Name: Het volgen van bispecifieke antilichaam-geïnduceerde T-celhandel met behulp van luciferase-getransduceerde menselijke T-cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T12:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Leer hoe u menselijke T-cellen transduceert met luciferase voor in vivo tracking naar tumoren. Deze methode evalueert de anti-tumorwerking van bispecifieke antilichamen zonder dieren te hoeven offeren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen Dr. Vladimir Ponomarev bedanken voor het delen van de luciferase-constructies die worden gebruikt in de experimenten die worden beschreven in de sectie representatieve resultaten van dit artikel.

De volgende procedures zijn geëvalueerd en goedgekeurd door memorial Sloan Kettering's Institutional Animal Care and Use Committee.
1. Transfectie van 293T-cellen met luciferase en oogst van viraal supernatant
<ol><li>Kweek van 293T cellen<ol><li>Bereid media door het volgende toe te voegen aan een liter DMEM elk: 110 ml warmte-geïnactiveerd foetaal runderserum (FBS), 11 ml penicilline-streptomycine.</li>
		<li>Ontdooi 5 x 106 293T cellen en breng ze over in een T175-kolf met de media voorbereid zoals hierboven beschreven.</li>
		<li>Splits de 293T cellen 1:10 om de 3 dagen gedurende 6 dagen. Laat de cellen niet meer dan 90% confluent worden.</li>
	</ol></li>
	<li>Transfectie van 293T cellen OPMERKING: De volgende hoeveelheden reagentia worden berekend voor het transfecteren van één T175-kolf van 293T-cellen. Stel dienovereenkomstig in als er meer kolven moeten worden overgebracht.<ol><li>Breng 1,5 ml media over naar elk van de twee buizen van 50 ml met behulp van een pipet. Voeg aan één buis 10 μg VSV-G-plasmide, 20 μg Gag/pol en 20 μg klikkever rode TD-tomaat (CBR-TDR) luciferaseplasmide toe en meng. Voeg aan de andere buis 100 μL DNA in vitro transfectiereagens toe en meng. Incubeer beide buizen bij kamertemperatuur (RT) gedurende 5 minuten. OPMERKING: Alle plasmiden die in dit manuscript worden beschreven, werden geleverd door Dr. Vladimir Ponomarev.</li>
		<li>Breng de media die het DNA in vitro transfectiereagens bevatten druppelsgewijs over naar de buis met de DNA-plasmiden (meer dan ongeveer 30 s) en meng voorzichtig met een pipet. Incubeer bij RT gedurende 20 min.</li>
		<li>Maak tijdens deze incubatie van 20 minuten de 293T-cellen los door 5-10 ml 0,05% trypsine toe te voegen. Zodra de cellen zijn losgemaakt, voegt u 10 ml media toe en centrifugeert u gedurende 5 minuten op 800 x g . Resuspendeer de cellen in 1,5 ml media.</li>
		<li>Voeg de media met het DNA in vitro transfectiereagens en de DNA-plasmiden toe aan de 293T-cellen en incubeer gedurende 30 minuten bij 37 °C.</li>
		<li>Breng over in een T175-kolf en voeg 18 ml media toe. Incubeer 's nachts bij 37 °C.</li>
		<li>Zuig de media de volgende dag voorzichtig op met een glazen pipet zonder de cellen los te maken. Vervang door 18 ml verse media. Incubeer bij 37 °C gedurende een nacht in een couveuse.</li>
	</ol></li>
	<li>Oogsten van viraal supernatant<ol><li>Verwijder het virale supernatant met behulp van een pipet op ijs. Centrifugeer op 800 x g gedurende 5 minuten om de cellen en het puin te pelleteren. OPMERKING: Als de celkorrel groot is, zijn de cellen waarschijnlijk verstoord door de kolf toen het supernatant werd verwijderd. Deze cellen kunnen opnieuw worden verguld in een nieuwe kolf met verse media.</li>
		<li>Filter het virale supernatant met een filter van 0,22 μm.</li>
		<li>Gebruik het virale supernatant onmiddellijk. Bewaar het op ijs of bij 4 °C gedurende maximaal 24 uur, of vries het in bij -80 ° C voor langdurige opslag.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Uitbreiding en transductie van geactiveerde menselijke T-cellen met luciferase
<ol><li>Activering van menselijke T-cellen in vitro
	<ol><li>Was de kralen door 10 ml fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) met 0,1% runderserumalbumine (BSA) en 2 mM ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) toe te voegen aan een steriele buis van 15 ml, kralen toe te voegen (één kraal per twee T-cellen), gedurende 2 minuten in een magneetrek te plaatsen en de PBS eruit te zuigen.</li>
		<li>Bereid media voor zoals beschreven in stap 1.1.1, voeg vervolgens IL-2 toe tot een eindconcentratie van 30 IE/ml en voeg de gewassen kralen toe. Maak 2,5 ml media voor elke twee miljoen T-cellen die moeten worden geactiveerd.</li>
		<li>Tel de T-cellen (vers gezuiverd of eerder gezuiverd, bevroren, ontdooid en gewassen) met behulp van een hemocytometer en trypanblauwe vlek. Voeg T-cellen toe aan de media die in stap 2.1.2 zijn voorbereid en keer de buis voorzichtig om om te mengen. De T-cellen zullen minstens 20x uitzetten, afhankelijk van de bron en de algemene gezondheid van de cellen. Bepaal het aantal te activeren T-cellen door het aantal te berekenen dat nodig is om de muizen te behandelen en te delen door 20. Hier werden 20 x 106 T-cellen per muis gebruikt op basis van voorbereidende experimenten.</li>
		<li>Plaat 2,5 ml media met twee miljoen T-cellen, kralen en IL-2 in elke put van een 24-well weefselkweekplaat. Kweek bij 37 °C in een bevochtigde 5% CO 2-incubator.</li>
		<li>Onderzoek de T-cellen elke dag onder een 20x microscoop gedurende de komende 3 dagen om te bepalen wanneer te transduceren met luciferase. De cellen zijn klaar wanneer ze samenklonteren en de media uitputten, waardoor deze van rood / roze naar lichtoranje verandert.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereiding van retronectineplaten OPMERKING: Retronectine wordt gebruikt om de platen te coaten die bij de transductie worden gebruikt, omdat het de gentransductieverbetert 15.<ol><li>Voeg 2 ml 20 μg/ml retronectine in PBS toe aan een putje van een onbehandelde 6-well-plaat. Incubeer gedurende 2 uur bij RT of 1 uur bij 37 °C. Eén met retronectine gecoate put is nodig voor elke twee miljoen T-cellen die moeten worden getransduceerd.</li>
