Name: Lipidensuppletie voor een lange levensduur en gentranscriptionele analyse bij Caenorhabditis elegans (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: Leer lipidsuppletiemethoden voor transcriptieanalyse bij Caenorhabditis elegans. Dit protocol combineert vloeibare voeding en plaatkweken met RNA-extractie uit weefsels voor verouderingsonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken P. Svay voor de onderhoudsondersteuning. Dit werk werd ondersteund door NIH-beurzen R01AG045183 (MCW), R01AT009050 (MCW), R01AG062257 (MCW), DP1DK113644 (MCW), March of Dimes Foundation (MCW), Welch Foundation (MCW), HHMI-onderzoeker (M.C.W.) en NIH T32 ES027801 predoctorale student fellow (MS). Sommige stammen werden geleverd door de CGC, die wordt gefinancierd door het NIH Office of Research Infrastructure Programs (P40 OD010440).

<ol><li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li>
<li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+LIPID+MAPS+classification%2C+nomenclature%2C+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li>
<li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li>
<li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li>
<li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C. Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+J+%22Ageing%3A+Lessons+from+C.+elegans.+Healthy+Ageing+and+Longevity%22">Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity</a>. Olsen, A., Gill, M. , Springer. Cham. 307-329 (2017).</li>
<li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li>
<li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li>
<li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li>
<li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li>
<li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+window+into+biology%3A+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li>
<li>Nigon, V. M., Félix, M. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li>
<li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li>
<li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545(2009).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108(2006).</li>
<li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitoyl-CoA-specific+%CE%949+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Palmitoyl-CoA-specific Δ9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li>
<li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li>
<li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+an+animal+%CE%9412+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of an animal Δ12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li>
<li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+animal+%CF%89-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Identification of an animal ω-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+a+%CE%945-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of a Δ5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li>
<li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879(2013).</li>
<li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression%3A+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695(2021).</li>
<li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids+and+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Lipidology%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li>
<li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CF%89-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">ω-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes & Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li>
<li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1%2FNrf+in+response+to+germ+cell+absence%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836(2015).</li>
<li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKN-1%2FNrf%2C+stress+responses%2C+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li>
<li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li>
<li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%CF%89-3+fatty+acid+%CE%B1-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49%2FPPAR%CE%B1+and+oxidation+to+oxylipins%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The ω-3 fatty acid α-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPARα and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li>
<li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254(2017).</li>
<li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li>
<li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li>
<li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li>
<li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li>
<li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li>
<li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li>
<li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten.

Lipidensuppletie is gebruikt in verouderingsonderzoek om de directe impact van bepaalde lipidensoorten op gezond ouder worden op te helderen 6,7,23,26,27,31. De lipidensuppletieprocedure kan echter een uitdaging zijn en elke inconsistentie tussen experimenten kan niet-reproduceerbare resultaten veroorzaken. Hier wordt het ee...

