Name: Genereren van functionele endodermale leverorganoïden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: Ontdek een protocol voor het genereren van endodermale leverorganoïden binnen twee weken. Deze methode maakt langdurige expansie mogelijk zonder verlies van differentiatie en functionaliteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Huch, M., Koo, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+mouse+and+human+development+using+organoid+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Modeling mouse and human development using organoid cultures.</a> Development. 142 (18), 3113-3125 (2015).</li>
<li>Marsee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+consensus+on+definition+and+nomenclature+of+hepatic%2C+pancreatic%2C+and+biliary+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Building consensus on definition and nomenclature of hepatic, pancreatic, and biliary organoids.</a> Cell Stem Cell. 28 (5), 816-832 (2021).</li>
<li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li>
<li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massive+and+reproducible+production+of+liver+buds+entirely+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Massive and reproducible production of liver buds entirely from human pluripotent stem cells.</a> Cell Reports. 21 (10), 2661-2670 (2017).</li>
<li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1-2), 299-312 (2015).</li>
<li>Guan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+hepatic+organoids+for+the+analysis+of+human+genetic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Human hepatic organoids for the analysis of human genetic diseases.</a> JCI Insight. 2 (17), e94954(2017).</li>
<li>Ramli, M. N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pluripotent+stem+cell-derived+organoids+as+models+of+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Human pluripotent stem cell-derived organoids as models of liver disease.</a> Gastroenterology. 159 (4), 1471-1486 (2020).</li>
<li>Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypan+blue+exclusion+test+of+cell+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Trypan blue exclusion test of cell viability.</a> Current Protocols in Immunology. 21 (1), 3(1997).</li>
<li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+processing+and+hematoxylin+and+eosin+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%3A+Methods+and+Protocols%22%5BJournal%5D)">Tissue processing and hematoxylin and eosin staining.</a> Histopathology: Methods and Protocols. 1180, 31-43 (2014).</li>
<li>Akbari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((long-term+culture+of+endoderm-derived+hepatic+organoids+for+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">long-term culture of endoderm-derived hepatic organoids for disease modeling.</a> Stem Cell Reports. 13 (4), 627-641 (2019).</li>
<li>Meisenheimer, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proluciferin+acetals+as+bioluminogenic+substrates+for+cytochrome+P450+activity+and+probes+for+CYP3A+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Metabolism+and+Disposition%22%5BJournal%5D)">Proluciferin acetals as bioluminogenic substrates for cytochrome P450 activity and probes for CYP3A inhibition.</a> Drug Metabolism and Disposition. 39 (12), 2403-2410 (2011).</li>
<li>Cali, J. J., Ma, D., Wood, M. G., Meisenheimer, P. L., Klaubert, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+assays+for+ADME+evaluation%3A+dialing+in+CYP+selectivity+with+luminogenic+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Metabolism+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent assays for ADME evaluation: dialing in CYP selectivity with luminogenic substrates.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 8 (9), 1115-1130 (2012).</li>
<li>Cali, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luminogenic+cytochrome+P450+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Metabolism+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Luminogenic cytochrome P450 assays.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 2 (4), 629-645 (2006).</li>
