Name: Methoden voor het bestuderen van baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling in een ovariectomiemodel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-07T12:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Leer hoe je baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling bestudeert in een ovariectomiemodel met muizen. Deze protocollen helpen onderzoekers de hormonale regulatie van de HPG-as begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd mogelijk gemaakt door de Victorian State Government Operational Infrastructure Support en de Australian Government National Health and Medical Research Council (NHMRC) IRIISS. Dit werk werd ondersteund door de Monash University Faculty of Medicine, Nursing and Health Science Platform Access Grant aan A.L.W. (Winship-PAG18-0343) om toegang te krijgen tot het Monash Reproductive Services Platform. A.L.W. wordt ondersteund door DECRA-financiering DE21010037 van de Australian Research Council (ARC). J.N.H. en L.R.A. worden ondersteund door een Australian Government Research Training Program Scholarship. L.R.A. wordt ondersteund door een Monash Graduate Excellence Scholarship. K.J.H. wordt ondersteund door een ARC Future Fellowship FT190100265.

<ol><li>Szamatowicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+reproductive+medicine+-+Possibilities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Ginekologia+Polska%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations.</a> Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).</li>
<li>Evans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertile+ground%3A+Human+endometrial+programming+and+lessons+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Fertile ground: Human endometrial programming and lessons in health and disease.</a> Nature Reviews. Endocrinology. 12 (11), 654-667 (2016).</li>
<li>Norwitz, E. R., Schust, D. J., Fisher, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+and+the+survival+of+early+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Implantation and the survival of early pregnancy.</a> The New England Journal of Medicine. 345 (19), 1400-1408 (2001).</li>
<li>Zinaman, M. J., Clegg, E. D., Brown, C. C., O'Connor, J., Selevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+human+fertility+and+pregnancy+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">Estimates of human fertility and pregnancy loss.</a> Fertility & Sterility. 65 (3), 503-509 (1996).</li>
<li>Kupka, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+Europe%2C+2010%3A+Results+generated+from+European+registers+by+ESHRE%E2%80%A0%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in Europe, 2010: Results generated from European registers by ESHRE†.</a> Human Reproduction. 29 (10), 2099-2113 (2014).</li>
<li>Gleicher, N., Kushnir, V. A., Barad, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+decline+of+IVF+birth+rates+and+its+probable+causes%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Open%22%5BJournal%5D)">Worldwide decline of IVF birth rates and its probable causes.</a> Human Reproduction Open. 2019 (3), (2019).</li>
<li>Diaz-Gimeno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genomic+diagnostic+tool+for+human+endometrial+receptivity+based+on+the+transcriptomic+signature%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature.</a> Fertility & Sterility. 95 (1), 50-60 (2011).</li>
<li>Amin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+outcomes+in+recurrent+implantation+failure+patients+following+endometrial+receptivity+array+with+pre-implantation+genetic+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer outcomes in recurrent implantation failure patients following endometrial receptivity array with pre-implantation genetic testing.</a> Cureus. 14 (6), e26248(2022).</li>
<li>Patel, J. A., Patel, A. J., Banker, J. M., Shah, S. I., Banker, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+helps+in+improving+in+vitro+fertilization%2FICSI+outcomes+in+patients+with+recurrent+implantation+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Human+Reproductive+Sciences%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer helps in improving in vitro fertilization/ICSI outcomes in patients with recurrent implantation failure.</a> Journal of Human Reproductive Sciences. 12 (1), 59-66 (2019).</li>
