Name: Orthotope transplantatie van de linkerlong in een juveniel varkensmodel voor ESLP (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Leer orthotope longtransplantatie bij juveniele varkens voor ESLP-onderzoek. Deze methode omvat chirurgische technieken en stabilisatie om geïsoleerde linkerlongfunctie te beoordelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek wordt gefinancierd in opdracht van de Stichting Academisch Ziekenhuis.

Alle procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van de Canadian Council on Animal Care en de gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. De protocollen zijn goedgekeurd door de institutionele dierenverzorgingscommissie van de Universiteit van Alberta. Dit protocol is toegepast bij vrouwelijke juveniele Yorkshire-varkens tussen 35-50 kg. Varkens zijn pathogeenvrije, voedselveilige exemplaren. Ze worden gekocht bij het Swine Research and Technology Centre in Edmonton, AB, Canada (https://srtc.ualberta.ca). Alle personen die betrokken waren bij ESLP-procedures hadden een goede bioveiligheidstraining gekregen.
1. Preoperatieve voorbereidingen en anesthesie
OPMERKING: Varkens worden voorafgaand aan de operatie een nacht vasten voor een maximale duur van 12 uur.
<ol><li>Dien intramusculaire injecties van ketamine (20 mg/kg) en atropine (0,05 mg/kg) toe als premedicatie voor het ontvangende varken in de operatiekamer.</li>
	<li>Plaats het varken op een verwarmde operatietafel om normothermie te behouden en ga verder met maskerinductie.</li>
	<li>Titreer het zuurstofdebiet op basis van het gewicht van het dier en het anesthesiesysteem. NOTITIE: De zuurstofstroom moet 20-40 ml/kg zijn.</li>
	<li>Dien isofluraan toe in een dosis van 4%-5% en verlaag tot 3% na 1-2 minuten.</li>
	<li>Evalueer de diepte van de anesthesie, zorg ervoor dat het varken geen terugtrekkingsreflex heeft als reactie op een schadelijke stimulus. Herhaal dit elke 5 minuten. OPMERKING: Als er een pijnreactie aanwezig is, verhoog dan het percentage toediening van isofluraan totdat de juiste diepte van anesthesie is bereikt. Zie stap 10 van dit hoofdstuk voor meer informatie over onderhoudsanalgesie met ketamine en hydromorfon. Er worden geen verlammingsmiddelen toegediend. Dit maakt het mogelijk om een ontwenningsreflex te beoordelen. Een neusknijp wordt gebruikt als een schadelijke stimulus.</li>
	<li>Intubeer het varken zodra de juiste diepte van de anesthesie is bevestigd. Gebruik een op maat gemaakte 10 inch, platte laryngoscoop en maat 9 of 10 endotracheale tubes voor varkens van 40-50 kg.</li>
	<li>Plaats een pulsoximetersonde op de tong (bij voorkeur) of oor en richt op een zuurstofverzadiging van meer dan 90%. NOTITIE: De temperatuur wordt bewaakt via een neussonde. Een verwarmingskussen wordt gebruikt om normothermie in stand te houden.</li>
	<li>Om de anesthesie te behouden, past u de zuurstofstroom (20-40 ml/kg) en de inhalatiegassnelheid (1%-3%) aan.</li>
	<li>Houd de instellingen van de ventilator op een ademhalingsfrequentie van 12-30 ademhalingen/min, TV van 6-10 ml/kg, PEEP van 5 cm H 2 O enpiekdruk van 20 cm H2O. NOTITIE: Een standaard overdrukventilator in ICU-stijl wordt gebruikt om een gesloten systeem voor anesthesie en beademing te creëren. Vitale functies worden continu gemonitord en geregistreerd met tussenpozen van 15 minuten. ABG's worden elke 15-60 minuten getrokken, afhankelijk van de stabiliteit van het dier. Hoewel tv's worden gericht op een snelheid van 10 ml/kg, wordt 6-8 ml/kg bereikt. Figuur 1 geeft een schematisch overzicht van de onderdrukventilatie (NPV)-ESLP voor het transplantatieprotocol dat in het lab wordt toegepast.</li>
	<li>Scheer, was en bereid de incisieplaats aseptisch voor met povidonjodium. OPMERKING: Na sedatie met ketamine/atropine omvat het analgetische regime toediening van 3 mg/kg ketamine IV q 1 uur (bereik 1-3 mg/kg afhankelijk van patiëntparameters) en hydromorfon 0,05 mg/kg IM q 2 uur via een perifeer ingebrachte IV-lijn in een oorader. Elke langere duur tussen de doses resulteert in een doorbraakpijnrespons, zoals een verhoogde hartslag en abnormale ademhalingspatronen / buikspierbewegingen.</li>
</ol>2. Inbrengen van centrale veneuze en arteriële lijnen
<ol><li>Voeg een centrale lijn in voor toediening van vloeistof en heparine. OPMERKING: De totale IV-vloeistoftoediening wordt berekend op 1 ml/kg/u en vloeistofbolussen worden PRN toegediend om een MAP >60 mmHg te behouden. De centrale lijn wordt ook gebruikt om steroïden, antibiotica, vasopressoren en inotropen toe te dienen. Zie figuur 2A voor de positionering van de lijn.<ol><li>Bereid de huid voor met een povidonjodiumoplossing en laat volledig drogen. Gebruik elektrocauterisatie om een incisie van 5-8 cm in de middellijn te maken, gecentreerd over de luchtpijp en craniaal uit te strekken vanaf de sternale inkeping.</li>
