Name: Isolatie van cellen met morfologische en ruimtelijke informatie uit orale submuceuze fibrosemonsters door middel van microdissectie met laseropname (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: Leer laseropname-microdissectie voor orale submuceuze fibrose om cellen met morfologische en ruimtelijke informatie te isoleren. Deze methode ondersteunt multi-omics analyse van paraffine-ingebette weefsels.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door onderzoekssubsidies van de National Nature Science Foundation of China (81671006, 81300894), CAMS Innovation Fund for Medical Sciences (2019-I2M-5-038), National clinical key discipline construction project (PKUSSNKP-202102), Innovation Fund for Outstanding Doctoral Candidates van het Peking University Health Science Center (BMU2022BSS001).

Deze studie werd goedgekeurd door de institutionele beoordelingsraad van de Peking University School and Hospital. Geïnformeerde toestemming werd verkregen van de patiënten. De weefselmonsters die in dit onderzoek werden gebruikt, werden geanonimiseerd. Het onderzoeksschema is weergegeven in figuur 1.
1. Voorbereiding van het monster
<ol><li>Snijd in formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde orale submuceuze fibroseweefsels in continue secties van 3 μm en 10 μm dikte op een microtoom.</li>
	<li>Vouw de secties uit in het water en vis ze vervolgens uit op de glijbanen. Bevestig de secties van 3 μM en 10 μm op respectievelijk adhesiemicroscoopglaasjes (objectglaasjes A) en PEN-membraanglaasjes (objectglaasje B).</li>
	<li>Plaats de objectglaasjes gedurende 2 uur op een hete plaat van 60 °C.</li>
</ol>2. Hematoxyline-eosine-kleuring
<ol><li>Plaats objectglaasjes A en B gedurende 10 minuten in xyleen (LET OP) en herhaal deze stap driemaal.</li>
	<li>Hydrateer A en B in gesorteerde ethanoloplossingen in de orde van grootte van 100%, 100%, 90%, 80% en 70% gedurende 1 minuut in elke concentratie.</li>
	<li>Plaats objectglaasjes A en B gedurende 30 seconden in ultrapuur gedestilleerd water</li>
	<li>Plaats objectglaasjes A en B gedurende 90 s in Harris hematoxyline-kleurstofoplossing.</li>
	<li>Leg de objectglaasjes A en B gedurende 30 seconden in ultrazuiver gedestilleerd water en herhaal deze stap driemaal.</li>
	<li>Plaats objectglaasjes A en B gedurende 2 s in div-hematoxyline-oplossing (VOORZICHTIG).</li>
	<li>Leg de objectglaasjes A en B gedurende 30 seconden in ultrazuiver gedestilleerd water en herhaal deze stap driemaal.</li>
	<li>Plaats de objectglaasjes in A en B in 1% re-blue oplossing gedurende 2 s.</li>
	<li>Leg de objectglaasjes A en B gedurende 30 seconden in ultrazuiver gedestilleerd water en herhaal deze stap driemaal.</li>
	<li>Plaats de objectglaasjes gedurende 2 s in eosine-oplossing.</li>
	<li>Leg de objectglaasjes A en B gedurende 30 seconden in ultrazuiver gedestilleerd water en herhaal deze stap driemaal.</li>
	<li>Dehydrateer de objectglaasjes in gesorteerde ethanoloplossingen in de orde van grootte van 70%, 80%, 90%, 100% en 100% gedurende 2 s in elke concentratie.</li>
	<li>Plaats dia A gedurende 3 minuten in xyleen en herhaal deze stap twee keer.</li>
	<li>Voeg een druppel montagemedium (LET OP) toe aan dia A en dek het af met een afdekglas.</li>
</ol>3. Observatie van histologische morfologie en laseropname microdissectie
<ol><li>Start het lasermicrodissectiesysteem en de software (Figuur 2).</li>
	<li>Plaats objectglaasje A op de objectglaasje en observeer de histologische morfologie om het interessegebied voor lasermicrodissectie te identificeren.</li>
	<li>Verwijder dia A en plaats dia B omgekeerd op de objectglaas.</li>
	<li>Klik op de knop Lossen (Figuur 2) om het opvangapparaat naar buiten te duwen. Steek een polymerasekettingreactie (PCR)-buis in het opvangapparaat en zorg ervoor dat de buis vast wordt gehouden. Klik op de knop OK (Figuur 3).</li>
	<li>Selecteer een dop door op de corresponderende rode cirkel te klikken die het verzamelapparaat markeert: buisdoppen. De geselecteerde cirkel wordt groen.</li>
	<li>Klik op de knop Tekenen en de knop Tekenen + knippen en gebruik de muis om het interessegebied te schetsen.</li>
	<li>Klik op de Start Cut knop om het interessegebied vast te leggen; het gevangen monster wordt opgevangen door de dop (Figuur 4).</li>
	<li>Klik op de knop Omlaag om ervoor te zorgen dat het gevangen monster wordt verzameld (Figuur 5).</li>
	<li>Klik op de knop Specimen om het volgende monster vast te leggen.</li>
	<li>Klik op de knop Lossen om de PCR-buis met het opgevangen monster te ontladen.</li>
</ol>

