Name: Het meten van de diameter van het netvliesvat van fluorescerende angiografiebeelden van muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: Leer een betrouwbare methode om automatisch de diameter van netvliesvaten te meten bij muizen met fluorescerende angiografie. Deze techniek gebruikt een aangepast MATLAB-programma voor beeldanalyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door een Postdoctoral Fellowship-beurs van het Icelandic Research Fund (217796-052) (A.G.L.) en het Helga Jónsdóttir and Sigurlidi Kristjánsson Memorial Fund (A.G.L en T.E.). De auteurs danken prof. Eiríkur Steingrímsson voor het ter beschikking stellen van de muizen.

Alle experimenten werden goedgekeurd door de IJslandse Voedsel- en Veterinaire Autoriteit (MAST-licentie nr. 2108002). Alle dierstudies zijn uitgevoerd volgens de Verklaring van de Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) for the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research. Mannelijke en vrouwelijke C57BL/6J en Mitfmi-vga9/+ muizen werden in deze studie gebruikt. C57BL/6J muizen (n = 7) werden gebruikt als controle. De wilde typen werden commercieel verkregen (zie Materiaaltabel), maar alle gemuteerde muizen (n = 7) werden gefokt en grootgebracht in dierenfaciliteiten in het Biomedisch Centrum van de Universiteit van IJsland. In de huidige studie werden dieren van 3 maanden oud gebruikt; Het protocol is echter ook van toepassing op dieren van 1 maand en ouder.
1. Experimentele voorbereiding
<ol><li>Bereid het anesthesiemengsel voor. Neem een ampul van een ketamine-stockoplossing van 2 ml (25 mg/ml) en 250 μl xylazine-stockoplossing (2%) om een werkoplossing van ketamine/xylazine-mengsel (25 mg/ml ketamine en 20 mg/ml xylazine) te bereiden (zie materiaaltabel).</li>
	<li>Verdoof de muis met een intraperitoneale injectie van het ketamine/xylazine-mengsel, met een vloeistofvolume dat vier keer zo groot is als het lichaamsgewicht van de muis; Een muis met een gewicht van 20 g heeft bijvoorbeeld 35 μL xylazine/ketamine-werkoplossing nodig om een werkdosis xylazine (4 mg/kg lichaamsgewicht) en ketamine (40 mg/kg lichaamsgewicht) te verkrijgen.</li>
	<li>Verwijd de pupillen met een oogdruppel van 10% fenylefrinehydrochloride en 1% tropicamide onmiddellijk na anesthesie.</li>
	<li>Wacht tot het dier volledig verdoofd is en de pupillen wijd verwijd zijn.</li>
	<li>Bereid een fluoresceïnezoutoplossing voor. Voeg 9 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS; 1x) toe aan 1 ml fluoresceïneoplossing (100 mg/ml bouillonconcentratie) (zie materiaaltabel). De uiteindelijke concentratie van de werkoplossing is 10 mg/ml.</li>
</ol>2. In vivo beeldvorming van het netvlies met behulp van een knaagdierbeeldvormingssysteem voor het netvlies
<ol><li>Fluoresceïne werkoplossing intraperitoneaal (5 μL/g lichaamsgewicht) toedienen aan het verdoofde dier.</li>
	<li>Breng een druppel 2% methylcellulosegel aan op het oppervlak van het hoornvlies en plaats het dier vervolgens op de positioneringstafel van het beeldvormingssysteem (zie Materiaaltabel).</li>
	<li>Plaats de retinale beeldvormende fundus-cameralens om het hoornvlies van de muis direct en voorzichtig aan te raken. Om de oogzenuwkop in het midden van het gezichtsveld te plaatsen, past u de uitlijning iets aan.</li>
	<li>Schakel over naar het groene fluorescerende kanaal op de funduscamera.</li>
	<li>Stel scherp op de netvliesvaten om foto's te maken.</li>
	<li>Om het ideale tijdstip te vinden, maakt u een aantal foto's op 1, 3, 5 en 10 minuten (maar niet langer dan 10 minuten) na de fluoresceïne-injectie. OPMERKING: De FA-behandeling moet binnen 10 minuten worden voltooid, omdat na die tijd de fluoresceïne te diffuus kan worden en de bloedvaten niet meer detecteerbaar worden.</li>
	<li>Na voltooiing van de beeldvorming, terwijl de muis nog verdoofd is, euthanaseert u deze door cervicale dislocatie.</li>
</ol>3. Analyse van de diameter van het netvlies
<ol><li>Open het MATLAB-programma (zie Materiaaltabel).</li>
	<li>Download en bewaar de code "fundusDiameter.m" (zie Aanvullend coderingsbestand 1, Aanvullend coderingsbestand 2 en Aanvullend coderingsbestand 3).</li>
	<li>Open de map waarin de code is opgeslagen. Sleep de code en plaats deze over de huidige map in MATLAB.</li>
	<li>Sleep de FFA-afbeelding (fundus, fluorescentie, angiografie-afbeelding) of afbeeldingen die u wilt analyseren neer over de huidige map in MATLAB.</li>
	<li>Druk op de tool Uitvoeren in de MATLAB-werkbalk.</li>
	<li>Er verschijnt een pop-upvenster. Typ de bestandsnaam van de afbeelding in het vak Bestandsnaam invoeren en druk op OK. OPMERKING: Wijzig of wijzig de rest van de parameters niet.</li>
	<li>Selecteer het midden van de optische schijf en selecteer vervolgens de rand van de optische schijf. De software berekent nu de intensiteit van pixels in de fundusbeelden van de muis in een cirkel met een straal die twee keer zo groot is als die van de optische schijf, met de klok mee vanaf het midden van de optische schijf (Figuur 1).</li>
	<li>Zorg er vervolgens voor dat de software de gemiddelde vaatdiameter (in pixels) van elk vat in de fundus uitzet als functie van het aantal vaten (Figuur 2).</li>
	<li>Zorg er vervolgens voor dat de software de meetgegevens voor elk vaartuig overzet naar een Excel-document, waar het gemiddelde, de mediaan en de standaarddeviatie van deze waarden worden berekend (tabel 1 en tabel 2).</li>
	<li>Verplaats de waarden uit de resultatentabel naar een spreadsheetprogramma door alle waarden in de tabel te selecteren. Plak de waarden in de spreadsheet.</li>
	<li>Teken de grafieken en voer statistische analyses uit met behulp van de gegevens die in een spreadsheetprogramma naar keuze zijn geplakt (zie Materiaaltabel).</li>
</ol>

