Name: Productie van High-titer Recombinant Newcastle Disease Virus uit Allantoic Fluid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Leer de productie van hoogtiter recombinant Newcastle disease virus uit allantoïsche vloeistof voor virologisch onderzoek met muizen en andere dieren. Deze methode levert meer dan 6 × 10⁹ plaque-vormende eenheden per mL op.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

J.G.E.Y was de ontvanger van een Ontario Veterinary College PhD Scholarship en een Ontario Graduate Scholarship. Dit werk werd gefinancierd door Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada Discovery Grants aan SKW (grant #304737) en LS (grant #401127).

<ol><li>Kim, S. H., Samal, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease+virus+as+a+vaccine+vector+for+development+of+human+and+veterinary+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease virus as a vaccine vector for development of human and veterinary vaccines.</a> Viruses. 8 (7), (2016).</li>
<li>Kortekaas, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rift+Valley+fever+virus+immunity+provided+by+a+paramyxovirus+vaccine+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Rift Valley fever virus immunity provided by a paramyxovirus vaccine vector.</a> Vaccine. 28 (27), 4394-4401 (2010).</li>
<li>Matveeva, O. V., Kochneva, G. V., Zainutdinov, S. S., Ilyinskaya, G. V., Chumakov, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolytic+paramyxoviruses%3A+mechanism+of+action%2C+preclinical+and+clinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Molekuliarnaia+Biologiia%22%5BJournal%5D)">Oncolytic paramyxoviruses: mechanism of action, preclinical and clinical studies.</a> Molekuliarnaia Biologiia. 52 (3), 360-379 (2018).</li>
<li>Sinkovics, J. G., Horvath, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease+virus+%28NDV%29%3A+brief+history+of+its+oncolytic+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Virology%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease virus (NDV): brief history of its oncolytic strains.</a> Journal of Clinical Virology. 16 (1), 1-15 (2000).</li>
<li>Matuszewska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+vascular+normalization+with+an+oncolytic+virus+enhances+immunotherapy+in+a+preclinical+model+of+advanced-stage+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Combining vascular normalization with an oncolytic virus enhances immunotherapy in a preclinical model of advanced-stage ovarian cancer.</a> Clinical Cancer Research. 25 (5), 1624-1638 (2019).</li>
<li>McAusland, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+vanadyl+sulfate+with+Newcastle+disease+virus+potentiates+rapid+innate+immune-mediated+regression+with+curative+potential+in+murine+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+Oncolytics%22%5BJournal%5D)">Combining vanadyl sulfate with Newcastle disease virus potentiates rapid innate immune-mediated regression with curative potential in murine cancer models.</a> Molecular Therapy Oncolytics. 20, 306-324 (2021).</li>
<li>Warner, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+vaccination+with+a+Newcastle+disease+virus-vectored+vaccine+protects+hamsters+from+SARS-CoV-2+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Intranasal vaccination with a Newcastle disease virus-vectored vaccine protects hamsters from SARS-CoV-2 infection and disease.</a> iScience. 24 (11), 103219(2021).</li>
<li>Sun, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease+virus+%28NDV%29+expressing+the+spike+protein+of+SARS-CoV-2+as+a+live+virus+vaccine+candidate%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease virus (NDV) expressing the spike protein of SARS-CoV-2 as a live virus vaccine candidate.</a> EBioMedicine. 62, (2020).</li>
<li>Sun, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Newcastle+disease+virus+%28NDV%29+expressing+a+membrane-anchored+spike+as+a+cost-effective+inactivated+SARS-CoV-2+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccines%22%5BJournal%5D)">A Newcastle disease virus (NDV) expressing a membrane-anchored spike as a cost-effective inactivated SARS-CoV-2 vaccine.</a> Vaccines. 8 (4), 1-14 (2020).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Newcastle+disease+virus+mediated+dendritic+cell+activation+and+cross-priming+tumor-specific+immune+responses+ex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Newcastle disease virus mediated dendritic cell activation and cross-priming tumor-specific immune responses ex vivo.</a> International Journal of Cancer. 146 (2), 531-541 (2020).</li>
<li>Burman, B., Pesci, G., Zamarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease+virus+at+the+forefront+of+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease virus at the forefront of cancer immunotherapy.</a> Cancers. 12 (12), 1-15 (2020).</li>
<li>Ricca, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-existing+immunity+to+oncolytic+virus+potentiates+its+immunotherapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Pre-existing immunity to oncolytic virus potentiates its immunotherapeutic efficacy.</a> Molecular Therapy. 26 (4), 1008-1019 (2018).</li>
<li>Zamarin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+oncolytic+virotherapy+overcomes+systemic+tumor+resistance+to+immune+checkpoint+blockade+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Localized oncolytic virotherapy overcomes systemic tumor resistance to immune checkpoint blockade immunotherapy.</a> Science Translational Medicine. 6 (226), (2014).</li>