		<li>Verdeel de huid en het onderhuidse vet met behulp van cauterisatie.</li>
		<li>Verdeel het middellijnvlak tussen de bandspieren en verdeel vervolgens de bindweefsellagen om de linker of rechter halsslagader intravasculaire bundel lateraal van de luchtpijp te identificeren.</li>
		<li>Verkrijg proximale en distale controle van de halsader met behulp van zijden banden (maat 2-0) als vaatlussen.</li>
		<li>Bind de craniale omringende band vast en trek deze naar boven terug op de proximale band om de bloedstroom te regelen.</li>
		<li>Maak een kleine incisie in de ader met behulp van een Metzenbaum-schaar (zie Materiaaltabel) om plaats te bieden aan een centrale lijn met twee poorten en 7 Fr (~1/3 van de omtrek van het vat).</li>
		<li>Laat tegelijkertijd de spanning op de proximale vaatlus los, kanunneer de ader en bind vervolgens vast om de canule op een diepte van 10 cm in de ader vast te zetten.</li>
		<li>Spoel de lijn door met heparine, sluit aan op een IV-lijn van 0,9% normale zoutoplossing en dien vloeistof toe als het varken intravasculair uitgeput is door uitdroging. NOTITIE: Heparine vergrendelt alle ongebruikte poorten.</li>
		<li>Dien 500 mg methylprednison en 1 g cefazoline IV toe.</li>
	</ol></li>
	<li>Volg dezelfde technieken om de gemeenschappelijke halsslagader te cannuleren met behulp van een 7 Fr arteriële lijn voor nauwkeurig bloeddrukbeheer.</li>
</ol>3. Aanschaf van de linkerlong
<ol><li>Plaats het varken in een rechter laterale decubituspositie.</li>
	<li>Voer een linker anterolaterale thoracotomie uit (Figuur 2).<ol><li>Bereid de huid voor met een povidonjodiumoplossing en laat volledig drogen. Markeer de incisie in de thoracotomie (20 cm) met behulp van de volgende oriëntatiepunten: gebruik palpatie om de punt van het linkerschouderblad te identificeren; Identificeer op dezelfde manier het xiphoid-proces dat inferieur is aan het borstbeen met palpatie. Verbind de twee zoals weergegeven in afbeelding 2B.</li>
		<li>Injecteer in totaal 10 ml 0,25% bupivacaïne in de incisielijn en twee ribben boven en onder de incisie.</li>
		<li>Gebruik elektrocauterisatie om de huid, onderhuidse lagen en spierlagen te ontleden. De latissimus dorsi moet worden verdeeld. Identificeer de rib direct onder de incisie en schroei bovenop de rib om de intercostale spieren bloot te leggen en vermijd de intercostale neurovasculaire bundel.</li>
		<li>Gebruik een muggenhemostaat om de tussenribspieren direct boven de rib te doorboren en voel vervolgens met een vinger in de borst voor verklevingen. Duw de long weg met behulp van een Yankauer-zuignap of vinger (zie Materiaaltabel) terwijl u langs de bovenrand van de rib schroeit om de thoracotomie te verlengen.<ol><li>Verleng de thoracotomie naar voren tot 1 inch verwijderd van het borstbeen. Verleng de thoracotomie naar achteren naar de paraspinale spieren.</li>
		</ol></li>
		<li>Plaats een Cooley sternale retractor (zie Tabel met materialen) om de thoracotomie wijd (10 cm) te openen (Figuur 2C). Trek de long terug om de linker hemi-azygote ader bloot te leggen (Figuur 2D).</li>
		<li>Ontleed de linker hemiazygos-ader omtrek met een Metzenbaum-schaar en een fijne Lauer. Omring het vat met zijden banden en maak het vervolgens los en doorsnijd het (Figuur 2E). Houd een zijden stropdas om de proximale stomp voor extra controle. OPMERKING: Lauer is een haakse klem of een coeliakieklem die wordt gebruikt voor weefseldissectie.</li>
		<li>Ontleed de linker longslagader (PA) en linker longaders (PV). Omcirkel de aderen in zijden banden voor controle (Figuur 2F). OPMERKING: De superieure PV's zijn erg klein en worden gehecht aan hun vertakkingspunten of gemeenschappelijke stam, afhankelijk van de individuele anatomie. De linker bronchus van de hoofdstam bevindt zich diep in de PA en LA (linker atrium), dus af en toe kan deze niet gemakkelijk worden ontleed totdat de slagader en aders zijn vastgeklemd en doorgesneden (Figuur 2G).</li>
		<li>Dien 5000 eenheden heparine IV 5 minuten toe voordat u de PA vastklemt. OPMERKING: Heparine 5000 eenheden IV wordt ook 5 minuten toegediend voordat de PA wordt losgemaakt. Voor elk uur daarna worden 1000 eenheden intraveneuze heparine toegediend.</li>
		<li>Klem de PA (DeBakey-kruisklem), de linker inferieure longader (Satinsky-klem) en de linker bronchus (Spoon Potts-klem) afzonderlijk vast (zie Materiaaltabel). Verlaag het teugvolume tot 5 ml/kg zodra de linker bronchus is vastgeklemd.</li>