		<li>Zuig de retronectine aan zonder de bodem van de plaat te krassen.</li>
		<li>Voeg 3 ml 2% BSA in PBS (steriel gefilterd) per put toe in de 6-putplaat. Incubeer gedurende 30 minuten bij RT.</li>
	</ol></li>
	<li>Spinoculatie<ol><li>Zuig de BSA aan zonder krassen op de bodem van de plaat.</li>
		<li>Was de putjes één keer met 3 ml PBS per put. Ga door of vervang door verse PBS en laat de plaat een nacht afgedekt bij 4 °C.</li>
		<li>Voeg 2 ml CBR-TDR luciferase viraal supernatant (verzameld in stap 1.3) per putje toe.</li>
		<li>Centrifugeer bij 1.240 x g gedurende 90 minuten bij 32 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Transductie<ol><li>Tel de T-cellen.</li>
		<li>Zuig het virale supernatant op zonder de bodem van de plaat te krassen.</li>
		<li>Plaat twee miljoen T-cellen per put in 6 ml Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) met 30 IE/ml humaan IL-2.</li>
		<li>Onderzoek de T-cellen dagelijks. De T-cellen zijn klaar om te worden uitgebreid wanneer ze bijna samenvloeien, meestal na 2 dagen.</li>
		<li>Wanneer de cellen bijna samenvloeien, spoelt u ze voorzichtig van de bodem van de plaat met behulp van een pipet en brengt u elk putje over in een aparte T75-kolf. Voeg 9 ml media toe voor een totaal van 15 ml media per kolf.</li>
		<li>Voeg de volgende dag nog eens 15 ml media toe. De cellen moeten klaar zijn om de dag na deze toevoeging van media in muizen te injecteren. Bevestig succesvolle transductie door flowcytometrie uit te voeren (het luciferaseconstruct bevat een TD-tomatenfluorofoor die zichtbaar is in het PE-kanaal)16.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Engraftment van luciferase-getransduceerde T-cellen in immuungecompromitteerde muizen
<ol><li>Bereid en tel de T-cellen voor injectie.<ol><li>Verwijder de T-cellen uit de kolven en tel. De cellen zijn klaar om te injecteren wanneer ze 20x-30x zijn uitgebreid, meestal op dag 7 na activering.</li>
		<li>Centrifugeer de T-cellen op 800 x g gedurende 5 minuten. Resuspendie in 2 ml media en verwijder de kralen met behulp van een magneetrek.</li>
		<li>Voor experimenten waarbij T-cellen afzonderlijk van bispecifieke antilichamen worden geïnjecteerd, telt u de T-cellen en resuspenseert u zodat de uiteindelijke concentratie 20 miljoen T-cellen per 100 μL media is. Ga verder met stap 3.2. Ga voor experimenten met ex vivo gewapende T-cellen (EAT's) verder met stap 3.1.4.</li>
		<li>Voor experimenten met ex vivo gewapende T-cellen, tel de T-cellen en scheid ze in individuele buizen van 1,5 ml voor elke groep, met 20 miljoen cellen per muis. Als er bijvoorbeeld drie groepen van elk vijf muizen zijn, bereid dan drie buizen van 1,5 ml voor met elk 100 miljoen T-cellen.</li>
		<li>Centrifugeer de buizen van 1,5 ml gedurende 5 minuten op 800 x g . Verwijder de media voorzichtig zonder de T-celkorrel te verstoren. Resuspendie in niet meer dan 50 μl media die de bispecifieke antilichamen bevatten. Incubeer bij RT gedurende 30 min. OPMERKING: Voor de experimenten die in deze studie werden uitgevoerd, werden gepatenteerde IgG-[L]-scFv T-cel-engaging bispecifieke antilichamen gebruikt die in het laboratorium werden gegenereerd. Gebruik voor T-celarm 5 μg antilichaam per 20 x 106 T-cellen. In de handel verkrijgbare bispecifieke antilichamen kunnen ook worden gebruikt.</li>
		<li>Spoel overtollige antilichamen weg door 1.450 μL media aan elke buis toe te voegen. Centrifugeer gedurende 5 minuten op 800 x g , zuig de media voorzichtig op en resuspensie bij een concentratie van 20 miljoen bewapende T-cellen per 100 μL media.</li>
	</ol></li>
	<li>Injectie en transplantatie in muizen<ol><li>Verdoof de muizen in een kamer die 3,5% (v/v) geïnhaleerd isofluraan levert in 1 L/min zuurstof. De muizen worden volledig verdoofd wanneer de terugtrekkingsreflex van het achterpootpedaal is verdwenen. OPMERKING: Zorg voor thermische ondersteuning tijdens de hele procedure.</li>
		<li>Injecteer met een naald van 26 G 20 miljoen T-cellen in 100 μL media retroorbitaal per muis.</li>
		<li>Dien 1.000 U recombinant IL-2 subcutaan toe om de overleving van T-cellen in vivo te ondersteunen.</li>
		<li>Dien de bispecifieke antilichamen retroorbitaal (in het oog dat niet wordt gebruikt voor T-celinjectie) of intraperitoneaal toe. Laat de muizen herstellen van anesthesie en terugkeren naar hun kooien. OPMERKING: Nogmaals, hier werden gepatenteerde antilichamen gebruikt die in het laboratorium werden gegenereerd, maar in plaats daarvan konden commercieel beschikbare antilichamen worden gebruikt. In de experimenten hier werd 0,3-10 μg antilichaam per muis per dosis toegediend. De antilichamen werden twee keer per week toegediend gedurende 3-4 weken.</li>
	</ol></li>
</ol>4. In vivo beeldvorming van muizen geënt met luciferase-getransduceerde T-cellen
OPMERKING: Deze stap moet worden uitgevoerd op de dag van beeldvorming, wat niet noodzakelijkerwijs dezelfde dag is dat de T-cellen en / of antilichamen aan de muizen worden toegediend. Doorgaans voeren we beeldvorming uit 24 uur na toediening van de luciferase-getransduceerde T-cellen.
<ol><li>Bereiding van D-luciferine<ol><li>Los 1 g D-luciferine op in 33,3 ml steriele PBS (eindconcentratie: 30 mg/ml).</li>
		<li>Aliquoteer het opgeloste D-luciferine in 33 x 1,5 ml microcentrifugebuizen en houd de buisjes op -20 °C.</li>