<ol><li>Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+retina+to+study+dementia+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging retina to study dementia and stroke.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).</li>
<li>Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+development+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature development in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+vessel+attenuation+in+eyes+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal vessel attenuation in eyes with retinitis pigmentosa.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 4306-4314 (2012).</li>
<li>Eysteinsson, T., Hardarson, S. H., Bragason, D., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vessel+oxygen+saturation+and+vessel+diameter+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Retinal vessel oxygen saturation and vessel diameter in retinitis pigmentosa.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (5), 449-453 (2014).</li>
<li>Al-Latayfeh, M., Silva, P. S., Sun, J. K., Aiello, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy+for+ischemic+retinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy for ischemic retinopathies.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (6), 006411(2012).</li>
<li>Wang, S., Villegas-Perez, M. P., Vidal-Sanz, M., Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+optic+axon+dystrophy+and+vacuslar+changes+in+rd+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Progressive optic axon dystrophy and vacuslar changes in rd mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (2), 537-545 (2000).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cells+influence+retinal+vascular+degeneration+in+mouse+models+of+retinal+degeneration+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cells influence retinal vascular degeneration in mouse models of retinal degeneration and diabetes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 57 (10), 4272-4281 (2016).</li>
<li>Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocytes+and+the+microphthalmia+transcription+factor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Genetics%22%5BJournal%5D)">Melanocytes and the microphthalmia transcription factor network.</a> Annual Review of Genetics. 38, 365-411 (2004).</li>
<li>Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+the+microphthalmia+locus+and+its+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mitf.+Pigment+Cell+%26+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The discovery of the microphthalmia locus and its gene.</a> Mitf. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (6), 729-735 (2010).</li>
<li>Garcia-Llorca, A., Aspelund, S. G., Ogmundsdottir, M. H., Steingrimsson, E., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+gene+and+its+role+in+regulating+eye+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene and its role in regulating eye function.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15386(2019).</li>
<li>Bharti, K., Liu, W., Csermely, T., Bertuzzi, S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoter+use+in+eye+development%3A+the+complex+role+and+regulation+of+the+transcription+factor+MITF%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Alternative promoter use in eye development: the complex role and regulation of the transcription factor MITF.</a> Development. 135 (6), 1169-1178 (2008).</li>
<li>Lu, S. Y., Li, M., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+induction+by+RANKL+is+critical+for+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mitf induction by RANKL is critical for osteoclastogenesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 21 (10), 1763-1771 (2010).</li>
<li>Pillaiyar, T., Manickam, M., Jung, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+signaling+pathways+inhibitors+of+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Recent development of signaling pathways inhibitors of melanogenesis.</a> Cellular Signalling. 40, 99-115 (2017).</li>
<li>Danielsson, S. B., Garcia-Llorca, A., Reynisson, H., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+mutations+affect+the+structure+of+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Mouse microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) mutations affect the structure of the retinal vasculature.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (8), 911-918 (2022).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annual Review of Vision Science. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vessel+diameter+quantification+and+vessel+tracing+for+OCT+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Automated vessel diameter quantification and vessel tracing for OCT angiography.</a> Journal of Biophotonics. 13 (12), e202000248(2020).</li>
<li>Salas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+akinetic+swept+source+optical+coherence+tomography+angiography+at+1060+nm+supporting+a+wide+field+of+view+and+adaptive+optics+imaging+modes+of+the+posterior+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Compact akinetic swept source optical coherence tomography angiography at 1060 nm supporting a wide field of view and adaptive optics imaging modes of the posterior eye.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1871-1892 (2018).</li>
<li>Albanna, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+neurovascular+coupling+in+the+murine+retina+by+dynamic+retinal+vessel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of neurovascular coupling in the murine retina by dynamic retinal vessel analysis.</a> PLoS One. 13 (10), e0204689(2018).</li>
<li>Moult, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+anesthetic+protocols+for+functional+blood+flow+imaging+in+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Evaluating anesthetic protocols for functional blood flow imaging in the rat eye.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (1), 16005(2017).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat er geen tegenstrijdige belangen zijn.

