Name: Test voor Adhesie en Agar invasie in S. cerevisiae (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-08T00:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Leer een kwalitatieve test voor adhesie en agar-invasie bij S. cerevisiae om invasieve en pseudohyphale differentiatie te meten. Deze methode helpt onderzoekers gistmutanten en omgevingsinvloeden te evalueren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen graag Lisa Schneper en Katrin Duevel bedanken voor hun inzichten in de ontwikkeling van deze test.

<ol><li> Doe 200ul van groeiende culturen van de rente op synthetische media platen met de vereiste hongerdood voorwaarden (SC met 2% glucose versus SC met 0,2% glucose, bijvoorbeeld) Indien de dichtheid van culturen zijn te verschillend van elkaar, aan te passen celgetal per 200ul cultuur zodat elke druppel is ongeveer dezelfde hoeveelheid cellen. </li><li> Zorg ervoor dat gegevens van die druppel op de platen is die cultuur te houden. </li><li> Houd de plaat deksel op een kier en laat zowel bij kamertemperatuur of bij 30 ° C tot druppels droog. </li><li> Seal-platen met parafilm en plastic wrap (optioneel) en laat in 30 ° C voor 3-7 dagen. </li><li> Document van de groei van cellen op platen (door het scannen, het nemen van een digitale foto, etc) </li><li> Was de cellen off van de agar oppervlak met water onder hoge druk (bij voorkeur DI water) gedurende ongeveer een minuut nemen de zorg voor de agar niet op te tillen en te veranderen oriëntatie. </li><li> Zich te ontdoen van overtollig water door te tikken platen op keukenpapier en laat ze open om te drogen. </li><li> Zodra de platen zijn droge document hechting op elke plaat (door het scannen of het nemen van digitale foto&#39;s) </li><li> Met een gehandschoende vinger, zachtjes af te wrijven cellen vormen de agar oppervlak onder stromend water gedurende ongeveer een minuut. </li><li> Droog de platen als voorheen. </li><li> Bij gebruik van een ontleding scope, verwijder dan de naald voordat u platen op de microscoop platform. </li><li> Document invasie met 10x of 40x vergroting. Zorg ervoor om zich te concentreren op het midden van elke cirkel, want de randen zullen ook druk aan de individuele cel morfologie te zien. De randen kunnen wijzen op het niveau van de filamenteuze groei en kan worden gedocumenteerd voor toekomstig gebruik. Scannen of het nemen van een digitale foto van de hele plaat kan ook nuttig zijn. </li></ol>