<li>Khan, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+differences+between+functionalis+and+basalis+endometria+in+women+with+and+without+adenomyosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Obstetrics%2C+Gynecology%2C+and+Reproductive+Biology%22%5BJournal%5D)">Biological differences between functionalis and basalis endometria in women with and without adenomyosis.</a> European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 203, 49-55 (2016).</li>
<li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment%2C+differentiation%2C+and+impact+on+fertility%3A+2017+update%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocrine Reviews. 39 (1), 1-20 (2018).</li>
<li>Corciulo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+administration+for+physiological+estrogen+replacement+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Pulsed administration for physiological estrogen replacement in mice.</a> F1000Research. 10, 809(2021).</li>
<li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li>
<li>Griffiths, M. J., Alesi, L. R., Winship, A. L., Hutt, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+embryo+transfer+model+to+study+uterine+contributions+to+pregnancy+in+vivo+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction+%26+Fertility%22%5BJournal%5D)">Development of an embryo transfer model to study uterine contributions to pregnancy in vivo in mice.</a> Reproduction & Fertility. 3 (1), 10-18 (2022).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+from+a+mouse+model+that+epithelial+cell+migration+and+mesenchymal-epithelial+transition+contribute+to+rapid+restoration+of+uterine+tissue+integrity+during+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evidence from a mouse model that epithelial cell migration and mesenchymal-epithelial transition contribute to rapid restoration of uterine tissue integrity during menstruation.</a> PLoS One. 9 (1), e86378(2014).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgens+regulate+scarless+repair+of+the+endometrial+%26%2334%3Bwound%26%2334%3B+in+a+mouse+model+of+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Androgens regulate scarless repair of the endometrial &#34;wound&#34; in a mouse model of menstruation.</a> FASEB Journal. 30 (8), 2802-2811 (2016).</li>
<li>Fullerton, P. T., Monsivais, D., Kommagani, R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follistatin+is+critical+for+mouse+uterine+receptivity+and+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Follistatin is critical for mouse uterine receptivity and decidualization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), E4772-E4781 (2017).</li>
<li>Rowland, R. R., Reyes, E., Chukwuocha, R., Tokuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticosteroid+and+immune+responses+of+mice+following+mini-osmotic+pump+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Corticosteroid and immune responses of mice following mini-osmotic pump implantation.</a> Immunopharmacology. 20 (3), 187-190 (1990).</li>
<li>Barton, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+steroid+hormones+in+oviductal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Roles of steroid hormones in oviductal function.</a> Reproduction. 159 (3), R125-R137 (2020).</li>
<li>Lee, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+regulates+embryonic+survival+during+delayed+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autophagy regulates embryonic survival during delayed implantation.</a> Endocrinology. 152 (5), 2067-2075 (2011).</li>
<li>Hamatani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+analysis+identifies+molecular+pathways+distinguishing+blastocyst+dormancy+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Global gene expression analysis identifies molecular pathways distinguishing blastocyst dormancy and activation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (28), 10326-10331 (2004).</li>
<li>Cui, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcervical+embryo+transfer+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Transcervical embryo transfer in mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (3), 228-231 (2014).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen concurrerende financiële of andere belangen te hebben.