<li>Schirrmacher, V., van Gool, S., Stuecker, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+therapy+resistance%3A+an+update+on+oncolytic+Newcastle+disease+virus+for+improvements+of+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Breaking therapy resistance: an update on oncolytic Newcastle disease virus for improvements of cancer therapy.</a> Biomedicines. 7 (3), (2019).</li>
<li>Santry, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+purification+of+high-titer+Newcastle+disease+virus+for+use+in+preclinical+mouse+models+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+Methods+and+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Production and purification of high-titer Newcastle disease virus for use in preclinical mouse models of cancer.</a> Molecular Therapy Methods and Clinical Development. 9, 181-191 (2018).</li>
<li>Cassel, W. A., Murray, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ten-year+follow-up+on+stage+II+malignant+melanoma+patients+treated+postsurgically+with+Newcastle+disease+virus+oncolysate%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Oncology+and+Tumor+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">A ten-year follow-up on stage II malignant melanoma patients treated postsurgically with Newcastle disease virus oncolysate.</a> Medical Oncology and Tumor Pharmacotherapy. 9 (4), 169-171 (1992).</li>
<li>Plitt, T., Zamarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+therapy+with+Newcastle+disease+virus%3A+rationale+for+new+immunotherapeutic+combinations%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Investigations%22%5BJournal%5D)">Cancer therapy with Newcastle disease virus: rationale for new immunotherapeutic combinations.</a> Clinical Investigations. 5 (1), 75-87 (2015).</li>
<li>Arifin, M. A., Mel, M., Abdul Karim, M. I., Ideris, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Newcastle+disease+virus+by+Vero+cells+grown+on+cytodex+1+microcarriers+in+a+2-litre+stirred+tank+bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+%26+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Production of Newcastle disease virus by Vero cells grown on cytodex 1 microcarriers in a 2-litre stirred tank bioreactor.</a> Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2010, (2010).</li>
<li>Blom, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+chromatographic+reduction+of+ovalbumin+for+egg-based+influenza+virus+purification%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Efficient chromatographic reduction of ovalbumin for egg-based influenza virus purification.</a> Vaccine. 32 (30), 3721-3724 (2014).</li>
<li>Hegde, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture-based+influenza+vaccines%3A+A+necessary+and+indispensable+investment+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+and+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Cell culture-based influenza vaccines: A necessary and indispensable investment for the future.</a> Human Vaccines and Immunotherapeutics. 11 (5), 1223-1234 (2015).</li>
<li>Fulber, J. P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Process+development+for+Newcastle+disease+virus-vectored+vaccines+in+serum-free+vero+cell+suspension+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccines%22%5BJournal%5D)">Process development for Newcastle disease virus-vectored vaccines in serum-free vero cell suspension cultures.</a> Vaccines. 9 (11), 1335(2021).</li>
<li>Ungerechts, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moving+oncolytic+viruses+into+the+clinic%3A+clinical-grade+production%2C+purification%2C+and+characterization+of+diverse+oncolytic+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy.+Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Moving oncolytic viruses into the clinic: clinical-grade production, purification, and characterization of diverse oncolytic viruses.</a> Molecular Therapy. Methods & Clinical Development. 3, 16018(2016).</li>
<li>Ayllon, J., García-Sastre, A., Martínez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+recombinant+Newcastle+disease+virus+from+cDNA%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+%28Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Rescue of recombinant Newcastle disease virus from cDNA.</a> JoVE (Journal of Visualized Experiments. (80), e50830(2013).</li>
<li>Zhao, W., Zhang, Z., Zsak, L., Yu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P+and+M+gene+junction+is+the+optimal+insertion+site+in+Newcastle+disease+virus+vaccine+vector+for+foreign+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">P and M gene junction is the optimal insertion site in Newcastle disease virus vaccine vector for foreign gene expression.</a> The Journal of General Virology. 96, Pt 1 40-45 (2015).</li>
<li>van Vloten, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+purification+of+high-titer+OrfV+for+preclinical+studies+in+vaccinology+and+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+-+Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Production and purification of high-titer OrfV for preclinical studies in vaccinology and cancer therapy.</a> Molecular Therapy - Methods & Clinical Development. 23, 434-447 (2021).</li>