Het huidige artikel is het eerste dat een methode presenteert om de diameter van het netvlies en het vaatstelsel van het netvlies te analyseren op basis van FA-beelden van muizen. Aangezien alleen fundusbeeldvorming werd gebruikt om beelden van het netvlies vast te leggen, heeft de methode verschillende nadelen, waarvan er één is dat men alleen veranderingen in de oppervlakkige lagen van dat netvliesvasculatuur kan afleiden bij de muizen die in deze studie zijn onderzocht; Eventuele verschillen in de diepere lagen zijn n...

Misschien wel het meest onderzochte vaatbed in het lichaam is het retinale vaatstelsel. Met een steeds betere technische verfijning kan het vaatstelsel van het netvlies gemakkelijk worden gefotografeerd bij levende patiënten en in veelonderzoeksgebieden worden gebruikt. Bovendien is het retinale vaatstelsel van muizen tijdens de ontwikkeling een zeer effectief modelsysteem gebleken voor onderzoek naar de fundamentele biologie van vasculaire groei. Het primaire doel van het retinale vaatstelsel is om het binnenste deel van het netvlies metabolische ondersteuning te bieden via een laminair capillair netwerk dat het neurale weefsel doordringt. Niettemin kan de toestand van het netvlies, en bijgevolg elke disfunctie of atrofie, aanzienlijke effecten hebben op zowel de vertakkingen van het netvlies als de diameter van de slagaders, wat een samenspel tussen de netvliescellen en het vaatstelsel aantoont 3,4. Het is bekend dat tal van oogaandoeningen, waaronder retinopathie van prematuriteit (ROP), diabetische retinopathie (DR), leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD), glaucoom en neovascularisatie van het hoornvlies, kunnen leiden tot abnormale oculaire angiogenese. In het geval van het retinale vaatstelsel vertonen muismodellen van retinale degeneratie vaak veranderingen die vergelijkbaar zijn met die welke worden gezien bij menselijke vaatziekten 6,7. De Myc-supergenfamilie van fundamentele helix-loop-helix-zipper-transcriptiefactoren omvat het gen voor microftalmie-geassocieerde transcriptiefactor (Mitf) dat tot expressie komt in het retinale pigmentepitheel (RPE)8,9,10.
Van talrijke organen, waaronder het oog, het oor, het immuunsysteem, het centrale zenuwstelsel, de nieren, de botten en de huid, is aangetoond dat ze worden gereguleerd door Mitf 9,11,12,13. We hebben ontdekt dat de structuur en functie van de RPE worden beïnvloed bij muizen die verschillende mutaties in het Mitf-gen dragen, wat resulteert in sommige gevallen van retinale degeneratie enuiteindelijk verlies van het gezichtsvermogen. Onlangs is aangetoond dat het aantal vaten en de diameter van de vaten aanzienlijk verschillen tussen Mitf-mutante en wildtype muizen14. Onderzoekers en artsen kunnen nu het retinale vaatstelsel in vivo nauwkeurig kwantificeren als gevolg van ontwikkelingen in de beeldvorming van het netvlies. Sinds de jaren 1800 hebben onderzoekers en artsen geprofiteerd van het voordeel van het visualiseren van het retinale vaatstelsel, en fluoresceïne-angiografie (FA) heeft zowel de netvliesbloedstroom als de afbraak van de bloed-retinale barrière aangetoond15.
Dit artikel laat zien hoe u de diameter van het netvlies van FA-afbeeldingen van muizen kunt analyseren met een op maat geschreven code in MATLAB-software.