<ol><li>Costerton, J. W., Lewandowski, Z., Caldwell, D. E., Korber, D. R., Lappin-Scott, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microbial biofilms.</a> Annu Rev Microbiol. 49, 711-745 (1995).</li>
<li>Elortondo, F. J. P., Salmeron, J., Albisu, M., Casas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms+in+the+food+industry%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Science+and+Technology+International%22%5BJournal%5D)">Biofilms in the food industry.</a> Food Science and Technology International. 5, 25-30 (1999).</li>
<li>Keinanen, M. M., Martikainen, P. J., Kontro, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+community+structure+and+biomass+in+developing+drinking+water+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microbial community structure and biomass in developing drinking water biofilms.</a> Can J Microbiol. 50, 183-191 (2004).</li>
<li>Biffinger, J. C., Pietron, J., Ray, R., Little, B., Ringeisen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biofilm+enhanced+miniature+microbial+fuel+cell+using+Shewanella+oneidensis+DSP10+and+oxygen+reduction+cathodes%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">A biofilm enhanced miniature microbial fuel cell using Shewanella oneidensis DSP10 and oxygen reduction cathodes.</a> Biosens Bioelectron. 22, 1672-1679 (2007).</li>
<li>Kim, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+community+structure%2C+compartmentalization+and+activity+in+a+microbial+fuel+cell%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bacterial community structure, compartmentalization and activity in a microbial fuel cell.</a> J Appl Microbiol. 101, 698-710 (2006).</li>
<li>Kim, J. R., Jung, S. H., Regan, J. M., Logan, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electricity+generation+and+microbial+community+analysis+of+alcohol+powered+microbial+fuel+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresour+Technol%22%5BJournal%5D)">Electricity generation and microbial community analysis of alcohol powered microbial fuel cells.</a> Bioresour Technol. 98, 2568-2577 (2007).</li>
<li>Picioreanu, C., Head, I. M., Katuri, K. P., Loosdrecht, M. C. van, Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+computational+model+for+biofilm-based+microbial+fuel+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">A computational model for biofilm-based microbial fuel cells.</a> Water Res. 41, 2921-2940 (2007).</li>
<li>Singh, R., Paul, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms%3A+implications+in+bioremediation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Biofilms: implications in bioremediation.</a> Trends in Microbiology. 14, 389-397 (2006).</li>
<li>Cullen, P. J., Sprague, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+depletion+causes+haploid+invasive+growth+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Glucose depletion causes haploid invasive growth in yeast.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13619-13224 (2000).</li>
<li>Gimeno, C. J., Ljungdahl, P. O., Styles, C. A., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unipolar+cell+divisions+in+the+yeast+S.+cerevisiae+lead+to+filamentous+growth%3A+regulation+by+starvation+and+RAS%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Unipolar cell divisions in the yeast S. cerevisiae lead to filamentous growth: regulation by starvation and RAS.</a> Cell. 68, 1077-1090 (1992).</li>
<li>Blankenship, J. R., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+build+a+biofilm%3A+a+fungal+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">How to build a biofilm: a fungal perspective.</a> Curr Opin Microbiol. 9, 588-594 (2006).</li>
<li>Reynolds, T. B., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bakers%27+yeast%2C+a+model+for+fungal+biofilm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bakers' yeast, a model for fungal biofilm formation.</a> Science. 291, 878-881 (2001).</li>
<li>Verstrepen, K. J., Klis, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flocculation%2C+adhesion+and+biofilm+formation+in+yeasts%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Flocculation, adhesion and biofilm formation in yeasts.</a> Mol Microbiol. 60, 5-15 (2006).</li>
<li>Liu, H., Styles, C. A., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elements+of+the+yeast+pheromone+response+pathway+required+for+filamentous+growth+of+diploids%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Elements of the yeast pheromone response pathway required for filamentous growth of diploids.</a> Science. 262, 1741-1744 (1993).</li>
<li>Madhani, H. D., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+filamentous+differentiation+and+virulence+in+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The control of filamentous differentiation and virulence in fungi.</a> Trends Cell Biol. 8, 348-353 (1998).</li>
<li>Mosch, H. U., Kubler, E., Krappmann, S., Fink, G. R., Braus, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+the+Ras2p-controlled+mitogen-activated+protein+kinase+and+cAMP+pathways+during+invasive+growth+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between the Ras2p-controlled mitogen-activated protein kinase and cAMP pathways during invasive growth of Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol Biol Cell. 10, 1325-1335 (1999).</li>
<li>Mosch, H. U., Roberts, R. L., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ras2+signals+via+the+Cdc42%2FSte20%2Fmitogen-activated+protein+kinase+module+to+induce+filamentous+growth+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Ras2 signals via the Cdc42/Ste20/mitogen-activated protein kinase module to induce filamentous growth in Saccharomyces cerevisiae.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 5352-5356 (1996).</li>
<li>Pan, X., Heitman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+AMP-dependent+protein+kinase+regulates+pseudohyphal+differentiation+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cyclic AMP-dependent protein kinase regulates pseudohyphal differentiation in Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol Cell Biol. 19, 4874-4887 (1999).</li>
<li>Roberts, R. L., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elements+of+a+single+MAP+kinase+cascade+in+Saccharomyces+cerevisiae+mediate+two+developmental+programs+in+the+same+cell+type%3A+mating+and+invasive+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Elements of a single MAP kinase cascade in Saccharomyces cerevisiae mediate two developmental programs in the same cell type: mating and invasive growth.</a> Genes Dev. 8, 2974-2985 (1994).</li>
<li>Robertson, L. S., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+three+yeast+A+kinases+have+specific+signaling+functions+in+pseudohyphal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The three yeast A kinases have specific signaling functions in pseudohyphal growth.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13783-13787 (1998).</li>
<li>Reynolds, T. B., Jansen, A., Peng, X., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mat+formation+in+Saccharomyces+cerevisiae+requires+nutrient+and+pH+gradients%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryot+Cell%22%5BJournal%5D)">Mat formation in Saccharomyces cerevisiae requires nutrient and pH gradients.</a> Eukaryot Cell. , (2007).</li>
</ol>