Dit artikel biedt stapsgewijze instructies voor het uitvoeren van OVX en biedt exogene hormonen voor studies gericht op het begrijpen van de baarmoederbijdragen aan zwangerschap en vruchtbaarheid. Er worden twee gedetailleerde protocollen verstrekt over twee experimentele toepassingen van deze methoden, waaronder het uitvoeren van embryotransfer en het kunstmatig induceren van decidualisatie.
Hoewel het uitvoeren van OVX in eerste instantie een uitdaging kan zijn - vooral voor onderzoekers die...

Met het toenemende gebruik van geassisteerde reproductieve technologieën in de afgelopen decennia, zijn veel barrières voor conceptie overwonnen, waardoor veel paren een gezin kunnen stichten ondanks vruchtbaarheidsproblemen1. Oöcyten- of spermatekorten kunnen vaak worden omzeild met behulp van in-vitrofertilisatie of intracytoplasmatische sperma-injectie ; Problemen met betrekking tot de baarmoeder en endometriumreceptiviteit blijven echter een ongrijpbare "zwarte doos" van voortplantingspotentieel2.
Zwangerschap wordt vastgesteld wanneer een embryo van hoge kwaliteit met succes interageert met een receptief endometrium (baarmoederslijmvlies). De kans op een succesvolle zwangerschap in een bepaalde menstruatiecyclus is laag, rond de 30%3,4. Van degenen die succesvol zijn, gaat slechts 50% -60% verder dan 20 weken zwangerschap, waarbij implantatiefalen verantwoordelijk is voor 75% van de zwangerschappen die 20 weken niet bereiken3. Ondanks deze cijfers die dateren uit de late jaren 1990, moet het veld nog steeds de beperkingen overwinnen die worden veroorzaakt door een onvoldoende ontvankelijk endometrium. Dit heeft geresulteerd in stagnerende - en soms dalende - IVF-slagingspercentages in de afgelopen jaren 5,6.
Vrouwen met onverklaarbare onvruchtbaarheid hebben vaak een verplaatst venster van ontvankelijkheid of zijn om onbekende redenen niet in staat om ontvankelijkheid te bereiken. Onlangs is de endometriumreceptiviteitsarray ontwikkeld, die de expressie van honderden genen beoordeelt met als doel de timing van embryotransfer aan te passen aan het venster van ontvankelijkheid van een individu 7,8,9. Het veld mist echter nog steeds een goed begrip van de pathogenese van zwangerschapscomplicaties die zich manifesteren nadat het implantatieproces is voltooid.
Het vrouwelijke voortplantingssysteem is zeer dynamisch en staat onder strakke hormonale controle. De hypothalamus-hypofyse-gonadale (HPG) as regelt de afgifte van luteïniserend hormoon en follikelstimulerend hormoon, die aspecten van de ovariële cyclus reguleren, waaronder follikelrijping en oestrogeen- en progesteronactiviteit. Op zijn beurt wordt de baarmoedermenstruele cyclus gereguleerd door oestrogenen en progesteron10,11. Het bestuderen van baarmoederbiologische mechanismen wordt dus bemoeilijkt door ovariële invloed. Bij het bestuderen van hoe kankertherapieën de baarmoeder kunnen beïnvloeden, kan het bijvoorbeeld moeilijk zijn om te onderscheiden of een waargenomen baarmoederfenotype (zoals zwangerschapsverlies of menstruatieacycliciteit) het gevolg is van een directe belediging van de baarmoeder of een gevolgeffect van schade aan de eierstokken.
Om de vruchtbaarheid volledig te begrijpen, moeten de baarmoederbijdragen aan de zwangerschap worden gekarakteriseerd. Belangrijk is dat dit begrip verder moet reiken dan de baarmoederfunctie onder ovariële controle. Dit kan niet bij mensen worden bestudeerd; Daarom worden vaak diermodellen gebruikt. Als zodanig wordt ovariëctomie (OVX) vaak gebruikt om onderzoekers in staat te stellen knaagdieroestruscycli te reguleren (analoog aan de menstruatiecyclus) door exogene hormonen te leveren. Bovendien maakt OVX het mogelijk om baarmoederresponsen te bestuderen onafhankelijk van ovariële invloed12. Als hormonen echter niet onmiddellijk na OVX worden geleverd, zal een menopauzefenotype optreden, dat zorgvuldig door de onderzoekers moet worden overwogen.
OVX wordt vaak gebruikt in knaagdiermodellen 13,14,15,16,17 en is relatief eenvoudig uit te voeren na adequate training. Methoden variëren afhankelijk van of de eierstok alleen of de eierstok en eileider worden verwijderd, evenals afhankelijk van de leeftijd van het dier (volwassen, fietsende dieren hebben grotere eierstokken met een zichtbaar corpus luteum op hun oppervlak, wat betekent dat hun eierstokken gemakkelijker te visualiseren zijn). Evenzo bestaan er veel methoden voor hormoonsuppletie, waaronder subcutane injecties14, pellets met langzame afgifte15, osmotische minipompen18 en ovariële transplantatie.
In dit artikel worden gedetailleerde instructies gegeven over het uitvoeren van ovariëctomie en het bereiden van drie soorten hormoonsuppletie, waaronder subcutane injecties, pellets met langzame afgifte en osmotische minipompen. Er worden twee gedetailleerde protocollen verstrekt voor experimentele eindpunten die baat hebben bij OVX, gevolgd door exogene hormoonsuppletie (embryotransfer en kunstmatige decidualisatie). Dit artikel bespreekt de sterke en zwakke punten van elke aanpak met als doel onderzoekers te begeleiden bij het uitvoeren van studies om de effecten op de baarmoeder te isoleren, met name op het gebied van zwangerschap en vruchtbaarheid.

