Een celtraceringsinjectie gebruiken om de oorsprong van neointimavormende cellen in een sacculair zijwandmodel van een rat te onderzoeken

Door gebruik te maken van een directe intra-aortale cel-tracer applicatie, kunnen we de rol van endotheelcellen afkomstig uit de bovenliggende slagader in neointimavorming op twee verschillende tijdstippen analyseren. Een groot voordeel van deze techniek is een directe, one-point, interpretatieve in-vivo injectie die dit model tot een robuuste en reproduceerbare techniek maakt. Incubeer vóór de operatie de arteriële zakjes van donorratten in 0,1% natriumdodecylodecylaat gedurende 10 uur bij 37 graden Celsius om gedecellulariseerde aneurysma's te verkrijgen.

Verzamel deze zakjes van donordieren een paar dagen voor de operatie. Analyseer om te beginnen het gedrag van het dier en inspecteer de slijmvliezen en turgor als onderdeel van het preoperatieve klinische onderzoek. Noteer het gewicht van elk dier.

Voor anesthesie-inductie plaatst u alle ratten in een schone doos die is voorzien van zuurstof totdat het bewustzijn na vijf tot 10 minuten wordt verloren. Controleer de diepte van de anesthesie door de afwezigheid van de pedaalontwenningsreflex. Plaats de ratten in rugligging en scheer het thoracoabdominale gebied met een elektrisch scheerapparaat.

Fixeer met tape de poten van de rat op een bord dat is bedekt met een verwarmingskussen dat is aangesloten op een automatisch regulerende rectale sonde. Plaats de rectale sonde in de anus van de rat om de gewenste temperatuur van 37 graden Celsius te behouden met behulp van een verwarmingskussen. Installeer vervolgens een sensor op het rechterachterbeen dat is aangesloten op een geautomatiseerd systeem voor het intraoperatief controleren van vitale functies.

Breng voor perianesthetische zorg een steriel oogheelkundig glijmiddel aan op de ogen en bedek ze met een ondoorzichtig foliemasker om uitdroging en schade door de chirurgische lamp te voorkomen. Desinfecteer het chirurgische veld met povidonjodium en drapeer het chirurgische veld op een steriele manier. Plaats een micro-uitstrijkje met paarse vulling onder de proximale en distale delen van de aorta om de slagader beter te visualiseren zodra deze is gescheiden van de ader van de caval.

Bescherm vervolgens de buik met wit gaas. Los op de dag van gebruik twee microliter van de celtracer op door in één milliliter PBS te pipetteren. Breng het mengsel over in een spuit van één milliliter met een canule.

Doe het licht in de operatiekamer uit. Voer met behulp van een microscoop de eenpuntsinjectie uit in het middelste ventrale deel van de aorta met microtang en injecteer zorgvuldig één milliliter heparinized 0,9% zoutoplossing. Injecteer de celtracer voorzichtig en schakel onmiddellijk ook de operatiemicroscoop uit.

Bescherm de buik opnieuw met nat gaas. Laat de kleurstof minstens 15 minuten incuberen. Zet vervolgens de microscoop en de verlichting van de operatiekamer aan.

Gebruik microtang en microschaar om de longitudinale arteriotomie uit te voeren, zodat de lengte het gemiddelde is van de diameter van het geoogste aneurysma. Plaats het aneurysma naast de aorta voordat u arteriotomie uitvoert om de juiste lengte te garanderen. Hecht het aneurysma met acht tot 10 enkele hechtingen met behulp van een niet-absorbeerbare 10-0 hechting.

Lever voor de laatste steek de spoel af met een pakdichtheid van één centimeter. In dit model kan een spoel- of stentbehandeling worden uitgevoerd. Verwijder vervolgens voorzichtig de tijdelijke klemmen, beginnend distaal, onder continue irrigatie met heparinized zoutoplossing.

Sluit de wond op een gelaagde manier. Aan het einde van de operatie, draai de anesthesie om met een subcutane injectie. Laat elk geopereerd dier herstellen in een schone kooi totdat het volledig wakker is en zo nodig opwarmt met een verwarmingslamp.

Getrokken baseline aneurysmavolumes voor dag zeven en dag 21 verschilden niet significant voor gedecellulariseerde of vitale aneurysma's tussen de spoel- of stentbehandelingsgroepen. Getrokken FU-volumes voor gedecellulariseerde aneurysmata vertoonden een niet-significante aneurysmagroei in opgerolde in vergelijking met de gestenteerde aneurysma's. Het getrokken FU-volume was significant groter in de vitale opgerolde groep dan in de gestenteerde groep.

Hoeveelheden cel-tracerpositieve cellen in de neointima van gedecellulariseerde aneurysma's verschilden niet significant tussen de stent- of opgerolde behandelde groepen op dag zeven FU, maar waren significant hoger bij gestenteerde ratten op dag 21 FU.No significante verschillen werden opgemerkt in vitaal-aneurysma gehechte ratten op zeven dagen of 21 dagen FU.In gedecellulariseerde aneurysma's na zeven dagen FU, significant meer cel-tracer positieve cellen bleven in de trombus van de met stent behandelde in vergelijking met de met spoel behandelde groep. Dit verschil werd niet waargenomen in vitale aneurysma's na zeven dagen FU. Vergeet niet om altijd de lichten in de operatiekamer uit te doen voordat u de celtracer injecteert om vervaging te voorkomen. Laat de kleurstof ook minstens 15 minuten incuberen.