<li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2%E2%88%92%CE%94%CE%94CT+method%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2−ΔΔCT method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li>
<li>Duval, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+physiological+events+in+2D+vs.+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Modeling physiological events in 2D vs. 3D cell culture.</a> Physiology. 32 (4), 266-277 (2017).</li>
<li>Rowe, R. G., Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells+in+disease+modelling+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells in disease modelling and drug discovery.</a> Nature Reviews Genetics. 20 (7), 377-388 (2019).</li>
<li>Akbari, S., Arslan, N., Senturk, S., Erdal, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+liver+medicine+using+organoid+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+Development+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Next-generation liver medicine using organoid models.</a> Frontiers in Cell Development and Biology. 7, 345(2019).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Bowen, W. C., Mule, K., Stolz, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+organization+in+hepatocyte+organoid+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Histological organization in hepatocyte organoid cultures.</a> American Journal of Pathology. 159 (5), 1877-1887 (2001).</li>
<li>Shinozawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-fidelity+drug-induced+liver+injury+screen+using+human+pluripotent+stem+cell-derived+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">High-fidelity drug-induced liver injury screen using human pluripotent stem cell-derived organoids.</a> Gastroenterology. 160 (3), 831-846 (2021).</li>
<li>Wu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+hepatobiliary+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Generation of hepatobiliary organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Hepatology. 70 (6), 1145-1158 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 mL conische centrifugebuizen</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>37 &deg;C waterbad</td><td>N&uuml;ve</td><td>210.NB9</td><td></td></tr><tr><td>37 &deg;C, 5 % CO2 incubator</td><td>Memmert</td><td>INCO 153</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conische centrifugebuizen</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>70 &micro;m en 40 &micro;m Cell strainer</td><td>Falcon</td><td>352350/ 352340</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Sigma</td><td>1009832511</td><td></td></tr><tr><td>A1AT</td><td>Abcam</td><td>ab166610</td><td>Verdunning: 1/500 (IF), 1/50 (IHC)</td></tr><tr><td>A-83.01 (TGF-&beta; inhibitor)</td><td>Tocris Biosciene</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Isolab</td><td>9,01,026</td><td></td></tr><tr><td>Zelfklevende microscoopslide</td><td>Histobond</td><td>C981040</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM-F12</td><td>Gibco</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>AFP</td><td>Abcam</td><td>ab3980</td><td>Verdunning: 1/25 (IHC)</td></tr><tr><td>Agar</td><td>EMS</td><td>10200</td><td></td></tr><tr><td>ALB</td><td>Abcam</td><td>ab10241</td><td>Verdunning: 1/100 (IF), 1/20 (IHC)</td></tr><tr><td>Alexa Flour 488 (Muis)</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td>Verdunning: 1/1000 (IF)</td></tr><tr><td>Alexa Flour 488 (Konijn)</td><td>Invitrogen</td><td>A110034</td><td>Verdunning: 1/1000 (IF)</td></tr><tr><td>Alexa Flour 594 (Muis)</td><td>Invitrogen</td><td>A11005</td><td>Verdunning: 1/1000 (IF)</td></tr><tr><td>Alexa flour 594 (Konijn)&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A11037</td><td>Verdunning: 1/1000 (IF)</td></tr><tr><td>Ammonia Assay Kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MAK-310</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniumchloride</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-202936</td><td></td></tr><tr><td>B27 