Name: Embryo Rescue Protocol voor interspecifieke hybridisatie in squash (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Leer een embryo-redcaprotocol voor interspecifieke hybridisatie in Cucurbita pepo en Cucurbita moschata. Deze eenvoudige methode met MS-medium en antibiotica maakt regeneratie van onrijpe embryo's mogelijk voor fokprogramma's.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het USDA National Institute of Food and Agriculture, NRS Project No. FLA-TRC-006176 en het University of Florida Institute of Food and Agricultural Sciences.

1. Planten en bestuiven
OPMERKING: Het is belangrijk om compatibele genotypen te identificeren waarvan de hybridisatie zou resulteren in vruchtzetting en de productie van levensvatbare embryo's.
<ol><li>Plantomstandigheden en onderhoud<ol><li>Verkrijg zaden van squashgenotypen (cultivars/toetredingen) voor hybridisatie (tabel 1).</li>
		<li>Vul 50-cel startplaten (25 cm breed x 50 cm lang) met potmedium aangepast met complete NPK-meststof met 1,38 g/kg N, 1,38 g/kg P en 1,38 g/kg K.</li>
		<li>Zaai zaden tot een diepte gelijk aan hun lengte en bedek met potmedium. Geef de flats water zonder stilstaand water te creëren. Houd daarna de media vochtig door het eenmaal per dag met de hand water te geven.</li>
		<li>In het tweede true-leaf stadium transplanteer je de zaailingen in potten met een diameter van 25 cm tot 30 cm, aangepast met een complete NPK-meststof op 3 eetlepels / pot. Bemest de planten eenmaal per week met 500 ml / pot vloeibare meststof met NPK 20:20:20 toegevoegd aan een concentratie van 1 g per gallon water.</li>
		<li>Onderhoud planten in de kas bij temperaturen tussen 22-28 °C onder natuurlijk lichtregime. Zorg voor vining genotypen voor een ondersteunend traliewerk in de kas (figuur 1).</li>
	</ol></li>
	<li>Bestuivingen uitvoeren<ol><li>Meestal begint de bloei in squash na 6 tot 8 weken na het zaaien, afhankelijk van de cultivar (figuur 2A, B). Begin met het maken van gecontroleerde hybridisatie (kruisingen) zodra de planten beginnen te bloeien. Onder broeikasomstandigheden kan bestuiving het hele jaar door worden gedaan.</li>
		<li>Identificeer mannelijke en vrouwelijke bloemen van C. pepo en C. moschata cultivars die de volgende dag klaar zullen zijn voor bestuiving. Om dergelijke bloemen te identificeren, controleert u op bloemen waarvan de bloemblaadjes een gele tint hebben maar niet open zijn. Plak de bloemen voorzichtig aan de bovenkant dicht met afplaktape om onbedoelde bestuiving van insecten te voorkomen (figuur 2C,D).</li>
		<li>De ochtend van de volgende dag zijn de bloemen klaar om te bestuiven. Voer bestuiving uit vóór 10:00 uur om de snelheid van hybridisatiesucces te verbeteren27.</li>
		<li>Open de vrouwelijke en mannelijke bloemen door voorzichtig het getapete bovenste gedeelte van de bloemblaadjes te verwijderen. Verwijder de bloemblaadjes van de mannelijke bloem en breng het stuifmeel over door de helmknop zachtjes op het stigma van de vrouwelijke bloem te wrijven (figuur 3A).</li>
		<li>Sluit na bestuiving onmiddellijk de bestoven vrouwelijke bloem met afplaktape. Gebruik een tag om de datum van bestuiving vast te leggen en om de vaderlijke en moederlijke ouders aan te geven die in het kruis zijn gebruikt (figuur 3B).</li>
		<li>Een succesvolle kruising wordt aangegeven door een uitgezette eierstok die binnen 1 week snel een kleine vrucht vormt (figuur 4A). De plant is dan 45-55 dagen na bestuiving klaar voor de oogst28 (figuur 4B).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Embryoreddingstechniek
<ol><li>Media voorbereiding<ol><li>Bereid antibioticavoorraden voor: Voor cefotaxime (natriumzout), los het antibioticum op in 4 ml gedeïoniseerd of gedestilleerd water, filter door een steriel spuitfilter van 0,22 μm en maak 0,5 ml aliquots. Bewaren bij -20 °C. De resulterende stamoplossing heeft een concentratie van 250 mg/ml.</li>
		<li>Voor ampicilline (natriumzout), los het poeder op in 10 ml water, filter door een steriel spuitfilter van 0,22 μm en aliquot in 1 ml bouillon met een eindconcentratie van 100 mg / ml. Bewaren bij -20 °C.</li>
		<li>Maak Murashige en Skoog (MS) medium door 2,45 g medium (4,91 g/l concentratie) op te lossen in 500 ml gedestilleerd water in een fles van 1 l. Voeg gedurende 20 min 1,5 g gellanggom en autoclaaf toe bij 121 °C. De gellangom lost volledig op tijdens het autoclaveren.</li>
		<li>Koel na het autoclaveren het medium af door de fles in een waterbad op 50 °C te plaatsen. Haal de antibioticavoorraden uit de vriezer en ontdooi ze in de laminaire flowkast.</li>
		<li>Breng de medium fles over naar de laminaire stromingskap. Voeg 0,6 ml cefotaxime stockoplossing (250 mg / ml) en 0,25 ml ampicillinebouillon (100 mg / ml) toe aan de middelgrote fles en meng goed. Giet ongeveer 7 ml van het medium in een steriele petrischaal (60 mm x 15 mm).</li>
		<li>Laat het medium ongeveer 15-20 min stollen in de petrischaaltjes. Sluit de petrischalen met seal wrap en plaats ze in een opbergdoos. Bewaren bij kamertemperatuur.</li>
	</ol></li>
	<li>Redding van embryo's<ol><li>Reinig en steriliseer de laminaire luchtstroomkast voordat u begint met 70% ethylalcohol.</li>
		<li>Oogst het pompoenfruit door het van de hoofdrank te breken/af te snijden en desinfecteer het fruitoppervlak door het te wassen met vloeibaar wasmiddel (bijv. 0,3% chloroxylenol) in de gootsteen van het laboratorium totdat al het losse vuil is verwijderd (figuur 5A).</li>
		<li>Afspoelen met voldoende kraanwater. Droog het fruit af met schone papieren handdoekjes. Verplaats de vrucht naar de laminaire-luchtstroomkast (figuur 5B).</li>
		<li>Steriliseer het fruit door 70% ethanol op het fruit te spuiten in de steriele laminaire luchtstroomkast. Snijd de vrucht met een steriel mes (figuur 5C) en extraheer de zaden.</li>
		<li>Gebruik een steriele tang om de zaadlaag aseptisch te openen en de onrijpe embryo's bloot te leggen (figuur 6). Plaats de onrijpe embryo's voorzichtig in een petrischaal met MS-medium aangevuld met cefotaxime en ampicilline (figuur 7A). Sluit de petrischaal en sluit af met wikkelfolie. OPMERKING: Afhankelijk van de grootte van het embryo is het mogelijk om vijf of zes embryo's in een petrischaaltje te plaatsen.</li>
		<li>Plaats de verzegelde petrischalen met embryo's in een groeikamer onder 16 uur fotoperiode bij 25 °C en 70% relatieve vochtigheid. Als er besmetting optreedt, subcultureer dan onmiddellijk de niet-verontreinigde embryo's in een nieuwe plaat met hetzelfde medium.</li>
		<li>De zaadlobben beginnen na 4 dagen uit te zetten en worden binnen 10 dagen groen (figuur 7B). Voer op dit punt, indien nodig, subculturatie uit in nieuwe platen die hetzelfde medium bevatten om weefselexpansie mogelijk te maken. De wortels beginnen te verschijnen na 14 dagen (figuur 7C) en na 21 dagen hebben de planten verlengde wortels en zaadlobben (figuur 7D). OPMERKING: Het kweekmedium dat in het protocol wordt gebruikt, is geschikt voor differentiatie in scheuten en wortels zonder aanvullende groeiregulatoren.</li>