		<li>Doorsnijd de PA, linker inferieure longader en de linker bronchiën. Laat minimaal 0,5 cm tissue cuff over om te naaien. Verdeel het linker inferieure longligament en verwijder de linkerlong. OPMERKING: De linkerlong kan worden weggegooid of bewaard voor controlehistologie.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Beëindiging van ESLP, deling van de linkerlong en spoelen met elektrolytoplossing
<ol><li>Klem de beademingsslang vast bij maximale inspiratie, beëindig perfusie en beademing en koppel de longen los van het ESLP-apparaat.</li>
	<li>Weeg de longen om de hoeveelheid oedeemvorming te bepalen. OPMERKING: Oedeem is zwelling van het weefsel als gevolg van de ophoping van overtollig vocht.</li>
	<li>Neem een weefselbiopsie van de accessoirekwab, verdeel deze in drie gelijke stukken en plaats een stuk in elk van de volgende: optimale snijtemperatuur (OCT) gel, formaline en snap freeze in vloeibare stikstof. OPMERKING: Deze stap wordt meestal gevolgd in het lab van de auteur. De monsters worden vervolgens opgeslagen voor toekomstige analyse: OCT- en diepvriesmonsters worden bewaard in een vriezer van -80 °C en in formaline opgeslagen monsters worden in een goed afgesloten container geplaatst en bewaard in koelkasten van 4 °C. Details van het specifieke ESLP-protocol en de weefselanalyse worden elders gepubliceerd16.</li>
	<li>Verdeel de linker donorlong van de rechterlong. Laat 1 cm donor-PA, 1 cm donorbronchiën en een geschikte donor-LA-manchet (~0.5 cm omtrek) over om aan de LA van de ontvanger te naaien (Figuur 2H). Laat de linker inferieure PV en linker superieure PV's in continuïteit met de LA-wand van de donor om latere anastomosen te vergemakkelijken.</li>
	<li>Weeg de linkerlong.</li>
	<li>Maak de linker PA van de donor onbedoeld met behulp van een druppelzuignap die is aangesloten op een infuuslijn en spoel 500 ml extracellulaire, kaliumarme, op dextran gebaseerde elektrolytconserveringsoplossing antegrade door de longvasculatuur. Zet de canule tijdens het spoelen vast in de PA met een zijden band en laat los wanneer het spoelen is voltooid. OPMERKING: De genoemde stappen hebben betrekking op het specifieke ESLP-apparaat dat voor dit werk wordt gebruikt en zijn mogelijk niet direct van toepassing op andere apparaten.</li>
</ol>5. Linker longtransplantatie
<ol><li>Steek de donorlong in de borstkas van de ontvanger, te beginnen met de onderste kwab. Forceer de long niet op zijn plaats. NOTITIE: De onderste ribbenkast moet mogelijk omhoog worden getild om plaats te bieden aan de donorlong door het sternale oprolmechanisme te draaien. Idealiter is de ontvanger een paar kilo groter dan de donor om een maatmatch mogelijk te maken.</li>
	<li>Voer de bronchiale anastomose eerst uit met behulp van 4-0 prolene op een TF-naald (Figuur 2I). OPMERKING: Een lopende, end-to-end anastomose werkt goed. Knip overtollige lengte van de twee anastomose-uiteinden af voordat u gaat naaien om knikken door overtollig weefsel te voorkomen.</li>
	<li>Voer de LA-anastomose als tweede uit met 6-0 prolene op BV-1-naalden met behulp van een lopende, end-to-end anastomose. Nogmaals, snijd overtollig weefsel bij om knikken te voorkomen. OPMERKING: De LA is brokkelig en profiteert van de kleine BV-1-naald. Horizontale beten op de donor kunnen nodig zijn om voldoende weefsel te kopen en de niet-overeenkomende grootte te corrigeren die wordt veroorzaakt door het naaien van de donor-IPV en SPV aan de IPV/LA-opening van de ontvanger.</li>
	<li>Neem de SPV's van de donor op in de inferieure PV- en LA-anastomose om veneuze drainage van de linker bovenlongkwab mogelijk te maken (Figuur 2J). OPMERKING: De tak superieure longaders (SPV's) hebben een diameter van minder dan 0,5 cm. De gemeenschappelijke SPV-stam is variabel in lengte en is niet routinematig aanwezig, waardoor directe anastomose tussen de SPV's van de donor en de ontvanger een slechte optie is.</li>
	<li>Voltooi de PA-anastomose met 6-0 prolene op BV-1-naalden met behulp van een lopende, end-to-end anastomose. Nogmaals, snijd overtollig weefsel bij om knikken te voorkomen.</li>
	<li>Verwijder de bronchiale klem en verhoog de tv's tot 10 ml/kg.</li>
	<li>Bevestig de heparinisatie, dien een kaliumverschuiving toe (40 mg furosemide, 10 eenheden insuline, 100 ml 25% dextrose-oplossing), open de PA-klem gedeeltelijk, ontlucht en bind de PA-hechting vast. Laat de PA-klem na 10 minuten volledig los.</li>
	<li>Ontlucht ondertussen de LA, bind de hechtingen vast en verwijder de LA-klem.</li>
