Name: Bron en route van pyrrolizidine alkaloïde besmetting in thee monsters (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Leer een betrouwbare detectiemethode voor pyrrolizidine alkaloïden in thee, bodem en onkruid met zuivering via adsorbentia. Deze techniek biedt efficiëntie en kostenbesparing voor voedselveiligheidsonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Scientific Foundation of China (32102244), het National Agricultural Products Quality and Safety and Risk Assessment Project (GJFP2021001), de Natural Scientific Foundation of Anhui Province (19252002) en de USDA (HAW05020H).

Voor dit onderzoek werden de volgende onkruidsoorten verzameld: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L., en Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore. De verse theebladeren werden geplukt uit de variëteit van Longjing 43 # theebomen en de gedroogde theemonsters waren commercieel verkrijgbare thee verwerkt volgens het productieproces van groene thee (zie tabel met materialen).
1. Monsterverzameling
<ol><li>Verzamel 40 echte monsters.<ol><li>Verzamel 10 onkruiden, 10 bodems en 10 verse theebladeren willekeurig uit meerdere theetuinen. OPMERKING: Voor dit onderzoek werd de grond bemonsterd op een diepte van 20 cm met een monsterhoeveelheid van 200 g.</li>
		<li>Verzamel willekeurig 10 gedroogde theeproducten (250 g) uit een supermarkt.</li>
	</ol></li>
	<li>Verzamel monsters van onkruid, aarde en verse theebladeren om de besmettingsbron van PA's in thee te bestuderen.<ol><li>Stel vijf bemonsteringspunten in dezelfde theetuin in, met drie replica's op elk punt.</li>
		<li>Verzamel Ageratum conyzoides L. onkruidmonsters met het hoogste PA-gehalte dat vaak wordt aangetroffen in theetuinen. OPMERKING: De steekproefhoeveelheid was 250 g voor dit onderzoek.</li>
		<li>Verzamel de bodemmonsters. OPMERKING: De bodemmonsters waren A. conyzoides rhizosferische grond op een diepte van 20 cm met een monsterhoeveelheid van 200 g.</li>
		<li>Verzamel de verse theebladeren van verschillende delen van de theeplanten, waaronder een knop met twee bladeren, een knop met drie bladeren, een knop met vier bladeren en volwassen bladeren. OPMERKING: De monsterhoeveelheid was 250 g.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Monsterbehandeling
<ol><li>Behandel de monsters voor volgens de onderstaande stappen.<ol><li>Maal de gedroogde thee- en grondmonsters met een molen, haal de verpulverde monsters door een zeef met 200 mazen en bewaar ze bij −20 °C. OPMERKING: De gedroogde thee was een in de handel verkrijgbaar theeproduct (zie tabel met materialen), dus het werd direct geplet en gezeefd voor opslag. De bodemmonsters (200 g) werden op een geventileerde plaats in het donker geplaatst om ongeveer een week aan de lucht te drogen.</li>
		<li>Homogeniseer de wiet en verse theebladeren met een homogenisator en bewaar ze bij −20 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Voer een monsterbehandeling uit van de gedroogde theeproducten, verse theebladeren en onkruid.<ol><li>Weeg 1,00 g van elk monster af (gedroogde theeproducten, verse theebladeren en onkruid) en plaats het in een centrifugebuis van 50 ml.</li>
		<li>Voeg 10 ml zwavelzuuroplossing van 0,1 mol/l en vortex toe gedurende 2 minuten voor vastefase-extractie (met behulp van SPE-patroon, zie materiaaltabel) en 1 minuut voor adsorbenszuivering. Voer ultrasone extractie23 uit gedurende 15 minuten en centrifugeer vervolgens gedurende 10 minuten met een snelheid van 9.390 x g bij kamertemperatuur. OPMERKING: Het vermogen van de ultrasone oscillator was 290 W, de oscillatiefrequentie was 35 kHz en de temperatuur was ingesteld op 30 °C.</li>
		<li>Breng het supernatant over in een centrifugebuis van 50 ml met een druppelaar met plastic punt.</li>
		<li>Volg de bovenstaande stappen om de extractie eenmaal te herhalen. Combineer de twee supernatanten.<ol><li>Activeer de SPE-patronen met 5 ml methanol en 5 ml gedeïoniseerd water. Voeg 10 ml supernatant toe aan de vooraf geactiveerde patroon en voer het monsterreiniging uit.</li>
			<li>Nadat het niveau van de monsteroplossing de bovenste laag patronen heeft bereikt, elueert u de analyten met 5 ml 1% mierenzuuroplossing en vervolgens 5 ml methanol. Gooi het eluaat weg.</li>
			<li>Elueer met 5 ml methanol (met 0,5% ammoniakwater), filtreer het eluaat door een membraanfilter van 0,22 μm en analyseer met UPLC-MS/MS (zie materiaaltabel).</li>
		</ol></li>
		<li>Voer het opschonen van monsters uit met adsorbentia.<ol><li>Neem 2 ml van het supernatant (stap 2.2.4) in een centrifugebuis van 10 ml gevuld met de adsorbentia van GCB:PSA:C18 (10 mg:20 mg:15 mg, zie materiaaltabel), vortex gedurende 1 minuut en centrifugeer gedurende 8 minuten bij kamertemperatuur bij 9.390 x g .</li>
			<li>Laat 1 ml van het supernatant door een membraanfilter van 0,22 μm lopen vóór analyse door UPLC-MS/MS.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Voer de behandeling van de bodemmonsters uit.<ol><li>Weeg een bodemmonster van 1,00 g af. Plaats het in een centrifugebuis van 50 ml en voeg 0,1 ml 0,1 mol/l trinatriumcitraatoplossing toe (zie materiaaltabel) om de pH-waarde van de bodem aan te passen naar 6,0.</li>
		<li>Laat 2 minuten staan en voeg vervolgens 10 ml 0,1 mol / L zwavelzuur-methanoloplossing, vortex gedurende 2 minuten en schud gedurende 30 minuten toe en voer vervolgens ultrasone extractie gedurende 30 minuten uit.</li>
		<li>Centrifugeer gedurende 10 minuten op 9.390 x g en breng het supernatant over in een centrifugebuis van 50 ml met een druppelaar met plastic punt.</li>
		<li>Volg de bovenstaande stappen om de extractie te herhalen en combineer het supernatant twee keer. OPMERKING: De zuiveringsmethode was dezelfde als in stap 2.2.5.1 en stap 2.2.5.2.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Instrumentele analyse
<ol><li>Detecteer de 15 PA's in gedroogde theemonsters, verse theebladeren, wiet en aarde (monsters uit stap 2) met behulp van een in de handel verkrijgbaar UPLC-MS/MS-systeem (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm) (zie materiaaltabel).</li>
	<li>Stel de kolomtemperatuur in op 40 °C, het debiet op 0,250 ml/min en het injectievolume op 3 μl.</li>
	<li>Stel de mobiele fase A in: methanol (met 0,1% mierenzuur + 1 mmol/L ammoniumformiaat) en mobiele fase B: water (met 0,1% mierenzuur + 1 mmol/L ammoniumformiaat).</li>
	<li>Stel een gradiëntretrelutieprocedure in: 10% A van 0,0 min tot 0,25 min, 10%-30% A van 0,25 min tot 6,0 min, 30%-40% A van 6,0 min tot 9,0 min, 40%-98% A van 9,0 min tot 9,01 min die 1,9 min werd vastgehouden en 98%-100% A van 11,0 min tot 11,1 min die 2,9 min werd vastgehouden.</li>
	<li>Stel de massaspectrometerparameters in: ionisatiemodus, elektrospraypositieve ionenbron (ESI +); verstuiver druk, 7,0 bar; capillaire spanning, 4,0 kV; taps toelopend gat terugblaasstroom, 150 L/h; oplosmiddelgasstroom, 800 l/h; temperatuur van het oplosmiddel, 400 °C; impactgasstroom, 0,25 ml/min.</li>
</ol>