		<li>Verwijder in dit stadium de planten uit de petrischalen en was de media voorzichtig van de wortels af met kraanwater (figuur 8). Plaats de planten in een plastic bakje (14 cm x 9 cm x 4 cm) en bedek de wortels met natte papieren handdoekjes (figuur 9A). Bedek de container en verwijder de papieren handdoeken indien nodig.</li>
		<li>Bewaar de containers op kamertemperatuur (25-28 °C) en met een fotoperiode van 16 uur. Deze stap zal de planten acclimatiseren. Na acclimatisatie gedurende 7-10 dagen in de container, zullen de zaailingen ongeveer 3-4 lang zijn. Tijdens deze periode moet u de papieren handdoeken indien nodig opnieuw instellen.</li>
		<li>Breng de zaailingen over in 50 celstartplaten (25 cm breedte x 50 cm lengte) aangepast met meststof zoals eerder beschreven en verplaats ze naar de kas (figuur 9B). Geef zaailingen niet te veel water om rotting te voorkomen; voeg indien nodig ongeveer 10-20 ml per cel toe.</li>
		<li>In het tweede tot derde true-leaf stadium transplanteer je de zaailingen in potten met een diameter van 30 cm gevuld met potmedium aangepast met kunstmest zoals eerder beschreven (figuur 10A). Trellis-ondersteuning bieden voor viningplanten en gecontroleerde hybridisatie uitvoeren wanneer de planten beginnen te bloeien, zoals eerder beschreven (figuur 10B).</li>
		<li>Houd de planten in de kas op temperaturen tussen 22-28 °C onder natuurlijk lichtregime. Evalueer de planten op fruit- en zaadkenmerken.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Paris, H. S. Genetic Resources of Pumpkins and Squash, Cucurbita spp. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParis%2C+HS+%22Genetics+and+Genomics+of+Cucurbitaceae.+Plant+Genetics+and+Genomics%3A+Crops+and+Models%22">Genetics and Genomics of Cucurbitaceae. Plant Genetics and Genomics: Crops and Models</a>. Grumet, R., Katzir, N., Garcia-Mas, J. 20, (2016).</li>
<li>Gong, L., Stift, G., Kofler, R., Pachner, M., Lelley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsatellites+for+the+genus+Cucurbita+and+an+SSR-based+genetic+linkage+map+of+Cucurbita+pepo+L%5BTitle%5D)+AND+%22Theoretical+and+Applied+Genetics%22%5BJournal%5D)">Microsatellites for the genus Cucurbita and an SSR-based genetic linkage map of Cucurbita pepo L.</a> Theoretical and Applied Genetics. 117 (1), 37-48 (2008).</li>
<li>Paris, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+genetic+relationships+in+Cucurbita+pepo+%28Cucurbitaceae%29+using+DNA+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Theoretical+and+Applied+Genetics%22%5BJournal%5D)">Assessment of genetic relationships in Cucurbita pepo (Cucurbitaceae) using DNA markers.</a> Theoretical and Applied Genetics. 106 (6), 971-978 (2003).</li>
<li>Robinson, R. W., Decker-Walters, D. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobinson%2C+RW+%22Cucurbits%22">Cucurbits</a>. , CAB International. Wallingford, Oxon, UK. (1997).</li>
<li>Teppner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cucurbita+pepo+%28Cucurbitaceae%29-history%2C+seed+coat+types%2C+thin+coated+seeds+and+their+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Phyton+%28Horn%29%22%5BJournal%5D)">Cucurbita pepo (Cucurbitaceae)-history, seed coat types, thin coated seeds and their genetics.</a> Phyton (Horn). 40 (1), 1-42 (2000).</li>
<li>Hazra, P., Mandal, A. K., Dutta, A. K., Ram, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breeding+pumpkin+%28Cucurbita+moschata+Duch.+Ex+Poir.%29+for+fruit+yield+and+other+characters%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Plant+Breeding%22%5BJournal%5D)">Breeding pumpkin (Cucurbita moschata Duch. Ex Poir.) for fruit yield and other characters.</a> International Journal of Plant Breeding. 1 (1), 51-64 (2007).</li>
<li>Paris, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+the+cultivar-groups+of+Cucurbita+pepo%5BTitle%5D)+AND+%22Horticultural+Reviews-Westport+Then+New+York%22%5BJournal%5D)">History of the cultivar-groups of Cucurbita pepo.</a> Horticultural Reviews-Westport Then New York. 25, 71(2001).</li>
<li>Baggett, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attempts+to+cross+Cucurbita+moschata+%28Duch.%29+Poir.+%27Butternut+and+C.+pepo+L.+%27Delicata%27%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cucurbit+Genetics+Cooperative%22%5BJournal%5D)">Attempts to cross Cucurbita moschata (Duch.) Poir. 'Butternut and C. pepo L. 'Delicata'.</a> The Cucurbit Genetics Cooperative. 2, 32-34 (1979).</li>
<li>Erwin, A. T., Haber, E. S. Species and Varietal Crosses in Cucurbits. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aErwin%2C+AT+%22Agricultural+Experiment+Station%2C+Iowa+State+College+of+Agriculture+and+Mechanical+Arts%22">Agricultural Experiment Station, Iowa State College of Agriculture and Mechanical Arts</a>. , (1929).</li>
<li>Whitaker, T. W., Bohn, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+taxonomy%2C+genetics%2C+production+and+uses+of+the+cultivated+species+of+Cucurbita%5BTitle%5D)+AND+%22Economic+Botany%22%5BJournal%5D)">The taxonomy, genetics, production and uses of the cultivated species of Cucurbita.</a> Economic Botany. 4 (1), 52-81 (1950).</li>
<li>Bemis, W. P., Nelson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+hybridization+within+the+genus+Cucurbita+I%2C+fruit+set%2C+seed+and+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Arizona+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Interspecific hybridization within the genus Cucurbita I, fruit set, seed and embryo development.</a> Journal of the Arizona Academy of Science. 2 (3), 104-107 (1963).</li>
<li>Washek, R. L., Munger, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybridization+of+Cucurbita+pepo+with+disease+resistant+Cucurbita+species%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cucurbit+Genetics+Cooperative%22%5BJournal%5D)">Hybridization of Cucurbita pepo with disease resistant Cucurbita species.</a> The Cucurbit Genetics Cooperative. 6, 92(1983).</li>
<li>Davoodi, S., Olfati, J. A., Hamidoghli, Y., Sabouri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+heterosis+in+Cucurbita+moschata+and+Cucurbita+pepo+interspecific+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Vegetable+Science%22%5BJournal%5D)">Standard heterosis in Cucurbita moschata and Cucurbita pepo interspecific hybrids.</a> International Journal of Vegetable Science. 22 (4), 383-388 (2016).</li>
<li>De Oliveira, A. C. B., Maluf, W. R., Pinto, J. E. B., Azevedo, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+papaya+ringspot+virus+in+summer+squash+Cucurbita+pepo+L.+introgressed+from+an+interspecific+C.+pepo%C3%97+C.+moschata+cross%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Resistance to papaya ringspot virus in summer squash Cucurbita pepo L. introgressed from an interspecific C. pepo× C. moschata cross.</a> Euphytica. 132 (2), 211-215 (2003).</li>