	<li>Neem een reperfusiebloedgas uit de centrale lijn en een reperfusieweefselbiopsie uit de linker middenkwab. OPMERKING: Om een weefselbiopsie te nemen, gebruikt u een zijden stropdas van maat 0 om een deel van 1 cm van de top van de middelste lob te omcirkelen, vast te binden om het weefsel te verstrikken en knipt u vervolgens het geïsoleerde gedeelte af met een Metzenbaum-schaar. Verdeel de biopsie in drie gelijke porties en beheer zoals eerder beschreven.</li>
	<li>Voer een bronchoscopie van de linker- en rechterlong uit om de bronchiale anastomose te beoordelen en secreties op te zuigen. Steek een bronchoscoop in de endotracheale tube met behulp van een adapteraansluiting.<ol><li>Sluit de scoop aan op zuigkracht. Schuif de bronchoscoop in de linker bronchiën. Inspecteer de bronchiale anastomose (Figuur 2N). Schuif de scoop langs de bronchiolen naar beneden en zuig eventuele vloeistof op. Herhaal aan de rechterkant. NOTITIE: Zorg ervoor dat de zuurstofverzadiging niet onder de 90% komt. Als de saturatie onder dit niveau daalt, verwijder dan de scoop en geef het varken een paar minuten ononderbroken ventilatie om te herstellen.</li>
	</ol></li>
	<li>Breng een kneedbare thoraxbuis van 20 Fr in (Figuur 2L), sluit de thoracotomie in drie lagen (Figuur 2M) en leg het varken op buik zodra de arteriële bloedgassen (ABG's) stabiel zijn (Figuur 2O).</li>
	<li>Houd het varken gedurende 4 uur in buikligging in de gaten. Voer elke 30 minuten een ABG-analyse uit. Dien elk uur na reperfusie 1000 eenheden heparine toe.<ol><li>Neem elk uur een bloedmonster van 10 ml voor centrifugatie en analyse van enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) van ontstekingsmarkers16. OPMERKING: Centrifugatieparameters worden later beschreven.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Geïsoleerde beoordeling van de linkerlong
<ol><li>Leg het varken op zijn rug en bereid het borstbeen opnieuw voor met povidonjodiumprep-oplossing. Voer een middellijnsternotomie uit voor de laatste geïsoleerde beoordeling van de linkerlong (Figuur 2P).</li>
	<li>Open het linker borstvlies met een Metzenbaum-schaar en neem een weefselbiopsie uit de linker onderkwab zoals eerder beschreven (OPMERKING bij stap 5.9).</li>
	<li>Open het borstvlies van de accessoirelob en ontleed de gemeenschappelijke ader met een Metzenbaum-schaar. LET OP: Deze wordt later vastgeklemd.</li>
	<li>Neem een bloedmonster van de LA-anastomose met behulp van een naald van 21 G. Richt de naald naar de linker longaders en weg van het gemeenschappelijke linker atrium of de romp van de accessoirekwab.</li>
	<li>Open het rechter borstvlies om ruimte te creëren voor de juiste hilarische klemmen (zie Materiaaltabel). Ontleed het rechter inferieure longligament tot aan het hilum. Zorg ervoor dat een klem superieur, inferieur en anterieur rond het hilum kan worden geplaatst. OPMERKING: Dit zorgt ervoor dat het hilum wordt afgesloten en dat alle oxygenatie afhankelijk is van de linkerlong. De rechterlong zal op dit moment niet beademd worden, wat zou moeten blijken uit een gebrek aan inflatie/deflatie met beademingsapparatuur. De rechter onderkwab kan uit de borst worden getild om dit te bereiken.</li>
	<li>Klem de ader van de accessoirelob vast met behulp van een DeBakey aortakruisklem (zie Materiaaltabel) om eventuele afvoer van de accessoirelob in de LA af te sluiten (Figuur 2Q).</li>
	<li>Klem het rechter hilium vast en neem de volgende seriële bloedmonsters van de linker PV-anastomose met een naald van 21 G gericht op de linkerlong: 0 min, 1 min, 2 min, 5 min en 10 min na het klemmen. OPMERKING: Er worden vijf monsters genomen om te controleren op een trend in de partiële zuurstofdruk (PaO2) (Figuur 2R). De PaO2 moet relatief stabiel blijven om een goede linkerlongfunctie weer te geven. Vijf monsters bieden ook zekerheid voor een kwaliteitsbeoordeling als er een probleem is met de stolling van monsters of als er zich een probleem voordoet met de ABG-analyse.</li>
	<li>Doorsnijd de anastomosen en verwijder de linkerlong. Transect het IVC om euthanasie onder narcose te versnellen via verbloeding. NOTITIE: De totale anesthesietijd voor het ontvangende varken is 8 uur.</li>
	<li>Weeg de donorlong om te beoordelen op oedeemvorming en inspecteer deze op het algehele uiterlijk. Inspecteer de PA, bronchus en LA-manchet op tekenen van stolsel of andere pathologie in de donorlong en het mediastinum van de ontvanger.</li>
	<li>Voer de laatste gasanalyses uit, centrifugeer de perfusaatmonsters en bewaar de weefselbiopten zoals eerder beschreven (OPMERKING bij stap 4.3). NOTITIE: De centrifugatie-instellingen zijn: 112 x g, 9 versnelling, 9 vertraging, 4 °C en 15 minuten duur.</li>
</ol>