<ol><li>Schramm, S., Kohler, N., Rozhon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids%3A+Biosynthesis%2C+biological+activities+and+occurrence+in+crop+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids: Biosynthesis, biological activities and occurrence in crop plants.</a> Molecules. 24 (3), 498(2019).</li>
<li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scientific+opinion+on+pyrrolizidine+alkaloids+in+food+and+feed%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+Journal%22%5BJournal%5D)">Scientific opinion on pyrrolizidine alkaloids in food and feed.</a> EFSA Journal. 9 (11), 134(2011).</li>
<li>Ma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+and+regulation+of+hepatotoxic+pyrrolizidine+alkaloids+in+food%3A+A+critical+review+of+recent+research%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Determination and regulation of hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in food: A critical review of recent research.</a> Food and Chemical Toxicology. 119, 50-60 (2018).</li>
<li>Keuth, O., Humpf, H. U., Fürst, P. Pyrrolizidine Alkaloids: Analytical Challenges. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKeuth%2C+O+%22Encyclopedia+of+Food+Chemistry%22">Encyclopedia of Food Chemistry</a>. Melton, L., Shahidi, F., Varelis, P. 1, Elsevier. 348-355 (2019).</li>
<li>Huang, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids+and+its+source+analysis+in+tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+Safety+%26+Quality%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids and its source analysis in tea.</a> Journal of Food Safety & Quality. 9 (2), 229-236 (2018).</li>
<li>Liang, A. H., Ye, Z. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+situation+of+the+toxicity+researches+on+Senecio%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">General situation of the toxicity researches on Senecio.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 31 (2), 93-97 (2006).</li>
<li>Li, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+study+of+pyrrolizidine+alkaloid-induced+hepatic+sinusoidal+obstruction+syndrome+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Research+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Proteomic study of pyrrolizidine alkaloid-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in rats.</a> Chemical Research in Toxicology. 28 (9), 1715-1727 (2015).</li>
<li>Jia, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catalytic+enantioselective+synthesis+of+a+pyrrolizidine-alkaloid-inspired+compound+collection+with+antiplasmodial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Organic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Catalytic enantioselective synthesis of a pyrrolizidine-alkaloid-inspired compound collection with antiplasmodial activity.</a> The Journal of Organic Chemistry. 83, 7033-7041 (2018).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+evidence+of+pyrrolizidine+alkaloid+N-oxide-induced+hepatic+sinusoidal+obstruction+syndrome+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">First evidence of pyrrolizidine alkaloid N-oxide-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in humans.</a> Archives of Toxicology. 91 (12), 3913-3925 (2017).</li>
<li>Chen, Z., Huo, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+veno-occlusive+disease+associated+with+toxicity+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+herbal+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Netherlands+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hepatic veno-occlusive disease associated with toxicity of pyrrolizidine alkaloids in herbal preparations.</a> Netherlands Journal of Medicine. 68 (6), 252-260 (2010).</li>
<li>Mattocks, A. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMattocks%2C+AR+%22Chemistry+and+Toxicology+of+Pyrrolizidine+Alkaloid%22">Chemistry and Toxicology of Pyrrolizidine Alkaloid</a>. , Academic Press. London, UK. (1986).</li>
<li>Picron, J. F., Herman, M., Van Hoeck, E., Goscinny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+strategies+for+the+determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+plant+based+food+and+examination+of+the+transfer+rate+during+the+infusion+process%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Analytical strategies for the determination of pyrrolizidine alkaloids in plant based food and examination of the transfer rate during the infusion process.</a> Food Chemistry. 266, 514-523 (2018).</li>
<li>Kowalczyk, E., Kwiatek, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+sum+parameter+method+for+the+determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+teas%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Additives+%26+Contaminants%3A+Part+A%22%5BJournal%5D)">Application of the sum parameter method for the determination of pyrrolizidine alkaloids in teas.</a> Food Additives & Contaminants: Part A. 37 (4), 622-633 (2020).</li>
<li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+for+human+health+related+to+the+presence+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+honey%2C+tea%2C+herbal+infusions+and+food+supplements%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+Journal%22%5BJournal%5D)">Risks for human health related to the presence of pyrrolizidine alkaloids in honey, tea, herbal infusions and food supplements.</a> EFSA Journal. 15 (7), 04908(2017).</li>