Lipiden Lipiden zijn kleine hydrofobe of amfipathische moleculen die oplosbaar zijn in organische oplosmiddelen, maar onoplosbaar in water 1,2. Verschillende lipidemoleculen onderscheiden zich van elkaar op basis van het aantal koolstofatomen in hun ketens, locatie, aantal dubbele bindingen en gebonden structuren, waaronder glycerol of fosfaten. Lipiden spelen een cruciale rol in en tussen verschillende cellen om organismale functies te reguleren, waaronder het vormen van membraanbilagen, het bieden van energieopslag en het fungeren als signaalmoleculen 3,4.
Ten eerste zijn lipiden structurele componenten van biologische membranen, waaronder het plasmamembraan en intracellulaire subcellulaire membranen die de interne compartimenten scheiden van de extracellulaire omgeving. Ten tweede zijn lipiden de belangrijkste vorm van energieopslag bij gewervelde en ongewervelde dieren. Neutrale lipiden, waaronder triacylglycerolen, worden gedurende een langere periode opgeslagen in verschillende weefsels, waaronder in vetweefsel. In de nematode Caenorhabditis elegans is de darm het belangrijkste metabole vetopslagorgaan; de functie ervan is niet alleen betrokken bij de spijsvertering en absorptie van voedingsstoffen, maar ook bij het proces van ontgifting, dat lijkt op de activiteit van hepatocyten van zoogdieren. Andere vetopslagweefsels omvatten de kiembaan, waarin lipiden essentieel zijn voor het ontwikkelen van eicellen, en de hypodermis, die bestaat uit huidachtige epidermale cellen 3,5. Ten derde is er de laatste jaren meer bewijs dat lipiden krachtige signaalmoleculen zijn die betrokken zijn bij intra- en extracellulaire signalering door direct in te werken op een verscheidenheid aan receptoren, waaronder G-eiwitgekoppelde en nucleaire receptoren, of indirect via membraanfluïditeitsmodulatie of posttranslationele modificaties 6,7,8,9 . Verdere studies zullen doorgaan met het ophelderen van de onderliggende moleculaire mechanismen van lipidesignalering bij het bevorderen van een lang leven en de gezondheid.
Modelorganismen zijn belangrijk om specifieke biologische vragen aan te pakken die te complex zijn om bij mensen te bestuderen. De spoelworm C. elegans is bijvoorbeeld een uitstekend model voor het uitvoeren van genetische analyse om biologische processen te ontleden die relevant zijn voor menselijke voeding en ziekte10. De sterk geconserveerde moleculaire paden die relevant zijn voor de menselijke fysiologie, complexe weefsels, gedragspatronen en overvloedige genetische manipulatietools maken C. elegans een opmerkelijk modelorganisme11. C. elegans is bijvoorbeeld uitstekend in het doorsturen van genetische schermen om fenotype-specifieke genen te identificeren, evenals in genoombrede omgekeerde genetische schermen via RNA-interferentie12.
In laboratoria worden de nematoden gekweekt op agar petriplaten bezaaid met een gazon van Escherichia coli-bacteriën, die macronutriënten zoals eiwitten, koolhydraten en verzadigde en onverzadigde vetzuren leveren als bronnen van energie en bouwstenen, en micronutriënten zoals co-factoren envitamines 13. Net als bij zoogdieren synthetiseren nematoden vetzuurmoleculen uit zowel palmitinezuur als stearinezuur (respectievelijk verzadigde 16-koolstof- en 18-koolstofmoleculen) die sequentieel verzadigd en langwerpig zijn tot een verscheidenheid aan enkelvoudig onverzadigde vetzuren (MUFA's) en meervoudig onverzadigde vetzuren (PUFA's)14,15,16,17,18. Interessant is dat C. elegans in staat is tot de novo synthese van alle vereiste vetzuren en kernenzymen die betrokken zijn bij de biosynthese, desaturatie en rek van vetzuren, waardoor de synthese van pufa's met langeketens wordt vergemakkelijkt 19. Anders dan andere diersoorten kan C. elegans 18-koolstof en 20-koolstof ω-6 vetzuren omzetten in ω-3 vetzuren met zijn eigen ω-3 desaturase enzymen. Bovendien bezitten wormen een Δ12-desaturase dat de vorming van linolzuur (LA) uit oliezuur katalyseert (OA, 18:1)20,21. De meeste dieren of planten missen zowel Δ12- als ω-3-desaturasen en zijn dus afhankelijk van de inname via de voeding van ω-6 en ω-3 om hun PUFA's te verkrijgen, terwijl C. elegans geen voedingsvetzuren nodig heeft22. Geïsoleerde mutanten zonder functionele desaturase-enzymen zijn gebruikt om de functies van specifieke vetzuren in verschillende biologische processen te bestuderen, waaronder reproductie, groei, levensduur en neurotransmissie. Het effect van individuele vetzuren op specifieke biologische routes kan worden aangepakt met behulp van zowel een genetische benadering als voedingssuppletie 16,17,23. Tot op heden heeft lipidenonderzoek zich gericht op het karakteriseren van genen die betrokken zijn bij de lipidesynthese, afbraak, opslag en afbraak in neurologische en ontwikkelingsstoornissen24. De rol van lipiden in de regulering van de levensduur begint echter net te worden onthuld.