<li>Ramakrishnan, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+50%25+endpoint+titer+using+a+simple+formula%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Determination of 50% endpoint titer using a simple formula.</a> World Journal of Virology. 5 (2), 85(2016).</li>
<li>Yuan, P., Paterson, R. G., Leser, G. P., Lamb, R. A., Jardetzky, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+Ulster+strain+Newcastle+disease+virus+hemagglutinin-neuraminidase+reveals+auto-inhibitory+interactions+associated+with+low+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Structure of the Ulster strain Newcastle disease virus hemagglutinin-neuraminidase reveals auto-inhibitory interactions associated with low virulence.</a> PLoS Pathogens. 8 (8), (2012).</li>
<li>Sheets, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opinion+on+adventitious+agents+testing+for+vaccines%3A+Why+do+we+worry+so+much+about+adventitious+agents+in+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Opinion on adventitious agents testing for vaccines: Why do we worry so much about adventitious agents in vaccines.</a> Vaccine. 31 (26), 2791-2795 (2013).</li>
<li>Chung, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+allergies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Vaccine+Research%22%5BJournal%5D)">Vaccine allergies.</a> Clinical and Experimental Vaccine Research. 3 (1), 50(2014).</li>
<li>Schirrmacher, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifty+years+of+clinical+application+of+Newcastle+disease+virus%3A+time+to+celebrate%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Fifty years of clinical application of Newcastle disease virus: time to celebrate.</a> Biomedicines. 4 (3), (2016).</li>
<li>Ajamian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL5+persists+in+RSV+stocks+following+sucrose-gradient+purification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">CCL5 persists in RSV stocks following sucrose-gradient purification.</a> Journal of Leukocyte Biology. 108 (1), 169-176 (2020).</li>
<li>Axis-Shield. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Axis-Shield+OptiPrepTM+The+ideal+density+gradient+medium+for+isolation+of+blood+cells%22">Axis-Shield OptiPrepTM The ideal density gradient medium for isolation of blood cells</a>. , (2020).</li>
<li>Mita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiproinflammatory+effects+of+iodixanol+%28OptiPrep%29-based+density+gradient+purification+on+human+islet+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Antiproinflammatory effects of iodixanol (OptiPrep)-based density gradient purification on human islet preparations.</a> Cell Transplantation. 19 (12), 1537-1546 (2010).</li>
<li>Gias, E., Nielsen, S. U., Morgan, L. A. F., Toms, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+human+respiratory+syncytial+virus+by+ultracentrifugation+in+iodixanol+density+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Purification of human respiratory syncytial virus by ultracentrifugation in iodixanol density gradient.</a> Journal of Virological Methods. 147 (2), 328-332 (2008).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+efficient+purification+of+Citrus+yellow+vein+clearing+virus+by+sucrose+cushion+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">A rapid and efficient purification of Citrus yellow vein clearing virus by sucrose cushion ultracentrifugation.</a> Journal of Plant Pathology. 98 (1), 159-161 (2016).</li>
<li>Zhao, H., Peeters, B. P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+Newcastle+disease+virus+as+a+viral+vector%3A+Effect+of+genomic+location+of+foreign+gene+on+gene+expression+and+virus+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">Recombinant Newcastle disease virus as a viral vector: Effect of genomic location of foreign gene on gene expression and virus replication.</a> Journal of General Virology. 84 (4), 781-788 (2003).</li>
<li>Cheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+modification+of+oncolytic+Newcastle+disease+virus+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Genetic modification of oncolytic Newcastle disease virus for cancer therapy.</a> Journal of Virology. 90 (11), 5343-5352 (2016).</li>
<li>Chen, T. -F., Jang, J. -W., Miller, J. A. STABLE AND FILTERABLE ENVELOPED VIRUS FORMULATIONS STABILE UND FILTERBARE EINGEHÜLLTE VIRUSFORMULIERUNGEN FORMULATIONS DE VIRUS ENVELOPPÉS FILTRABLES ET STABLES (84). EUROPEAN PATENT SPECIFICATION. , Designated Contracting States: AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LI LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR 1-14 (2007).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+amino+acid+sequence+diversity+at+the+F+protein+cleavage+site+of+Newcastle+disease+virus+in+fusogenic+activity%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of amino acid sequence diversity at the F protein cleavage site of Newcastle disease virus in fusogenic activity.</a> PLOS ONE. 12 (9), 0183923(2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Virussen die in preklinisch onderzoek als therapeutisch middel worden gebruikt, moeten sterk worden gezuiverd om toxiciteit te voorkomen wanneer ze in vivo worden toegediend 15. Als onvoorziene agentia of verontreinigingen niet worden verwijderd, kan dit leiden tot ernstige bijwerkingen die het therapeutische effect van het virale middel tenietdoen28. Aangezien NDV wordt geproduceerd in embryonale kippeneieren, zijn er verschillende verontreinigende ei-eiwitten, zo...