<li>Han, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids+in+tea%3A+A+review+of+analytical+methods%2C+contamination+levels+and+health+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Science%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids in tea: A review of analytical methods, contamination levels and health risk.</a> Food Science. 42 (17), 255-266 (2021).</li>
<li>Nowak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+transfer+of+pyrrolizidine+alkaloids%3A+An+unconsidered+source+of+contaminations+of+phytopharmaceuticals+and+plant+derived+commodities%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Interspecific transfer of pyrrolizidine alkaloids: An unconsidered source of contaminations of phytopharmaceuticals and plant derived commodities.</a> Food Chemistry. 213, 163-168 (2016).</li>
<li>Selmar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+pyrrolizidine+alkaloids+between+living+plants%3A+A+disregarded+source+of+contaminations%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Transfer of pyrrolizidine alkaloids between living plants: A disregarded source of contaminations.</a> Environmental Pollution. 248, 456-461 (2019).</li>
<li>Izcara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniaturized+and+modified+QuEChERS+method+with+mesostructured+silica+as+clean-up+sorbent+for+pyrrolizidine+alkaloids+determination+in+aromatic+herbs%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Miniaturized and modified QuEChERS method with mesostructured silica as clean-up sorbent for pyrrolizidine alkaloids determination in aromatic herbs.</a> Food Chemistry. 380, 132189(2022).</li>
<li>Izcara, S., Casado, N., Morante-Zarcero, S., Sierra, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+miniaturized+QuEChERS+method+combined+with+ultrahigh+liquid+chromatography+coupled+to+tandem+mass+spectrometry+for+the+analysis+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+oregano+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">A miniaturized QuEChERS method combined with ultrahigh liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids in oregano samples.</a> Foods. 9 (9), 1319(2020).</li>
<li>Van Wyk, B. E., Stander, M. A., Long, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senecio+angustifolius+as+the+major+source+of+pyrrolizidine+alkaloid+contamination+of+rooibos+tea+%28Aspalathus+linearis%29%5BTitle%5D)+AND+%22South+African+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Senecio angustifolius as the major source of pyrrolizidine alkaloid contamination of rooibos tea (Aspalathus linearis).</a> South African Journal of Botany. 110, 124-131 (2017).</li>
<li>Johnson, A. E., Molyneux, R. J., Merrill, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry+of+toxic+range+plants.+Variation+in+pyrrolizidine+alkaloid+content+of+Senecio%2C+Amsinckia%2C+and+Crotalaria+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Chemistry of toxic range plants. Variation in pyrrolizidine alkaloid content of Senecio, Amsinckia, and Crotalaria species.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 33 (1), 50-55 (1985).</li>
<li>Vrieling, K., de Vos, H., van Wijk, C. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+the+concentrations+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+Senecio+jacobaea%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of the concentrations of pyrrolizidine alkaloids in Senecio jacobaea.</a> Phytochemistry. 32 (5), 1141-1144 (1993).</li>
<li>Han, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+optimization%2C+validation+and+application+of+ultra+high+performance+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry+for+the+analysis+of+pyrrolizidine+alkaloids+and+pyrrolizidine+alkaloid+N-oxides+in+teas+and+weeds%5BTitle%5D)+AND+%22Food+control%22%5BJournal%5D)">Development, optimization, validation and application of ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids and pyrrolizidine alkaloid N-oxides in teas and weeds.</a> Food control. 132, 108518(2022).</li>
<li>Bodi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+tea%2C+herbal+drugs+and+honey%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Additives+%26+Contaminants%3A+Part+A%22%5BJournal%5D)">Determination of pyrrolizidine alkaloids in tea, herbal drugs and honey.</a> Food Additives & Contaminants: Part A. 31 (11), 1886-1895 (2014).</li>
<li>European Union Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commission+Regulation+%28EU%29+2020%2F2040+of+11+December+2020+amending+Regulation+%28EC%29+No+1881%2F2006+as+regards+maximum+levels+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+certain+foodstuffs%5BTitle%5D)+AND+%22Official+Journal+of+the+European+Union%22%5BJournal%5D)">Commission Regulation (EU) 2020/2040 of 11 December 2020 amending Regulation (EC) No 1881/2006 as regards maximum levels of pyrrolizidine alkaloids in certain foodstuffs.</a> Official Journal of the European Union. 14 (12), 1-4 (2020).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het huidige werk was bedoeld om een effectieve, gevoelige methode te ontwikkelen om de besmettingsroutes en bronnen van PA's in theemonsters te onderzoeken, evenals de distributie van PA's in verschillende delen van de theeplanten. In deze studie werden echter slechts 15 PA's met succes gescheiden op de chromatografische kolom, wat een zeer klein aantal is in vergelijking met het grote aantal alkaloïden in plantensoorten 3,4. Dit had niet alleen te maken met de v...