Lipide signalering bij levensduurregulatie Lipiden spelen een cruciale rol bij de regulering van de levensduur door cellulaire signaleringscascades in verschillende weefsels en celtypen te activeren. Recente studies hebben de actieve rol van lipiden benadrukt bij het moduleren van transcriptie en cel-celcommunicatie via lipidebindende eiwitten of herkenning van membraanreceptoren25. Bovendien biedt lipidensuppletie in de voeding een uitstekend hulpmiddel om te ontleden hoe het lipidenmetabolisme de levensduur in C. elegans beïnvloedt. Van verschillende MUFA's en PUFA's is aangetoond dat ze de levensduur bevorderen door transcriptiefactoren 26,27 te activeren.
Levensduurmodellen, waaronder de insuline/IGF-1-signalering en de ablatie van kiembaanvoorlopercellen, zijn geassocieerd met de MUFA-biosyntheseroute en MUFA-suppletie, inclusief oliezuur, palmitoleïnezuur en cis-vacceenzuur, is voldoende om de levensduur van C. elegans te verlengen26. Hoewel het levensduureffect van de MUFA-administratie verder onderzoek vereist, zal het onderliggende mechanisme waarschijnlijk worden gemedieerd door de SKN-1 / Nrf2-transcriptiefactor, die een belangrijke activator is van oxidatieve stressrespons en levensduurregulatie28,29. Onder MUFA's speelt een bepaalde klasse van vetacylethanolamiden genaamd N-acylethanolamines (NAE's) een cruciale rol in verschillende mechanismen, waaronder ontsteking, allergieën, leren, geheugen en energiemetabolisme30. Met name het lipidemolecuul dat bekend staat als oleoylethanolamide (OEA) is geïdentificeerd als een positieve regulator van de levensduur door de translocatie van het lipidebindende eiwit 8 (LBP-8) in de kern te bevorderen om de nucleaire hormoonreceptoren NHR-49 en NHR-807 te activeren. Suppletie van het OEA analoge KDS-5104 is voldoende om de levensduur te verlengen en induceert de expressie van genen die betrokken zijn bij oxidatieve stressreacties en mitochondriale β-oxidatie 7,8.
Tegelijkertijd is de rol van PUFA's ook gekoppeld aan regulering van de levensduur. Toediening van PUFA ω-3 vetzuur α-linoleenzuur (ALA) bevordert de levensduur door de NHR-49/PPARα, SKN-1/NRF transcriptiefactoren te activeren en mitochondriale β-oxidatie te induceren31. Interessant is dat geperoxideerde producten van ALA, aangeduid als oxylipines, SKN-1 / NRF activeren, wat suggereert dat zowel PUFA's als hun oxidatieve derivaten voordelen voor de levensduur kunnen opleveren23. Suppletie van ω-6 vetzuur arachidonzuur (AA) en dihomo-γ-linoleenzuur (DGLA) verlengt de levensduur via autofagie-activering, bevordert de kwaliteitscontrole van eiwitten en resulteert in de afbraak van verspilde en toxische eiwitaggregaten27,32. Meer recent is aangetoond dat een cel-niet-autonome signaleringsregulatie gemedieerd door het lipidebindende eiwit 3 (LBP-3) en DGLA cruciaal is voor het bevorderen van de levensduur door perifere signalen naar neuronen te sturen, wat een langeafstandsrol van lipidemoleculen in interweefselcommunicatie op systemische niveaussuggereert 33. De huidige studie rapporteert elke stap om lipidensuppletie uit te voeren met bacteriën die op platen zijn gezaaid of bacteriële suspensie in vloeibare cultuur. Deze methodologieën worden gebruikt om de levensduur en transcriptionele analyse te beoordelen, waarbij gebruik wordt gemaakt van de inhoud van het hele lichaam of ontleedde weefsels die zijn afgeleid van een paar wormen. De volgende technieken kunnen worden aangepast aan een verscheidenheid aan voedingsstudies en bieden een geldig hulpmiddel om te ontleden hoe lipidemetabolisme de levensduur en gezond ouder worden beïnvloedt.

