Eencellige sortering van immunofenogetypeerde mesenchymale stamcellen van menselijke geëxfolieerde bladverliezende tanden

Dit protocol beschrijft een cruciale methode voor het nauwkeurig karakteriseren en zuiveren van menselijke mesenchymale stamcellen op één enkel platform, waardoor efficiënte stroomafwaartse toepassingen zoals stamceltransplantatie mogelijk worden. Het is met name belangrijk voor klinische laboratoria die moleculaire en cytogenetische tests verbeteren door middel van nauwkeurige sortering van gemanipuleerde of natuurlijke stamcellen in één cel. De veelgebruikte methoden voor het isoleren van gezuiverde stamcelpopulaties verwijzen naar technieken zoals immunomagnetische scheiding, dichtheidsgradiënt of microfluïdische celsortering.

Een techniek zoals indexsortering maakt het mogelijk om het te koppelen aan RNA-profilering van één cel die transcriptomische informatie van elke gesorteerde cel kan extraheren. De belangrijkste uitdagingen zijn het handhaven van de monsterkwaliteit, het optimaliseren van de celkweekomstandigheden, inclusief celdichtheid en levensvatbaarheid tijdens en na het sorteren. Daarnaast zou ook worden overwogen om geschikte spuitmonden voor het instrument te kiezen en te zorgen voor tijdige toegang tot de sorteerders.

Dit protocol illustreert een nauwkeurig kleurpaneel voor immunofenotypering en het sorteren van de gewenste celpopulatie. Het zorgt voor een gestandaardiseerde monsterkwaliteit, optimale cellevensvatbaarheid, dichtheid voor het sorteren van celpopulaties en definieert experimentele sorteerparameters op de FACSDiva-software. Deze methode maakt een eenvoudige selectie en immunofenotypering mogelijk van stamcelpopulaties die specifieke biomarkers tot expressie brengen.

Dit eenvoudige platform maakt een efficiënte sortering mogelijk op basis van de doelpopulatie, waardoor gezuiverde monsters worden geholpen en verkregen voor latere stroomafwaartse toepassingen.