		<li>Ontdooi op de dag van de beeldvorming voldoende aliquots van 30 mg/ml D-luciferine om het aantal dieren in beeld te brengen. Eén buis is genoeg voor 10 dieren. OPMERKING: Vries de resterende D-luciferine na gebruik opnieuw in. D-luciferine is stabiel gedurende ten minste vijf vries-/dooicycli.</li>
	</ol></li>
	<li>Toediening van D-luciferine aan muizen OPMERKING: Voordat u D-luciferine aan de muizen toedient, opent u de beeldvormingssoftware en initialiseert u het systeem. Het kan enkele minuten duren voordat de camera is afgekoeld, en dit moet worden gedaan voordat de muizen worden geïnjecteerd met D-luciferine om ervoor te zorgen dat beeldvorming 5 minuten na toediening van het substraat kan plaatsvinden.<ol><li>Verdoof maximaal vijf muizen in een kamer die 3,5% (v/v) geïnhaleerd isofluraan levert in 1 l/min zuurstof. De muizen worden volledig verdoofd wanneer de terugtrekkingsreflex van het achterpootpedaal is verdwenen.</li>
		<li>Zodra de muizen volledig zijn verdoofd, dient u 100 μL 30 mg / ml D-luciferine per muis (3 mg per muis) toe via retroorbitale injectie met een naald van 26 G. Stel je deze groep muizen voor voordat je D-luciferine toedient aan de volgende groep. Plaats de volgende groep muizen in de isofluraankamer om te worden verdoofd terwijl de vorige groep wordt afgebeeld.</li>
	</ol></li>
	<li>Beeldvorming van luciferase-getransduceerde T-cellen<ol><li>Verplaats de verdoofde muizen naar de lichtdichte kamer van de imager en blijf 3% isofluraan toedienen bij 0,5 l/min. Plaats de muizen op hun zijkanten zodanig dat de flank met de xenograft naar boven is gericht naar de camera. Maak een andere reeks afbeeldingen met de muizen in rugligging om de aanwezigheid van T-cellen in de longen te evalueren.</li>
		<li>Selecteer in het configuratiescherm voor acquisitie de optie Luminescent, Photo en Overlay. Stel de belichtingstijd in op automatisch, de binning op gemiddeld en F/Stop op 1. Verkrijg afbeeldingen. Stel na de eerste afbeelding de belichtingstijd zo in dat deze overeenkomt met de tijd die automatisch is berekend voor de eerste afbeelding, zodat volgende afbeeldingen rechtstreeks kunnen worden vergeleken. Het kan handig zijn om beelden met meerdere belichtingstijden vast te leggen om de optimale belichtingstijd te bepalen voor het bereiken van het helderste signaal zonder pixelverzadiging.</li>
		<li>Verwijder de muizen uit isofluraan, keer terug naar hun kooien en observeer totdat ze wakker en ambulant zijn.</li>
		<li>Herhaal de stappen uit stap 4.2.1 totdat alle groepen zijn afgebeeld.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Gökbuget, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blinatumomab+for+minimal+residual+disease+in+adults+with+B-cell+precursor+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Blinatumomab for minimal residual disease in adults with B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 131 (14), 1522-1531 (2018).</li>
<li>Runcie, K., Budman, D. R., John, V., Seetharamu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bi-specific+and+tri-specific+antibodies-+the+next+big+thing+in+solid+tumor+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bi-specific and tri-specific antibodies- the next big thing in solid tumor therapeutics.</a> Molecular Medicine. 24 (1), 50(2018).</li>
<li>Dreier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+Cell+costimulus-independent+and+very+efficacious+inhibition+of+tumor+growth+in+mice+bearing+subcutaneous+or+leukemic+human+B+cell+lymphoma+xenografts+by+a+CD19-%2FCD3-+Bispecific+single-chain+antibody+construct%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">T Cell costimulus-independent and very efficacious inhibition of tumor growth in mice bearing subcutaneous or leukemic human B cell lymphoma xenografts by a CD19-/CD3- Bispecific single-chain antibody construct.</a> The Journal of Immunology. 170 (8), 4397-4402 (2003).</li>
<li>Offner, S., Hofmeister, R., Romaniuk, A., Kufer, P., Baeuerle, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+regular+cytolytic+T+cell+synapses+by+bispecific+single-chain+antibody+constructs+on+MHC+class+I-negative+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Induction of regular cytolytic T cell synapses by bispecific single-chain antibody constructs on MHC class I-negative tumor cells.</a> Molecular Immunology. 43 (6), 763-771 (2006).</li>
<li>Santich, B. H., Cheung, N. V., Klein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+Bispecific+antibodies+for+T-cell+based+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Editorial: Bispecific antibodies for T-cell based immunotherapy.</a> Frontiers in Oncology. 10, 628005(2020).</li>
<li>Santich, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interdomain+spacing+and+spatial+configuration+drive+the+potency+of+IgG-%5BL%5D-scFv+T+cell+bispecific+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Interdomain spacing and spatial configuration drive the potency of IgG-[L]-scFv T cell bispecific antibodies.</a> Science Translational Medicine. 12 (534), eaax1315(2020).</li>
<li>Wang, L., Hoseini, S. S., Xu, H., Ponomarev, V., Cheung, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+Fc+domains+in+T+cell-engaging+bispecific+antibodies+improves+T-cell+trafficking+and+antitumor+potency%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Silencing Fc domains in T cell-engaging bispecific antibodies improves T-cell trafficking and antitumor potency.</a> Cancer Immunology Research. 7 (12), 2013-2024 (2019).</li>
<li>Park, J. A., Cheung, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GD2+or+HER2+targeting+T+cell+engaging+bispecific+antibodies+to+treat+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">GD2 or HER2 targeting T cell engaging bispecific antibodies to treat osteosarcoma.</a> Journal of Hematology & Oncology. 13 (1), 172(2020).</li>