Als secundaire metabolieten beschermen pyrrolizidine-alkaloïden (PA's) planten tegen herbivoren, insecten en ziekteverwekkers 1,2. Tot nu toe zijn meer dan 660 PA's en PA-N-oxiden (PANO's) met verschillende structuren gevonden in meer dan 6.000 plantensoorten wereldwijd 3,4. PA-producerende planten komen vooral voor in de families Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae en Apocynaceae 5,6. PA's worden gemakkelijk geoxideerd tot onstabiele dehydropyrrolizidine-alkaloïden, die een sterke elektrofielheid hebben en nucleofielen zoals DNA en eiwitten kunnen aanvallen, wat resulteert in levercelnecrose, veneuze occlusies, cirrose, ascites en andere symptomen 7,8. Het belangrijkste doelorgaan van PA-toxiciteit is de lever. PA's kunnen ook long-, nier- en andere orgaantoxiciteit en mutagene, carcinogene en ontwikkelingstoxiciteit veroorzaken 9,10.
Gevallen van menselijke en dierlijke vergiftiging zijn in veel landen gemeld door de inname van traditionele kruiden, supplementen of thee die PA's bevatten of de indirecte besmetting van voedingsmiddelen zoals melk, honing of vlees (giftig door inname van weidegrond die PA's bevat)11,12,13. De bevindingen van de Europese Autoriteit voor voedselveiligheid (EFSA) geven aan dat stoffen zoals (kruiden)thee een belangrijke bron van menselijke blootstelling aan PA's/PANO'szijn 14. Theemonsters produceren geen PA's, terwijl PA-producerende planten vaak worden aangetroffen in theetuinen (bijv. Emilia sonchifolia, Senecio angulatus en Ageratum conyzoides)15. Eerder werd vermoed dat de thee tijdens het plukken en verwerken besmet kon zijn met PA's uit hun producerende fabrieken. PA's werden echter ook gedetecteerd in sommige met de hand geplukte theebladeren (d.w.z. geen PA-producerende planten), wat suggereert dat er andere routes of bronnen van besmetting moeten zijn16. Een co-teeltexperiment van jakobskruiskruid (Senecio jacobaea) met melissa (Melissa officinalis), pepermunt (Mentha piperita), peterselie (Petroselinum crispum), kamille (Matricaria recutita) en nasturtium (Tropaeolum majus) planten werd uitgevoerd, en de resultaten toonden aan dat PA's werden gedetecteerd in al deze planten17. Er is geverifieerd dat PA's inderdaad worden overgedragen en uitgewisseld tussen levende planten via bodem18,19. Van Wyk et al.20 vonden dat rooibosthee (Aspalathus linearis) ernstig verontreinigd was op onkruidrijke locaties en PA's van hetzelfde type en dezelfde verhouding bevatte. Er werden echter geen PA's gedetecteerd in rooibosthee op onkruidvrije locaties.
Op dit moment wordt ultra-high performance vloeistofchromatografie tandem massaspectrometrie (UPLC-MS/MS) met hoge selectiviteit en gevoeligheid op grote schaal gebruikt bij de kwalitatieve en kwantitatieve analyse van PA's in landbouwproducten en levensmiddelen21,22. De monsterbehandelingsmethode bestaat meestal uit vaste fase extractie (SPE) of de QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe) reiniging van complexe voedselmatrices extracten, die de hoogst mogelijke gevoeligheid12,19 kunnen verkrijgen. Robuuste analysemethoden die de detectie en kwantificering van PA's in complexe matrices zoals aarde, onkruid en verse theebladeren mogelijk maken, ontbreken echter nog steeds.
Deze studie analyseerde 15 PA's in gedroogde theemonsters, verse theebladeren, onkruid en onkruid rhizosferische bodemmonsters met UPLC-MS / MS in combinatie met een adsorberende zuiveringsmethode. Bovendien werden 15 gepaarde onkruid- en onkruid rhizosferische bodemmonsters en 60 verse theebladmonsters verzameld van vijf bemonsteringslocaties in de Jinzhai-theetuin in de provincie Anhui, China, en werden geanalyseerd op 15 PA's. Deze resultaten kunnen een onderzoeksmethode en enige informatie over de bron en route van PA's (verontreiniging) in theemonsters opleveren om de kwaliteit en veiligheid van thee te waarborgen.

```html
