Name: Celvrij eiwitsynthesesysteem voor het bouwen van synthetische cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Leer een celvrij eiwitsynthesesysteem opbouwen voor synthetische celonderzoek met microfluidische apparaten en biocompatibele materialen. Deze methode ondersteunt modulaire celmimiek en minimal celontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>CFPS-protocollen voor micro-gecompartimenteerde synthetische cellen

```html
<table>
<tbody>
<tr>
<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-fosfocholine(DOPC)</td>
<td>Avanti</td>
<td>850375P</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-fosfo-L-serine (natriumzout)(DOPS)</td>
<td>Avanti</td>
<td>840035P</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>1,4 dithiothreitol (DTT)</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>1.11474</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfocholine (POPC)</td>
<td>Avanti</td>
<td>850457P</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>3,5-cyclisch AMP (cAMP)</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A9501</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>50 mL buisjes</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>Eppendorf Tubes BioBased</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>50% waterstofperoxide</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>516813</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Azetaat</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A6283</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Agar poeder</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>05040</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Alanine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A4349</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Amicon Stirred Cells</td>
<td>MerckMillipore</td>
<td>UFSC05001</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ammoniumacetaat (NH4OAc)</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A7262</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Arginine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A4474</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Asparagine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A0884</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Aspartaat</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A5474</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>ATP</td>
<td>Roche</td>
<td>11140965001</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Atto 488 DOPE</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>67335</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Atto 647N DOPE</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>42247</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Baffled Erlenmeyer kolf</td>
<td>Shuniu</td>
<td>250 mL, 1000mL</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Bos Serum Albumine(BSA)</td>
<td>Roche</td>
<td>10711454001</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifugebuis</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>Eppendorf Tubes 3810X</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifugebuis houder</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>0030119819</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Chemiluminescentie en epifluorescentie beeldvormingssysteem</td>
<td>Uvitec</td>
<td>Alliance Q9 Advanced</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Chloorform</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>288306</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Confocale Laser Scanning Microscopie (LSM)</td>
<td>ZEISS</td>
<td>LSM 780</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Countess Celtellingskamer Slides</td>
<td>Thermo Fisher Scientific</td>
<td>C10283</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Dekglas</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>Menzel BB02400500A113MNZ0</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>creatine kinase (CK)</td>
<td>Roche</td>
<td>10127566001</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Creatinefosfaat (CP)</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>10621714001</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Kweekschotel</td>
<td>Huanqiu</td>
<td>90 mm</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Cysteine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>C5360</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Cytidine 5'-trifosfaat dinatriumzout (CTP)</td>
<td>aladdin</td>
<td>C101487</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Dialyse membraan</td>
<td>Spectrum</td>
<td>Standard RC Tubing MWCO: 12-14 kD</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>E.Z.N.A. Cycle Pure Kit</td>
<td>Omega Bio-Tek</td>
<td>D6492-01</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Elektro-verwarmingsstaande temperatuur Cultivator</td>
<td>Yiheng instrument</td>
<td>DHP-9602</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ethyleendiaminetetraazijnzuur(EDTA)</td>
<td>Biosharp</td>
<td>1100027</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Fluorescente platenlezer</td>
<td>BioTek</td>
<td>Synergy 2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Gefluoreerde olie</td>
<td>Suzhou CChip wetenschappelijk instrument</td>
<td>2%HFE7500</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Folinezuur</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>47612</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>French Press</td>
<td>G.Heinemann</td>
<td>HTU-DIGI-Press</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G7021</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamaat</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G5667</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G5792</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Glycerol</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G5516</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G7126</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Guanosine 5'-trifosfaat natriumzout hydraat(GTP)</td>
<td>Roche</td>
<td>10106399001</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>H3375</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>HiPrep Q FF 16/10</td>
<td>Cytiva</td>
<td>28936543</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Histidine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>H6034</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Isoleucine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>I5281</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Isopropyl-β-D-thiogalactopyranosid (IPTG)</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>I5502</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>K2HPO4</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P8281</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>KH2PO4</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P5655</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Leucine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>L6914</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Lysine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>L5501</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Magnesiumacetaat tetrahydraat (Mg(OAc)2)</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>M5661</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Magnesiumchloride(MgCl2)</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>M2670</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Methionine</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>M8439</td>
<td></td>
</tr>

celvrij eiwitsynthesesysteem voor het bouwen van synthetische cellen

Cell-Free Protein Synthesis System for Building Synthetic Cells

Celvrij eiwitsynthesesysteem voor het bouwen van synthetische cellen

The Cell-Free Protein Synthesis (CFPS) system has been widely employed to facilitate the bottom-up assembly of synthetic cells. It serves as the host for ...