Newcastle Disease Virus, ook bekend als Avian Orthoavulavirus-1, is een omhuld aviair paramyxovirus met het potentieel om zowel als een oncolytisch virus of een viraal gevectord vaccin 1,2,3,4,5,6,7 te worden gebruikt. Meest recent is NDV ontworpen om het spike-eiwit van SARS-CoV-2 tot expressie te brengen, gekarakteriseerd als een effectief intranasaal vaccin in muis- en hamsteruitdagingsmodellen 7,8,9. Wanneer het wordt gebruikt als kankerimmunotherapie, resulteert het in de rekrutering van aangeboren immuuncellen, met name natuurlijke killercellen, productie van type I interferon en de generatie van antitumorspecifieke T-cellen 10,11,12,13. Naast deze krachtige immunostimulerende eigenschappen heeft NDV een sterk veiligheidsprofiel en een goed ingeburgerd omgekeerd genetisch systeem14,15. Deze wenselijke kenmerken hebben geleid tot de evaluatie van NDV in talrijke preklinische en humane klinische onderzoeken (NCT04871737, NCT01926028, NCT04764422)16,17. Om deze veelbelovende, immuunstimulerende virale vector verder te bevorderen, zijn gedetailleerde methoden nodig voor het produceren en zuiveren van ultrazuivere NDV met hoge titer die veilig in vivo kan worden toegediend.
Omdat NDV een vogelparamyxovirus is, wordt het meestal versterkt in embryonale kippeneieren. Hoewel er op cellen gebaseerde systemen beschikbaar zijn voor het vermeerderen van NDV, zijn de meeste niet in staat geweest om titers te produceren die vergelijkbaar zijn met die in embryonale kippeneieren18. Niettemin zijn er enkele nadelen aan het produceren van NDV in eieren, waaronder het feit dat de productie op basis van eieren lang en niet gemakkelijk schaalbaar is, het inkopen van grote hoeveelheden SPF-kippeneieren problematisch kan zijn en er bestaat het potentieel voor besmetting met ei-allergenen 13,18,19,20 . Onlangs heeft een groep aangetoond dat Vero-cellen gekweekt in suspensie in serumvrij medium de replicatie van NDV naar titers kunnen ondersteunen die vergelijkbaar zijn met die in eieren, voorafgaand aan zuivering21. Dit vereiste echter seriële passaging van het virus om het virus aan te passen aan Vero-cellen, en de optimalisatie van een methode om NDV te zuiveren van suspensie Vero-cellen is nog steeds vereist21.
Zoals eerder benadrukt, variëren de methoden die worden gebruikt voor het zuiveren van hoogtiter, in vivo-grade virus afhankelijk van het virus in vraag22. Er is een goed ingeburgerd omgekeerd genetisch systeem beschikbaar voor het genereren van recombinant NDV. Dit proces, waarbij gebruik wordt gemaakt van een cDNA-kloon, helperplasmiden en een helpervirus dat T7-RNA-polymerase tot expressie brengt, is eerder in detail beschreven15,23. Dit protocol kan worden toegepast op lentogene of mesogene NDV. Het virus dat in dit protocol wordt beschreven, is een recombinant mesogeen NDV dat codeert voor het groene fluorescerende eiwit (GFP) van de kwal Aequorea victoria die tussen virale P- en M-genen is ingebracht als een individuele transcriptie-eenheid, omdat dit eerder is beschreven als de optimale plaats voor vreemde transgene insertie24.
Ingesloten methoden schetsen de zuivering van NDV op basis van de grootte, variërend van 100 tot 500 nm, en de dichtheid15. Dit heeft het mogelijk gemaakt om in vivo-grade, high-titer NDV-bestanden in ongeveer 3 weken te genereren, vanaf het moment dat de eieren worden ontvangen tot het hebben van een laatste titer. Technieken die vaak worden gebruikt bij de grootschalige productie van op eieren gebaseerde virussen, zoals tangentiële stromingsfiltratie, dieptefiltratie en ultracentrifugatie van de dichtheidsgradiënt, worden beschreven, waardoor de vertaling van deze methoden naar grootschalige productie mogelijk wordt. Eerder beschreven technieken voor de zuivering van NDV zijn verbeterd door de opname van een virusstabiliserende buffer, het gebruik van iodixanol tijdens ultracentrifugatie van de dichtheidsgradiënt en de beschrijving van verschillende kwaliteitscontrolemaatregelen om de kwaliteit van in vivo kwaliteit te waarborgen15. Dit heeft de zuivering mogelijk gemaakt van in vivo-grade NDV die titers bereiken tot 3 × 1010 PFU / ml van 0,8 tot 1,0 l allantoïsche vloeistof.

