Monstervoorbereiding voor op computertomografie gebaseerde driedimensionale visualisatie van murine achterpootvaten

Het is mogelijk om CT-beelden te maken van bloedvaten in de onderste ledematen en de buikorganen met behulp van het stapprotocol. De methode maakt de evaluatie van de volledige bloedvaten volledig mogelijk. Bovendien is het mogelijk om alleen slagaders of tegelijkertijd slagaders en aderen te evalueren.

Het is erg belangrijk om bloedstolsels, lekken of bloed goed te voorkomen en luchtbellen te voorkomen. Injecteer vóór de operatie 1 eenheid/gram heparine in PBS in de intraperitoneale holte van de muis. Maak na 30 minuten een middellijnincisie in het borstbeen van de geëuthanaseerde muis en bevestig de open thorax met pinnen.

Snijd de opgaande aorta voordat u het hart verwijdert en verwijder vervolgens de long om de dalende aorta bloot te leggen. Snijd de dalende aorta diagonaal om de doorsnede van het vat te onthullen. Plaats vervolgens een 22-gauge katheter in de dalende aorta terwijl u de vaatverwijdingsbuffer uitvoert.

Pin de wortel van de katheter en maak een knoop om lekkage door de terugstroming te voorkomen. Als u klaar bent, start u de perfusie met een verwarmde vaatverwijdende oplossing bij een vaste druk tussen 13 en 15 kilopascal. Perfuseer na drie minuten een oplossing van 4%paraformaldehyde in PBS gedurende 3 minuten.

Stop de perfusie en vul de verlengbuis die op de katheter is aangesloten met 2 ml van het vers bereide contrastmedium verdund in de verhouding 1:1 tot perfusie met een vaste tussen 13 en 15 kilopascal. Om slagaders te visualiseren, controleert u de teennagel van de mond om te bevestigen dat het contrastmiddel de slagader heeft bereikt. Controleer op dezelfde manier de inferieure vena cava van het diafragma om de volledige circulatie van het contrastmedium te bevestigen en alle bloedvaten te visualiseren.

Als de circulatie van het contrastmedium is voltooid, sluit u de driewegstopkraan en verwijdert u de buis. Incubeer het monster 's nachts bij 4 graden Celsius. In dit protocol werden alle vaten in de onderste ledematen van de muis gevisualiseerd.

De resultaten van een ischemiemodel voor de achterpoten bevestigden dat de niet-geligeerde femorale slagader parallel liep aan de dijbeenader. Ook maakte de onderbreking in de contrastmedia het gemakkelijk om een geligeerde femorale slagader en de ontwikkeling van collaterale vaten te bekijken. Een paar vaten gevuld met het contrastmedium konden worden bekeken.

Aan de andere kant werd ook de verstoring in de contrastmedia opgemerkt als gevolg van vermenging van niet-conflicterende media, of onvoldoende perfusie. Het was onmogelijk om de slagaders op het oppervlak van het lichaam te bekijken door microscopische stereomicroscopische observatie van het contrastmedium, wat het gemakkelijker maakte om defecten in de vasculatuur te beoordelen. Het is erg belangrijk om luchtbellen te vermijden bij het inbrengen van de katheter.

Omdat hun buikorganen ook ontspannen zijn, is het mogelijk om uit de organen te halen en een CT-scan te maken. Door deze methode te gebruiken, konden we een nieuw kwart van verzadiging identificeren.