<table><tbody><tr><td>1.5 mL Pestle</td><td>Genesee Scientific</td><td>93-165P15</td><td>Voor wormen vermalen met Trizol</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma</td><td>A9639-500G</td><td></td></tr><tr><td>AmfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix</td><td>GenDEPOT</td><td>R5600</td><td>Voor reverse transcriptie van bulkwormenstalen</td></tr><tr><td>Applied Biosystems QuanStudio 3 Real-Time PCR</td><td>ThermoFisher</td><td>A28567</td><td>Voor qRT-PCR</td></tr><tr><td>Benchmark Scientific StripSpin 12 Microcentrifuge</td><td>Benchmark Scientific</td><td>C1248</td><td>Voor het afslaan van PCR-buizen</td></tr><tr><td>Branson 450 Digital Sonifier, w/ 1/8" tip</td><td>Branson Ultrasonic Corporation</td><td>100-132-888R</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Fisher Scientific</td><td>C298-500</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma</td><td>C8503-25G</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5424 R centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>22620444R</td><td>Voor RNA-extractie</td></tr><tr><td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td><td>Eppendorf</td><td>950030010</td><td>Voor reverse transcriptie</td></tr><tr><td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-500</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W Plate</td><td>Neta Scientific</td><td>665180</td><td>12-well platen voor vloeibare voeding</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 100 x 20 mm</td><td>Neta Scientific</td><td>664161</td><td>Voor bacteriële LB-platen en wormen 10-cm NGM-platen</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 60 x 15 mm</td><td>Neta Scientific</td><td>628161</td><td>Voor wormen 6-cm NGM-platen</td></tr><tr><td>Invitrogen nuclease-free water</td><td>ThermoFisher</td><td>AM9937</td><td></td></tr><tr><td>Isoproanol</td><td>Sigma</td><td>PX1835-2</td><td></td></tr><tr><td>Levamisole hydrochloride</td><td>VWR</td><td>SPCML1054</td><td></td></tr><tr><td>lipl-4Tg</td><td>MCW Lab</td><td>N/A</td><td>Transgene C. elegans</td></tr><tr><td>lipl-4Tg;fat-3(wa22)</td><td>MCW Lab</td><td>N/A</td><td>Transgene C. elegans</td></tr><tr><td>Luria Broth Base</td><td>ThermoFisher</td><td>12795-084</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td><td>Sigma</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Reaction Plate with Barcode</td><td>ThermoFisher</td><td>4483354</td><td>96-well qPCR-plaat</td></tr><tr><td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td><td>Applied BioSystem</td><td>4311971</td><td>Voor het afdichten van de 96-well qPCR-plaat</td></tr><tr><td>Milli-Q Advantage A10 Water Purification System</td><td>Sigma</td><td>Z00Q0V0WW</td><td>Degeïoniseerd water gebruikt voor het maken van alle reagentia, inclusief buffer en kweekmedia, tenzij gespecificeerd als nuclease-free water in het protocol</td></tr><tr><td>N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N/A</td><td>C. elegans wild isolate</td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer</td><td>ThermoFisher</td><td>N/A</td><td>Voor het meten van RNA-concentratie</td></tr><tr><td>OP50</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N/A</td><td>Bacterieën gebruikt als C. elegans voedsel</td></tr><tr><td>Potasium phosphate dibasic trihydrate (K2HPO4&middot;3H2O)</td><td>Sigma</td><td>P5504-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Potasium phosphate monobasic (KH2PO4)</td><td>Sigma</td><td>P0662-2.5KG</td><td></td></tr><tr><td>Power SYBR Green cells-to-Ct kit</td><td>ThermoFisher</td><td>4402953</td><td>Voor reverse transcriptie en qPCR van een paar wormen of wormweefsel</td></tr><tr><td>Power SYBR Green Master Mix</td><td>ThermoFisher</td><td>4367659</td><td>Voor qPCR van bulkwormenstalen</td></tr><tr><td>Pure Bright germicidal ultra bleach&nbsp;</td><td>KIK International LLC.</td><td>59647210143</td><td>6% huisbleach Voor wormeieren voorbereiding</td></tr><tr><td>Pyrex spot plate with nine depressions</td><td>Sigma</td><td>CLS722085-18EA</td><td>Kijkglas voor het dissecteren van de wormen</td></tr><tr><td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td><td>ThermoFisher</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Sodium cloride (NaCl)</td><td>Sigma</td><td>S7653-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>Sigma</td><td>SX0590-3</td><td></td></tr><tr><td>Sodium phosphate dibasic heptahydrate (Na2HPO4&middot;7H2O)</td><td>Sigma</td><td>S9390-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R Centrifuge</td><td>Thermo</td><td>7500-4337</td><td>Voor bacteriënverzameling</td></tr><tr><td>Thermo Sorvall ST 8 centrifuge</td><td>Thermo</td><td>7500-7200</td><td>Voor wormeieren voorbereiding</td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>TheroFisher</td><td>15596018</td><td>RNA extractiereagens</td></tr><tr><td>Turbo DNA-free kit</td><td>ThermoFisher</td><td>AM1907</td><td>Voor het verwijderen van DNA-besmetting in RNA-extracties</td></tr><tr><td>Vortexer 59</td><td>Denville Scientific INV</td><td>S7030</td><td></td></tr><tr><td>VWR Disposable Pellet Mixers and Cordless Motor</td><td>VWR</td><td>47747-370</td><td>Voor wormen vermalen met Trizol</td></tr><tr><td>VWR Kinetic Energy 26 Joules Mini Centrifuge C1413 V-115</td><td>VWR</td><td>N/A</td><td>Voor wormenverzameling. Uit productie genomen model, een soortgelijk model verkrijgbaar bij VWR met cat# 76269-064</td></tr><tr><td>Worm picker</td><td>WormStuff</td><td>59-AWP</td><td></td></tr></tbody></table>