<li>Rakha, M. T., Metwally, E. I., Moustafa, S. A., Etman, A. A., Dewir, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Cucurbita+interspecific+hybrids+through+cross+pollination+and+embryo+rescue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22World+Applied+Sciences+Journal%22%5BJournal%5D)">Production of Cucurbita interspecific hybrids through cross pollination and embryo rescue technique.</a> World Applied Sciences Journal. 20 (10), 1366-1370 (2012).</li>
<li>Zhang, Q. I., Yu, E., Medina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+advanced+interspecific-bridge+lines+among+Cucurbita+pepo%2C+C.+maxima%2C+and+C.+moschata%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Development of advanced interspecific-bridge lines among Cucurbita pepo, C. maxima, and C. moschata.</a> HortScience. 47 (4), 452-458 (2012).</li>
<li>Brown, R. N., Bolanos-Herrera, A., Myers, J. R., Miller Jahn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+resistance+to+four+cucurbit+viruses+in+Cucurbita+moschata%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Inheritance of resistance to four cucurbit viruses in Cucurbita moschata.</a> Euphytica. 129 (3), 253-258 (2003).</li>
<li>Pachner, M., Paris, H. S., Winkler, J., Lelley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+marker-assisted+pyramiding+of+genes+for+resistance+to+zucchini+yellow+mosaic+virus+in+oilseed+pumpkin+%28Cucurbita+pepo%29%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Breeding%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and marker-assisted pyramiding of genes for resistance to zucchini yellow mosaic virus in oilseed pumpkin (Cucurbita pepo).</a> Plant Breeding. 134 (1), 121-128 (2015).</li>
<li>Hayase, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cucurbita-crosses.+XV.+Flower+pollination+at+4+am+in+the+production+of+C.+pepo+x+C.+moschata+F1+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Breeding%22%5BJournal%5D)">Cucurbita-crosses. XV. Flower pollination at 4 am in the production of C. pepo x C. moschata F1 hybrids.</a> Japanese Journal of Breeding. 13 (2), 76-82 (1963).</li>
<li>Reed, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+development+and+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Embryo rescue.</a> Plant development and biotechnology. , 235-239 (2004).</li>
<li>Sharma, D. R., Kaur, R., Kumar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+rescue+in+plants-a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Embryo rescue in plants-a review.</a> Euphytica. 89 (3), 325-337 (1996).</li>
<li>Wall, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+hybrids+of+Cucurbita+obtained+by+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Society+of+Horticultural+Science%22%5BJournal%5D)">Interspecific hybrids of Cucurbita obtained by embryo culture.</a> Proceedings of the American Society of Horticultural Science. 63, 427-430 (1954).</li>
<li>Metwally, E. I., Haroun, S. A., El-Fadly, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+cross+between+Cucurbita+pepo+L.+and+Cucurbita+martinezii+through+in+vitro+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Interspecific cross between Cucurbita pepo L. and Cucurbita martinezii through in vitro embryo culture.</a> Euphytica. 90 (1), 1-7 (1996).</li>
<li>Sisko, M., Ivancic, A., Bohanec, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+size+analysis+in+the+genus+Cucurbita+and+its+use+for+determination+of+interspecific+hybrids+obtained+using+the+embryo-rescue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Genome size analysis in the genus Cucurbita and its use for determination of interspecific hybrids obtained using the embryo-rescue technique.</a> Plant Science. 165 (3), 663-669 (2003).</li>
<li>Giancaspro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+in+vitro+embryo+rescue+protocol+for+breeding+seedless+table+grapes+%28Vitis+vinifera+L.%29+in+Italy%5BTitle%5D)+AND+%22Horticulturae%22%5BJournal%5D)">Optimization of an in vitro embryo rescue protocol for breeding seedless table grapes (Vitis vinifera L.) in Italy.</a> Horticulturae. 8 (2), 121(2022).</li>
<li>Warchol, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+genotype%2C+media+composition%2C+pH+and+sugar+concentrations+on+oat+%28Avena+sativa+L.%29+doubled+haploid+production+through+oat+x+maize+crosses%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologiae+Plantarum%22%5BJournal%5D)">The effect of genotype, media composition, pH and sugar concentrations on oat (Avena sativa L.) doubled haploid production through oat x maize crosses.</a> Acta Physiologiae Plantarum. 40 (5), 1-10 (2018).</li>
<li>Nepi, M., Pacini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pollination%2C+pollen+viability+and+pistil+receptivity+in+Cucurbita+pepo%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Pollination, pollen viability and pistil receptivity in Cucurbita pepo.</a> Annals of Botany. 72 (6), 527-536 (1993).</li>
<li>Harvey, W. J., Grant, D. G., Lammerink, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+sensory+changes+during+development+and+storage+of+buttercup+squash%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Crop+and+Horticultural+Science%22%5BJournal%5D)">Physical and sensory changes during development and storage of buttercup squash.</a> New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science. 25 (4), 341-351 (1997).</li>
<li>Moon, P., Meru, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+rescue+of+aged+Cucurbita+pepo+seeds+using+squash+rescue+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Horticultural+Science+and+Research%22%5BJournal%5D)">Embryo rescue of aged Cucurbita pepo seeds using squash rescue medium.</a> Journal of Horticultural Science and Research. 2 (1), 62-69 (2018).</li>
<li>Nuñez-Palenius, H. G., Ramírez-Malagón, R., Ochoa-Alejo, N. Muskmelon embryo rescue techniques using in vitro embryo culture. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNu%C3%B1ez-Palenius%2C+HG+%22Plant+Embryo+Culture%22">Plant Embryo Culture</a>. , Humana Press. 107-115 (2011).</li>
<li>Vining, K. J., Loy, J. B. Seed development and seed fill in hull-less seeded cultigens of pumpkin (Cucurbita pepo L). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVining%2C+KJ+%22Cucurbitaceae+98%3A+Evaluation+and+Enhancement+of+Cucurbit+Germplasm%22">Cucurbitaceae 98: Evaluation and Enhancement of Cucurbit Germplasm</a>. McCreight, J. M. , ASHS Press. Alexandria, VA. 64-69 (1998).</li>
<li>Vining, K. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Seed+development+in+hull-less-seeded+pumpkin+%28Cucurbita+pepo+L.%29%22">Seed development in hull-less-seeded pumpkin (Cucurbita pepo L.)</a>. , University of New Hampshire. L.), Durham, NH. M.S. Thesis (1999).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen belangenconflicten.