Het vastleggen van orale submuceuze fibroseweefselmonsters voor spatial-omics-analyse

<ol><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+clinicopathological+study+of+674+cases+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A clinicopathological study of 674 cases in China.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. 48 (4), 321-325 (2019).</li>
<li>Cai, X., Huang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathological+factors+associated+with+progression+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+population-based+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Clinicopathological factors associated with progression of oral submucous fibrosis: A population-based retrospective study.</a> Oral Oncology. 130, 105949(2022).</li>
<li>Ray, J. G., Chatterjee, R., Chaudhuri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+global+challenge.+Rising+incidence%2C+risk+factors%2C+management%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontology+2000%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A global challenge. Rising incidence, risk factors, management, and research priorities.</a> Periodontology 2000. 80 (1), 200-212 (2019).</li>
<li>Shih, Y. H., Wang, T. H., Shieh, T. M., Tseng, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+Review+on+etiopathogenesis%2C+diagnosis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A Review on etiopathogenesis, diagnosis, and therapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (12), 2940(2019).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preliminary+exploration+of+immune+microenvironment+in+oral+leukoplakia+concomitant+with+oral+submucosal+fibrosis%3A+A+comparative+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">The preliminary exploration of immune microenvironment in oral leukoplakia concomitant with oral submucosal fibrosis: A comparative immunohistochemical study.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. , (2023).</li>
<li>Warnakulasuriya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+potentially+malignant+disorders%3A+A+consensus+report+from+an+international+seminar+on+nomenclature+and+classification%2C+convened+by+the+WHO+Collaborating+Centre+for+Oral+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral potentially malignant disorders: A consensus report from an international seminar on nomenclature and classification, convened by the WHO Collaborating Centre for Oral Cancer.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1862-1880 (2021).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+nomogram+prediction+model+for+malignant+transformation+of+oral+potentially+malignant+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a nomogram prediction model for malignant transformation of oral potentially malignant disorders.</a> Oral Oncology. 123, 105619(2021).</li>
<li>Murthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+rate+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation rate of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Journal of Clinical Medicine. 11 (7), 1793(2022).</li>
<li>Kujan, O., Mello, F. W., Warnakulasuriya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1936-1946 (2020).</li>
<li>Qin, X., Ning, Y., Zhou, L., Zhu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+Etiological+mechanism%2C+malignant+transformation%2C+therapeutic+approaches+and+targets%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: Etiological mechanism, malignant transformation, therapeutic approaches and targets.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (5), 4992(2023).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+and+spatial+dissection+of+precancerous+lesions+underlying+the+initiation+process+of+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discovery%22%5BJournal%5D)">Single-cell and spatial dissection of precancerous lesions underlying the initiation process of oral squamous cell carcinoma.</a> Cell Discovery. 9 (1), 28(2023).</li>
<li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+the+dynamic+evolution+from+preneoplasia+to+invasive+lung+adenocarcinoma+by+integrating+single-cell+RNA+sequencing+and+spatial+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Delineating the dynamic evolution from preneoplasia to invasive lung adenocarcinoma by integrating single-cell RNA sequencing and spatial transcriptomics.</a> Experimental & Molecular Medicine. 54 (11), 2060-2076 (2022).</li>
<li>Ji, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+analysis+of+composition+and+spatial+architecture+in+human+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal analysis of composition and spatial architecture in human squamous cell carcinoma.</a> Cell. 182 (2), 497-514 (2020).</li>
<li>Van den Bossche, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-driven+intratumoral+heterogeneity+in+head+and+neck+cancers%3A+clinical+challenges+and+opportunities+for+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Resistance+Updates%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-driven intratumoral heterogeneity in head and neck cancers: clinical challenges and opportunities for precision medicine.</a> Drug Resistance Updates. 60, 100806(2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+in+the+risk+assessment+of+oral+leukoplakia+through+morphology-related+copy+number+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+China.+Life+sciences%22%5BJournal%5D)">Improvement in the risk assessment of oral leukoplakia through morphology-related copy number analysis.</a> Science China. Life sciences. 64 (9), 1379-1391 (2021).</li>