lipidensuppletie voor een lange levensduur en gentranscriptionele analyse bij caenorhabditis elegans

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Veroudering is een complex proces dat wordt gekenmerkt door progressieve fysiologische veranderingen als gevolg van zowel omgevings- als genetische bijdragen. Lipiden zijn cruciaal bij het vormen van structurele componenten van celmembranen, het opslaan van energie en als signaalmoleculen. Regulatie van lipidemetabolisme en signalering is essentieel om verschillende levensduurroutes te activeren. De spoelworm Caenorhabditis elegans is een uitstekend en krachtig organisme om de bijdrage van lipidemetabolisme en signalering in levensduurregulatie te ontleden. Meerdere onderzoeken hebben beschreven hoe dieetsuppletie van specifieke lipidemoleculen de levensduur van C. elegans kan verlengen; kleine verschillen in de suppletievoorwaarden kunnen echter reproduceerbaarheidsproblemen veroorzaken bij wetenschappers in verschillende laboratoria. Hier worden twee gedetailleerde suppletiemethoden voor C. elegans gerapporteerd met behulp van lipidensuppletie met bacteriën die op platen zijn gezaaid of bacteriële suspensie in vloeibare cultuur. Hierin worden ook de details gegeven om levensduurtests uit te voeren met levenslange lipidensuppletie en qRT-PCR-analyse met behulp van een hele wormlysaat of ontleedde weefsels afgeleid van een paar wormen. Met behulp van een combinatie van longitudinale studies en transcriptionele onderzoeken naar lipidensuppletie, bieden de voedingstests betrouwbare benaderingen om te ontleden hoe lipiden de levensduur en gezonde veroudering beïnvloeden. Deze methodologie kan ook worden aangepast voor verschillende benaderingen voor voedingsscreening om veranderingen in een subset van transcripten te beoordelen met behulp van een klein aantal ontleedde weefsels of een paar dieren.

Validatie van transcriptionele veranderingen met behulp van een paar hele wormen bij lipidensuppletie Om te onderzoeken of het protocol om RNA in cDNA te extraheren en retrotranscriberen van een paar hele wormen reproduceerbaar is en vergelijkbaar is met de gegevens van bulkwormen, werd een langlevende wormenstam gebruikt die het lysosomale zure lipase lipl-4 in de darm overexpressie gaf 7,8,33,35.<s...

Het huidige protocol beschrijft lipidensuppletiemethoden in vloeibare en on-plate culturen voor Caenorhabditis elegans, in combinatie met longitudinale studies en gentranscriptionele analyse van bulk of een paar wormen en wormweefsels.