Er zijn twee belangrijke knelpunten voor succesvolle interspecifieke hybridisatie tussen C. moschata en C. pepo: kruiscompatibiliteitsbarrière, die wordt bepaald door genotyperesponsiviteit om hybride embryo's te produceren, en post-bevruchtingsbarrières, die de ontwikkeling van hybride embryo's naar normale zaden belemmeren. Zoals eerder gemeld voor squash, onthulde de kruiscompatibiliteitstest in de huidige studie dat het grootste deel van de vrucht zich parthenocarpisch ontwikkelde, waarbij de meeste...

Cucurbita (2n = 40) is een zeer divers geslacht in de Cucurbitaceae-familie die 27 verschillende soorten bevat, waarvan er vijf gedomesticeerd zijn1. Hiervan zijn Cucurbita moschata, C. pepo en C. maxima wereldwijd de economisch belangrijkste. In de VS zijn C. moschata en C. pepo de twee belangrijkste soorten in de landbouwproductie. C. pepo bestaat uit vier ondersoorten (ovifera, pepo, fraternal en gumala) die zowel zomer- als winterpompoencultivargroepen van kromhals, rechte hals, eikel, sint-jakobsschelp, cocozelle, groentemerg, courgette en pompoenbevatten 2,3,4,5. C. moschata bestaat voornamelijk uit winterpompoenmarkttypen, waaronder butternut, Dickinson en kaasgroep1. De twee soorten zijn morfologisch en fenotypisch divers, waarbij C. pepo wordt beschouwd om zijn opbrengst, gehoorzaamheid, struikgroeigewoonte en diverse fruitkenmerken, waaronder fruitvorm, vruchtgrootte, vleeskleur en korstpatroon. Aan de andere kant wordt C. moschata gewaardeerd om zijn aanpassing aan hitte en vochtigheid, evenals ziekte- en plaagresistentie 6,7. Interspecifieke hybridisatie tussen C. moschata en C. pepo is niet alleen een belangrijke strategie voor introgressie van wenselijke kenmerken tussen de twee soorten, maar maakt ook de verbreding van de genetische basis in fokprogramma's mogelijk 7,8.
Vroege kruisingen tussen C. moschata en C. pepo werden gemaakt om hun compatibiliteit en / of taxonomische barrières 9,10,11 te bepalen, terwijl latere studies zich vooral richtten op het overbrengen van wenselijke eigenschappen 12,13,14. Interspecifieke hybridisatie tussen de twee soorten is gericht op de overdracht van nieuwe eigenschappen zoals een struik- of semi-struikgroeigewoonte en verbeterde opbrengst van C. pepo, samen met ziekteresistentie, aanpassingsvermogen aan abiotische stress en verhoogde kracht van C. moschata 14,15,16. Specifieke kruisingen tussen C. pepo (P5) en C. moschata (MO3) hebben bijvoorbeeld geresulteerd in een hogere vruchtopbrengst13, terwijl C. moschata-toetredingen (Nigerian Local en Menina) op grote schaal zijn gebruikt als de primaire bron van resistentie tegen potyvirussen in gekweekte C. pepo-cultivars 17,18.
Eerdere studies toonden aan dat hybridisatie tussen C. moschata en C. pepo mogelijk is, maar moeilijk 8,15. De interspecifieke kruisingen kunnen resulteren in geen vruchtzetting (abortus), parthenocarpische vruchten zonder levensvatbare zaden (lege zaden), pitloze vruchten waar de onrijpe embryo's zich niet ontwikkelen (stenospermocarpie) of vruchten met weinig onrijpe embryo's die kunnen worden gered tot volwassen planten door embryoredding15,16. Er werden bijvoorbeeld geen levensvatbare zaden verkregen door C. pepo (tafelkoningin, moeder) te kruisen met C. moschata (grote kaas, vaderlijk), maar het wederzijdse kruis leverde 57 levensvatbare zaden op uit 134 bestuivingen9. Hayase verkreeg levensvatbare zaden van C. moschata en C. pepo kruisingen alleen wanneer kruisingen werden gemaakt om 04:00 uur met behulp van stuifmeel opgeslagen bij 10 °C 's nachts19. Baggett kruiste acht verschillende C. moschata-variëteiten met C. pepo (delicata) en meldde dat van de 103 totale bestuivingen 83 vruchten werden verkregen die normaal leken, maar geen van hen bevatte levensvatbare zaden8. In een kruising tussen C. pepo (S179) en C. moschata (NK) verkregen Zhang et al. 15 vruchten met 2.994 zaden, maar slechts 12 van die zaden waren levensvatbaar, terwijl de rest slechts rudimentaire ontwikkeling vertoonde. Deze studies suggereren dat hoewel interspecifieke kruising tussen C. moschata en C. pepo zeer gunstig is, het verkrijgen van fruit met levensvatbare zaden uit de kruisen veeleisend is16.
Embryoredding is voorgesteld als een geschikte methode om problemen te overwinnen die voortvloeien uit vroege abortering of slecht ontwikkelde embryo's en is een van de vroegste en meest succesvolle in vitro kweektechnieken voor regeneratie van onrijpe embryo's16,20. Embryoredding omvat de in vitro kweek van onderontwikkelde/onrijpe embryo's, gevolgd door overdracht naar een steriel voedingsmedium om het herstel van zaailingen en uiteindelijk volwassen planten te vergemakkelijken21. Hoewel embryoredding vaak wordt gebruikt in de squashfokkerij, ontbreekt een gedetailleerde beschrijving van de juiste methodologie die de routinematige toepassing ervan mogelijk zou maken. Het gebruik van embryoreddingstechniek om interspecifieke hybridisatiebarrières bij Cucurbita-soorten te overwinnen, werd al in 1954 gemeld22. Het succes van embryoredding in de vroege studies was echter niet gemeld of zeer laag. Metwally et al. rapporteerden een succespercentage van 10% (regeneratie in volwassen planten) onder 100 interspecifieke hybride embryo's gered uit een kruising tussen C. pepo en C. martinezii23. Sisko et al. rapporteerden een variabel succespercentage van embryoregeneratie bij embryo's verkregen uit verschillende kruiscombinaties: het regeneratiepercentage van hybriden verkregen door kruising van C. maxima (Bos. Max) en C. pepo (Gold Rush) was 15,5%, voor C. pepo (Courgette) en C. moschata (Hokaido) was 20%, terwijl voor C. pepo (Gold Rush) en C. moschata (Dolga) het 37,5% 24 was. Naast het genotype zijn media en in vitro kweekomstandigheden belangrijke factoren voor het succes van de techniek25,26. In de huidige studie werden verschillende kruiscombinaties tussen C. moschata en C. pepo getest en werd een eenvoudige methodologie ontwikkeld voor het gebruik van de embryoreddingstechniek in squash. De ontwikkeling van een eenvoudige en gemakkelijk reproduceerbare embryoreddingstechniek zal interspecifieke hybridisatie en kiemplasmaverbetering in squashveredelingsprogramma's vergemakkelijken.