<table><tbody><tr><td>ALZET 1002 mini osmotische pompen</td><td>BioScientific</td><td>1002</td><td>Leveren 0,25 &micro;L/h gedurende 14 dagen. Gebruik voor sectie 7 (Experimentele procedure - Embryo transfer).</td></tr><tr><td>ALZET 1003D mini osmotische pompen</td><td>BioScientific</td><td>1003D</td><td>Leveren 1 &micro;L/h gedurende 14 dagen. Gebruik voor sectie 8 (Experimentele procedure - Kunstmatige decidualisatie).</td></tr><tr><td>ALZET Reflex 7 mm clips</td><td>BioScientific</td><td>0009971</td><td>Er kunnen Reflex clips of Michel clips worden gebruikt voor wondsluiting, afhankelijk van voorkeur</td></tr><tr><td>ALZET Reflex clip applicator</td><td>BioScientific</td><td>0009974</td><td>Er kunnen Reflex clips of Michel clips worden gebruikt voor wondsluiting, afhankelijk van voorkeur</td></tr><tr><td>ALZET Reflex clip verwijderaar</td><td>BioScientific</td><td>0009976</td><td>Er kunnen Reflex clips of Michel clips worden gebruikt voor wondsluiting, afhankelijk van voorkeur</td></tr><tr><td>Bupivicaine injectie</td><td>Pfizer</td><td>NA</td><td>Voorraad 0,5%. Gebruik op 0,05% in zoutoplossing</td></tr><tr><td>Estradiol</td><td>Sigma</td><td>E8875</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Ilium</td><td>NA</td><td>Actieve bestanddeel 0,5 mg/mL. Gebruik 3,5 mL per 400 mL kooiwaterfles, of zoals voorgeschreven door de dierenarts van uw instelling.</td></tr><tr><td>Michel clips</td><td>Daniels</td><td>NS-000242</td><td></td></tr><tr><td>Multifunctionele afdichtingsmiddel</td><td>Dow Corning</td><td>732</td><td></td></tr><tr><td>Niet-chirurgisch embryo transfer (NSET) apparaat</td><td>ParaTechs</td><td>60010</td><td>Bevat een 6 mm speculum. Enkelvoudig gebruik.</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P0130</td><td>Oplosbaar in ethanol. Gebruik voor&nbsp; sectie 3 (Hormoonvoorbereiding - subcutane injectie) en&nbsp; sectie 4 (Hormoonvoorbereiding - slow-release pellets)</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P7556</td><td>Oplosbaar in water. Gebruik voor sectie 5 (Hormoonvoorbereiding - osmotische mini pompen)</td></tr><tr><td>Refresh oogzalf</td><td>Allergan</td><td>NA</td><td>42,5% w/v vloeibare paraffine, 57,3% w/v zachte witte paraffine</td></tr><tr><td>Rimadyl Carprofen</td><td>Zoetis</td><td>NA</td><td>Voorraad 50 mg/mL. Gebruik op 1 mg/ml (voor een dosis van 5 mg/kg)</td></tr><tr><td>Rubberen slang</td><td>Dow Corning</td><td>508-008</td><td>Gewassen in 100% ethanol en gesneden in stukken van 1 cm. Binnendiameter 1,57 mm &plusmn; 0,23 mm; buitendiameter 3,18 mm &plusmn; 0,23 mm; wanddikte 0,81 mm.</td></tr><tr><td>Sesamolie</td><td>Sigma</td><td>S3547</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk Zijde hechtdraad maat 3-0</td><td>Covidien</td><td>GS-832</td><td></td></tr></tbody></table>

methoden voor het bestuderen van baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling in een ovariectomiemodel

Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model

Om zwangerschap vast te stellen, moet een levensvatbare blastocyst met succes interageren met een receptief baarmoederslijmvlies (endometrium) om implantatie en placentavorming te vergemakkelijken en een voortdurende zwangerschap mogelijk te maken. De beperkingen van zwangerschapssucces veroorzaakt door embryonale defecten zijn bekend en zijn de afgelopen decennia grotendeels overwonnen met de opkomst van in-vitrofertilisatie (IVF) en geassisteerde voortplantingstechnologieën. Tot nu toe heeft het veld echter de beperkingen die worden veroorzaakt door een onvoldoende ontvankelijk endometrium niet overwonnen, wat resulteert in stagnerende IVF-slagingspercentages. Ovariële en endometriumfuncties zijn nauw met elkaar verweven, omdat hormonen die door de eierstok worden geproduceerd verantwoordelijk zijn voor de menstruatiecycliciteit van het endometrium. Als zodanig kan het bij het gebruik van knaagdiermodellen van zwangerschap moeilijk zijn om vast te stellen of een waargenomen resultaat te wijten is aan een ovariële of baarmoedertekort. Om dit te ondervangen, werd een ovariectomie muismodel ontwikkeld met embryotransfer of kunstmatige decidualisatie om de studie van baarmoederspecifieke bijdragen aan de zwangerschap mogelijk te maken. Dit artikel geeft instructies over het uitvoeren van ovariëctomie en biedt inzicht in verschillende technieken voor het leveren van exogene hormonen ter ondersteuning van succesvolle kunstmatige decidualisatie of zwangerschap na embryotransfer van gezonde donoren. Deze technieken omvatten subcutane injectie, pellets met langzame afgifte en osmotische minipompen. De belangrijkste voor- en nadelen van elke methode worden besproken, zodat onderzoekers de beste onderzoeksopzet voor hun specifieke onderzoeksvraag kunnen kiezen.