<li>Wu, Z., Guo, H. F., Xu, H., Cheung, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+tetravalent+anti-GPA33%2Fanti-CD3+bispecific+antibody+for+colorectal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Development of a tetravalent anti-GPA33/anti-CD3 bispecific antibody for colorectal cancers.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 17 (10), 2164-2175 (2018).</li>
<li>Lin, T. Y., Park, J. A., Long, A., Guo, H. F., Cheung, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+potent+anti-STEAP1+bispecific+antibody+to+redirect+T+cells+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+Immunotherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Novel potent anti-STEAP1 bispecific antibody to redirect T cells for cancer immunotherapy.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (9), e003114(2021).</li>
<li>Hoseini, S. S., Espinosa-Cotton, M., Guo, H. F., Cheung, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+leukemia+heterogeneity+by+combining+T+cell+engaging+bispecific+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+Immunotherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Overcoming leukemia heterogeneity by combining T cell engaging bispecific antibodies.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (2), e001626(2020).</li>
<li>Hoseini, S. S., Guo, H., Wu, Z., Hatano, M. N., Cheung, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+potent+tetravalent+T-cell-engaging+bispecific+antibody+against+CD33+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">A potent tetravalent T-cell-engaging bispecific antibody against CD33 in acute myeloid leukemia.</a> Blood Advances. 2 (11), 1250-1258 (2018).</li>
<li>Hoseini, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+engaging+bispecific+antibodies+targeting+CD33+IgV+and+IgC+domains+for+the+treatment+of+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+Immunotherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">T cell engaging bispecific antibodies targeting CD33 IgV and IgC domains for the treatment of acute myeloid leukemia.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (5), e002509(2021).</li>
<li>Li, H., Er Saw, P., Song, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+strategies+for+next-generation+bispecific+antibody-based+antitumor+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Challenges and strategies for next-generation bispecific antibody-based antitumor therapeutics.</a> Cellular and Molecular Immunology. 17 (5), 451-461 (2020).</li>
<li>Rajabzadeh, A., Hamidieh, A. A., Rahbarizadeh, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinoculation+and+retronectin+highly+enhance+the+gene+transduction+efficiency+of+Mucin-1-specific+chimeric+antigen+receptor+%28CAR%29+in+human+primary+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Molecular+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Spinoculation and retronectin highly enhance the gene transduction efficiency of Mucin-1-specific chimeric antigen receptor (CAR) in human primary T cells.</a> BMC Molecular and Cell Biology. 22 (1), 57(2021).</li>
<li>Kleeman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+choosing+fluorescent+protein+combinations+for+flow+cytometric+analysis+based+on+spectral+overlap%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">A guide to choosing fluorescent protein combinations for flow cytometric analysis based on spectral overlap.</a> Cytometry Part A. 93 (5), 556-562 (2018).</li>
<li>Park, J. A., Santich, B. H., Xu, H., Lum, L. G., Cheung, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+ex+vivo+armed+T+cells+using+recombinant+bispecific+antibodies+for+adoptive+immunotherapy+with+reduced+cytokine+release%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+Immunotherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Potent ex vivo armed T cells using recombinant bispecific antibodies for adoptive immunotherapy with reduced cytokine release.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 9 (5), e002222(2021).</li>
<li>Park, J. A., Wang, L., Cheung, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulating+tumor+infiltrating+myeloid+cells+to+enhance+bispecific+antibody-driven+T+cell+infiltration+and+anti-tumor+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">Modulating tumor infiltrating myeloid cells to enhance bispecific antibody-driven T cell infiltration and anti-tumor response.</a> Journal of Hematology & Oncology. 14 (1), 142(2021).</li>
<li>Ströhlein, M. A., Heiss, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trifunctional+antibody+catumaxomab+in+treatment+of+malignant+ascites+and+peritoneal+carcinomatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">The trifunctional antibody catumaxomab in treatment of malignant ascites and peritoneal carcinomatosis.</a> Future Oncology. 6 (9), 1387-1394 (2010).</li>
<li>Rabinovich, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+fewer+than+10+mouse+T+cells+with+an+enhanced+firefly+luciferase+in+immunocompetent+mouse+models+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Visualizing fewer than 10 mouse T cells with an enhanced firefly luciferase in immunocompetent mouse models of cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (38), 14342-14346 (2008).</li>
<li>Skovgard, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+CAR+T-cell+kinetics+in+solid+tumors%3A+Translational+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+Oncolytics%22%5BJournal%5D)">Imaging CAR T-cell kinetics in solid tumors: Translational implications.</a> Molecular Therapy Oncolytics. 22, 355-367 (2021).</li>
</ol>