Lipidensuppletie voor een lange levensduur en gentranscriptionele analyse bij Caenorhabditis elegans

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

Dit protocol beschrijft twee lipidensuppletiestrategieën met een combinatie van longitudinale en transcriptionele analyse in het modelorganisme, C.elegans. De techniek beschrijft hoe transcriptionele veranderingen kunnen worden onderzocht met behulp van enkele wormen of ontleed wormweefsels en hoe de vloeibare voeding voor een insectenpopulatie kan worden gekoppeld aan hydrotechnieken. Personen die deze techniek uitvoeren, moeten weefseldissectie oefenen vanwege het korte tijdvenster om het experiment uit te voeren om adequate transcriptionele analyse te bereiken.Verzamel om te beginnen OP50-bacteriën door de 's nachts gekweekte cultuur gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur op 4.000 G te centrifugeren. Gooi het supernatant weg. Suspensie de bacteriële pellet in 20 milliliter bacteriële verdunning, dieetbeperking of BDR-base door vortexing en herhaal opnieuw de centrifugatie gedurende 10 minuten.Nadat u het supernatant hebt weggegooid, suspenseert u de bacteriële pellet opnieuw in het BDR-medium om een bacteriële bouillon van 20 X BDR te bereiden. Verdun de bacteriële bouillon tot 5X met behulp van een BDR-medium voor gebruik. Gebruik ethanol of dimethylsulfoxide als oplosmiddel, bereid een lipide stockoplossing in een nieuwe glazen injectieflacon met autoclaaf en vul de glazen injectieflacon met argon of stikstof om oxidatie te voorkomen.Breng de lipidevoorraadoplossing over naar de BDR-bacterieoplossing om de gewenste eindconcentratie in voedingsomstandigheden te bereiken. Meng het grondig door 20 seconden te vortexen. Bereid het voertuig voor dat wordt bestuurd door dezelfde hoeveelheden gefilterde ethanol of dimethylsulfoxide met BDR-bacteriën te mengen.Voer lipidensuppletie en vloeistofcultuur uit door de gewenste hoeveelheid lipide- of voertuigcontrole over te brengen naar elke put van een 12-putplaat met drie tot vier replicaties voor elke voedingsconditie. Meng de gesynchroniseerde Caenorrhabditis elegans wormsuspensie met 5X BDR bacteriën in een één-op-één verhouding om een uiteindelijke concentratie van 1.500 wormen per milliliter en 2,5X voor bacteriën te bereiken. Breng vervolgens twee milliliter van het wormbacteriemengsel over naar elke put van de 12 putplaat.Als u klaar bent, wikkelt u de 12-putplaat met folie en schudt u de plaat in een incubator van 20 graden Celsius bij 100 RPMM voor de gewenste incubatielengte. Voor lipidensuppletie op platen, zaai een milliliter van de lipide geconditioneerde bacteriën op het midden van een 10 centimeter nematode groeimedium of NGM agar plaat. Zorg ervoor dat de uiteindelijke werkoplossing meerdere keren wordt gevortexed tussen het zaaien van de twee platen bij het werken met een groot aantal platen.Droog de plaat in het donker in een bioveiligheidskap. Breng 3000 wormen over van de gesynchroniseerde wormencultuur naar de 10 centimeter plaat. Droog de plaat in een bioveiligheidskap totdat wormen die op de met lipiden aangevulde platen zwommen, beginnen te kruipen.Eenmaal gedroogd, incubeer de lipide geconditioneerde plaat in een incubator van 20 graden Celsius voor de gewenste tijdsduur en als u meervoudig onverzadigde