<li>Watkins, T. B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pervasive+chromosomal+instability+and+karyotype+order+in+tumour+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pervasive chromosomal instability and karyotype order in tumour evolution.</a> Nature. 587 (7832), 126-132 (2020).</li>
<li>Odell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneuploidy+and+loss+of+heterozygosity+as+risk+markers+for+malignant+transformation+in+oral+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Aneuploidy and loss of heterozygosity as risk markers for malignant transformation in oral mucosa.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1993-2007 (2021).</li>
<li>Wood, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+road+to+invasion-examining+the+similarities+and+differences+in+the+genomes+of+associated+oral+pre-cancer+and+cancer+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Medicine%22%5BJournal%5D)">The genomic road to invasion-examining the similarities and differences in the genomes of associated oral pre-cancer and cancer samples.</a> Genome Medicine. 9 (1), 53(2017).</li>
<li>Venugopal, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+proteomics+based+on+2D+gel+electrophoresis+and+mass+spectrometry+with+validations%3A+Identification+of+a+biomarker+compendium+for+oral+submucous+fibrosis-An+indian+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Personalized+Medicine%22%5BJournal%5D)">Integrated proteomics based on 2D gel electrophoresis and mass spectrometry with validations: Identification of a biomarker compendium for oral submucous fibrosis-An indian study.</a> Journal of Personalized Medicine. 12 (2), 208(2022).</li>
<li>Kundu, P., Pant, I., Jain, R., Rao, S. G., Kondaiah, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+DNA+methylation+changes+in+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Genome-wide DNA methylation changes in oral submucous fibrosis.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1094-1103 (2022).</li>
<li>Cai, X., Zhang, H., Li, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-target+pharmacological+mechanisms+of+Salvia+miltiorrhiza+against+oral+submucous+fibrosis%3A+A+network+pharmacology+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Multi-target pharmacological mechanisms of Salvia miltiorrhiza against oral submucous fibrosis: A network pharmacology approach.</a> Archives of Oral Biology. 126, 105131(2021).</li>
<li>Xiao, X., Hu, Y., Li, C., Shi, L., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+content+abnormality+in+oral+submucous+fibrosis+concomitant+leukoplakia%3A+A+preliminary+evaluation+of+the+diagnostic+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">DNA content abnormality in oral submucous fibrosis concomitant leukoplakia: A preliminary evaluation of the diagnostic and clinical implications.</a> Diagnostic Cytopathology. 48 (11), 1111-1114 (2020).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+expression+profile+associated+with+malignant+progression+of+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA expression profile associated with malignant progression of oral submucous fibrosis.</a> Journal of Oncology. 2019, 6835176(2019).</li>
<li>Lunde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+of+chromosomal+changes+in+potentially+malignant+and+malignant+oral+mucosal+lesions+from+South+and+Southeast+Asia+using+array-comparative+genomic+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Genomics+%26+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Profiling of chromosomal changes in potentially malignant and malignant oral mucosal lesions from South and Southeast Asia using array-comparative genomic hybridization.</a> Cancer Genomics & Proteomics. 11 (3), 127-140 (2014).</li>
<li>Sun, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+resolved+metabolomics+to+discover+tumor-associated+metabolic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Spatially resolved metabolomics to discover tumor-associated metabolic alterations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (1), 52-57 (2019).</li>
<li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copy+number+alteration+profiling+facilitates+differential+diagnosis+between+ossifying+fibroma+and+fibrous+dysplasia+of+the+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Copy number alteration profiling facilitates differential diagnosis between ossifying fibroma and fibrous dysplasia of the jaws.</a> International Journal of Oral Science. 13 (1), 21(2021).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat er geen sprake is van belangenverstrengeling.

Dit protocol rapporteerde een pijplijn om OSF-weefselmonsters vast te leggen met morfologische en ruimtelijke informatie voor verdere ruimtelijk-omische analyses door middel van lasermicrodissectie. Op basis van de representatieve resultaten identificeerden we verschillende CNA-patronen tussen verschillende morfologiegerelateerde monsters.
OSF, een type OPMD, is een veel voorkomende precancereuze aandoening van oraal plaveiselcelcarcinoom6. Er is gemeld dat genomische i...