Gistcellen scherm verschillende modes differentiatie afhankelijk van de beschikbaarheid van voedingsstoffen en milieu-omstandigheden, met inbegrip spore vorming onder honger en stress omstandigheden, filamentatie onder verschillende voedingsstoffen spanningen, en flocculatie. Verschillende gisten, waaronder S. cerevisiae en C. albicans, kan ook worden gevonden in biofilms gevormd door een gevarieerde set van micro-organismen. Hoewel er enige correlatie met filamentatie en invasieve gedrag, is het niet duidelijk hoe filamentatie kan leiden t...

<table><tbody><tr><td>Moticam 350</td><td>Camera</td><td>Motic</td><td>niet meer leverbaar (nieuw model: Moticam 352)</td><td>Een relatief goedkope camera die op de oculairs van microscopen wordt bevestigd en digitale beelden vastlegt voor PC of Mac.</td></tr></tbody></table>

test voor adhesie en agar invasie in s. cerevisiae

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Gisten zijn te vinden in natuurlijke biofilms, waar veel micro-organismen koloniseren oppervlakken. In een kunstmatige omgeving, zoals de oppervlakken van de mens gemaakte objecten, kunnen biofilms verminderen industriële productiviteit, vernietigen structuren en bedreigen het menselijk leven. 1-3 op de andere kant kan het benutten van de kracht van biofilms helpen bij het schoonmaken van het milieu en het genereren van duurzame energie. 4-8 Het vermogen van S. cerevisiae aan oppervlakken koloniseren en participeren in complexe biofilms was grotendeels genegeerd tot de herontdekking van de differentiatie programma&#39;s veroorzaakt door verschillende signaalwegen en omgevingsfactoren in dit organisme. 9, 10 De aanhoudende belangstelling voor het gebruik S. cerevisiae als modelorganisme om de interactie en de convergentie van signaalwegen, zoals de Ras-PKA, Kss1 MAPK, en Hog1 osmolariteit paden, snel geplaatst S. cerevisiae in de kruising van de biofilm te begrijpen biologie en signaaltransductie onderzoek. 11-20 Te dien einde, differentiatie van gistcellen in lange, lijm, pseudohyfale filamenten werd een gemakkelijke uitlezing voor de activering van signaaltransductieroutes op diverse veranderingen in het milieu. Echter, filamentatie is een complexe verzameling van fenotypes, waardoor het testen voor het alsof het een simpel fenotype misleidend. In de afgelopen tien jaar werden verschillende tests met succes overgenomen van bacteriële biofilm studies om gist onderzoek, zoals de vorming van MAT assays om kolonie verspreiden meten op zachte agar en kristalviolet kleuring om kwantitatief te meten celoppervlak therapietrouw. 12, 21 echter, is er sprake van enige verwarring in assays ontwikkeld om de kwalitatieve evaluatie van de lijm en invasieve fenotypen van gist in agar. Hier presenteren wij een eenvoudige en betrouwbare methode voor de beoordeling van de lijm en invasieve de kwaliteit van giststammen met eenvoudig te begrijpen stappen om de hechting beoordeling isoleren van de invasie beoordeling. Onze methode, overgenomen van eerdere studies, 10, 16 impliceert groeiende cellen in vloeibare media en plating op differentiële voedingsstof voorwaarden voor groei van grote vlekken, die we vervolgens wassen met water om de hechting te beoordelen en volledig wrijven cellen uit de agar oppervlak invasie te beoordelen in de agar. We elimineren de noodzaak voor strepen cellen op agar, die de invasie van cellen beïnvloedt in de agar. In het algemeen hebben we opgemerkt dat haploïde stammen die agar binnenvallen altijd lijm zijn, maar niet alle lijm-stammen kunnen agar medium binnen te vallen. Onze aanpak kan worden gebruikt in combinatie met andere testen zorgvuldig te ontleden de differentiatie stappen en eisen van de gist signaaltransductie, differentiatie, quorum sensing, en biofilmvorming.