<table><tbody><tr><td>ampicillin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1760-5</td><td></td></tr><tr><td>autoclaaf</td><td>Steris</td><td>AMSCO LAB 250</td><td></td></tr><tr><td>balans</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>cefotaxime</td><td>Sigma Alfrich</td><td>C 7039</td><td></td></tr><tr><td>centrifugebuizen (1,5 ml)</td><td>Sigma Alfrich</td><td>T9661</td><td></td></tr><tr><td>detergens</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ethanol, 95%</td><td>Decon Labs</td><td>2805HC</td><td></td></tr><tr><td>pincet</td><td>VWR</td><td>82027-408</td><td></td></tr><tr><td>gellan gom</td><td>Caisson Laboratories</td><td>G024</td><td></td></tr><tr><td>groeikamer of verlichte plank</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>laminaire kap / bioveiligheidskast</td><td>The Baker Company, Inc</td><td>Edgegard</td><td></td></tr><tr><td>masking tape</td><td>Uline</td><td>S-11735</td><td></td></tr><tr><td>media fles</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Murashige &amp; Skoog Medium</td><td>Research Products International</td><td>M10200</td><td></td></tr><tr><td>NPK meststof (20-20-20)</td><td>BWI Companies, Inc</td><td>PR200</td><td></td></tr><tr><td>Osmocote Plus meststof</td><td>BWI Companie,s Inc</td><td>OS90590</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Sigma Alfrich</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Petri-schaal (60 x 15 mm)</td><td>USA Scientific, Inc</td><td>8609-0160</td><td></td></tr><tr><td>plantpotjes</td><td>BWI Companies, Inc</td><td>NP4000BXL</td><td></td></tr><tr><td>hergebruikte plastic voedselverpakkingen</td><td>Oscar Mayer</td><td>4470003330</td><td></td></tr><tr><td>plastic hanglabels</td><td>Amazon</td><td>B07QTZRY6T</td><td></td></tr><tr><td>bloeiaarde</td><td>Jolly Gardener</td><td>Pro-Line C/B</td><td></td></tr><tr><td>zaailingstartersbakken</td><td>BWI Companies Inc</td><td>GPPF128S4</td><td></td></tr><tr><td>spuitfilter (0,22 um)</td><td>ExtraGene</td><td>B25CA022-S</td><td></td></tr><tr><td>trellisondersteuning</td><td>The Home Depot</td><td>2A060006</td><td></td></tr><tr><td>waterbad</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