<table><tbody><tr><td>Acetonitrile (99.9%)</td><td>Tedia Company,Inc.</td><td>21115197</td><td>CAS No:75-05-8</td></tr><tr><td>Ammonia (25%-28%)</td><td>Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>181210</td><td>CAS No:1336-21-6</td></tr><tr><td>Ammonium formate (97.0%)</td><td>Anpel Laboratory Technologies (Shanghai)</td><td>G0860050</td><td>CAS No:540-69-2</td></tr><tr><td>Carbon-GCB</td><td>CNW</td><td>B7760030</td><td>120-400 MESH, 10g. per box&nbsp;</td></tr><tr><td>Centrifuge Z 36 HK</td><td>HERMLE</td><td>Z36HK</td><td>30000&nbsp;rpm (min:10 rpm), Afmetingen (B x H x D):&nbsp;71,5 cm&times; 42 cm &times; 51 cm</td></tr><tr><td>Commercieel verkrijgbaar theeproduct</td><td>Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun</td><td>losse thee</td><td>Groene thee</td></tr><tr><td>Europine N-oxid (EuNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>323256</td><td>CAS No:65582-53-8</td></tr><tr><td>Europine (Eu) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>98222</td><td>CAS No:570-19-4</td></tr><tr><td>Formate (98.0%)</td><td>Aladdin</td><td>E2022005</td><td>CAS No:64-18-6</td></tr><tr><td>HC-C18</td><td>CNW</td><td>D2110060</td><td>40-63 &mu;m,100g.per box</td></tr><tr><td>Heliotrine (He) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>906426</td><td>CAS No:303-33-3</td></tr><tr><td>Heliotrine-N-oxide (HeNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>22581</td><td>CAS No:6209-65-0</td></tr><tr><td>High speed centrifuge TG16-WS</td><td>cence</td><td>203158000</td><td>Max:16000 r/min, 330 &times; 390 &times; 300 mm (L &times; B &times; H), Capaciteit: 6 &times; 50 mL</td></tr><tr><td>HSS T3 column</td><td>Waters</td><td>186004976</td><td>ACQUITY UPLC HSS T3 (2,1 &times; 100 mm 1,8 &mu;m)</td></tr><tr><td>Intermedine (Im) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>114843</td><td>CAS No:10285-06-0</td></tr><tr><td>Intermedine-N-oxide (ImNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>340066</td><td>CAS No:95462-14-9</td></tr><tr><td>Jacobine (Jb) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>132282048</td><td>CAS No:6870-67-3</td></tr><tr><td>Jacobine-N-oxide (JbNO) (98.0%)</td><td>ChemFaces</td><td>CFN00461</td><td>CAS No:38710-25-7</td></tr><tr><td>Methyl Alcohol (99.9%)</td><td>Tedia Company,Inc.</td><td>21115100</td><td>CAS No:67-56-1</td></tr><tr><td>PSA</td><td>Agela</td><td>P19-00833</td><td>40-60 &mu;m, 60 &Aring; 100g.per box</td></tr><tr><td>Retrorsine (Re) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281743</td><td>CAS No:480-54-6</td></tr><tr><td>Retrorsine-N-oxide (ReNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281734</td><td>CAS No:15503-86-3</td></tr><tr><td>Senecionine (Sc) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5280906</td><td>CAS No:130-01-8</td></tr><tr><td>Senecionine-N-oxide (ScNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5380876</td><td>CAS No:13268-67-2</td></tr><tr><td>Seneciphylline N-oxid (SpNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>6442619</td><td>CAS No:38710-26-8</td></tr><tr><td>Seneciphylline (Sp) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281750</td><td>CAS No:480-81-9</td></tr><tr><td>Senkirkine (Sk) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281752</td><td>CAS No:2318-18-5</td></tr><tr><td>SPE PCX</td><td>Agilent Technologies</td><td>12108206</td><td>Cation Mixed Mode, 6 mL</td></tr><tr><td>Sulfuric acid (97%)</td><td>Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>1003019</td><td>CAS No:7664-93-9</td></tr><tr><td>Trisodium citrate</td><td>Sinpharm Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>20121009</td><td>CAS No:6132-04-3</td></tr><tr><td>Ultrasonic cleaner</td><td>Supmile</td><td>KQ-600B</td><td>Inwendige sleufmaat: 500 &times; 300 &times; 150 mm; Capaciteit: 22,5 L</td></tr><tr><td>UPLC-xevoTQMS</td><td>Waters</td><td>ZPLYY-003</td><td>Triple four-stage rod mass analyzer, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Liquid Phase System</td></tr><tr><td>Water bath thermostat oscillator</td><td>Guoyu instrument</td><td>SHY-2AHS</td><td>Oscillatietijden:&nbsp; 60-300 keer/min, Constante temperatuurbereik: kamertemperatuur tot 100 &deg;C</td></tr></tbody></table>
```