<table><tbody><tr><td>0.25% Trypsin</td><td>HyClone</td><td>SH30042.02</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Slip-Tip Syringe</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Luer-Lok Syringe</td><td>BD</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10% Povidone Iodine Solution</td><td>LORIS</td><td>109-08</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Conical Tubes</td><td>Thermo-Fisher</td><td>14955240</td><td></td></tr><tr><td>18G x 1 1/2 in Blunt Fill Needle</td><td>BD</td><td>305180</td><td></td></tr><tr><td>18G x 1 1/2 in Precision Glide Needle</td><td>BD</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>25 G x 5/8 in Needle</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Thermo-Fisher</td><td>03446I-100</td><td></td></tr><tr><td>30% Acrylamide/Bis Solution 37.5:1</td><td>BioRad</td><td>1610158</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyde-PBS</td><td>Thermo-Fisher</td><td>J19943-K2</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Luer-Lok Syringe</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>96 Well Tissue Culture Plate - Flat Bottom</td><td>Greiner Bio One</td><td>655180</td><td></td></tr><tr><td>Acetic Acid, Glacial</td><td>Thermo-Fisher</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Froggabio</td><td>A87-500G</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-Fluor 488 Goat-Anti-Mouse</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td></td></tr><tr><td>Allegra X-14 Centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>B08861</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium Persulfate</td><td>BioRad</td><td>161-0700</td><td></td></tr><tr><td>Bleach (5%)</td><td>Thermo-Fisher</td><td>36-102-0599</td><td></td></tr><tr><td>Broad, unserrated tipped forceps</td><td>Thermo-Fisher</td><td>09-753-50</td><td></td></tr><tr><td>Bromophenol Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>114405-25G</td><td></td></tr><tr><td>Centramate Cassette Holder</td><td>PALL</td><td>CM018V</td><td></td></tr><tr><td>ChemiDoc XRS+</td><td>BioRad</td><td>1708265</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubator</td><td>Thermo-Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coomassie Brilliant Blue R-259</td><td>Thermo-Fisher</td><td>BP101-50</td><td></td></tr><tr><td>DF1 Cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-12203</td><td></td></tr><tr><td>Diet Gel Recovery</td><td>ClearH2O, INC</td><td>72-01-1062</td><td></td></tr><tr><td>Digital 1502 Sportsman Egg Incubator</td><td>Berry Hill</td><td>1502W</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4125-500G</td><td></td></tr><tr><td>Egg Candler</td><td>Berry Hill</td><td>A46</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (70%)</td><td>Thermo-Fisher</td><td>BP82031GAL</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) solution, pH 8.0, 0.5 M in H2O</td><td>Thermo-Fisher</td><td>BP2482-500</td><td></td></tr><tr><td>Female Threaded Tee fittings, nylon, 1/8 in NPT(F)</td><td>Cole-Parmer</td><td>06349-50</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>Fine Point High Precision Forceps</td><td>Thermo-Fisher</td><td>22-327379</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescent Microscope</td><td>ZEISS AXIO</td><td></td><td>Niet nodig als er geen IFA wordt uitgevoerd of als NDV geen fluorescent eiwit codeert</td></tr><tr><td>Freeze Dry System Freezone 4.5</td><td>LABCONCO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GiBOX Gel Imager</td><td>Syngene</td><td></td><td>Beeldvorming van agarose gels</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Thermo-Fisher</td><td>G33-1</td><td></td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Thermo-Fisher</td><td>BP381-5</td><td></td></tr><tr><td>High Capacity cDNA Reverse Transcriptase Kit</td><td>Thermo-Fisher</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>High Glucose Dulbecco's Modified Essential Medium</td><td>Cytiva</td><td>SH30022.01</td><td></td></tr><tr><td>Humidity Kit</td><td>Berry Hill</td><td>3030</td><td></td></tr><tr><td>Iodixanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1556</td><td>60% (w/v) oplossing van iodixanol in water (steriele)</td></tr><tr><td>L-Lysine Monohydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>62929-100G-F</td><td></td></tr><tr><td>Male and Female Luer-Lok a 1/8 in national pipe thread, NPT</td><td>Cole-Parmer</td><td>41507-44</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Digital Drive</td><td>Cole-Parmer</td><td>RK-07522-20</td><td>Peristaltische pomp met digitaal display</td></tr><tr><td>Masterflex L/S Easy Load Pump Head for Precision Tubing</td><td>Cole-Parmer</td><td>RK-07514-10</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex Silicon tubing (Platinum) L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>96420-16</td><td>BioPharm Platinum-Cured Silicone</td></tr><tr><td>MC Pro 5 Thermocycler</td><td>Eppendorf</td><td>EP950040025</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Thermo-Fisher</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>Mini Protean Tetra Cell</td><td>BioRad</td><td>1658000EDU</td><td>SDS-PAGE cast en draaiende apparaat</td></tr><tr><td>Mouse-Anti-NDV</td><td>Novus Biologicals</td><td>NBP2-11633</td><td>Clone 6H12</td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>Abcam</td><td>AB7481</td><td></td></tr><tr><td>NP-40</td><td>Thermo-Fisher</td><td>85124</td><td></td></tr><tr><td>Omega Membrane LV Centramate Cassette, 100K</td><td>PALL</td><td>OS100T02</td><td></td></tr><tr><td>Optima XE-90 Ultracentrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>A94471</td><td></td></tr><tr><td>OWL Easycast B1A Mini Gel Electrophoresis System</td><td>Thermo-Fisher</td><td>B1A</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10X Solution</td><td>Thermo-Fisher</td><td>BP399-20</td><td></td></tr><tr><td>Poly(Ethylene Glycol) Average Mn 20,000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81300-1KG</td><td></td></tr><tr><td>PowePac 300</td><td>BioRad</td><td></td><td>Model 1655050 - voor agarose gel elektroforese</td></tr><tr><td>Q5 High Fidelity 2X Master Mix</td><td>New England Biolabs</td><td>M0492S</td><td></td></tr><tr><td>QIA Amp Viral RNA Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>52904</td><td></td></tr><tr><td>RedSafe</td><td>Thermo-Fisher</td><td>50999562</td><td></td></tr><tr><td>Slide-a-lyzer Dialysis Cassette (Extra Strength), 10,000 MWCO 0.5-3 mL</td><td>Thermo-Fisher</td><td>66380</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Dodecyl Sulfate</td><td>Thermo-Fisher</td><td>BP166-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Hydroxide (Pellets)</td><td>Thermo-Fisher</td><td>S318-10</td><td></td></tr><tr><td>Specific pathogen free