embryo rescue protocol voor interspecifieke hybridisatie in squash

Embryo Rescue Protocol for Interspecific Hybridization in Squash

Interspecifieke hybridisatie in Cucurbita-gewassen (squash) is wenselijk voor het verbreden van genetische variatie en voor de introgressie van nuttige allelen. Onrijpe embryo's die uit deze brede kruisingen worden gegenereerd, moeten worden geregenereerd met behulp van geschikte embryoreddingstechnieken. Hoewel deze techniek voor veel gewassen goed ingeburgerd is, ontbreekt een gedetailleerde beschrijving van de juiste methodologie voor squash die de routinematige toepassing ervan mogelijk zou maken. Hier beschrijven we een embryoreddingsprotocol dat nuttig is voor interspecifieke hybridisatie van C. pepo en C. moschata. Om levensvatbare combinaties voor embryoredding te identificeren, werden 24 interspecifieke kruisingen uitgevoerd. Fruitset werd verkregen uit tweeëntwintig kruisen, wat wijst op een slagingspercentage van 92%. De meeste verkregen vruchten waren echter parthenocarpisch, met zaden zonder embryo's (lege zaden). Slechts één kruiscombinatie bevatte onrijpe embryo's die konden worden geregenereerd met behulp van basale plantengroeimedia. In totaal werden 10 embryo's gered uit de interspecifieke F1-vrucht en het slagingspercentage van embryoredding was 80%. Het hier ontwikkelde embryoreddingsprotocol zal nuttig zijn voor interspecifieke hybridisatie in squashveredelingsprogramma's.

Levensvatbaarheid van vruchtzetting en zaad Een eerste test werd uitgevoerd om de levensvatbaarheid van fruit en zaad in verschillende kruiscombinaties te bepalen. In totaal werden 15 squashgenotypen gekozen, vier C. pepo en 11 C. moschata, (tabel 1). Van de 24 interspecifieke kruisingscombinaties die werden geprobeerd, werd een vruchtzetting verkregen voor 22 (tabel 2), wat neerkomt op een totaal >92% succes in de vruchtzetting. Er werden geen rijpe...

Het artikel beschrijft een embryoreddingsprotocol voor de regeneratie van onrijpe embryo's afgeleid van de interspecifieke hybridisatie van Cucurbita pepo en Cucurbita moschata. Het protocol kan gemakkelijk worden gerepliceerd en zal een belangrijke bron zijn voor squashfokkerijprogramma's.

Embryo Rescue Protocol voor interspecifieke hybridisatie in squash

Interspecific hybridization in Cucurbita crops (squash) is desirable for widening genetic variation and for the introgression of useful alleles. Immature ...

