Bron en route van pyrrolizidine alkaloïde besmetting in thee monsters

De ontwikkeling van een detectiemethode van 15 pyrrolizidine-alkaloïden in onkruid, aarde, verse theebladeren en droge theemonsters kan technische ondersteuning bieden voor het onderzoeken van de bron van pyrrolizidine-alkaloïdenbesmetting in thee. In vergelijking met de extractie van vaste fase kan de adsorberende methode voor bodemmonsters tijd, lagere kosten en betere terugwinningen voor pyrrolizidine-alkaloïdenanalyse besparen. Om de extractie op de voorverwarmde gedroogde theeproducten, verse theebladeren of onkruid te starten, weegt u een gram van een monster in een centrifugebuis van 50 milliliter en voegt u 10 milliliter 0,1 mol zwavelzuuroplossing per liter toe aan de buis.

Vervolgens vortex het monster gedurende twee minuten als het moet worden geanalyseerd met behulp van vaste fase-extractie, terwijl gedurende één minuut als hetzelfde moet worden geanalyseerd met behulp van adsorberende reiniging. Onderwerp het monster vervolgens gedurende 15 minuten aan ultrasone extractie, gevolgd door centrifugatie bij 9.390 G gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Breng vervolgens met behulp van een druppelaar met plastic punt de bovennatuurlijke oplossing over in een centrifugebuis van 50 milliliter.

Nadat u de extractie twee keer hebt uitgevoerd, combineert u de supernatanten in de buis. Om de extractie op de voorbereide grond te starten, weegt u een gram van een monster in een centrifugebuis van 50 milliliter. Voeg 0,1 milliliter 0,1 mol per liter trinatriumcitraatoplossing toe om de pH van de grond op 6,0 te zetten en laat het monster twee minuten staan.

Voeg vervolgens 10 milliliter 0,1 mol zwavelzuur methanoloplossing toe aan de buis en draai het monster gedurende twee minuten, gevolgd door schudden gedurende 30 minuten. Voer vervolgens ultrasone extractie uit gedurende 30 minuten zoals eerder gedemonstreerd. Centrifugeer het monster vervolgens gedurende 10 minuten op 9,390 G.

En breng met behulp van een plastic druppelaar het supernatant over in een centrifugebuis van 50 milliliter. Nadat u de extractie twee keer hebt uitgevoerd, combineert u de supernatanten. Activeer de vaste fase extractie of SPE-patroon met vijf milliliter methanol gevolgd door vijf milliliter gedeïoniseerd water.

Voeg na activering 10 milliliter van het supernatant uit de monsterextractie toe aan de vooraf geactiveerde patroon. Nadat het niveau van de monsteroplossing de bovenste laag patronen heeft bereikt, elueert u de monstermatrix met vijf milliliter 1% mierenzuuroplossing, gevolgd door vijf milliliter methanol, en gooit u de eluenten weg. Elueer vervolgens de analyten met vijf milliliter methanol met 0,5% ammoniakwater.

Filter het eluent door een membraanfilter van 0,22 micron om te analyseren met UPLC-MS/MS. Om monsterreiniging uit te voeren met behulp van adsorbens, bereidt u een centrifugebuis van 10 milliliter voor met het adsorberende GCB, PSA en C18 in verhouding 10 tot 20 tot 15 milligram. Voeg vervolgens twee milliliter van het supernatant toe dat na de monsterbehandeling is verkregen.

Draai vervolgens het monster en het adsorberende mengsel gedurende één minuut en centrifugeer gedurende acht minuten bij 9.390 G bij kamertemperatuur. Filter een milliliter van het resulterende supernatant door een membraanfilter van 0,22 micron in een monsterflacon voordat u het analyseert met UPLC-MS / MS. In de studie werd een hoger percentage herstel van 15 pyrrolizidine-alkaloïden uit verse theebladeren, gedroogde theemonsters en wiet verkregen met behulp van de adsorberende zuiveringstechniek in vergelijking met de SPE-patroonmethode.

De terugwinningen van de alkaloïden in de bodem met behulp van adsorberende zuivering waren 79 tot 111%In de verse theebladeren verzameld van de vijf bemonsteringsplaatsen, werd een hoger gehalte aan intermedine N-oxide gedetecteerd dan senecionine. Senecionine werd niet gedetecteerd in volwassen bladeren van bemonsteringsplaatsen één en twee. Van de 11 pyrrolizidine-alkaloïden werd alleen intermedine N-oxide in de bodem gedetecteerd, terwijl senecionine en intermedine N-oxide in verschillende delen van de theeplanten werden gedetecteerd.

Bovendien bleek het gehalte aan het Intermedine N-oxide in één knop met twee bladeren het hoogst te zijn. Terwijl u dit eerst probeert, is het belangrijkste om 0,1 milliliter 0,1 mol per liter trinatriumcitraatoplossing toe te voegen om de pH van uw bodem aan te passen aan 6,0. Deze methode kan worden toegepast op de analyse van alkaloïden in andere eetbare planten, en het biedt ook een natuurlijke techniek voor het verkennen van de bron van alkaloïden in hen.