NKC meldt commerciële onderzoekssubsidies te ontvangen van Y-mAbs Therapeutics. NKC is de uitvinder en eigenaar van uitgegeven patenten die door MSK in licentie zijn gegeven aan Y-mAbs Therapeutics, Biotec Pharmacon/Lallemand en Abpro-labs. MSK en NKC hebben financieel belang in Y-mAbs. NKC meldt aandelenopties te ontvangen van Eureka Therapeutics. HFG en MEC hebben geen relevante openbaarmakingen.

Hoewel de T-BsAb blinatumomab is goedgekeurd voor CD19-positieve hematologische maligniteiten, is de succesvolle implementatie van T-BsAbs in solide tumoren veel moeilijker gebleken. Catumaxomab, een T-BsAb gericht tegen epitheliale celadhesiemolecuul (EPCAM), werd goedgekeurd voor de behandeling van kwaadaardige ascites bij patiënten met eierstokkanker, maar de productie van het geneesmiddel werd vervolgens om commerciële redenen stopgezet19. Er zijn geen andere T-BsAbs goedgekeurd voor solide tu...

T-cel-engaging bispecifieke antilichamen (T-BsAbs) zijn gemanipuleerde antilichamen die worden gebruikt om kunstmatige specificiteit te bieden aan polyklonale T-cellen door T-cellen aan te spreken via de ene bindingsarm en een tumorantigeen via een andere bindingsarm. Deze technologie is met succes toegepast op hematologische kankers (CD19-targeting blinatumomab1), en talrijke T-BsAbs zijn in preklinische en klinische ontwikkeling voor een verscheidenheid aan solide tumoren en2. T-BsAbs betrekken polyklonale T-cellen op een belangrijke histocompatibiliteitscomplex (MHC) -onafhankelijke manier, en daarom zijn zelfs tumoren die menselijke leukocytenantigenen (HLA's) downreguleren vatbaar voor dit type therapie 3,4. T-BsAbs zijn ontwikkeld in tientallen verschillende formaten, met verschillen in de valentie en ruimtelijke rangschikking van de T-cel en tumorbindende armen, interdomeinafstanden en de opname van een Fc-domein, dat de halfwaardetijd beïnvloedt en effectorfuncties kan induceren indien aanwezig5. Eerder werk in ons laboratorium heeft aangetoond dat deze factoren de anti-tumor werkzaamheid van T-BsAbs aanzienlijk beïnvloeden, met tot 1.000-voudige verschillen in potentie6. Door dit werk hebben we het IgG-[L]-scFv-formaat geïdentificeerd als het ideale platform voor T-BsAbs (zie de sectie Representatieve resultaten voor meer informatie over T-BsAb-formaten) en hebben we dit platform toegepast op doelen zoals GD2 (neuroblastoom), HER2 (borstkanker en osteosarcoom), GPA33 (colorectale kanker), STEAP1 (Ewing-sarcoom), CD19 (B-cel maligniteiten) en CD33 (B-cel maligniteiten)7, 8,9,10,11,12,13.
Een van de grootste uitdagingen voor het succesvol implementeren van T-BsAb-therapie in solide tumoren is het overwinnen van een immunosuppressieve tumormicro-omgeving (TME) om T-celhandel naar tumoren te drijven14. De hierboven beschreven factoren die de werkzaamheid van T-BsAb beïnvloeden, hebben een significante invloed op het vermogen van T-BsAbs om effectief T-cel homing aan tumoren te induceren, maar dit effect is moeilijk te evalueren in een in vivo systeem in realtime. Dit manuscript geeft een gedetailleerde beschrijving van het gebruik van luciferase-getransduceerde T-cellen in preklinische studies van T-BsAbs om T-celhandel naar verschillende weefsels in experimentele immuungecompromitteerde muismodellen tijdens de behandeling te evalueren. Het algemene doel van deze methode is om een middel te bieden om T-celinfiltratie in tumoren en andere weefsels te evalueren, evenals real-time inzicht in T-cel homing kinetiek en persistentie, zonder de noodzaak om dieren op te offeren tijdens de behandeling. Voor het toenemende aantal onderzoekers dat zich richt op cellulaire immunotherapieën, is het vermogen om T-cellen in vivo te volgen in preklinische diermodellen cruciaal. We streven ernaar een grondige, gedetailleerde beschrijving te geven van de methode die we hebben gebruikt voor het volgen van luciferase-getransduceerde T-cellen om andere onderzoekers in staat te stellen deze techniek gemakkelijk te repliceren.