Supplement 50x</td><td>Gibco</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Basisvorm</td><td>Sakura</td><td>4216</td><td></td></tr><tr><td>b-FGF</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Biosafety, CLASS II,SAFETY CABINET</td><td>Thermo</td><td>SAFE 2020</td><td></td></tr><tr><td>Gekalibreerde pipetten</td><td>Gilson</td><td>F167380</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5702</td><td></td></tr><tr><td>Cholylglycylamido-fluorescein</td><td>Corning</td><td>451041</td><td></td></tr><tr><td>Citraat Buffer pH 6.0</td><td>Bio-optica</td><td>15-M103</td><td></td></tr><tr><td>CK-18</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-51582</td><td>Verdunning: 1/100 (IF), 1/20 (IHC)</td></tr><tr><td>CK-19</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-6278</td><td>Verdunning: 1/100 (IF), 1/20 (IHC)</td></tr><tr><td>Confocal Microscope</td><td>Zeiss</td><td>LSM880</td><td></td></tr><tr><td>Cryogene werkhandschoenen en oogbescherming</td><td>Cryokit</td><td>5274</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 1950</td><td></td></tr><tr><td>Cryovialbuizen</td><td>Corning</td><td>430659</td><td></td></tr><tr><td>DAB</td><td>Roche</td><td>11718096001</td><td></td></tr><tr><td>DAPT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>a5942</td><td></td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>Dispase&nbsp;</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>7923</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F12</td><td>Gibco</td><td>31330038</td><td></td></tr><tr><td>E-CAD</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-8426</td><td>Verdunning: 1/100 (IF), 1/20 (IHC)</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575-020</td><td></td></tr><tr><td>Elektronenmicroscoop</td><td>Zeiss</td><td>Sigma500</td><td></td></tr><tr><td>ELISA kit</td><td>Fortis life sciences bethyl</td><td>E88-129</td><td></td></tr><tr><td>Embed 812 Inbedding Kit</td><td>EMS</td><td>14121</td><td></td></tr><tr><td>Entellan</td><td>Merck</td><td>107961</td><td></td></tr><tr><td>Eosine Y %1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110332</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-059-901</td><td>Verdunning: 1/11 (FACS)</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>1,00,98,32,511</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>26010066</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin (FSK)</td><td>Tocris Biosciene</td><td>1099</td><td></td></tr><tr><td>Vriescontainer (Mr. Frosty)</td><td>Thermo</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Vriesmedium</td><td>Gibco</td><td>12648010</td><td></td></tr><tr><td>Glas Pasteurpipet</td><td>Isolab</td><td>084.01.001</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax 100x</td><td>Gibco</td><td>35050-068</td><td></td></tr><tr><td>Gluteraldehyde %25, EM grade</td><td>EMS</td><td>16210-1L</td><td></td></tr><tr><td>Geit Anti-Muis HRP</td><td>Thermo Fisher</td><td>62-6520</td><td>Verdunning: 1/1000 (IHC)</td></tr><tr><td>Geit Anti-Konijn HRP</td><td>Thermo Fisher</td><td>31460</td><td>Verdunning: 1/1000 (IHC)</td></tr><tr><td>Geitenserum</td><td>Gibco</td><td>162-10-072</td><td></td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Merck</td><td>107209</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxyleine</td><td>Millipore</td><td>HX86017674</td><td></td></tr><tr><td>HEPES, 1 M</td><td>Gibco</td><td>15630-056</td><td></td></tr><tr><td>HNF-4&alpha;</td><td>Abcam</td><td>ab55223</td><td>Verdunning: 1/50 (IHC)</td></tr><tr><td>IJs en droogijs</td><td>zelfgemaakt</td><td>zelfgemaakt</td><td></td></tr><tr><td>Incubator (65 &deg;C)</td><td>N&uuml;ve</td><td>EN 400</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>24137</td><td></td></tr><tr><td>Leu15 Gastrin I menselijk</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9145</td><td></td></tr><tr><td>Luminometer</td><td>Berthold Tech</td><td>LB 960</td><td></td></tr><tr><td>Master mix&nbsp;</td><td>Applied Biosystems</td><td>43