<table><tbody><tr><td>1% Tropicamide (Mydriacyl)</td><td>Alcon Inc Laboratories</td><td></td><td>Mydriaticum</td></tr><tr><td>2% Methocel</td><td>OmniVision Eye Care</td><td></td><td>Hydroxypropryl methylcellulose gel</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>Wild type muizen</td></tr><tr><td>Excel for Microsoft 365</td><td>Microsoft Inc</td><td></td><td>Softwarepakket</td></tr><tr><td>Fluoresceïne natriumzout</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>28803-100G</td><td>Fluorescente angiografie</td></tr><tr><td>Matlab 8.0</td><td>The MathWorks, Inc.</td><td></td><td>Softwarepakket</td></tr><tr><td>Micron IV rodent fundus camera</td><td>Phoenix-Micron</td><td>40-2200</td><td>Fundusfotografie</td></tr><tr><td>Fenylephrine 10% w/v</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td></td><td>Mydriaticum</td></tr><tr><td>Fosfaat Buffered Saline - 100 tabletten</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>Verdunning</td></tr><tr><td>Sigmaplot 13</td><td>Jandel Scientific Software</td><td></td><td>Softwarepakket</td></tr><tr><td>S-Ketamine, 25 mg/mL</td><td>Pfizer Inc.</td><td>PAA104470</td><td>Anesthesie IP</td></tr></tbody></table>

het meten van de diameter van het netvliesvat van fluorescerende angiografiebeelden van muizen

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

Het is belangrijk om de ontwikkeling van retinale vasculatuur te bestuderen bij retinopathieën waarbij abnormale vaatgroei uiteindelijk kan leiden tot verlies van het gezichtsvermogen. Mutaties in het gen voor microftalmie-geassocieerde transcriptiefactor (Mitf) vertonen hypopigmentatie, microftalmie, retinale degeneratie en in sommige gevallen blindheid. In vivo beeldvorming van het netvlies van muizen met niet-invasieve middelen is van vitaal belang voor oogonderzoek. Gezien zijn kleine formaat is het beeldvormen van de fundus-mythese van muizen echter moeilijk en kan het gespecialiseerde hulpmiddelen, onderhoud en training vereisen. In deze studie hebben we een unieke software ontwikkeld waarmee de diameter van het netvlies bij muizen kan worden geanalyseerd met een geautomatiseerd programma dat is geschreven in MATLAB. Fundusfoto's werden verkregen met een commercieel funduscamerasysteem na een intraperitoneale injectie van een fluoresceïnezoutoplossing. Beelden werden gewijzigd om het contrast te verbeteren, en het MATLAB-programma maakte het mogelijk om de gemiddelde vasculaire diameter automatisch te extraheren op een vooraf gedefinieerde afstand van de optische schijf. De vasculaire veranderingen werden onderzocht bij wildtype muizen en muizen met verschillende mutaties in het Mitf-gen door de diameter van het netvlies te analyseren. Het op maat geschreven MATLAB-programma dat hier is ontwikkeld, is praktisch, gemakkelijk te gebruiken en stelt onderzoekers in staat om de gemiddelde diameter en de gemiddelde totale diameter, evenals het aantal bloedvaten van het netvlies van de muis, gemakkelijk en betrouwbaar te analyseren.

Figuur 1 toont het proces dat wordt gebruikt om het retinale vaatstelsel te analyseren, dat wordt toegepast op FFA-beelden van muizen van alle geteste muizen. Een straal die twee keer zo groot is als de optische schijf wordt gebruikt om de intensiteit van pixels in een cirkelvormige richting met de klok mee te meten vanaf het midden van de optische schijf. Het markeert pixels met een begin- of eindpunt wanneer het respectievelijk punten boven en onder een door de gebruiker opgegeven drempel ...