bron en route van pyrrolizidine alkaloïde besmetting in thee monsters

Source and Route of Pyrrolizidine Alkaloid Contamination in Tea Samples

Giftige pyrrolizidine-alkaloïden (PA's) worden aangetroffen in theemonsters, die een bedreiging vormen voor de menselijke gezondheid. De bron en route van PA-besmetting in theemonsters zijn echter onduidelijk gebleven. In dit werk werd een adsorberende methode in combinatie met UPLC-MS/MS ontwikkeld om 15 PA's te bepalen in het onkruid Ageratum conyzoides L., A. conyzoides rhizospherische grond, verse theebladeren en gedroogde theemonsters . De gemiddelde terugvorderingen varieerden van 78% -111%, met relatieve standaardafwijkingen van 0,33% -14,8%. Vijftien paar A. conyzoides en A. conyzoides rhizosferische bodemmonsters en 60 verse theebladmonsters werden verzameld uit de Jinzhai-theetuin in de provincie Anhui, China, en geanalyseerd voor de 15 PA's . Niet alle 15 PA's werden gedetecteerd in verse theebladeren, behalve intermedine-N-oxide (ImNO) en senecionine (Sn). Het gehalte aan ImNO (34,7 μg/kg) was groter dan dat van Sn (9,69 μg/kg). Bovendien waren zowel ImNO als Sn geconcentreerd in de jonge bladeren van de theeplant, terwijl hun gehalte lager was in de oude bladeren. De resultaten gaven aan dat de PA's in thee werden overgedragen via het pad van PA-producerend onkruid-grond-verse theebladeren in theetuinen.

De geoptimaliseerde adsorberende zuiverings- en analysemethode van 15 PA's in gedroogde theemonsters, verse theebladeren, onkruid en aarde werd vastgesteld en vergeleken met de veelgebruikte zuiveringsmethode met behulp van de SPE-cartridge. De resultaten toonden aan dat de terugwinningen van de 15 PA's in gedroogde theemonsters, wiet en verse theebladeren met behulp van de SPE-patroon 72% -120% waren, terwijl die met adsorbenszuivering 78% -98% was (figuur 1). De terugwinningen van de 15 PA...

Het huidige protocol beschrijft de besmetting van pyrrolizidine alkaloïden (PA's) in theemonsters van PA-producerend onkruid in theetuinen.

Bron en route van pyrrolizidine alkaloïde besmetting in thee monsters

Toxic pyrrolizidine alkaloids (PAs) are found in tea samples, which pose a threat to human health. However, the source and route of PA contamination in ...