Orale submuceuze fibrose (OSF) is een chronische, verraderlijke ziekte die zich voornamelijk in het mondslijmvlies ontwikkelt en resulteert in een beperkte mondopening. Hoewel OSF een multifactoriële ziekte is, is het kauwen van arecanoten of betelnoten de belangrijkste oorzaak van OSF 2,3. Vanwege deze geografisch specifieke gewoonte is OSF voornamelijk geconcentreerd in populaties in Zuidoost- en Zuid-Azië3. De gemeenschappelijke histologische kenmerken van OSF zijn onder meer abnormale collageenafzetting in het bindweefsel onder het mondslijmvliesepitheel, vasculaire stenose en occlusie1. OSF-epitheelweefsel kan manifestaties van atrofie of hyperplasie en zelfs dysplasie vertonen wanneer het gelijktijdig wordt behandeld met orale leukoplakie 4,5.
OSF wordt door de Wereldgezondheidsorganisatie gedefinieerd als een veel voorkomende orale potentieel kwaadaardige aandoening (OPMD) die het potentieel vertoont om zich te ontwikkelen tot oraal plaveiselcelcarcinoom met een kwaadaardige transformatiesnelheid van 4%-6%6,7,8,9. Het mechanisme dat ten grondslag ligt aan de kwaadaardige transformatie van OSF is complex10. Abnormale groei van het epitheel, waaronder zowel dysplasie als atrofie, verhoogt de kans op carcinogenese, en senescente fibroblasten in het stroma kunnen betrokken zijn bij de kwaadaardige progressie van OSF door epitheliale-mesenchymale overgang (EMT) te induceren via reactieve zuurstofsoorten (ROS) en andere moleculen10.
Technologieën voor ruimtelijk-omische analyses genereerden multi-omische gegevens met morfologische en ruimtelijke informatie die inzicht hebben verschaft in kankermechanismen11,12,13. Hier presenteren we een protocol om morfologie-gerelateerde celpopulaties vast te leggen uit formaline-gefixeerd paraffine-ingebed OSF-weefsel door middel van lasermicrodissectie. Multi-omische analyses van deze monsters kunnen uitdagingen met heterogeniteit binnen het weefsel overwinnen en het begrip van de moleculaire pathologie en mechanismen van kwaadaardige transformatie in OSF14 vergroten.

<table><tbody><tr><td>Adhesion microscope slides</td><td>CITOTEST</td><td>REF.188105</td><td></td></tr><tr><td>Div-haematoxyline</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>Eosine oplossing</td><td>BASO</td><td>BA4098</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>PEKING REAGENT</td><td>Nr.32061</td><td></td></tr><tr><td>Harris hematoxylindisoplossing</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>Heetplaat</td><td>LEICA</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Laser capture microdissectiesysteem</td><td>LEICA</td><td>LMD7</td><td>Machine</td></tr><tr><td>Laser microdissectie microsysteem</td><td>LEICA</td><td>8.2.3.7603</td><td>Software</td></tr><tr><td>Micromount montagemedium</td><td>LEICA</td><td>REF.3801731</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopdekglas</td><td>CITOTEST</td><td>REF.10212450C</td><td></td></tr><tr><td>Microtoom</td><td>LEICA</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>PCR buisjes</td><td>AXYGEN</td><td>16421959</td><td></td></tr><tr><td>PEN-membraan slides</td><td>LEICA</td><td>Nr.11505158</td><td></td></tr><tr><td>Re-blue oplossing</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>Ultrapuur gedistilleerd water</td><td>Invitrogen</td><td>REF.10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Xyleen</td><td>PEKING REAGENT</td><td>Nr.33535</td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie van cellen met morfologische en ruimtelijke informatie uit orale submuceuze fibrosemonsters door middel van microdissectie met laseropname

Isolation of Cells with Morphological and Spatial Information from Oral Submucous Fibrosis Samples by Laser Capture Microdissection