Een goed gekarakteriseerd model van kunstmatige decidualisatie wordt beschreven in dit protocoldocument (figuur 1A). Hier ondergingen jongvolwassen vrouwelijke muizen (8 weken oud) een chirurgische ovariëctomie zoals beschreven in rubriek 1 en rubriek 2. De muizen werden vervolgens gedurende 2 weken uitgerust om ervoor te zorgen dat de endogene ovariële hormonen verdwenen voordat ze werden ondersteund met exogene hormonen zoals beschreven in rubrieken 3-7 en rubriek 9. ...

Zwangerschapsvorming is een dynamisch proces met complexe embryo- en baarmoederkruisverwijzing. De precieze bijdragen van de maternale baarmoederomgeving aan deze processen blijven een actief onderzoeksgebied. Hier worden gedetailleerde protocollen verstrekt om te helpen bij het ontwerpen van in vivo diermodellen om deze onderzoeksvragen aan te pakken.

Methoden voor het bestuderen van baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling in een ovariectomiemodel

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation ...

Het is dus moeilijk om de rol van baarmoeder- en ovariële hormonale invloeden op de zwangerschap te scheiden, omdat beide nauw met elkaar verbonden zijn. Dit protocol stelt ons dus in staat om de baarmoederbijdragen direct te onderzoeken. Hoewel sommige van deze technieken zoals ovariëctomie vrij invasief zijn, zijn ze relatief eenvoudig uit te voeren na oefening en training, waardoor ze geschikt zijn voor onderzoekers die nieuw zijn in muismodellen.Deze methode kan dus worden gebruikt om de bredere regulatie van de HPG-as te begrijpen, omdat zowel de eierstokken als de baarmoeder een belangrijke rol spelen bij de regulatie van deze as. Als je deze technieken nog nooit eerder hebt uitgevoerd, raadpleeg dan het dierenartsteam van je instituut voor training en ondersteuning. Om te beginnen, breng oogglijmiddel royaal aan op een verdoofde muis door het zachtjes op het oog te deppen na het scheren van een klein gebied bij deuk onder de wervelkolom.Injecteer 0,1 milliliter carprofen subcutaan in het nekvel. Test of het dier wordt verdoofd door in zijn achterste teen te knijpen en te controleren op een reflex. Breng vervolgens Betadine aan op de chirurgische plaats.Bedek het vervolgens met een chirurgisch gordijn. Trek met behulp van een tang met rattentanden de huid bij de voorbode naar boven weg en maak een longitudinale incisie van vijf millimeter. Ontleed vervolgens met een stompe tang de huid weg van de onderliggende spierlaag naar één kant naar de nier.Identificeer de nier, eierstok en eierstokvetpad door de spierwand. Pak de spierlaag vast en til deze op met de tang. Maak vervolgens met een schaar een 0,5 tot een centimeter lange incisie en trek het eierstokkussen door de incisie met een stompe tang.Klem vervolgens met behulp van een gebogen naaldhouder onder de eierstok en eileider aan het distale uiteinde van de baarmoederhoorn en snijd de eierstok met een schaar. Verwijder na 30 seconden de klem en dep met steriel gaas. Om de spierwandincisie te sluiten, tilt u de bovenkant van de incisie op met een tang.Bind vervolgens de incisie met de knoop van een chirurg met behulp van zijden hechtingen. Breng lokaal een paar druppels bupivacaïne aan met behulp van een spuit van één milliliter zonder naaldbevestiging en dep het teveel met steriel gaas. Na het op dezelfde manier uitvoeren van de ovariëctomie aan de andere kant, sluit u de huidincisie door de twee zijden van de huid tegen elkaar te drukken en een paar chirurgische clips van zeven millimeter aan te brengen, waardoor er ruimte overblijft voor wondzwelling.Plaats alle benodigde apparatuur op een folie in een laminaire stroming of klasse II bioveiligheidskap