productie van high-titer recombinant newcastle disease virus uit allantoic fluid

Production of High-Titer Recombinant Newcastle Disease Virus from Allantoic Fluid

Newcastle disease virus (NDV), ook bekend als aviaire orthoavulavirus serotype-1, is een negatief zintuig, enkelstrengs RNA-virus dat zowel als een oncolytisch virus als een viraal gevectord vaccin is ontwikkeld. NDV is een aantrekkelijk therapeutisch en profylactisch middel vanwege het gevestigde omgekeerde geneticasysteem, krachtige immunostimulerende eigenschappen en een uitstekend veiligheidsprofiel. Bij toediening als een oncolytisch virus of een viraal gevectoreerd vaccin, lokt NDV een robuuste antitumor- of antigeenspecifieke immuunrespons uit, waardoor zowel de aangeboren als de adaptieve armen van het immuunsysteem worden geactiveerd. 
Gezien deze wenselijke kenmerken is NDV geëvalueerd in tal van klinische onderzoeken en is het een van de best bestudeerde oncolytische virussen. Momenteel zijn er twee geregistreerde klinische onderzoeken met NDV: een evaluatie van een recombinant NDV-gevectoreerd vaccin voor SARS-CoV-2 (NCT04871737), en een tweede evaluatie van een recombinant NDV dat codeert voor Interleukine-12 in combinatie met Durvalumab, een antiPD-L1-antilichaam (NCT04613492). Om verdere vooruitgang van deze veelbelovende virale vector mogelijk te maken, zijn vereenvoudigde methoden nodig voor het genereren van high-titer, in vivo-grade, recombinant NDV (rNDV). 
Dit artikel beschrijft een gedetailleerde procedure voor het versterken van rNDV in gespecificeerde pathogeenvrije (SPF) embryonale kippeneieren en het zuiveren van rNDV uit allantoïsche vloeistof, met verbeteringen om verlies tijdens zuivering te verminderen. Ook inbegrepen zijn beschrijvingen van de aanbevolen kwaliteitscontroletests, die moeten worden uitgevoerd om het gebrek aan verontreinigingen en virusintegriteit te bevestigen. Over het algemeen maakt deze gedetailleerde procedure de synthese, zuivering en opslag van high-titer, in vivo-grade, recombinant, lentogeen en mesogene NDV mogelijk voor gebruik in preklinische studies.

Allantoïsche vloeistof oogsten Omdat allantoïsche vloeistof wordt geoogst uit embryonale kippeneieren, moet het er helder en transparant uitzien. Als de vloeistof ondoorzichtig en geel lijkt, duidt dit op de aanwezigheid van verontreinigingen. Opname van deze allantoïsche vloeistof tijdens de zuivering zal het zuiveringsproces belemmeren, omdat de druk snel zal stijgen en 10 psi zal overschrijden, wat resulteert in het afschuiven van het virus en het verlies van infectieus virus. Allantoïsche vloeisto...

Hier bieden we een gedetailleerde procedure voor de productie, zuivering en kwantificering van high-titer recombinant Newcastle disease virus. Dit protocol levert consequent > 6 × 109 plaquevormende eenheden/ml op, wat virushoeveelheden oplevert die geschikt zijn voor in vivo dierstudies. Aanvullende kwaliteitscontroletests om de veiligheid in vivo te waarborgen, worden beschreven.

Productie van High-titer Recombinant Newcastle Disease Virus uit Allantoic Fluid

Newcastle disease virus (NDV), also known as avian orthoavulavirus serotype-1, is a negative sense, single-stranded RNA virus that has been developed both ...