genereren van functionele endodermale leverorganoïden

Generation of Functional Endodermal Hepatic Organoids

Genereren van functionele endodermale leverorganoïden

Organoid technology has allowed us to generate a variety of human organ-like mini structures, such as for the liver, brain, and intestine, in vitro. The ...

generation-of-functional-endodermal-hepatic-organoids

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit artikel zal zich richten op het genereren van humane lever endoderm van menselijke embryonale stamcellen populaties.

Robuuste Generatie van hepatocyt-achtige cellen uit menselijke embryonale stamcellen Populaties

Dit protocol beschrijft de productie van een muis extrahepatic gal 3-dimensionale organoid kanaalsysteem. Deze biliaire organoids kan worden gehandhaafd in cultuur te bestuderen van cholangiocyte biologie. Biliaire organoids express markers van voorlopercellen zowel biliaire cellen en zijn samengesteld uit gepolariseerde epitheliale cellen.

Generatie van Organoids van muis Extrahepatic galwegen

Dit protocol maakt het mogelijk om menselijke pluripotente cellen te differentiëren tot darmorganoïden. Het protocol bootst de normale menselijke ontwikkeling na door cellen te differentiëren in een populatie van definitief endoderm, endoderm van de dikke darm en vervolgens darmepitheel. Dit maakt het protocol geschikt voor het bestuderen van zowel darmontwikkeling als toepassingen voor ziektemodellering.

Generatie van hiPSC-afgeleide darmorganoïden voor ontwikkelings- en ziektemodelleringstoepassingen

Een langdurig ex vitro 3D-organoïde kweeksysteem werd opgezet uit muizenhepatocyten. Deze organoïden kunnen worden gepasseerd en genetisch gemanipuleerd door lentivirusinfectie van shRNA / ectopische constructie, siRNA-transfectie en CRISPR-Cas9-engineering.

Vaststelling en genetische manipulatie van Murine Hepatocyte Organoïden

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor differentiatie van menselijke embryonale stamcellen (hESC's) in functionele hepatocyt-achtige cellen (HCC's) door continu Activine A en CHIR99021 aan te vullen tijdens hESC-differentiatie tot definitief endoderm (DE).

Een efficiënte methode voor gerichte hepatocyt-achtige celinductie uit menselijke embryonale stamcellen

Hier worden gedetailleerde methoden beschreven voor het genereren, onderhouden en karakteriseren van menselijke pluripotente stamcel-afgeleide dunne darm- en colonorganoïden. Deze methoden zijn ontworpen om de reproduceerbaarheid te verbeteren, de schaalbaarheid uit te breiden en de werktijd te verkorten die nodig is voor het plateren en passeren van organoïden.

Generatie, onderhoud en karakterisering van menselijke pluripotente stamcel-afgeleide darm- en colonorganoïden

Hier presenteren we een niet-genetische methode om menselijke autologe leversferoïden te genereren met behulp van mononucleaire cellen geïsoleerd uit steady-state perifeer bloed.

Humane leversferoïden uit perifeer bloed voor leverziektestudies

We bieden een uitgebreid overzicht en verfijning van bestaande protocollen voor de vorming van hepatocellulair carcinoom (HCC), die alle stadia van de organoïdeteelt omvatten. Dit systeem dient als een waardevol model voor de identificatie van potentiële therapeutische doelwitten en de beoordeling van de effectiviteit van kandidaat-geneesmiddelen.

Ontwikkeling en optimalisatie van een humaan hepatocellulair carcinoom-patiënt-afgeleid organoïdemodel voor potentiële doelidentificatie en ontdekking van geneesmiddelen

Organoïden revolutioneren gepersonaliseerde weefselmodellering voor orgaanontwikkeling, medicijnontdekking en ziekteonderzoek. De voortgang in organoïdengineering leidt tot het creëren van ingewikkelde synthetische weefsels. Het doel is om morfogenese, assembloïdtechnologie en biomatrices te integreren om weefselengineering te bevorderen. Dit protocol helpt bij het modelleren van leverorganogenese en het vaststellen van richtlijnen voor de constructie van synthetisch weefsel.

In Vitro Cultuurtechnieken voor het Modelleren van Lever Organogenese, het Bouwen van Assembloids en het Ontwerpen van Synthetisch Weefsel met behulp van Menselijk Cellijnen

Dit protocol presenteert een geoptimaliseerde tweestaps collagenase-leverperfusietechniek in een rattenmodel en toont het gebruik van geïsoleerde hepatocyten voor in vitro langdurige kweek van 3D-organoïden.

Perfusie van rattenlever en isolatie van primaire hepatocyten: een oude procedure die cruciaal is voor geavanceerde 3D-organoïdencultuur

Ontdek een protocol voor het genereren van endodermale leverorganoïden binnen twee weken. Deze methode maakt langdurige expansie mogelijk zonder verlies van differentiatie en functionaliteit.

Genereren van functionele endodermale leverorganoïden

Meer video's verkennen