Het retinale vaatstelsel van muizen is bijzonder interessant voor het begrijpen van de mechanismen van vasculaire patroonvorming. Dit protocol meet automatisch de diameter van de retinale vaten van muizen op basis van fluorescerende angiografie-fundusbeelden op een vaste afstand van de optische schijf.

Het meten van de diameter van het netvliesvat van fluorescerende angiografiebeelden van muizen

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

Dit protocol biedt een eenvoudige en betrouwbare methode om automatisch de diameter van netvliesvaten te meten bij verdoofde muizen als gevolg van genmutaties of netvliesaandoeningen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het op maat geschreven MATLAB-programma hier praktisch, gebruiksvriendelijk, handig en betrouwbaar is. Veranderingen in de diameter van het netvlies komen vaak voor bij degeneratieve ziekten zoals RP en andere vasculaire aandoeningen van het netvlies.Muismodellen bieden inzicht in de werkzaamheid van de behandeling en hun impact op netvliesvaten. De methode kan mogelijk nuttig zijn als kwantificeerbare klinische markers na de progressie van vasculaire aandoeningen in het oog, en voor het monitoren van mogelijke behandelingen. Bereid om te beginnen een spuit voor met fluoresceïne-werkoplossing en dien deze intraperitoneaal toe aan het verdoofde dier en breng een druppel 2%methylcellulosegel aan op het hoornvliesoppervlak.Plaats het dier vervolgens op de positioneringstafel van het beeldvormingssysteem. Plaats de retinale beeldvormende fundus-cameralens om het hoornvlies van de muis direct en voorzichtig aan te raken en pas de uitlijning enigszins aan om de oogzenuwkop in het midden van het gezichtsveld te plaatsen. Schakel vervolgens over naar het groene fluorescentiekanaal op de funduscamera en stel scherp op de netvliesvaten om de beelden te maken.Leg beelden vast op de gewenste tijdstippen na de fluoresceïne-injectie om het ideale tijdstip te bepalen en het fluoresceïne-fundusbeeld te visualiseren. Open eerst het MATLAB-programma. Download vervolgens de fundusdiameter en sla deze op.M-code. Open vervolgens de analysemap voor fundusafbeeldingen en sleep de fundusdiameter. m-code in de analysemap.Sleep een FFA-afbeelding naar de map voor afbeeldingsanalyse. Klik in het MATLAB-programma twee keer op het codebestand om het te activeren. Selecteer de optie Uitvoeren.Er verschijnt een pop-upmenu om de afbeelding te selecteren. Selecteer de afbeelding en er verschijnt een pop-upmenu voor analyseparameters op het scherm. Stel de analyseparameters in het pop-upmenu in en druk op OK. Selecteer het midden van de optische schijf en selecteer vervolgens de rand van de optische schijf.De analyse wordt op de achtergrond uitgevoerd en de analyseresultaten verschijnen op het scherm. De tabel bevat de waarden van het gemiddelde, de standaarddeviatie en de standaardfout voor elk vaartuig. Sla de tabel op.En sla dan het cijfer op met de ingestelde gemiddelde dikte. Open de analysemap met de opgeslagen bestanden en open vervolgens de opgeslagen figuur. Open de opgeslagen tabel, kopieer de waarden en plak ze in een Excel-bestand.Na de fluoresceïne-injectie werden beelden verkregen van een controlemuis en een MITFMI-VGA9/mutante muis, waarvoor de kortste afstand werd gemeten van het midden van de optische schijf tot de eindpunten op de vaten met de klok mee. De gemiddelde diameter van het vaartuig werd verkregen als functie van het aantal vaartuigen voor de wildtype en de gemuteerde muizen. De belangrijkste dingen om te onthouden zijn de positionering van de funduscamera en de centrering van de optische schijf in het fundusbeeld.Naast deze techniek kunnen moleculaire technieken worden uitgevoerd om nieuwe geneesmiddelen te verkennen, verschillende vasculaire aandoeningen in het oog te diagnosticeren en de werking van het retinale vaatstelsel beter te begrijpen.

measuring-retinal-vessel-diameter-from-mouse-fluorescent-angiography

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Intravitale microscopie kan bij dieren worden gebruikt om retinale vaatdiameters, bloedstroomsnelheden en totale retinale bloedstroom te visualiseren en te meten.

Intravitale Video Microscopie Metingen van retinale bloedstroom in Muizen

Het protocol beschrijft de corneale micropocket assay zoals ontwikkeld in muizen.