Dit protocol schetst de technieken die worden gebruikt om Newcastle Disease Virus te produceren, zodat het veilig kan worden toegediend aan muizen en andere dieren zoals hamsters en schapen. Het gebruik van tangentiële stroomfiltratie maakt het mogelijk om grote startvolumes efficiënter te verwerken in vergelijking met bestaande procedures die alleen centrifugatieprocessen gebruiken. Dit is een langdurige procedure met verschillende ingewikkelde stappen, wat betekent dat tijdbeheer een probleem kan zijn.Ik zou aanraden om alle mogelijke pauzestappen te identificeren, zodat de techniek op de juiste manier kan worden opgesplitst, waardoor stress wordt geminimaliseerd. Deze procedure wordt gedemonstreerd door Alex, een onderzoeksassistent van mijn laboratorium. Voor de zuivering van Newcastle Disease Virus of NDV, eerst, prime het eerder ingestelde experimentele systeem door er 50 milliliter PBS doorheen te laten lopen.Stop de pomp wanneer er ongeveer vijf milliliter PBS in de buis zit. Bevestig vervolgens een dieptefilter met een retentieclassificatie van één tot drie micromolars aan de buis. Om het filter te ontluchten, verwijdert u de tweede dop aan de epical kant van het dieptefilter en begint u met het uitvoeren van nog eens 50 milliliter PBS door het systeem.Zodra de PBS door de ventilatieopening aan de bovenkant van het filter begint te stromen, sluit u de poort en blijft u PBS door de leidingen stromen. Vervang daarna het afvalvat door een nieuw steriel opvangvat en begin met het uitvoeren van Allantoic Fluid door het dieptefilter. Stel vervolgens het tangentiële stroomfiltratie- of TFF-systeem in een open bevestiging in en voer uit zoals beschreven in het manuscript.Wanneer er nog ongeveer vijf milliliter vloeistof in het reservoir zit, pauzeer dan de pomp en voeg diepte gefilterde allantoïsche vloeistof toe aan het reservoir. Hervat vervolgens de pompstroom. Om afschuiving van het virus te voorkomen, is het belangrijk om ervoor te zorgen dat de druk van het systeem niet hoger is dan 10 pond kracht per vierkante inch.Om de illusie te vergroten, moet een combinatie van de snelheid van de peristaltische pomp en de C-klem worden gebruikt. 150 tot 100 milliliter allantoïsche vloeistof blijft achter in het reservoir, pauzeer de pomp en wissel de buffer door 150 tot 200 milliliter ML-buffer toe te voegen. Nogmaals, pauzeer de pomp wanneer er vijf tot 10 milliliter vloeistof in het reservoir achterblijft en sluit vervolgens met behulp van twee C-klemmen de taille.Koppel de geretenteerde lijn die het reservoir voedt los en steek deze in een conische buis van 50 milliliter. Hervat vervolgens de stroom en pauzeer wanneer er nog maar weinig druppels vloeistof in de reservoirtank achterblijven. Verwijder vervolgens de C-klemmen van de afvalleidingen en bevestig de geretenteerde voedingsleiding opnieuw aan de reservoirtank.Ondertussen, om u voor te bereiden op iodixanol dichtheid gradiënt ultracentrifugatie, eerst een 0,5 milliliter van 40% iodixanol toe te voegen aan een 13,2 milliliter open dunne wand ultra centrifuge buis. Maak vervolgens de kolom klaar met opeenvolgende toevoegingen van 2,5 milliliter 20% jodidinenol en 2,5 milliliter 10% jodidinenol. Voeg vóór ultracentrifugatie voorzichtig zes tot 6,5 milliliter van de virusoplossing toe die uit het TFF-systeem wordt genoemd aan de iodixanolkolom zonder de gradiënt te verstoren.Verwijder na ultracentrifugatie de buisjes met een steriele tang. De doelband moet een grote band zijn tussen de 10 en 20% gradiënten. Hang vervolgens de buis over de bovenkant van een bekerglas met behulp van een retortstandaard.Bevestig daarna een 1,5 inch naald van 18 gauge aan een spuit van vijf milliliter en prik vervolgens de zijkant van de ultracentrifugebuis door met de naald en verwijder de doelband door de zuiger langzaam uit te trekken. Na het verwijderen van iodixanol uit de virusoplossing zoals beschreven in het manuscript, gebruikt u een spuit om het virus voorzichtig in een dialysecassette te injecteren. Om de virusoplossing te concentreren, verwijdert u de dialysecassette uit de dialysebuffer en plaatst u deze in een kleine afsluitbare plastic zak.Voeg vervolgens een 15 tot 25 milliliter van 40% polyethyleenglycol toe aan de zak zodat de dialysecassette volledig onder water staat. Spoel na dialyse de dialysecassette kort af met PBS. Vul vervolgens een spuit met een 1,5 inch naald van 18 gauge met lucht, steek de spuit in de dialysecassette en duw op de zuiger.Draai het apparaat voor het verwijderen van het virus zonder de ingebrachte lucht te verwijderen. Om het resterende virus dat zich aan het membraan hecht te verjagen, masseert u het membraan zorgvuldig met gehandschoende vingers zonder het te beschadigen. Om het ontwrichtingsproces te vergemakkelijken, verwijdert u een deel van de overtollige lucht in de dialysecassette.Voor kwaliteitscontroletests verdunt u eerst de virusoplossing 100 keer door er 10 microliter van toe te voegen aan 990 microliter PBS in een buis van 1,5 milliliter. Ga vervolgens verder met seriële verdunning door 100 microliter van de vorige verdunning toe te voegen aan 900 microliter PBS. Voeg voor infectietests 20 microliter van elke waan toe aan elke put van een 96 putplaat.Voordat u het cytopathische effect van groen fluorescentie-eiwit onderzoekt of een indirecte immunofluorescentietest uitvoert, incubeert u de plaat bij 37 graden Celsius met 5% koolstofdioxide gedurende ten minste 48 uur. Door dit protocol te gebruiken, werd sterk gezuiverde NDV verkregen, zoals aangetoond door natriumsulfaat polyacrylamide gel elektroforese van de virale eiwitten. De infectiviteit van het virus dat met deze methode werd gezuiverd, werd ook geverifieerd door de 50% weefselkweekinfectiedosis of TCID50-test uitgevoerd in 96 putplaten.De TCID50 werd bepaald uit het aantal positieve putten voor elke verdunning met behulp van de Spearman-Karber calculator. De infectietest onthulde het verschil tussen de cytopathische effecten van lentogene en mesogene NDV op DF-één-cellen onder verschillende omstandigheden na 10 en 24 uur incubatie. De immuno florence assay was ook effectief in het bestuderen van de infectie van Vero-cellen door lentogene NDV.Zorg er bij het priming van het experimentele systeem voor dat de lijnen effectief worden geprimed, omdat elke resterende natriumhydroxide het virus zal inactiveren. Het is ook belangrijk om de membraanintegriteit te behouden, omdat het compromitteren hiervan de viruszuivering en -opbrengst aanzienlijk zal schaden.

production-high-titer-recombinant-newcastle-disease-virus-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Redding van influenza A-virussen uit het plasmide DNA is een fundamentele en essentiële experimentele techniek die het mogelijk maakt influenza onderzoekers recombinante virussen te genereren om meerdere aspecten in de biologie van influenza virus te bestuderen en om te worden gebruikt als potentiële vectoren of vaccins.