<table><tbody><tr><td>293T cellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7030-10G</td><td></td></tr><tr><td>CD3/CD28 kralen</td><td>Gibco (ThermoFisher)</td><td>11161D</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferine, Kaliumzout</td><td>Goldbio</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco (ThermoFisher)</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>DNA in vitro transfectie reagens (polyjet)</td><td>SignaGen Laboratories</td><td>SL100688</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9884-100G</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco (ThermoFisher)</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Gag/pol plasmid</td><td>Addgene</td><td>14887</td><td></td></tr><tr><td>GFP plasmid</td><td>Addgene</td><td>11150-DNA.cg</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-Streptomycine</td><td>Gibco (ThermoFisher)</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant humaan IL-2</td><td>R&D Systems</td><td>202-IL-010/CF</td><td></td></tr><tr><td>Retronectin</td><td>Takara</td><td>T100B</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Gibco (ThermoFisher)</td><td>25-300-120</td><td></td></tr><tr><td>VSV-G plasmid</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td></td></tr></tbody></table>

het volgen van bispecifieke antilichaam-geïnduceerde t-celhandel met behulp van luciferase-getransduceerde menselijke t-cellen

Tracking Bispecific Antibody-Induced T Cell Trafficking Using Luciferase-Transduced Human T Cells

T-cel-engaging bispecifieke antilichamen (T-BsAbs) bevinden zich in verschillende stadia van preklinische ontwikkeling en klinische testen voor solide tumoren. Factoren zoals valentie, ruimtelijke ordening, interdomeinafstand en Fc-mutaties beïnvloeden de anti-tumor werkzaamheid van deze therapieën, meestal door de homing van T-cellen naar tumoren te beïnvloeden, wat een grote uitdaging blijft. Hier beschrijven we een methode om geactiveerde menselijke T-cellen te transduceren met luciferase, waardoor in vivo tracking van T-cellen tijdens T-BsAb-therapiestudies mogelijk is. Het vermogen van T-BsAbs om T-cellen om te leiden naar tumoren kan kwantitatief worden geëvalueerd op meerdere tijdstippen tijdens de behandeling, waardoor onderzoekers de anti-tumor werkzaamheid van T-BsAbs en andere interventies kunnen correleren met de persistentie van T-cellen in tumoren. Deze methode verlicht de noodzaak om dieren tijdens de behandeling op te offeren om T-celinfiltratie histologisch te beoordelen en kan op meerdere tijdstippen worden herhaald om de kinetiek van T-celhandel tijdens en na de behandeling te bepalen.

Zoals beschreven in stap 4.3, kunnen muizen tijdens de beeldvorming in verschillende posities worden georiënteerd om de aanwezigheid van T-cellen in verschillende weefsels te evalueren. Liggende positionering maakt de beoordeling van T-cellen in de longen mogelijk, wat gebruikelijk is op vroege tijdstippen na injectie. Laterale positionering met de subcutane xenograft naar boven gericht wordt gebruikt om de handel van T-cellen naar de tumor het beste te beoordelen. Vrouwelijke C.Cg-Rag2 tm1Fwa Il2rgtm1Sug<...

Hier beschrijven we een methode voor het transduceren van menselijke T-cellen met luciferase om in vivo tracking van bispecifieke antilichaam-geïnduceerde T-celhandel naar tumoren in studies te vergemakkelijken om de anti-tumor werkzaamheid en het mechanisme van T-cel-engaging bispecifieke antilichamen te evalueren.

Het volgen van bispecifieke antilichaam-geïnduceerde T-celhandel met behulp van luciferase-getransduceerde menselijke T-cellen

T cell-engaging bispecific antibodies (T-BsAbs) are in various stages of preclinical development and clinical testing for solid tumors. Factors such as ...