Orale submuceuze fibrose (OSF) is een veel voorkomende vorm van potentieel kwaadaardige aandoening in de mondholte. De atrofie van epitheel en fibrose van de lamina propria en de submucosa worden vaak aangetroffen op histopathologische objectglaasjes. Er werd voorgesteld dat epitheliale dysplasie, epitheliale atrofie en senescente fibroblasten geassocieerd zijn met de kwaadaardige transformatie van OSF. Vanwege de heterogeniteit van potentieel kwaadaardige orale aandoeningen en oraal plaveiselcelcarcinoom, is het echter moeilijk om de specifieke moleculaire mechanismen van kwaadaardige transformatie in OSF te identificeren. Hier presenteren we een methode om een klein aantal epitheel- of mesenchymale cellen te verkrijgen die morfologische gegevens en ruimtelijke informatie dragen door middel van microdissectie met laseropname op in formaline gefixeerde paraffine-ingebedde weefselglaasjes. Met behulp van een microscoop kunnen we op microschaal (~500 cellen) dysplastisch of atrofisch epitheelweefsel en fibrotisch subepitheliaal weefsel nauwkeurig vastleggen. De geëxtraheerde cellen kunnen worden geëvalueerd door genoom- of transcriptoomsequencing om genomische en transcriptomische gegevens met morfologische en ruimtelijke informatie te verkrijgen. Deze aanpak elimineert de heterogeniteit van de sequentiebepaling van OSF-weefsel in bulk en de interferentie veroorzaakt door cellen in niet-laesionele gebieden, waardoor nauwkeurige spatial-omics-analyse van OSF-weefsel mogelijk wordt.

Door lasermicrodissectie van OSF-weefsels uit te voeren, hebben we monsters genomen van dysplastisch epitheel, stroma onder het dysplastische epitheel, atrofisch epitheel en stroma onder atrofisch epitheelweefsel (Figuur 1). Door DNA te extraheren en sequencing van het hele genoom met een lage diepte, waren we in staat om morfologie-gerelateerde veranderingen in het aantal kopieën (CNA) te analyseren15. CNA is een veel voorkomende vorm van genomische instabiliteit die...

Laseropname van microdissectie van orale submuceuze fibroseweefsels maakt nauwkeurige extractie van cellen mogelijk uit histologische regio's die van belang zijn voor de analyse van multi-omics-gegevens met morfologische en ruimtelijke informatie.

Isolatie van cellen met morfologische en ruimtelijke informatie uit orale submuceuze fibrosemonsters door middel van microdissectie met laseropname

Oral submucous fibrosis (OSF) is a common type of potentially malignant disorder in the oral cavity. The atrophy of epithelium and fibrosis of the lamina ...

Onze belangrijkste onderzoeksinteresses zijn de mechanismen van maligne transformatie onder de ontwikkeling van voorspellende modellen van orale, potentieel kwaadaardige aandoeningen zoals orale leukoplakie en orale submuceuze fibrose. Genomische transcriptomische, proteomische en andere multi-omische sequencing-analyse onder deep learning kunstmatige-intelligentiemodellen worden gebruikt om de progressie van orale, mogelijk kwaadaardige aandoeningen naar mondkanker te bestuderen. De huidige sequencing en multi-omics-analyse zijn meestal gebaseerd op bevroren monsters, maar orale, potentieel kwaadaardige aandoeningen zijn meestal formeel gefixeerd in paraffine ingebed weefsel, vaak door biopsie, en ze hebben de noodzaak om experimentele technieken te ontwikkelen op basis van paraffinemonsters.Paraffineweefselmonsters van orale, potentieel kwaadaardige aandoeningen en plaveiselcelcarcinoom zijn in grote aantallen en uit verschillende bronnen beschikbaar, waardoor ze een zeer waardevolle bron voor onderzoek zijn. Alle protocollen kunnen helpen om deze bronnen volledig te gebruiken om de mechanismen van ziekteontwikkeling en kwaadaardige transformatie beter te begrijpen.

isolation-cells-with-morphological-spatial-information-from-oral

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Laser capture microdissectie van weefsel van zoogdieren

The video describes the laser dissection of the 3D organotypic co-culture model with micron-level precision. In 3D organotypic models, stromal constituents such as fibroblasts are 3-dimensionally co-cultured with cancer epithelial cells. The 3D model serves as an experimental tool that enables invasion and cancer-stroma interactions to be studied in near-physiological conditions.

Laser Microdissection: A Technique to Isolate Invading Colorectal Cancer cells from a 3D Organotypic Culture Model

Moleculaire profilering van laser gemicrodissecteerde cellen en stroma van synthetische, weefselengineering darmkanker modellen vertegenwoordigt een nieuwe benadering en manipuleerbaar te karakteriseren en ontleden de kenmerkende biologie op het grensvlak tussen tumorcellen aan de voorzijde en invasieve kanker geassocieerd stromacellen.