Generatie van recombinant griepvirus uit plasmide-DNA

In dit artikel beschrijven we de identificatie van het adeno-geassocieerd virus serotype 3 (AAV3) als de meest efficiënte vector voor het richten van de menselijke lever kankercellen.

High-Efficiency transductie van leverkanker met behulp van recombinant adeno-geassocieerd virus serotype 3 Vectoren

Recombinant adeno-associated virus (rAAVs) vectoren worden steeds waardevol...

Productie en Titering van recombinant adeno-geassocieerde virale vectoren

Hier beschrijven protocol alleen gebaseerd op cel infectie, hetgeen het rendement van recombinant parvovirus productie van meer dan 100 maal in vergelijking met andere protocollen gebruikt verbetert. Dit protocol is gebaseerd op het gebruik van een nieuw adenovirus 5 gebaseerde helper met de parvovirus VP transcriptie-eenheid (Ad-VP).

Efficiënte Recombinant Parvovirus productie met de hulp van Adenovirus-afgeleide systemen

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Propagation and Harvest of Influenza Virus from a Fertilized Chicken Egg

Redding van recombinant arenavirussen uit gekloneerde cDNA's, gegeven voor een reverse genetische benadering stelt onderzoekers de rol van specifieke virale genproducten, evenals de bijdrage van de verschillende specifieke gebieden en residuen te onderzoeken, om verschillende aspecten van de biologie van arenavirus . Ook reverse genetics technieken FDA-goedgekeurde cellijnen (Vero) voor vaccinontwikkeling verschaft nieuwe mogelijkheden voor het genereren van effectieve en veilige vaccins ter...

Generatie van recombinant arenavirus for Vaccine Development in FDA-goedgekeurde Vero cellen

Newcastle Disease Virus (NDV) is uitgebreid bestudeerd in de afgelopen jaren om nieuwe vectoren te ontwikkelen voor vaccinatie en therapie, onder anderen. Deze studies zijn mogelijk gemaakt door technieken om recombinant virus te redden van cDNA, zoals hier beschreven.

Redding van recombinant Newcastle Disease Virus uit cDNA

Bevruchte kippeneieren worden veel gebruikt om grote hoeveelheden humaan influenza A-virus te produceren, omdat ze een handig en kosteneffectief systeem bieden om hoge opbrengsten van het virus te bewijzen.

Influenza Virus Voortplanting in bevruchte kippeneieren

Hier bieden we een gedetailleerde procedure voor grootschalige productie van onderzoekskwaliteit AAV-vectoren met behulp van adherente HEK 293-cellen gekweekt in celstapels en affiniteitschromatografiezuivering. Dit protocol levert consequent &gt;1 x 1013 vectorgenomen /ml op, wat vectorhoeveelheden oplevert die geschikt zijn voor grote dierstudies.

Productie van Adeno-geassocieerde virusvectoren in celstapels voor preklinische studies in grote diermodellen

Naarmate het gebied van gentherapie zich blijft ontwikkelen, is er een groeiende behoefte aan innovatieve methoden die deze uitdagingen kunnen aangaan. Hier wordt een unieke methode gepresenteerd, die het proces van het genereren van AAV-vectoren met een hoge opbrengst en hoge zuiverheid stroomlijnt met behulp van een celfabrieksplatform, dat voldoet aan de kwaliteitsnormen voor in vivo studies.

Een gestroomlijnde en gestandaardiseerde procedure voor het genereren van adeno-geassocieerde virusvectoren met een hoge titer en hoge kwaliteit met behulp van een Cell Factory-platform

Dit artikel presenteert een vereenvoudigde methode voor het bereiden van 4 hemagglutinatie-eenheden antigeen voor serologische tests van het virus van de ziekte van Newcastle. Door de hemagglutinatietiter van het antigeen nauwkeurig te bepalen, in combinatie met een strengere back-titratiemethode en een goed gedefinieerd aanpassingsproces, verbetert het de testefficiëntie, vermindert het valse positieven en verbetert het ziektetoezicht bij pluimvee.

Optimalisatie van antigeenpreparaat voor hemagglutinatie-inhibitietest van Newcastle Disease Virus-serologie

Leer de productie van hoogtiter recombinant Newcastle disease virus uit allantoïsche vloeistof voor virologisch onderzoek met muizen en andere dieren. Deze methode levert meer dan 6 × 10⁹ plaque-vormende eenheden per mL op.

Productie van High-titer Recombinant Newcastle Disease Virus uit Allantoic Fluid

Meer video's verkennen