<ol><li>Chambers, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+thoracic+organ+transplant+registry+of+the+international+society+for+heart+and+lung+transplantation%3A+Thirty-fifth+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report-2018%3B+focus+theme%3A+Multiorgan+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+The+Official+Publication+of+the+International+Society+for+Heart+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international thoracic organ transplant registry of the international society for heart and lung transplantation: Thirty-fifth adult lung and heart-lung transplant report-2018; focus theme: Multiorgan transplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation: The Official Publication of the International Society for Heart Transplantation. 37 (10), 1169-1183 (2018).</li>
<li>Valapour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OPTN%2FSRTR+2017+annual+data+report%3A+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%3A+Official+Journal+of+the+American+Society+of+Transplantation+and+the+American+Society+of+Transplant+Surgeons%22%5BJournal%5D)">OPTN/SRTR 2017 annual data report: Lung.</a> American Journal of Transplantation: Official Journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 19, Suppl 2 404-484 (2019).</li>
<li>Klein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+donation+and+utilization+in+the+united+states%2C+1999-2008%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%3A+Official+Journal+of+the+American+Society+of+Transplantation+and+the+American+Society+of+Transplant+Surgeons%22%5BJournal%5D)">Organ donation and utilization in the united states, 1999-2008.</a> American Journal of Transplantation: Official Journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 10 (4), Pt 2 973-986 (2010).</li>
<li>Kotecha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continued+successful+evolution+of+extended+criteria+donor+lungs+for+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Continued successful evolution of extended criteria donor lungs for transplantation.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 104 (5), 1702-1709 (2017).</li>
<li>Singh, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence+of+refusals+for+donor+quality%2C+organ+utilization%2C+and+survival+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Sequence of refusals for donor quality, organ utilization, and survival after lung transplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 38 (1), 35-42 (2019).</li>
<li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normothermic+ex+vivo+lung+perfusion+in+clinical+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation.</a> The New England Journal of Medicine. 364 (15), 1431-1440 (2011).</li>
<li>Wallinder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+results+in+transplantation+of+initially+rejected+donor+lungs+after+ex+vivo+lung+perfusion%3A+A+case-control+study%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardio-Thoracic+Surgery%3A+Official+Journal+of+the+European+Association+for+Cardio-Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Early results in transplantation of initially rejected donor lungs after ex vivo lung perfusion: A case-control study.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery: Official Journal of the European Association for Cardio-Thoracic Surgery. 45 (1), 40-44 (2014).</li>
<li>Sage, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+transplantation+from+initially+rejected+donors+after+ex+vivo+lung+reconditioning%3A+The+french+experience%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardio-Thoracic+Surgery%3A+Official+Journal+of+the+European+Association+for+Cardio-Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lung transplantation from initially rejected donors after ex vivo lung reconditioning: The french experience.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery: Official Journal of the European Association for Cardio-Thoracic Surgery. 46 (5), 794-799 (2014).</li>
<li>Valenza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracorporeal+lung+perfusion+and+ventilation+to+improve+donor+lung+function+and+increase+the+number+of+organs+available+for+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Extracorporeal lung perfusion and ventilation to improve donor lung function and increase the number of organs available for transplantation.</a> Transplantation Proceedings. 44 (7), 1826-1829 (2012).</li>
<li>Fildes, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+outcome+of+patients+transplanted+with+marginal+donor+lungs+via+ex+vivo+lung+perfusion+compared+to+standard+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Clinical outcome of patients transplanted with marginal donor lungs via ex vivo lung perfusion compared to standard lung transplantation.</a> Transplantation. 99 (5), 1078-1083 (2015).</li>
<li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience+with+the+first+50+ex+vivo+lung+perfusions+in+clinical+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experience with the first 50 ex vivo lung perfusions in clinical transplantation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 144 (5), 1200-1206 (2012).</li>
<li>Clark, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+porcine+model+of+reperfusion+injury+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A new porcine model of reperfusion injury after lung transplantation.</a> Laboratory Animals. 33, 135-142 (1999).</li>
<li>Karimi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+pearls+for+swine+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Technical pearls for swine lung transplantation.</a> Journal of Surgical Research. 171, 107-111 (2011).</li>
<li>Kruger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+pulmonary+auto-transplantation+for+ex+vivo+therapy+as+a+model+for+new+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Interactive+CardioVascular+and+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Porcine pulmonary auto-transplantation for ex vivo therapy as a model for new treatment strategies.</a> Interactive CardioVascular and Thoracic Surgery. 23, 358-366 (2016).</li>
<li>Mariscal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pig+lung+transplant+survival+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Pig lung transplant survival model.</a> Nature Protocols. 13, 1814-1828 (2018).</li>
<li>Aboelnazar, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+pressure+ventilation+decreases+inflammation+and+lung+edema+during+normothermic+ex+vivo+lung+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+The+Official+Publication+of+the+International+Society+for+Heart+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Negative pressure ventilation decreases inflammation and lung edema during normothermic ex vivo lung perfusion.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation: The Official Publication of the International Society for Heart Transplantation. 37 (4), 520-530 (2018).</li>
</ol>