en UV-sterilisatie gedurende 20 minuten. Was de silastische slang in 100% desinol en laat deze aan de lucht drogen in de kap. Eenmaal droog, snijdt u de slang in segmenten van een centimeter lang met behulp van een scalpel.Knijp vervolgens ongeveer 200 microliter kit in een spuit zonder zuiger. Vervang de zuiger en duw een kleine hoeveelheid kit naar buiten. Breng het afdichtmiddel aan op het ene uiteinde van de slang en strijk het glad met een gehandschoende vinger.En laat de kit een nacht of onder UV-licht gedurende 30 minuten in de kap drogen. Giet vervolgens progesteronpoeder in een gesteriliseerde petrischaal. Schep het poeder in pellets met behulp van een tang.Tik het verzegelde uiteinde van de pellet langs het oppervlak van de kap om het poeder te condenseren. Sluit vervolgens het open uiteinde af met de kit. Wikkel de petrischaal met de pellets in folie om ze te beschermen tegen licht.Activeer de pellets ongeveer 72 uur voor het subcutaan inbrengen door ze te incuberen in met houtskool gestripte FCS. Dr. Fiona Cousins, een vroege onderzoekswetenschapper van het Hudson Institute of Medical Research, zal deze procedure demonstreren. Na hormoonpriming van de dieren met subcutane oestradiolinjecties, primen de dieren met subcutane progesteronkorrels twee dagen voor kunstmatige decidualisatie.Verdoof vóór de operatie de muis en test de diepte van de anesthesie door te controleren op de teenknijpreflex. Plaats de muis vervolgens in buikligging, til zijn staart op en steek langzaam een speculum van zes millimeter in zijn vagina. Plaats het onderlichaam van de muis tussen de eerste twee vingers van de niet-dominante hand.Duw vervolgens met de wijsvinger de staart voorzichtig omhoog om een betere vaginale toegankelijkheid mogelijk te maken. Breng 20 microliter sesamolie over in een niet-chirurgische embryotransfertip en breng de punt door de vagina en baarmoederhals in de baarmoederhoorn. Verdrijf de olie langzaam.Als u klaar bent, verwijdert u het speculum uit de vagina. In deze studie onderging 80% van de muizen een succesvolle decidualisatie, terwijl 20% dat niet deed. Het is dus belangrijk om al uw chirurgische apparatuur en werkgebieden steriel te houden en patiënten te hebben bij het inbrengen van het NSAID-apparaat via de baarmoederhals in de baarmoederhoorn van de muis.Na het induceren van kunstmatige decidualisatie kan het progesterongehemelte worden verwijderd om de menstruatie na te bootsen en endometriumafbraak te bestuderen. Met behulp van deze methode kunnen we de baarmoederbiologie en -regulatie bestuderen, onafhankelijk van de invloed van de eierstokken. Dit is echt spannend op het gebied van vruchtbaarheid en de gezondheid van vrouwen in het algemeen.

methods-for-studying-uterine-contributions-to-pregnancy-establishment

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Een beschrijving van de chirurgische inductie van endometriose bij muizen en ratten door auto-transplantatie van baarmoeder weefsel om de arteriële cascade van de intestinale mesenterium.

Muismodel van chirurgisch geïnduceerde Endometriose door Auto-transplantatie van baarmoeder weefsel

In this video, we describe a surgical procedure to harvest intact ovary from a mouse model.

Intact Ovary Harvest from Mouse: A Surgical Procedure to Isolate Complete Ovary from Murine Model

Dit protocol beschrijft een techniek om veranderingen in de maternale vaatstructuur tijdens zwangerschap bij muizen te beoordelen. Met behulp van stereologische methoden wordt de verandering van de deciduale spiraalvormige slagaders kwantitatief beoordeeld en worden de resultaten kwalitatief bevestigd door middel van immunohistochemie.