Beschrijven we een kwalitatieve analyse voor gist hechting en agar invasie als een maat voor invasieve en pseudohyfale differentiatie. Deze eenvoudige test kan gebruikt worden om de invasieve fenotype van verschillende mutanten, alsmede de effecten omgevingsfactoren te beoordelen en signaalwegen op gist differentiatie.

Test voor Adhesie en Agar invasie in S. cerevisiae

Gisten komen voor in natuurlijke biofilms, waarin veel micro-organismen oppervlakken koloniseren. In kunstmatige omgevingen, zoals oppervlakken van door mensen gemaakte objecten, ...

Neem 200 µL van de gewenste cultuur en breng deze aan. Gewoonlijk passen er tot zes monsters op een plaat als dat gewenst is; laat de plaat vervolgens openstaan om deze te laten drogen. Dit zijn twee platen.Eén daarvan bevat schimmel, maar dat is geen probleem omdat het ons experiment niet beïnvloedt. Eén daarvan bevindt zich in een compleet medium en één in een medium met een lage glucoseconcentratie. We gaan vervolgens kijken naar adhesie en invasie om te zien of er een verschil is.Haal de plaat dus op die manier uit de incubator. Je kunt zien dat er zaken groeien. Ik ga nu wassen.Je kunt de belletjes onder de boor zien, en dat komt omdat er water onder de boor is gekomen, wat geen probleem is, zolang de boor maar niet uit de plaat glijdt. Ik zou dus zeggen dat, hoewel sommige cellen zijn losgekomen, beide stammen adhesief zijn. De cellen hechten aan andere cellen die zich wellicht hechten aan de agar.Anders zouden veel van de cellen loskomen, maar dat gebeurde niet. Nu we de adhesie hebben gedocumenteerd, gaan we de invasie documenteren. Ik zal de cellen voorzichtig van het oppervlak afwrijven, voor zover ze loskomen.Ik oefen geen druk uit, maar ik probeer alles te verwijderen wat van het andere oppervlak komt. En u zult zien, u voelt uw vinger stoten waar de calling is. Ik probeer het te drogen. Kunnen we hier het verschil zien?Dat kan niet, wat gunstig is omdat dit een volledige plaat is en ze dus nergens een tekort aan hebben. En dit is een plaat met een laag glucosegehalte, waardoor ze een tekort aan glucose hebben. Daardoor ziet u een verschil.Dat is dus een goede controle.

assay-for-adhesion-and-agar-invasion-in-s-cerevisiae

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In deze video, beschrijven we een procedure voor de expressie van bacteriële type III effectoren in gist en het identificeren van effector-geïnduceerde groeiremming fenotypes. Dergelijke fenotypes kan vervolgens worden benut om effectorfuncties en doelstellingen toe te lichten.

Identificatie van groeiremming fenotypes geïnduceerd door expressie van bacteriële type III Effector in gist

Een algemeen protocol voor de studie van de invasie van gastheercellen door een bacteriële ziekteverwekker, gericht...

