol beschrijft histologische analyses van de levers van zebravislarven die 24 uur met 2% ethanol zijn behandeld. Een dergelijke acute ethanolbehandeling resulteert in hepatische steatosis en zwelling van de hepatische vasculatuur.

Histologische analyses van acute alcoholische leverbeschadiging bij zebravis

Het blijft een grote uitdaging om voorwaardelijke gen-knock-out of effectief gen-knockdown in volwassen zebrafish organen. Wij rapporteren hier een protocol voor presterende nanoparticle-gemedieerde siRNA gen-zwijgen in volwassen zebrafish hart, waardoor een nieuwe methode van het verlies-van-functie voor het bestuderen van volwassen organen in zebrafish en andere modelorganismen.

Nanoparticle-gemedieerde siRNA Gene-zwijgen in volwassen Zebrafish hart

Hier demonstreren we een methode voor het kwantificeren van levergrootte bij larve zebravissen, die een manier bieden om de effecten van genetische en farmacologische manipulaties op levergroei en ontwikkeling te beoordelen.

Kwantificerende levergrootte bij larvale zebravissen met behulp van Brightfield Microscopie

Hier presenteren we hoe we een niet-alcoholische leververvetting (NAFLD) -geassocieerd Hepatocellulair Carcinoom (HCC) zebravismodel kunnen genereren om de impact van cholesteroloverschot op de micro-omgeving van de lever en het immuuncellandschap te bestuderen.

Analyse van levermicro-omgeving tijdens vroege progressie van niet-alcoholische leververvetting-geassocieerd hepatocellulair carcinoom bij zebravissen

Een nieuwe intraperitoneale (IP) injectiemethode bij volwassen zebravissen wordt beschreven. Bij het hanteren van giftige stoffen zoals doxorubicine is deze procedure effectiever dan de twee eerder gerapporteerde IP-methoden. De techniek is zo ontworpen dat het gemakkelijk kan worden toegepast door onderzoekers met beperkte ervaring in het zebravismodel.

Een intraperitoneale injectietechniek bij volwassen zebravissen die lichaamsschade en bijbehorende sterfte minimaliseert

Leer een reproduceerbare methode voor partiële hepatectomie bij volwassen zebravissen om leverregeneratie te bestuderen. Dit protocol maakt onderzoek naar moleculaire mechanismen en genetische factoren mogelijk.

Gedeeltelijke hepatectomie bij volwassen zebravissen

Meer video's verkennen