De ontwikkeling van een detectiemethode van 15 pyrrolizidine-alkaloïden in onkruid, aarde, verse theebladeren en droge theemonsters kan technische ondersteuning bieden voor het onderzoeken van de bron van pyrrolizidine-alkaloïdenbesmetting in thee. In vergelijking met de extractie van vaste fase kan de adsorberende methode voor bodemmonsters tijd, lagere kosten en betere terugwinningen voor pyrrolizidine-alkaloïdenanalyse besparen. Om de extractie op de voorverwarmde gedroogde theeproducten, verse theebladeren of onkruid te starten, weegt u een gram van een monster in een centrifugebuis van 50 milliliter en voegt u 10 milliliter 0,1 mol zwavelzuuroplossing per liter toe aan de buis.Vervolgens vortex het monster gedurende twee minuten als het moet worden geanalyseerd met behulp van vaste fase-extractie, terwijl gedurende één minuut als hetzelfde moet worden geanalyseerd met behulp van adsorberende reiniging. Onderwerp het monster vervolgens gedurende 15 minuten aan ultrasone extractie, gevolgd door centrifugatie bij 9.390 G gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Breng vervolgens met behulp van een druppelaar met plastic punt de bovennatuurlijke oplossing over in een centrifugebuis van 50 milliliter.Nadat u de extractie twee keer hebt uitgevoerd, combineert u de supernatanten in de buis. Om de extractie op de voorbereide grond te starten, weegt u een gram van een monster in een centrifugebuis van 50 milliliter. Voeg 0,1 milliliter 0,1 mol per liter trinatriumcitraatoplossing toe om de pH van de grond op 6,0 te zetten en laat het monster twee minuten staan.Voeg vervolgens 10 milliliter 0,1 mol zwavelzuur methanoloplossing toe aan de buis en draai het monster gedurende twee minuten, gevolgd door schudden gedurende 30 minuten. Voer vervolgens ultrasone extractie uit gedurende 30 minuten zoals eerder gedemonstreerd. Centrifugeer het monster vervolgens gedurende 10 minuten op 9,390 G.En breng met behulp van een plastic druppelaar het supernatant over in een centrifugebuis van 50 milliliter. Nadat u de extractie twee keer hebt uitgevoerd, combineert u de supernatanten. Activeer de vaste fase extractie of SPE-patroon met vijf milliliter methanol gevolgd door vijf milliliter gedeïoniseerd water.Voeg na activering 10 milliliter van het supernatant uit de monsterextractie toe aan de vooraf geactiveerde patroon. Nadat het niveau van de monsteroplossing de bovenste laag patronen heeft bereikt, elueert u de monstermatrix met vijf milliliter 1% mierenzuuroplossing, gevolgd door vijf milliliter methanol, en gooit u de eluenten weg. Elueer vervolgens de analyten met vijf milliliter methanol met 0,5% ammoniakwater.Filter het eluent door een membraanfilter van 0,22 micron om te analyseren met UPLC-MS/MS. Om monsterreiniging uit te voeren met behulp van adsorbens, bereidt u een centrifugebuis van 10 milliliter voor met het adsorberende GCB, PSA en C18 in verhouding 10 tot 20 tot 15 milligram. Voeg vervolgens twee milliliter van het supernatant toe dat na de monsterbehandeling is verkregen.Draai vervolgens het monster en het adsorberende mengsel gedurende één minuut en centrifugeer gedurende acht minuten bij 9.390 G bij kamertemperatuur. Filter een milliliter van het resulterende supernatant door een membraanfilter van 0,22 micron in een monsterflacon voordat u het analyseert met UPLC-MS / MS. In de studie werd een hoger percentage herstel van 15 pyrrolizidine-alkaloïden uit verse theebladeren, gedroogde theemonsters en wiet verkregen met behulp van de adsorberende zuiveringstechniek in vergelijking met de SPE-patroonmethode.De terugwinningen van de alkaloïden in de bodem met behulp van adsorberende zuivering waren 79 tot 111%In de verse theebladeren verzameld van de vijf bemonsteringsplaatsen, werd een hoger gehalte aan intermedine N-oxide gedetecteerd dan senecionine. Senecionine werd niet gedetecteerd in volwassen bladeren van bemonsteringsplaatsen één en twee. Van de 11 pyrrolizidine-alkaloïden werd alleen intermedine N-oxide in de bodem gedetecteerd, terwijl senecionine en intermedine N-oxide in verschillende delen van de theeplanten werden gedetecteerd.Bovendien bleek het gehalte aan het Intermedine N-oxide in één knop met twee bladeren het hoogst te zijn. Terwijl u dit eerst probeert, is het belangrijkste om 0,1 milliliter 0,1 mol per liter trinatriumcitraatoplossing toe te voegen om de pH van uw bodem aan te passen aan 6,0. Deze methode kan worden toegepast op de analyse van alkaloïden in andere eetbare planten, en het biedt ook een natuurlijke techniek voor het verkennen van de bron van alkaloïden in hen.

source-route-pyrrolizidine-alkaloid-contamination-tea

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Presenteren we een protocol voor snelle screening van milieu monsters voor siderofoor potentieel bijdragen aan micronutriënt biologische beschikbaarheid en omzet in terrestrische systemen.