Invasie van menselijke cellen door een bacteriële pathogenen

Dit protocol is een eenvoudige bacteriële hechting test die bestaat in het tellen van de aantallen van bacteriële kolonievormende eenheden die in acht worden genomen op gekweekte cellen. De test is robuust, onafhankelijk van de adhesine bestudeerd en er zijn ontelbare variaties gebruikt in de meeste laboratoria werken aan bacteriële pathogenese.

In vitro assay van bacteriële hechting op zoogdieren epitheelcellen

This video illustrates the initiation of polymicrobial biofilm formation on virus-infected cells by bacteria and fungi. Herpes simplex virus infection impedes bacterial attachment to the cells, preventing bacterial-fungal co-localization. In contrast, uninfected cells display bacterial-fungal co-localization and initiation of biofilm formation.

An Assay to Determine Polymicrobial Biofilm Initiation on Virus-Infected Cells

Hier presenteren we een kosteneffectieve methode voor het definiëren van chemisch-genetische interacties in knopgistende gist. De benadering is gebaseerd op fundamentele technieken in moleculaire biologie van gist en is zeer geschikt voor het mechanistische onderzoek van kleine tot middelgrote collecties chemicaliën en andere media-omgevingen.

Snelle identificatie van chemische Genetische Interacties in<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Dit artikel beschrijft een op groei gebaseerde gisttest voor de bepaling van genetische vereisten voor eiwitafbraak. Het demonstreert ook een methode voor snelle extractie van gisteiwitten, geschikt voor western blotting om biochemisch de afbraakvereisten te bevestigen. Deze technieken kunnen worden aangepast om de afbraak van een verscheidenheid aan eiwitten te monitoren.

-Groei op basis Vaststelling en Biochemische Bevestiging van Genetische Eisen voor de afbraak van eiwitten in<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Dit protocol beschrijft een high-throughput methodologie om functioneel scherm op basis van eiwitten erfdeel in S. cerevisiae.

High-throughput Screening op basis van eiwitten erfdeel in S. cerevisiae

Deze studie toont het nut en het gemak van kwantitatieve celmembraan extensie meting en de correlatie met zelfklevende capaciteit van cellen. Als een representatief voorbeeld, laten we zien hier dat Dickkopf-gerelateerde eiwitten 3 (DKK3) bevordert de vorming van de verhoogde lobopodia en cel hechting in adrenocortical carcinoom cellen in vitro.

Karakterisering van de celmembraan extensies en het bestuderen van hun rollen in kanker cel adhesie Dynamics

Gistgroei fenotypes worden nauwkeurig gemeten door middel van zeer parallelle time-lapse beeldvorming van geïmmobiliseerde cellen die uitgroeien tot microkolonnies. Tegelijkertijd kunnen stresstolerantie, eiwitexpressie en eiwitlokalisatie worden gemonitord, waardoor geïntegreerde datasets worden gegenereerd om te bestuderen hoe omgevings- en genetische verschillen, evenals genexpressie heterogeniteit tussen isogene cellen, de groei moduleren.

Live imaging met hoge doorvoer van microkolonnies om heterogeniteit in groei en genexpressie te meten

Hier presenteren we een protocol voor het onderzoek van orale Candida-infectie bij patiënten met het primaire syndroom van Sjögren, dat kan worden gebruikt voor tijdige behandeling en daarna om gerelateerde complicaties te voorkomen.

Onderzoek naar orale Candida-infectie bij patiënten met het primaire syndroom van Sjögren

Leer een kwalitatieve test voor adhesie en agar-invasie bij S. cerevisiae om invasieve en pseudohyphale differentiatie te meten. Deze methode helpt onderzoekers gistmutanten en omgevingsinvloeden te evalueren.

Test voor Adhesie en Agar invasie in S. cerevisiae

Meer video's verkennen