DHF heeft patenten op Ex situ orgaanperfusietechnologie en -methoden. DHF en JN zijn oprichters en grootaandeelhouders van Tevosol, Inc.

Dit protocol omvat verschillende kritieke chirurgische stappen en probleemoplossing is nodig om een succesvolle transplantatie en longbeoordeling te garanderen. Juveniele varkenslongen zijn ongelooflijk delicaat in vergelijking met volwassen menselijke longen, dus de opererende chirurg moet voorzichtig zijn bij het hanteren van varkenslongen. Dit is met name het geval na een 12 uur durende ESLP-run, omdat het orgaan vloeistofvolume heeft aangenomen en vatbaar is voor letsel door overmatige manipulatie. Elke overmatige dr...

Longtransplantatie is de meest voorkomende langetermijnbehandeling voor longziekte in het eindstadium. Jaarlijks worden wereldwijd meer dan 4.600 longtransplantaties uitgevoerd1. Longtransplantatie heeft momenteel echter aanzienlijke beperkingen. Ten eerste blijft de behoefte aan organen de beschikbare donoren overschaduwen. Ondanks het feit dat het aantal longtransplantaties sinds 2012 elk jaar is gestegen als gevolg van de gecombineerde effecten van meer kandidaten die op de lijst voor transplantatie staan, een toename van het aantal donoren en een verbeterd gebruik van herstelde organen, is de sterfte op de wachtlijst voor transplantaties niet significant gedaald2. Zorgen over de orgaankwaliteit vormen een andere belangrijke beperking, met gerapporteerde orgaanbezettingspercentages van slechts 20%-30%3,4,5. Ten slotte zijn de trends in de postoperatieve resultaten van longtransplantatie niet bevredigend, waarbij de langetermijnresultaten van transplantaten en patiënten nog steeds achterblijven bij die van andere solide orgaantransplantaties.
Een opkomende technologie, ex situ longperfusie (ESLP), heeft het potentieel om deze beperkingen te verminderen. ESLP wordt in toenemende mate toegepast als een methode om marginale donorlongen te beoordelen en te herstellen en heeft aanvaardbare korte- en langetermijnresultaten aangetoond na transplantatie van donorlongen met uitgebreide criteria (ECD) 6,7,8,9,10. Bijgevolg heeft ESLP de bezettingsgraad in sommige centra met 15%-20% verhoogd6,7,8,9,10,11.
Goed ESLP-onderzoek vereist de in vivo validatie van in-vitrobevindingen; er is echter beperkte literatuur over longtransplantatiemodellen bij varkens voor ESLP12,13,14,15. Bovendien biedt de beschikbare literatuur onvoldoende details over de anesthesiebehandeling van Yorkshire-varkens voor longtransplantatie, die hemodynamisch zeer onstabiel kan zijn12,13,14,15. Het opzetten van een gemakkelijk reproduceerbaar model zou de in vivo validatie van de huidige ESLP-strategieën en de preklinische evaluatie van verschillende interventies om longischemie-reperfusieschade te verminderen, mogelijk maken. Het doel van de huidige studie is het beschrijven van een varkensmodel van orthotope allotransplantatie van de linkerlong voor gebruik met ESLP. Het protocol bevat beschrijvingen van de anesthesie- en chirurgische technieken, een aangepaste chirurgische checklist en details over de ervaring met het oplossen van problemen en protocolwijzigingen. De beperkingen en voordelen van het varkenstransplantatiemodel van de linkerlong zijn ook in dit werk besproken. Dit manuscript schetst niet het ophaalproces van varkenslongen bij Yorkshire-varkens van 35-50 kg, noch behandelt het de oprichting en beëindiging van ESLP. Dit protocol heeft uitsluitend betrekking op de transplantatie van de ontvanger.

<table><tbody><tr><td>ABL 800 FLEX Blood Gas Analyzer</td><td>Radiometer</td><td>989-963</td><td></td></tr><tr><td>Adult-Pediatric Electrostatic Filter HME - Small</td><td>Covidien</td><td>352/5877</td><td></td></tr><tr><td>Allison Lung Retractor</td><td>Pilling</td><td>341679</td><td></td></tr><tr><td>Arterial Filter</td><td>SORIN GROUP</td><td>01706/03</td><td></td></tr><tr><td>Backhaus Towel Clamp</td><td>Pilling</td><td>454300</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>MP biomedicals</td><td>218057791</td><td></td></tr><tr><td>Biomedicus Pump</td><td>Maquet</td><td>BPX-80</td><td></td></tr><tr><td>Bronchoscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cable Ties &ndash; White 12&rdquo;</td><td>HUASU International</td><td>HS4830001</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>C69-500G</td><td></td></tr><tr><td>Cooley Sternal Retractor</td><td>Pilling</td><td>341162</td><td></td></tr><tr><td>CUSHING Gutschdressing Forceps</td><td>Pilling</td><td>466200</td><td></td></tr><tr><td>Debakey-Metzenbaum Dissecting</td><td>Pilling</td><td>342202</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Pilling</td><td>342202</td><td></td></tr><tr><td>DeBakey Peripheral Vascular Clamp</td><td>Pilling</td><td>353535</td><td></td></tr><tr><td>Debakey Straight Vascular Tissue Forceps</td><td>Pilling</td><td>351808</td><td></td></tr><tr><td>D-glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767-500G</td><td></td></tr><tr><td>Drop sucker</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Endotracheal Tube 9.0mm CUFD</td><td>Mallinckrodt</td><td>9590E</td><td></td></tr><tr><td>Flow Transducer</td><td>BIO-PROBE</td><td>TX 40</td><td></td></tr><tr><td>Infusion Pump</td><td>Baxter</td><td>AS50</td><td></td></tr><tr><td>Inspire 7 M Hollow Fiber Membrane Oxygenator</td><td>SORIN GROUP</td><td>K190690</td><td></td></tr><tr><td>Intercept Tubing Connector 3/8" x 1/2"</td><td>Medtronic</td><td>6013</td><td></td></tr><tr><td>Intercept Tubing 1/4" x 1/16" x 8'</td><td>Medtronic</td><td>3108</td><td></td></tr><tr><td>Intercept Tubing 3/8" x 3/32" x 6'</td><td>Medtronic</td><td>3506</td><td></td></tr><tr><td>Laryngoscope</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Op maat gemaakt met 10-inch blade</td></tr><tr><td>Metzenbaum Dissecting Scissors</td><td>Pilling</td><td>460420</td><td></td></tr><tr><td>Medical Carbon Dioxide Tank</td><td>Praxair</td><td>5823115</td><td></td></tr><tr><td>Medical Oxygen Tank</td><td>Praxair</td><td>2014408</td><td></td></tr><tr><td>Medical Nitrogen Tank</td><td>Praxair</td><td>NI M-K</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito Clamp</td><td>Pilling</td><td>181816</td><td></td></tr><tr><td>Harken Auricle Clamp</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Organ Chamber</td><td>Tevosol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PlasmaLyte A</td><td>Baxter</td><td>TB2544</td><td></td></tr><tr><td>Poole Suction Tube</td><td>Pilling</td><td>162212</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Phosphate</td><td>Fischer Scientific</td><td>P285-500G</td><td></td></tr><tr><td>PERFADEX Plus</td><td>XVIVO</td><td>19811</td><td></td></tr><tr><td>Satinsky Clamp</td><td>Pilling</td><td>354002</td><td></td></tr><tr><td>Scale</td><td>TANITA</td><td>KD4063611</td><td></td></tr><tr><td>Silicon Support Membrane</td><td>Tevosol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>792519-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride 0.9%</td><td>Baxter</td><td>JB1324</td><td></td></tr><tr><td>Sorin XTRA Cell Saver</td><td>SORIN GROUP</td><td>75221</td><td></td></tr><tr><td>Sternal Saw</td><td>Stryker</td><td>6207</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Electrocautery Device</td><td>Kls Martin</td><td>ME411</td><td></td></tr><tr><td>TruWave Pressure Transducer</td><td>Edwards</td><td>VSYPX272</td><td></td></tr><tr><td>Two-Lumen Central Venous Catheter 7fr X2</td><td>Arrowg+ard</td><td>CS-12702-E</td><td></td></tr><tr><td>Vorse Tubing Clamp</td><td>Pilling</td><td>351377</td><td></td></tr><tr><td>Willauer-Deaver Retractor</td><td>Pilling</td><td>341720</td><td></td></tr><tr><td>Yankauer Suction Tube</td><td>Pilling</td><td>162300</td><td></td></tr><tr><td>0 ETHIBOND Green 1X36" Endo Loop 0</td><td>ETHICON</td><td>D8573</td><td></td></tr><tr><td>0 PDS II CP-1 2x27&rdquo;</td><td>ETHICON</td><td>Z467H</td><td></td></tr><tr><td>1 VICRYL MO-4 1x18&rdquo;</td><td>ETHICON</td><td>J702D</td><td></td></tr><tr><td>2-0 SILK Black 12" x 18" Strands</td><td>ETHICON</td><td>SA77G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 PROLENE Blue TF 1x24&rdquo;</td><td>ETHICON</td><td>8204H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 PROLENE Blue BV 2x30&rdquo;</td><td>ETHICON</td><td>M8776</td><td></td></tr><tr><td>21-Gauge Needle</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