lipiden gebruikt, beschermt u de plaat tegen licht. Bereid 20 microliter eindlysisoplossing voor elk monster door 0,2 microliter DNase I te mengen met 19,8 microliter lysisoplossing in een PCR-buis en meng deze goed door vijf keer op en neer te pipetteren. Om het RNA uit het kleine aantal hele wormen te extraheren, verwijdert u de bacteriën door 15 tot 20 wormen van het bacteriële gazon over te brengen naar een vers ongeplaatste NGM-plaat.Breng 15 tot 20 wormen over van de ongezaaide NGM-plaat naar de PCR-buis met 20 microliter van de vers bereide eindlysisoplossing met het minimum aantal bacteriën en incubeer de lysereactie gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Zodra de incubatie voorbij is, houdt u het monster in een mooi koudwaterbad en sondet u de wormen vier keer, vijf seconden per keer met 30% amplitude en pulseert u gedurende 15 seconden tussen elke tijd van ultrasoonapparaat. Incubeer de buis bij kamertemperatuur gedurende vijf minuten voordat u twee microliter stopoplossing aan de lysisreactie toevoegt en meng deze door zachtjes te tikken.Incubeer de reactie gedurende twee minuten bij kamertemperatuur en zet de buis vervolgens op ijs. Om RNA uit het wormweefsel te extraheren, pluk je ongeveer 20 wormen uit het bacteriële gazon en plaats je ze in een verse ongezaaide NGM-plaat om de bacteriën uit de wormen te verwijderen. Breng 20 wormen met zo min mogelijk bacteriën over naar een horlogeglas met 500 microliter M9-oplossing met vier micromolaire levamisol.Wanneer de wormen zijn geïmmobiliseerd, ontleedt u de kiembaan of darm met behulp van een naald van 25 gauge die aan de spuit van één milliliter kan worden bevestigd. Breng met behulp van een geautoclaveerde glazen pipet de ontleedde weefsels over in de PCR-buis en laat de buis gedurende twee minuten op ijs zakken, waardoor de afzetting van het materiaal aan de onderkant mogelijk wordt. Verwijder het supernatant uit de PCR-buis voordat u 20 microliter uiteindelijke lysisoplossing toevoegt en meng het goed door erop te tikken.Nadat u de lysisreactie gedurende vijf minuten hebt geïncubeerd, voegt u twee microliter stopoplossing toe en tikt u meerdere keren op de buis. Incubeer de buis gedurende twee minuten voordat u doorgaat met de omgekeerde transcriptie. In de validatiestudie vertoonde RNA geëxtraheerd uit een grote populatie en een paar wormen een vergelijkbare inductie van de neuropeptideverwerkingsgenen, egl-3 en egl-21.Het suggereert dat de RNA-extractie uit een paar wormen een geldig alternatief kan zijn voor standaard CDNA-synthesetechnieken uit grote populaties. In de ontleedde darm van de lipl-4 transgene wormen, aangevuld met dihomo-gamma-linoleenzuur, of DGLA, werden de neuronale neuropeptideverwerkingsgenen niet geïnduceerd. DGLA-suppletie bij verschillende concentraties redde levensduurverlenging in de wormen bij fat-3 knockdown.Wormen met lipidensuppletie kunnen ook worden verwerkt voor RNA-sequencing, proteomics, metabolomics en gedragsstudies om aanvullende fenotypen onder deze specifieke omstandigheden te identificeren. Deze methodologie kan worden toegepast op verouderingsonderzoek, lipidenbiologie en elk ander onderzoeksgebied dat gericht is op het vaststellen van een relatie tussen een bepaald fenotype en een voedingsfactor of metaboliet.