Molecular Profiling van de invasieve tumor micro in een 3-dimensionaal model van colorectale kanker cellen en<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fibroblasts

Microdissectie is uitgebreid toegepast voor de behandeling van DNA, RNA en eiwitten in weefsel. Laser capture microscopie (LCM) is de meest gebruikte methode, maar een nieuwe frees-techniek, mesodissection, is sinds kort beschikbaar. We tonen RNA extractie uit mesodissected formaline gefixeerd paraffine-ingebed weefsel slides van Mycobacterium tuberculosis granulomen.

A Novel Microdissection aanpak voor het herstellen<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Specifieke Afschriften van formaline gefixeerde in paraffine ingebedde Lung Granulomen

De isolatie van individuele dopamine neuronen of het ventrale tegmentale met directe of indirecte immunohistochemie wordt aangetoond met behulp van lasermicrodissectie. Parameters voor isolatie van weefsel uit een glasplaatje met een infrarood laser en van membraansystemen dia met de combinatie van infrarood en ultraviolet laser besproken.

Lasermicrodissectie - Een demonstratie van de Isolatie van individuele dopamineneuronen en de Gehele Ventral tegmentum

Genexpressie analyse van een subset van cellen in een specifiek weefsel vormt een grote uitdaging. In dit artikel wordt beschreven hoe u een hoge kwaliteit totaal RNA van een specifieke cel populatie te isoleren door het combineren van een snelle immunolabeling methode met lasermicrodissectie.

RNA isolatie van de Cel specifieke subpopulaties met behulp van laser-capture Microdissection Gecombineerd met Rapid immunolabeling

Hier presenteren we een protocol voor laser-geassisteerde microdissectie van specifieke plantencellen voor transcriptioneel profileren. Hoewel het protocol geschikt is voor verschillende soorten en celtypen, is de focus op zeer ontoegankelijke cellen van de vrouwelijke kiemlijn die belangrijk zijn voor seksuele en apomictische reproductie in het kruisbloemigengeslacht Boechera.

Laser-assisted Microdissection (LAM) als een tool voor Transcriptionele Profiling van individuele cel Types

Het doel van dit protocol is het verkrijgen van hoge-integriteit RNA monsters van darmen ganglia geïsoleerd van nietgefixeerde, vers gereseceerd menselijke intestinale weefsel met behulp van de laser vangt microdissection (LCM). Dit protocol omvat voorbereiding van monsters van menselijke intestinale weefsels, cryosectioning, ethanolbevattend kleuring en uitdroging, LCM, flash-bevroren en RNA extractie.

Optimalisatie van Laser-Capture Microdissection voor de isolatie van darmen Ganglia van menselijk weefsel vers bevroren

Laser microdissectie (LMD) is een gevoelige en zeer reproduceerbare techniek die kan worden gebruikt om paden die glioom heterogeniteit en invasie te bemiddelen blootleggen. Hier beschrijven we een geoptimaliseerd protocol om discrete gebieden te isoleren van glioomweefsel met behulp van laser LMD, gevolgd door transcriptomische analyse.

Laser Capture Microdissection of Glioma Subregions for Spatial and Molecular Characterization of Intratumoral Heterogeneity, Oncostreams, and Invasion

Dit protocol beschrijft een high-throughput workflow voor kunstmatige intelligentie-gedreven segmentatie van pathologie-bevestigde gebieden van belang van gekleurde, dunne weefselsectiebeelden voor verrijking van histologie-opgeloste celpopulaties met behulp van lasermicrodissectie. Deze strategie omvat een nieuw algoritme dat de overdracht van afbakeningen die interessante celpopulaties aangeven, rechtstreeks naar lasermicroscopen mogelijk maakt.

Geïndustrialiseerde, kunstmatige intelligentie-geleide lasermicrodissectie voor proteomische analyse op microschaal van de tumormicro-omgeving

Leer laseropname-microdissectie voor orale submuceuze fibrose om cellen met morfologische en ruimtelijke informatie te isoleren. Deze methode ondersteunt multi-omics analyse van paraffine-ingebette weefsels.

Isolatie van cellen met morfologische en ruimtelijke informatie uit orale submuceuze fibrosemonsters door middel van microdissectie met laseropname (Video) | JoVE Journal

Isolatie van cellen met morfologische en ruimtelijke informatie uit orale submuceuze fibrosemonsters door middel van microdissectie met laseropname

Meer video's verkennen