orthotope transplantatie van de linkerlong in een juveniel varkensmodel voor eslp

Left Lung Orthotopic Transplantation in a Juvenile Porcine Model for ESLP

Longtransplantatie is de gouden standaardbehandeling voor longziekte in het eindstadium, met jaarlijks meer dan 4.600 longtransplantaties die wereldwijd worden uitgevoerd. Longtransplantatie wordt echter beperkt door een tekort aan beschikbare donororganen. Als zodanig is er een hoge sterfte op de wachtlijst. Ex situ longperfusie (ESLP) heeft de bezettingsgraad van donorlongen in sommige centra met 15%-20% verhoogd. ESLP is toegepast als een methode om marginale donorlongen te beoordelen en te reconditioneren en heeft aanvaardbare korte- en langetermijnresultaten aangetoond na transplantatie van donorlongen met uitgebreide criteria (ECD). Transplantatiemodellen voor grote dieren (in vivo) zijn nodig om lopende in vitro onderzoeksresultaten te valideren. Anatomische en fysiologische verschillen tussen mensen en varkens vormen aanzienlijke technische en esthetische uitdagingen. Een gemakkelijk reproduceerbaar transplantatiemodel zou de in vivo validatie van de huidige ESLP-strategieën en de preklinische evaluatie van verschillende interventies die zijn ontworpen om de longfunctie van de donor te verbeteren, mogelijk maken. Dit protocol beschrijft een varkensmodel van orthotope allotransplantatie van de linkerlong. Dit omvat anesthesie- en chirurgische technieken, een op maat gemaakte chirurgische checklist, probleemoplossing, aanpassingen en de voordelen en beperkingen van de aanpak.

Alle resultaten zijn in de context van 4 uur reperfusie na 12 uur NPV-ESLP16. Tijdens longexplantatie zijn er verschillende klinische uitkomsten waarop moet worden geanticipeerd (Figuur 3). Doorgaans blijft het varken hemodynamisch stabiel na een succesvolle explantatie van de linkerlong, maar kan een infusie met een lage dosis fenylefrine (dosisbereik: 2-10 mg/uur) nodig zijn vanwege een vaatverwijdende reactie op een operatie. De hartslag moet ongeveer 100-120 slage...

Dit protocol beschrijft een juveniel varkensmodel van orthotope allotransplantatie van de linkerlong, ontworpen voor gebruik met ESLP-onderzoek. De nadruk ligt op anesthesie- en chirurgische technieken, maar ook op kritieke stappen en het oplossen van problemen.

Orthotope transplantatie van de linkerlong in een juveniel varkensmodel voor ESLP

Lung transplantation is the gold-standard treatment for end-stage lung disease, with over 4,600 lung transplantations performed worldwide annually. ...