lipid-supplementation-for-longevity-gene-transcriptional-analysis

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier presenteren wij een protocol voor het uitvoeren van solide plaat op basis van dieetbeperking...

Solid Plate-based dieetbeperking in Caenorhabditis elegans</em

&lt;em&gt; Caenorhabditis elegan &lt;/ em&gt; is een bruikbaar model om de functies van meervoudig onverzadigde vetzuren verkennen in ontwikkeling en fysiologie. Dit protocol beschrijft een efficiënte methode van aanvulling van het &lt;em&gt; C. elegans &lt;/ em&gt; dieet van meervoudig onverzadigde vetzuren.

Aanvulling van de voeding van meervoudig onverzadigde vetzuren in<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Galaxy en David hebben zich ontwikkeld tot populaire tools die het mogelijk maken de onderzoekers zonder bioinformatica training te analyseren en RNA-Seq gegevens te interpreteren. We beschrijven een protocol voor C. elegans onderzoekers RNA-Seq experimenten toegang voeren en verwerken dataset behulp Galaxy en zinvolle biologische informatie uit het gen lijsten met behulp DAVID verkrijgen.

Transcriptoom analyse<em&gt; C</em&gt;.<em&gt; elegans</em&gt; RNA Sequencing gegevens via de Tuxedo Suite op de Galaxy Project

Hier presenteren we een kader hebben betrekking op breed scala dieet beperking genexpressie en levensduur. We beschrijven de protocollen voor breed scala dieet beperking en voor kwantitatieve beeldvorming van genexpressie onder dit paradigma. We schetsen verder computationele analyses te onthullen de functies van information processing van de genetische circuits onderliggende betrokken bij voedsel-sensing.

Kwantificering van informatie gecodeerd door Gene Expression niveaus tijdens levensduur modulatie onder breed-scala dieet beperking in C. elegans

Hier beschrijven we een eenvoudig protocol voor het snel produceren van honderden nematode groei media agar, 96-Wells cultuur platen met een consistent aantal Caenorhhabditis elegans per putje. Deze culturen zijn nuttig voor de fenotypische screening van hele organismen. Hier richten we ons op met behulp van deze culturen op scherm chemicaliën voor Pro-levensduur effecten.

Een eenvoudige methode voor High Throughput chemische Screening in Caenorhabditis Elegans

Hier beschrijven we de replicaset methode, een benadering tot kwantitatief maatregel C. elegans levensduur/overleving en de healthspan in een high-throughput en robuuste manier, waardoor screening van vele voorwaarden zonder in te boeten op kwaliteit van de gegevens. Dit protocol details van de strategie en biedt een software-instrument voor de analyse van gegevens van de replicaset.

De Replica Set, methode: Een High-throughput benadering van kwantitatief maatregel Caenorhabditis elegans levensduur

Hier presenteren we een protocol voor de isolatie van RNA, DNA en eiwit uit hetzelfde monster, in een poging om de variatie te reduceren, reproduceerbaarheid te verbeteren en vergemakkelijken van interpretaties.

Gecombineerde Nucleotide en eiwit extracties in Caenorhabditis elegans

Proteostatische achteruitgang is een kenmerk van veroudering en vergemakkelijkt het begin van neurodegeneratieve ziekten. We schetsen een protocol om proteostase kwantificeerbaar te meten in twee verschillende Caenorhabditis elegans-weefsels door heterologe expressie van polyglutamine-herhalingen gefuseerd met een fluorescerende verslaggever. Dit model maakt een snelle in vivo genetische analyse van proteostase mogelijk.

Kwantificering van weefselspecifieke proteostatische achteruitgang van Caenorhabditis elegans

Gestimuleerde Raman scattering (SRS) microscopie maakt selectieve, labelvrije beeldvorming van specifieke chemische moieties mogelijk en het is effectief gebruikt om lipidemoleculen in vivo in beeld te brengen. Hier geven we een korte inleiding tot het principe van SRS-microscopie en beschrijven we methoden voor het gebruik ervan bij de opslag van beeldvormende lipiden in Caenorhabditis elegans.

Labelvrije beeldvorming van lipideopslagdynamiek bij Caenorhabditis elegans met behulp van gestimuleerde Raman-verstrooiingscopie

Caenorhabditis elegans dienen als een uitstekend modelsysteem met robuuste en goedkope methoden voor het onderzoeken van de gezondheid, levensduur en veerkracht tegen stress.

Onderzoek naar goedkope methoden om levensduur en gezondheid te meten in Caenorhabditis elegans

De voedselbron voor Caenorhabditis elegans in het lab is levende Escherichia coli. Omdat bacteriën metabolisch actief zijn, vormen ze een verstorende variabele in metabole en geneesmiddelstudies bij C. elegans. Een gedetailleerd protocol om bacteriën metabolisch te inactiveren met behulp van paraformaldehyde wordt hier beschreven.

Methodologie om bacteriën metabolisch te inactiveren voor Caenorhabditis elegans-onderzoek

Leer lipidsuppletiemethoden voor transcriptieanalyse bij Caenorhabditis elegans. Dit protocol combineert vloeibare voeding en plaatkweken met RNA-extractie uit weefsels voor verouderingsonderzoek.

Lipidensuppletie voor een lange levensduur en gentranscriptionele analyse bij Caenorhabditis elegans

Meer video's verkennen