De Cornea micropocket Analyse: Een model van angiogenese in de muis Eye

Om de permeabiliteit van de bloed-retinabarrière en de integriteit van de binnenste begrenzingsmembraan in diermodellen van retinale aandoeningen te onderzoeken, hebben we verschillende adeno-geassocieerde virus (AAV) varianten gebruikt als hulpmiddelen om retinale neuronen en gliacellen te labelen. Virusgemedieerde reportergenexpressie wordt vervolgens gebruikt als een indicator van de permeabiliteit van de retinabarrière.

Met behulp van adeno-geassocieerd virus als een instrument om retinale Barrières in ziekte te bestuderen

Het netvlies deelt opvallende gelijkenissen met de hersenen en vormt aldus een uniek venster te bestuderen van therapieën en neuronale structuur in de hersenen niet-gebeurt. Dit protocol beschrijft een methode om te studeren met behulp van retinale beeldvormingstechnieken dementie. Deze methode kan kunnen helpen bij de diagnose en risicobeoordeling van dementie.

Met behulp van retinale Imaging te bestuderen van dementie

Veel visie-bedreigende oogbeschadigingen en/of ziekten worden geassocieerd met disfunctionele retinale microvessels. De meting van de retinale arteriole reacties is daarom belangrijk om te onderzoeken van de onderliggende pathofysiologische mechanismen. Dit artikel beschrijft een gedetailleerd protocol voor muis retinale arteriole isolatie en voorbereiding te beoordelen van de effecten van vasoactieve stoffen op vasculaire diameter.

Voorbereiding stappen voor meting van reactiviteit in muis retinale arteriolen Ex Vivo

Hier bespreken we een methode-protocol waarmee een gemakkelijke analyse van de volwassen tg(fli:EGFP) zebrafish retinale therapieën als een snel uitlezing in instellingen van lange termijn vasculaire pathologieën gekoppeld aan neoangiogenesis en structurele veranderingen.

Bestuderen van Diabetes door de ogen van een vis: Microdissection, visualisatie en analyse van de volwassen tg(fli:EGFP) Zebrafish Retinal therapieën

In vivo beeldvorming is een krachtig hulpmiddel voor de studie van biologie in gezondheid en ziekte. Dit protocol beschrijft transpupillaire beeldvorming van het netvlies van de muis met een standaard microscoop met twee fotonen. Het demonstreert ook verschillende in vivoimaging-methoden om fluorescerend meerdere cellulaire cohorten van het netvlies te labelen.

Transpupillaire twee-fotonen in vivo beeldvorming van het netvlies van de muis

Dit protocol beschrijft een gedetailleerde methode voor de bereiding en immunofluorescentiekleuring van retinale flat mounts en analyse van muizen. Het gebruik van fluoresceïne fundusangiografie (FFA) voor muizenpups en beeldverwerking worden ook in detail beschreven.

Monitoring van dynamische groei van retinale vaten in zuurstof-geïnduceerde retinopathie muismodel

Dit artikel beschrijft een gevestigde en reproduceerbare lectinevlekkentest voor de gehele retinale preparaten van mount en de protocollen die nodig zijn voor de kwantitatieve meting van vasculaire parameters die vaak worden gewijzigd in proliferatieve en niet-proliferatieve retinopathieën.

Kwantificering van vasculaire parameters in whole mount retinas van muizen met niet-proliferatieve en proliferatieve retinopathieën

Hier presenteren we drie data-analyseprotocollen voor fluoresceïneangiografie (FA) en optische coherentietomografie (OCT) beelden in de studie van Retinal Vein Occlusion (RVO).

In vivo Vasculaire letseluitlezingen in het netvlies van muizen om de reproduceerbaarheid te bevorderen

De pericyten in het retinale vaatstelsel werden onderzocht door middel van immunofluorescerende kleuring met van bloedplaatjes afgeleide groeifactorreceptor β na retro-orbitale injectie van fluorescerend tomatenlectine. Het gelabelde netvlies werd verder behandeld met de weefselopruimingsmethode en in zijn geheel gemonteerd voor het visualiseren van de driedimensionale beelden van pericyten rond het netvliesvaatstelsel onder een confocale microscoop.

3D-visualisatie van retinale vasculaire pericyten bij muizen door immunokleuring 

Leer een betrouwbare methode om automatisch de diameter van netvliesvaten te meten bij muizen met fluorescerende angiografie. Deze techniek gebruikt een aangepast MATLAB-programma voor beeldanalyse.

Het meten van de diameter van het netvliesvat van fluorescerende angiografiebeelden van muizen

Meer video's verkennen