Dit protocol is een van de meest eenvoudige longtransplantatieprotocollen voor grote diermodellen en biedt de meeste details op het gebied van chirurgische behandeling. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn het beschrijven van de operatie, het beoordelen van de geïsoleerde linkerlongfunctie na transplantatie en het stabiliseren van het varken tijdens de operatie. De methode is nuttig in ex-situ longprofusieonderzoek om ex-situ bevindingen te valideren met een in vivo reperfusietransplantatiemodel.Het in vivo reperfusiemodel van longtransplantatie is gunstig voor het testen van ex-situ longprofusiebevindingen en kan ook worden gebruikt bij het testen van kunstmatige organen, zoals bio-engineered of mechanische longen. Begin met het plaatsen van het varken in een rechter laterale decubituspositie voor de linker anterieure laterale thoracotomie. Identificeer vervolgens de punt van het linkerschouderblad in het xiphoid-proces, inferieur aan het borstbeen met palpatie, en verbind de twee geïdentificeerde plekken om de 20 centimeter lange incisieplaats van de thoracotomie te markeren.Gebruik na het induceren van de anesthesie een scalpel om een incisie in de huid te maken en

left-lung-orthotopic-transplantation-juvenile-porcine-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Bronchiolitis obliterans is de sleutel belemmering voor de lange termijn overleving van patiënten na longtransplantatie en het ontbreken van een robuuste preklinisch model sluit de behandeling van bronchiolitis obliterans immunopathogenese. In tegenstelling tot andere vaste orgaantransplantaties, gevasculariseerd muis longtransplantatie heeft pas recent ontwikkeld. Hier laten we ons onafhankelijk van elkaar ontwikkeld Bronchiolitis obliterans model na murine orthotoop single-longtransplantatie.

Ontwikkeling van Bronchiolitis obliterans in een muizenmodel van orthotope longtransplantatie

Experimenteel dieronderzoek speelt een cruciale rol in de ontwikkeling van klinische transplantatiepraktijk. Het orthotopische varkenslevertransplantatiemodel (OLTx) lijkt sterk op menselijke omstandigheden en wordt vaak gebruikt in klinisch georiënteerd onderzoek. Het volgende protocol bevat alle informatie voor een betrouwbaar varkens-OLTx-model met behulp van een actieve porto-cavale-jugulaire shunt.

Techniek van varkenslever Procurement en Orthotope transplantatie met behulp van een actieve Porto-Caval Shunt

Ex-Vivo longperfusie (EVLP) heeft toegestaan ​​longtransplantatie bij de mens om meer direct beschikbaar doordat de mogelijkheid om organen te beoordelen en uit te breiden het donorpool geworden. We beschrijven hier de ontwikkeling van een rat EVLP programma en verfijningen die zorgen voor een reproduceerbaar model voor toekomstige uitbreiding.

WERKWIJZE Geïsoleerde<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Longperfusie in een Rat Model: Lessen uit het ontwikkelen van een Rat EVLP Program

Hier beschrijven we een pre-klinisch groot dier (Porcine) model van orthotopic harttransplantatie dat stevig is vastgesteld en gebruikt om nieuwe cardioprotective strategieën te onderzoeken.

Een preklinisch varkens model van Orthotopic harttransplantatie

Dit artikel beschrijft een varkensmodel van negatieve drukventilatie ex situ longperfusie, inclusief inkoop, aanhechting en beheer op het op maat gemaakte platform. De nadruk wordt gelegd op anesthesie- en chirurgische technieken, evenals het oplossen van problemen.

Normothermische negatieve drukventilatie ex situ longperfusie: evaluatie van longfunctie en metabolisme

In dit protocol wordt een model van orthotopische levertransplantatie bij varkens beschreven na statische koude opslag van donororganen gedurende 20 uur zonder het gebruik van een veno-veneuze bypass tijdens engraftment. De aanpak maakt gebruik van een vereenvoudigde chirurgische techniek met minimalisering van de anhepatische fase en geavanceerd volume- en vasopressorbeheer.

Varkenslevertransplantatie zonder veno-veneuze bypass als donormodel met uitgebreide criteria

Hier beschrijven we de noodzakelijke stappen voor het opstellen van een EVLP-model bij ratten en tonen we het ontstekingsprofiel dat verband houdt met de geperfuseerde longen. Het doel is om kennis en ervaringen over het EVLP-model van ratten te verspreiden, waardoor een integraal begrip mogelijk wordt van de biologische reacties die met die revolutionaire techniek gepaard gaan.

Opstelling van een ex vivo longperfusiemodel bij ratten voor translationele inzichten in longtransplantatie

Dit protocol beschrijft een verbeterde techniek voor orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten, gericht op het verminderen van operationele problemen en het verbeteren van overlevingskansen.

Orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten

Deze studie stelt een preklinisch orthotopisch harttransplantatiemodel voor bij Bama-miniatuurvarkens, waarbij gebruik wordt gemaakt van de biatriale techniek. Het model is van toepassing op transplantatieimmunologie, geneesmiddelenevaluatie en optimalisatie van chirurgische technieken en biedt ondersteuning voor klinische harttransplantatietoepassingen.

Een preklinisch model van orthotope harttransplantatie bij Bama-miniatuurvarkens met behulp van biatriale techniek

Dit artikel presenteert een protocol om het linker ventrikel assist-apparaat (LVAD) in een biggetje te implanteren. Dit model biedt een krachtige manier om de LVAD-implantatie bij kinderen te bestuderen en het mechanisme van ventrikelomgekeerde remodellering in LVAD-behandeling te onthullen.

Implantatie van het Left Ventricul Assist Device (LVAD) bij jonge landracevarkens: een LVAD-implantatiemodel van pediatrisch hartfalen

Leer orthotope longtransplantatie bij juveniele varkens voor ESLP-onderzoek. Deze methode omvat chirurgische technieken en stabilisatie om geïsoleerde linkerlongfunctie te beoordelen.

Orthotope transplantatie van de linkerlong in een juveniel varkensmodel voor ESLP

Meer video's verkennen