Het embryoreddingsprotocol is verplicht voor regeneratie van onrijpe embryo's afkomstig van interspecifieke kruisingen tussen verschillende Cucurbita-soorten. Het wordt meestal gebruikt voor kruisingen tussen Cucurbita moschata en Cucurbita pepo. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is de eenvoud.Het protocol gebruikt alleen MS-media met antibiotica. Daarom kan het gemakkelijk worden gerepliceerd door elk laboratorium. Het zou mogelijk zijn om deze techniek aan te passen om verschillende barrières voor interspecifieke of intergenerische hybridisatie te onderzoeken.Aandacht besteden aan de details tijdens elke stap zal nuttig zijn voor een succesvol resultaat. Begin met het planten van de Cucurbita-planten door 50-celstartplaten van 25 bij 50 centimeter te vullen met behulp van een potmedium aangevuld met volledige stikstof-, fosfor- en kaliummeststof, met elk 1,38 gram per kilogram stikstof, fosfor en kalium. Zaai vervolgens de zaden tot een diepte gelijk aan hun lengte en bedek ze met het potmedium.Geef de flats water zonder stilstaand water te creëren en houd de media vochtig door ze eenmaal per dag water te geven. Aan het einde van de tweede echte bladfase transplanteer je de zaailingen in potten met een diameter van 30 centimeter, aangevuld met drie eetlepels complete meststof per pot. Bemest na elke zeven dagen elke pot met 500 milliliter vloeibare meststof met 20, 20, 20 stikstof, fosfor en kalium in één gram toegevoegd aan een liter water.Onderhoud planten in de kas bij temperaturen tussen 22 en 28 graden Celsius onder het natuurlijke lichtregime. Voor vining genotypen, zorg voor een ondersteunend traliewerk in de kas. Voer de gecontroleerde hybridisatie of bestuiving uit zodra de planten beginnen te bloeien op zes tot acht weken na het zaaien.Controleer de ongeopende bloemen met een gele tint op de bloemblaadjes en identificeer mannelijke bloemen en vrouwelijke bloemen van Cucurbita pepo en Cucurbita moschata cultivars. Om onbedoelde bestuiving door insecten te voorkomen, plakt u de gesloten bloem aan de bovenkant voorzichtig vast met afplaktape. Voer de volgende ochtend de bestuiving uit vóór 10:00 uur door voorzichtig het afgeplakte bovenste gedeelte van de mannelijke en vrouwelijke bloem te verwijderen.Het scheiden van de bloemblaadjes van de mannelijke bloem en het overbrengen van de pollen door de helmknop zachtjes op het vrouwelijke bloemstigma te wrijven. Sluit na bestuiving onmiddellijk de bestoven vrouwelijke bloem met afplaktape en gebruik een tag om de datum van bestuiving vast te leggen en om de vaderlijke en maternale ouders aan te geven die in het kruis zijn gebruikt. Een succesvolle kruising aangegeven door een uitgebreide eierstok zal binnen een week een kleine vrucht vormen.Oogst het fruit na 45 tot 55 dagen bestuiving. Bereid een cefotaxime voorraad. Filtreer het door een steriel spuitfilter van 0,22 micron.En maak 0,5 milliliter aliquot van 250 milligram per milliliter cefotaxime voordat je ze bewaart bij min 20 graden Celsius. Bereid op dezelfde manier ampicillinevoorraad voor. Filter het door een steriel spuitfilter van 0,22 micron en bereid een milliliter aliquot van 100 milligram per milliliter ampicilline voordat je ze bewaart bij min 20 graden Celsius.Bereid Murashige en Skoog, of MS-medium door 2,45 gram van het medium op te lossen in 500 milliliter gedestilleerd water in een fles van één liter. Voeg 1,5 gram gellangom toe aan het MS-medium en autoclaaf het gedurende 20 minuten op 121 graden Celsius. Koel het medium af door de fles in een waterbad op 50 graden Celsius te plaatsen.Ontdooi de antibioticavoorraden in de laminaire stromingskast. Breng de medium fles over naar de laminaire stromingskap en voeg 0,6 milliliter cefotaximebouillon en 0,25 milliliter ampicillinebouillon toe aan het medium met de juiste menging. Giet ongeveer zeven milliliter van het medium in een steriele petrischaal van 60 bij 15 millimeter.Laat het medium ongeveer 15 tot 20 minuten stollen in de petrischalen. Sluit de petrischaaltjes met afdichtingsfolie en plaats ze in een opbergdoos op kamertemperatuur tot verder gebruik. Oogst het pompoenfruit door het van de hoofdrank af te snijden en desinfecteer het fruit door het oppervlak in de laboratoriumgootsteen te wassen met een vloeibaar wasmiddel zoals 0,3% chloroxylenol.Spoel het fruit af met voldoende kraanwater en droog het af met schone papieren handdoeken voordat u het fruit overbrengt naar de laminaatluchtstroomkast. Steriliseer het fruitoppervlak in de kast door 70% ethanol te spuiten. Bisect de vrucht met een steriel mes en haal de zaden eruit.Gebruik een steriele tang of handen met steriele handschoenen om de zaadlaag aseptisch te openen en de onrijpe embryo's bloot te stellen voordat u ze in een petrischaal met met antibiotica aangevulde MS Medium plaatst. Sluit de petriplaten af met wikkelfolie en plaats ze in een groeikamer met een temperatuur van 25 graden Celsius, een fotoperiode van 16 uur en een relatieve vochtigheid van 70%. In geval van besmetting, subcultureer de niet-verontreinigde embryo's onmiddellijk in een nieuwe plaat met hetzelfde medium.Zodra de wortels na 10 tot 14 dagen zijn ontwikkeld en de zaadlobben na 15 tot 21 dagen zijn ontwikkeld, verwijdert u de planten uit de petrischalen en wast u voorzichtig de aanwezige media rond de wortels af met kraanwater. Leg schoongemaakte planten in een plastic bakje van 14 bij 9 bij 4 centimeter en bedek de wortels met natte papieren handdoekjes. Dek de container af en bevochtig de papieren handdoeken opnieuw indien nodig.Houd de plastic containers op 25 tot 28 graden Celsius en in een fotoperiode van 16 uur om de planten te acclimatiseren met behoud van de vochtige conditie van papieren handdoeken. Na 7 tot 10 dagen acclimatisatie, breng de drie tot vier centimeter lange zaailingen over in 50 celflats met commerciële potgrond aangepast met kunstmest en verplaats ze naar de kas. Vermijd overbewatering om rotting te voorkomen en voeg indien nodig ongeveer 10 tot 20 milliliter water per cel toe.In het tweede tot het derde echte bladstadium transplanteer je de zaailingen in potten met een diameter van 25 centimeter gevuld met potmedium dat is aangepast met kunstmest en voer je gecontroleerde hybridisatie uit wanneer de planten beginnen te bloeien. Houd de planten in de kas op 22 tot 28 graden Celsius onder het natuurlijke lichtregime. En evalueer de planten op fruit- en zaadkenmerken.Vier Cucurbita pepo en 11 Cucurbita moschata werden gekozen voor interspecifieke hybridisatie. Van de 24 interspecifieke kruisingscombinaties die werden geprobeerd, werd een vruchtzetting verkregen voor 22 kruisingen die meer dan 92% succes in de vruchtzetting vertegenwoordigen. De kruisingen tussen Cucurbita moschata en Cucurbita pepo met genotypen O en M, en genotypen E en J, leverden geen rijpe vruchten op.Terwijl de kruising tussen Cucurbita moschata en Cucurbita pepo met genotypen F en J zes vruchten opleverde. Het aantal bestoven bloemen voor verschillende kruiscombinaties varieerde van 1 tot 11. En het slagingspercentage van bestuiving varieerde van 0% tot 100% Van de 44 vruchten geproduceerd uit alle kruiscombinaties, produceerde slechts één vrucht uit een kruising tussen Cucurbita moschata en Cucurbita pepo, genotypen C en J onrijpe embryo's die konden worden gered.Voor de ontwikkeling van deze slecht ontwikkelde embryo's werden ze gekweekt met behulp van de embryoreddingsmedia, wat resulteerde in een slagingspercentage van 80% voor embryoredding. De twee belangrijkste procedures zijn het identificeren van compatibele kruisingen tussen twee soorten, namelijk Cucurbita moschata en Cucurbita pepo, en succesvolle embryoregeneratie. Omdat de embryoreddingstechniek eenvoudig en gemakkelijk repliceerbaar is, kunnen squashkwekers wereldwijd deze techniek gebruiken voor het redden van onrijpe embryo's die zijn afgeleid van interspecifieke kruisingen tussen verschillende Cucurbita-soorten.