Met deze methode kunnen gebruikers eenvoudig T-cellen in vivo volgen om de kinetiek van homing te evalueren en de persistentie van T-cellen te controleren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het op meerdere tijdstippen op hetzelfde dier kan worden herhaald zonder dat er offers nodig zijn in flowcytometrie of immunohistochemie. Deze techniek kan ook worden aangepast voor het volgen van andere soorten immuuncellen.Om 293T-cellen te kweken, bereidt u een liter DMEM voor door 110 milliliter warmte-geïnactiveerd foetaal runderserum en 11 milliliter penicilline-streptomycine toe te voegen. Ontdooi vijf maal 10 tot de zesde 293T-cellen en breng ze over in een T175-kolf met DMEM. Splits de cellen één tot 10 om de drie dagen gedurende zes dagen voordat de cellen meer dan 90% confluent worden.Breng voor transfectie 1,5 milliliter media over naar twee buizen van 50 milliliter met behulp van een pipet. Voeg aan één buis 10 microgram VSVG-plasmide, 20 microgram gag pol en 20 microgram klikkever rode TDtomato of CBRTDR luciferaseplasmide toe en meng. Voeg 100 microliter DNA in vitro transfectiereagens toe aan een andere buis en meng.Incubeer beide buizen bij kamertemperatuur gedurende vijf minuten. Breng de media die het DNA in vitro transfectiereagens bevatten druppelsgewijs over naar de buis met de DNA-plasmiden en meng voorzichtig met een pipet. Incubeer gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur.Maak tijdens de incubatie de 293T-cellen los door vijf tot 10 milliliter 0,05% trypsine toe te voegen. Zodra de cellen zijn losgemaakt, voegt u 10 milliliter media toe en centrifugeert u gedurende vijf minuten op 800 G. Resuspendeer de cellen in 1,5 milliliter media.Voeg de media met het DNA in vitro transfectiereagens en de DNA-plasmiden toe aan de 293T-cellen en incubeer gedurende 30 minuten bij 37 graden Celsius. Breng na incubatie de suspensie over in een T175-kolf. Voeg 18 milliliter media toe en incubeer 's nachts bij 37 graden Celsius.Zuig de media de volgende dag voorzichtig op met een glazen pipet zonder de cellen los te maken en vervang deze door 18 milliliter verse media. Nogmaals, incubeer 's nachts bij 37 graden Celsius. Verwijder de volgende dag het virale supernatant met behulp van een pipet op ijs en centrifugeer gedurende vijf minuten op 800 G om de cellen en het puin te pelleteren.Filter het virale supernatant met een filter van 0,22 micron en plaats het onmiddellijk op ijs. Voeg voor in vitro activering van menselijke T-cellen 10 milliliter PBS met 0,1% runderserumalbumine of BSA en twee millimolaire EDTA toe aan een steriele buis van 15 milliliter. Voeg vervolgens om de kralen te wassen kralen toe aan een buis en plaats de buis in een magnetisch rek.Verwijder na twee minuten de PBS uit de buis. Voeg na het bereiden van DMEM gewassen kralen en interleukine-2 of IL-2 toe aan een uiteindelijke concentratie van 30 internationale eenheden per milliliter. Tel de T-cellen met behulp van een hemocytometer en Trypan-blauwe vlek.Voeg na het tellen het gewenste aantal T-cellen toe aan de media en keer de buis voorzichtig om om te mengen. Plaat 2,5 milliliter media met twee miljoen T-cellen, kralen en IL-2 in elke put van een 24-well weefselkweekplaat. Kweek bij 37 graden Celsius in bevochtigd 5% koolstofdioxide.Onderzoek de T-cellen onder een 20X-doelstelling elke dag gedurende drie dagen om te bepalen wanneer te transduceren met luciferase. Voeg vervolgens, om een RetroNectine-plaat te bereiden, twee milliliter van 20 microgram per milliliter RetroNectin in PBS toe aan een put van een onbehandelde zesputplaat en incubeer gedurende twee uur bij kamertemperatuur. Zuig de RetroNectin aan zonder krassen op de bodem van de plaat en voeg drie milliliter 2% BSA in PBS per put toe aan de plaat met zes putjes.Incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Vervolgens, voor spinoculatie, zuig de BSA op en was de putjes eenmaal met drie milliliter PBS. Ga door of vervang door verse PBS en laat de plaat een nacht afgedekt bij vier graden Celsius.Voeg de volgende dag twee milliliter CBRTDR luciferase viraal supernatant per put toe en centrifugeer op 1.240 G gedurende 90 minuten bij 32 graden Celsius. Voor transductie, na het tellen van de T-cellen, zuigt u het virale supernatant op en plaatst u twee miljoen T-cellen per put in zes milliliter DMEM met 30 internationale eenheden per milliliter menselijk IL-2. Onderzoek de T-cellen gedurende twee dagen.Wanneer de cellen bijna samenvloeien, spoelt u ze voorzichtig van de bodem van de plaat met behulp van een pipet en brengt u elk putje over in een aparte T75-kolf. Voeg negen milliliter media toe voor een totaal volume van 15 milliliter per kolf. Voeg de volgende dag 15 milliliter media toe en bevestig succesvolle transductie door flowcytometrie uit te voeren.Na het verdoven van de muis, met behulp van een naald van 26 gauge, injecteert u 20 miljoen T-cellen retroorbitaal in 100 microliter media. Dien 1.000 eenheden recombinant IL-2 subcutaan toe om de overleving van T-cellen in vivo te ondersteunen. Dien vervolgens het bispecifieke antilichaam retroorbitaal of intraperitoneaal toe.Voor in vivo beeldvorming, dien 100 microliter van drie milligram D-luciferine toe door retroorbitale injectie met een naald van 26 gauge in een verdoofde muis. Om beelden vast te leggen, plaatst u de muis in de lichtdichte kamer van de imager, zodat de flank met de xenograft naar boven naar de camera is gericht. Selecteer met behulp van het bedieningspaneel voor acquisitie lichtgevende, foto- en overlay.Stel de belichtingstijd in op automatisch, het binning op medium en f-stop op één en verkrijg afbeeldingen. Stel na de eerste afbeelding de belichtingstijd zo in dat deze overeenkomt met de automatisch berekende belichtingstijd voor de eerste afbeelding, zodat volgende afbeeldingen rechtstreeks kunnen worden vergeleken. Maak een andere reeks afbeeldingen met de muis in rugligging om de aanwezigheid van T-cellen in de longen te evalueren.Gewapende T-cellen smokkelden sneller naar de tumor dan ongewapende T-cellen, waardoor de longen twee dagen eerder werden verlaten. Kwantificering van T-celinfiltratie in tumoren in de loop van de tijd werd gemeten door bioluminescentie en uitgedrukt als totale koppels of uitstraling per pixel geïntegreerd over de tumorcontour. T-celhandel kon gedurende 28 dagen na injectie van de luciferase-getransduceerde T-cellen worden gevolgd, waardoor T-cel homing en persistentie tijdens de behandeling konden worden gevolgd.T-celhandel in HER2-positieve menselijke borstkankerpatiënt-afgeleide xenografts in DKO-muizen wordt getoond. Behandeling met het HER2 bispecifieke antilichaam met een niet-gedempt FC had geen effect op de tumorgroei in vergelijking met een gecontroleerd bispecifiek antilichaam. Daarentegen was behandeling met HER2 bispecifiek antilichaam met N297A-mutatie alleen of in combinatie met een K322A-mutatie in staat om de tumorgroei volledig te stoppen.Voor groepen met de uitschakelingsmutaties bereikte het T-cel luminescentiesignaal een hogere piek op dag drie na de injectie en bleef het op een hoger niveau in vergelijking met het gecontroleerde bispecifieke antilichaam en het niet-gesilenceerde HER2 bispecifieke antilichaam. Muizen met neuroblastoom patiënt-afgeleide xenografts toonden uitputting van Ly6C-positieve macrofagen significant verhoogde T-cel homing aan tumoren, wat resulteerde in verminderde tumorgroei en verlengde overleving. Het effect was meer uitgesproken bij osteosarcoom patiënt-afgeleide xenografts.Onder bispecifieke antilichamen gericht op het tumorantigeen STEAP1 resulteerde het IGGL SCFV-formaat in significant meer T-celinfiltratie op dag zes na de eerste dosis T-cellen die aanhield gedurende de duur van de behandeling. Dergelijke waarnemingen werden niet voorspeld door in vitro cytotoxiciteitstests. Na het volgen van T-cellen in vivo, kunnen gebruikers nog steeds immunohistochemie uitvoeren om specifieker te bepalen waar de T-cellen zich in de tumor of andere normale weefsels bevinden.

tracking-bispecific-antibody-induced-t-cell-trafficking-using

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Murine beenmergtransplantatie is een veel gebruikte techniek om immunologische mechanismen voor graft-versus-host ziekte bij mensen bestuderen. De mogelijkheid om T-cel mensenhandel patronen te...