Beoordeling van de moeder Vasculaire Verbouwing tijdens de zwangerschap in de muis Baarmoeder

Baarmoeder contracties zijn belangrijk voor het welzijn van vrouwen. Echter, pathologisch verhoogde contractiliteit kan leiden tot dysmenorroe, vooral bij jongere vrouwtjes. Hier beschrijven we een eenvoudige ex vivo voorbereiding waardoor een snelle beoordeling van de werkzaamheid van glad Spierrelaxantia die kunnen worden gebruikt voor de behandeling van dysmenorroe.

Ex vivo-methode voor het beoordelen van het voortplantingsstelsel van muizen spontane beweeglijkheid en een op MATLAB gebaseerd baarmoeder bewegings Volgalgoritme voor gegevensanalyse

Veel knaagdiermodellen van endometriose worden beperkt door technische complexiteit, reproduceerbaarheid en/of behoefte aan immuungecompromitteerde dieren of speciale reportermuizen. We presenteren een vereenvoudigd systeem van laesie-inductie met behulp van elke experimentele muis met een onafhankelijk verifieerbaar, objectief scoresysteem en zonder vereiste voor ovariëctomie of overlevingsoperaties.

Een syngeneïsch murinemodel van endometriose met natuurlijk fietsende muizen

Hier beschrijven we de methode voor het genereren van een kunstmatig decidualisatiemodel met behulp van de ovariëctomische muis, een klassiek endometriumdecidualisatie-experiment op het onderzoeksgebied van endometriumdecidualisatie.

Generatie van een muis kunstmatig decidualisatiemodel met ovariëctomie voor endometriumdecidualisatieonderzoek

De gepresenteerde cervicale manipulatiemethode kan pseudozwangerschap bij muizen induceren zonder dat het nodig is om vrouwtjes te fokken met vasectomie mannetjes. De inductie van pseudozwangerschap is vereist voor het succes van niet-chirurgische embryotransfer en niet-chirurgische kunstmatige inseminatie, die beide ook worden gepresenteerd.

Het induceren van pseudopregnancy bij vrouwelijke muizen zonder de noodzaak van vasectomie bij mannen voorafgaand aan niet-chirurgische embryotransfer of kunstmatige inseminatie

Follikelstimulerend hormoon (FSH) in verschillende extragonadale weefsels en organen wordt in verband gebracht met de pathogenese van meerdere ziekten. Het ovariëctomische en met FSH behandelde muismodel (OVF) kan worden gebruikt om de extragonadale werking van FSH te onderzoeken.

Onderzoek naar onafhankelijke effecten van follikelstimulerend hormoon in vivo in een muismodel

Deze studie introduceert een nieuw muismodel dat speciaal is ontworpen om endometrioom te simuleren, een klinisch significant subtype van endometriose. Door gebruik te maken van C57BL/6J-muizen wil het model de pathofysiologische mechanismen die ten grondslag liggen aan endometrioomgerelateerde onvruchtbaarheid ophelderen en een verfijnd hulpmiddel bieden om de huidige kenniskloof in de reproductieve geneeskunde te overbruggen.

Oprichting van een experimenteel muismodel van endometrioom om de gerelateerde onvruchtbaarheid te bestuderen

Dit artikel beschrijft een gedetailleerd protocol voor het produceren van een betrouwbaar en reproduceerbaar dun baarmoederslijmvlies met een zeer laag sterftecijfer en minimale intra-uteriene verklevingen door binnen 1-3 minuten 95% ethanol in de baarmoeder van de muis te injecteren.

Een muismodel van dun endometrium opstellen

Dit protocol beschrijft een procedure voor het induceren van baarmoederbeschadiging in een muismodel, gevolgd door stroomafwaartse analyses tijdens een volgende zwangerschap.

Muismodel van chirurgisch baarmoederletsel en daaropvolgende zwangerschapsuitkomsten

Leer hoe je baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling bestudeert in een ovariectomiemodel met muizen. Deze protocollen helpen onderzoekers de hormonale regulatie van de HPG-as begrijpen.

Methoden voor het bestuderen van baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling in een ovariectomiemodel

Meer video's verkennen