embryo-rescue-protocol-for-interspecific-hybridization-in-squash

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video toont twee-kleuren ganse berg in situ hybridisatie, een methode waarmee de ruimtelijke en temporele expressie patroon van twee verschillende genen kunnen worden gevisualiseerd in jonge kippenembryo's. Deze methode werd oorspronkelijk geïntroduceerd door David Wilkinson, Domingos Henrique, Phil Ingham en David Ish-Horowicz.

Dubbele Hele Mount in situ hybridisatie van het vroege embryo&#39;s Chick

Hele monteren in situ hybridisatie is een van de meest gebruikte technieken in de ontwikkelingsbiologie. Hier presenteren wij een hoge resolutie dubbele fluorescente in situ hybridisatie protocol voor de analyse van de precieze expressiepatroon van een enkel gen en voor het bepalen van de overlap van de expressie-domeinen van twee genen. We nemen een propidiumjodide nucleair anti-vlek weefsel organisatie te markeren.

Zebravis hele Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridisatie

Een stap-voor-stap handleiding voor gerichte chimerisch zebravis embryo's genereren door transplantatie op de blastula of gastrulastadium.

Het genereren van Chimère zebravis embryo&#39;s door transplantatie

Een benadering voor het analyseren van migratie en de uiteindelijke lot van aviaire neurale lijst cellen in kwartel-chick chimere embryo's wordt beschreven. Deze methode is een eenvoudige en directe techniek voor het opsporen van neurale lijst cellen tijdens migratie en differentiatie die anders moeilijk te onderscheiden binnen een ongemanipuleerde kippenembryo.

Analyse van de neurale lijst migratie en differentiatie door Cross-soorten transplantatie

Wij rapporteren een efficiënte en eenvoudige methode om embryo's te isoleren in een vroeg stadium van de ontwikkeling...

Efficiënte en snelle isolatie van een vroeg stadium embryo&#39;s van<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Zaden

De zebravis, een kleine tropische vissen, is uitgegroeid tot een populair model voor het bestuderen van gen-functie tijdens gewervelde ontwikkeling en ziekte. De ruimtelijke en temporele expressie van de doelwitgenen worden...

Hoge resolutie Hele Mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in zebravis embryo&#39;s om genexpressie en functie te bestuderen

Het doel is om te illustreren dat het model-legume Medicago truncatula gemakkelijk kan worden gebruikt om de regulatie van vroege plantenembryogenese te onderzoeken als aanvulling op het niet-legume Arabidopsis-model. De morfologie van peulen is gekoppeld aan stadia van zygotische embryogenese en er wordt ook een protocol gegeven om embryo's te verzamelen met behulp van weefselkweek.

Protocollen voor het verkrijgen Zygotic en somatische embryo&#39;s voor het bestuderen van de verordening van de vroege embryo ontwikkeling in de Model Legume<em&gt; Medicago truncatula</em

We beschrijven een multi-target chromogene whole-mount in situ hybridisatie (MC-WISH) procedure in intacte Drosophila embryo's toestaan ​​gelijktijdige en specifieke detectie van drie verschillende mRNA distributie patronen door contrasterende kleur neerslagen.

Multi-target Chromogene Whole-mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie voor het vergelijken van genexpressie Domeinen in<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryo

Visualisatie van de expressie van genen in embryonale Astyanax cavefish kunnen dit protocol. Deze aanpak is ontwikkeld met als doel het maximaliseren van gen expressie signaal, terwijl het minimaliseren van aspecifieke achtergrondkleuring.

Wholemount In Situ hybridisatie voor Astyanax embryo 's

Dit doel van dit protocol is het produceren van chimerische axolotls met haploïde voorpoten afgeleid van Cas9-mutagenized donorweefsel met behulp van embryonale weefsel enten technieken.

Generatie chimeric Axolotls met Mutant Haploid Ledematen door embryonale grafting

Dit protocol beschrijft hoe beelden kunnen worden verkregen door in situ hybridisatie en immunohistochemie van embryonale secties van zebravissen te combineren. In situ hybridisatie werd uitgevoerd voorafgaand aan cryosectie, gevolgd door antilichaamkleuring. Het is nuttig om de expressiepatronen van twee genen in zebravissen te detecteren als er een tekort aan antilichamen is.

Ter plaatse Hybridisatie gecombineerd met immunohistochemie in cryosectie zebravisembryo's

Leer een embryo-redcaprotocol voor interspecifieke hybridisatie in Cucurbita pepo en Cucurbita moschata. Deze eenvoudige methode met MS-medium en antibiotica maakt regeneratie van onrijpe embryo's mogelijk voor fokprogramma's.

Embryo Rescue Protocol voor interspecifieke hybridisatie in squash

Meer video's verkennen