Inductie van Graft-versus-host ziekte en<em&gt; In Vivo</em&gt; T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel

De compartimentering van eiwitten, hetzij binnen het plasma membraan of in de intracellulaire locaties is een regulerend mechanisme die sterk kunnen beïnvloeden signalering resultaten, vandaar dat te begrijpen signalering is het van belang het bestuderen van de ruimtelijke en temporele gedrag van de betrokken eiwitten. We beschrijven hier een TIRF microscopie gebaseerde systeem om signaaltransductie in T-cellen te bestuderen, maar is breed toepasbaar.

Een TIRF Microscopie Techniek voor Real-time, gelijktijdige beeldvorming van de TCR en de bijbehorende signaaleiwitten

This video demonstrates a method for tracking bispecific antibody-induced T cell trafficking to tumors in a mouse model. Luciferase-transduced effector T cells are injected into a mouse with a subcutaneous tumor cell xenograft. Bispecific antibodies are then introduced, binding to T cells and the tumor cells. The localization of the T cells is tracked using bioluminescent imaging, with the magnitude of the signal indicating the extent of T cell infiltration into the tumor.

An In Vivo Technique to Track Bispecific Antibody-Induced T Cell Trafficking to Tumors

We beschrijven een live-cell imaging methode die inzicht geeft in eiwitdynamica tijdens de T-cel activatie proces. We tonen de totale gebruiksduur van de T-cel verspreiding assay, confocale microscopie en beeldanalyse te geven kwantitatieve resultaten volgen signalering complexvorming in T-cel activatie.

Real-time Live beeldvorming van T-cel signaleringscomplex Vorming

We beschrijven een protocol om de radiale mobiliteit van niet-aderente immuuncellen in vitro te monitoren met behulp van een celsedimentatie manifold/slide apparaat. Celmigratie wordt gevolgd op monolagen van tumorcellen of op extracellulaire matrix-eiwitten. Onderzoek door licht- en fluorescentiemicroscopie maakt observatie van celmobiliteit en cytotoxische functionaliteit mogelijk.

Radial Mobiliteit en cytotoxische functie van retrovirale replicerende vector getransduceerde, niet-klevende Alloresponsive T-lymfocyten

Na de bereiding van een 64 Cu-gemodificeerd monoklonaal antilichaam dat aan een transgene muizen T-celreceptor, T-cellen radiogelabeld in vivo geanalyseerd op levensvatbaarheid functionaliteit labeling stabiliteit en apoptose en adoptief overgebracht in muizen met een luchtweg vertraagde hypersensitiviteit reactie voor niet-invasieve beeldvorming met positron emission tomography / computed tomography (PET / CT).

Muizen-lymfocyt Labeling door<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antibody Receptor targeting voor<em&gt; In Vivo</em&gt; Celverkeer PET / CT

Protocollen voor kwantitatieve beoordeling van lymfocyt chemotaxis en migratie zijn belangrijke hulpmiddelen voor onderzoek van de immunologie. Hier, wordt een in vitro -protocol beschreven dat vergunningen real-time, multiplexed evaluatie van cel migratie, alsmede een complementaire in vivo techniek waardoor tracking van inheemse cellen met milt.

Kwantificeren van menselijke monocyt Chemotaxis In Vitro en lymfkliertest lymfocyt handel In Vivo

Hier presenteren we een protocol voor de productie en de preklinische beproeving van lymfkliertest CD19 auto T-cellen door retrovirale transductie en gebruik als een therapie tegen gevestigde syngeneic A20 B-cel lymfoom in BALB/c muizen met of zonder lymphodepleting Preconditionering.

Een Syngeneic B-cel lymfoom muismodel voor pre-klinische evaluatie van CD19 auto T cellen

Dit protocol beschrijft de methodologie voor het niet-invasief volgen van T-cellen die genetisch gemanipuleerd zijn om chimere antigeenreceptoren in vivo tot expressie te brengen met een klinisch beschikbaar platform.

Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [18F]Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie

Dit protocol biedt een methode voor primaire muizen T-celisolatie en time-lapse-microscopie van T-celmigratie onder specifieke omgevingsomstandigheden met kwantitatieve analyse.

Real-time in-vitromigratietest voor primaire muizen CD8+ T-cellen

We presenteren verbeterde protocollen voor retrovirale transductie van transportreceptoren en competitieve homing om receptor-gemedieerde orgaan- en micro-omgevingsspecifieke lymfocytenpositionering te bestuderen. Deze methode biedt waardevolle inzichten in mechanismen voor het transport van immuuncellen en heeft potentiële toepassingen in toekomstig fundamenteel en therapeutisch onderzoek.

Efficiënte retrovirale transductie en competitieve homing voor het onderzoeken van GPCR-gemedieerde T-cellokalisatie in diverse weefselmicro-omgevingen

Leer hoe u menselijke T-cellen transduceert met luciferase voor in vivo tracking naar tumoren. Deze methode evalueert de anti-tumorwerking van bispecifieke antilichamen zonder dieren te hoeven offeren.

Het volgen van bispecifieke antilichaam-geïnduceerde T-celhandel met behulp van luciferase-getransduceerde menselijke T-cellen

Meer video's verkennen