Siderofoor High-throughput Screening van milieu monsters: plantaardige weefsels, Bulk bodems en rhizosfeer bodems

Dit werk presenteert een protocol voor de oprichting van een cel schorsing cultuur afgeleid van thee (Camellia sinensis L.) bladeren die kunnen worden gebruikt om het metabolisme van de externe verbindingen die kunnen worden opgenomen door de hele plant, zoals insecticiden studie.

Studie over het metabolisme van zes systemische insecticiden in een nieuw opgerichte cel schorsing cultuur afgeleid van thee (Camellia sinensis L.) Bladeren

Hier presenteren we een protocol om high-performance vloeistofchromatografie (HPLC) vast te stellen, gekoppeld aan chemische vingerafdruk multi-patroonherkenning, die een nieuwe strategie biedt voor het effectief identificeren van de echte variëteiten van Clematidis Armandii Caulis en zijn overspelige stoffen.

HPLC in combinatie met chemische vingerafdrukken voor multi-patroonherkenning voor het identificeren van de authenticiteit van Clematidis Armandii Caulis

Hier wordt een methode gepresenteerd voor het verrijken en analyseren van de vluchtige componenten van thee-extracten met behulp van oplosmiddelondersteunde smaakverdamping en oplosmiddelextractie gevolgd door gaschromatografie-massaspectrometrie, die kan worden toegepast op alle soorten theemonsters.

Theearoma-analyse op basis van oplosmiddelondersteunde smaakverdampingsverrijking

We presenteren een methode voor snelle massaspectrometrie (MS)/massaspectrometrie (MS)-gebaseerde annotatie en classificatie van tropaanalkaloïden, nuttig voor zowel voorlopige dereplicatie van tropane-bevattende monsters als de ontdekking van nieuwe alkaloïden voor isolatie.

Toepassingen van vloeistofchromatografie tandem massaspectrometrie in onderzoek naar natuurlijke producten: tropaanalkaloïden als casestudy

Dit protocol presenteert een gevalideerde massaspectrometriemethode voor vloeistofchromatografie-ionenmobiliteit en hoge resolutie om de aanwezigheid van moederkorenalkaloïden in voedsel te bepalen in overeenstemming met de onlangs uitgebrachte Verordening (EU) 2023/915 van de Commissie.

Detectie van gereguleerde moederkorenalkaloïden in voedselmatrices door middel van vloeistofchromatografie-ingesloten ionenmobiliteitsspectrometrie-time-of-flight massaspectrometrie

Deze studie ontwikkelde een hoogpresterende vloeistofchromatografie in combinatie met triple quadrupole mass spectrometry (HPLC-QQQ-MS) methode om tropaanalkaloïden (hyoscyamine, anisomine, scopolamine) in Anisodus tanguticus te identificeren en te kwantificeren. De methode bleek snel, nauwkeurig en betrouwbaar voor high-throughput analyse van medicinale planten.

Een efficiënte en snelle HPLC-QQQ-MS-methode voor de kwantificatie van tropaanalkaloïden in medicinale planten

Het algemene doel van deze studie was om de potentiële verontreiniging kruis mechanisme van door voedsel overgedragen pathogeen Listeria monocytogenes in een retail broodjeszaak instelling tonen. Deze methodologie kan worden toegepast op een verscheidenheid van verschillende omgevingen pathogeen besmetting te volgen.

Tracking microbiële verontreiniging in Retail Environments met fluorescerende poeder - Een Retail Delicatessen Milieu Voorbeeld

EPA-methode 1615 gebruikt een elektropositieve filter om enterovirussen en norovirusessen te concentreren in milieu- en drinkwater. Dit manuscript beschrijft de procedure voor het verzamelen van monsters voor analyse volgens Methode 1615.

EPA Method 1615. Meting van Enterovirus en Norovirus Voorkomen in water per cultuur en RT-qPCR. I. Het verzamelen van Virus Samples

We beschrijven een protocol voor het filtreren van watermonsters met een filtercartridge en het extraheren van omgevings-DNA (eDNA) zonder dat het behuizing hoef te worden geopend om de filter te verwijderen. Dit protocol is ontwikkeld voor metabarcoding van eDNA van vissen, maar is ook toepasbaar op eDNA van andere organismen.

Het gebruik van een filter cartridge voor filtratie van watermonsters en Winning van Environmental DNA

Leer een betrouwbare detectiemethode voor pyrrolizidine alkaloïden in thee, bodem en onkruid met zuivering via adsorbentia. Deze techniek biedt efficiëntie en kostenbesparing voor voedselveiligheidsonderzoek.

Bron en route van pyrrolizidine alkaloïde besmetting in thee monsters

Meer video's verkennen