cell-free-protein-synthesis-system-for-building-synthetic-cells

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Deze vijfdaagse protocol beschrijft alle stappen, apparatuur en aanvullende software voor het maken en uitvoeren van een efficiënte endogene Escherichia coli op basis TX-TL-cel-vrije expressie systeem vanaf nul. Met reagentia, het protocol duurt 8 uur of minder voor het inrichten van een reactie, verzamelen en verwerken van gegevens.

Protocollen voor implementatie van een Escherichia coli Op basis TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Hierin beschrijven we eenvoudige werkwijzen voor de bereiding van vesicles, de inkapseling van transcriptie en translatie, en de controle van eiwitproductie. De verkregen celvrije systemen kunnen worden gebruikt als een uitgangspunt steeds complexe cellulaire nabootst.

De inkapseling van de Cell-free transcriptie en vertaling Machines in Blaasjes voor de bouw van Cellular Mimics

Op een ondergrond, die kan worden gebruikt voor het uitvoeren van cel-vrije gen expressie experimenten op biochips beschrijven we een eenvoudige lithografische procedure voor de immobilisatie van gen-lengte DNA moleculen.

Functionele oppervlak-immobilisatie van genen met behulp van meerstaps Strand Displacement lithografie

Dit protocol detailleert de stappen, kosten, en apparatuur die nodig is voor het genereren van E. coli-op basis van cel extracten en uit te voeren in vitro eiwit synthese reacties binnen 4 dagen of minder. Om de invloed van de flexibele aard van dit platform voor brede toepassingen, bespreken we reactie voorwaarden die kunnen worden aangepast en geoptimaliseerd.

Escherichia coli-cel-Free eiwitsynthese gebaseerd: protocollen voor een robuuste, flexibele en toegankelijk platformtechnologie

Dit protocol beschrijft de methode, materialen, apparatuur en stappen voor bottom-up voorbereiding van RNA en eiwit produceren synthetische cellen. Het binnenste waterige compartiment van de synthetische cellen bevatte de S30 bacteriële lysaat ingekapseld in een lipide tweelaag (dat wil zeggen, stabiele liposomen), met behulp van een water-in-olie emulsie overdracht methode.

Voorbereiding van eiwit producerende synthetische cellen met behulp van cell free bacteriële extracten, liposomen en emulsie transfer

We presenteren een snelle en kosteneffectieve methode om het recombinante PURE celvrije TX-TL-systeem te produceren met behulp van standaard laboratoriumapparatuur.

OnePot PURE Celvrij Systeem

De studie beschrijft een protocol voor het maken van grote (μg-mg) hoeveelheden DNA voor eiwitscreeningcampagnes uit synthetische genfragmenten zonder klonen of het gebruik van levende cellen. De minimale sjabloon wordt enzymatisch verteerd en gecicirkeld en vervolgens versterkt met behulp van isothermische rollende cirkelversterking. Celvrije expressiereacties konden worden uitgevoerd met het ongezuiverde product.

Snelle, enzymatische methoden voor versterking van minimale, lineaire sjablonen voor eiwitprototypering met behulp van celvrije systemen

Goed gekarakteriseerde genetische delen zijn noodzakelijk voor het ontwerp van nieuwe genetische circuits. Hier beschrijven we een kosteneffectieve, high-throughput methode voor het snel karakteriseren van genetische delen. Onze methode vermindert kosten en tijd door celvrije lysaten, lineair DNA om klonen te voorkomen en akoestische vloeistofverwerking te combineren om de doorvoer te verhogen en reactievolumes te verminderen.

Snelle karakterisering van genetische delen met celvrije systemen

Dit werk beschrijft de bereiding van celextract van Escherichia coli (E. coli) gevolgd door celvrije eiwitsynthese (CFPS) reacties in minder dan 24 uur. Uitleg van het celvrije auto-inductie (CFAI) protocol beschrijft verbeteringen die zijn aangebracht om het toezicht van onderzoekers te verminderen en de verkregen hoeveelheden celextract te verhogen.

Van cellen naar celvrije eiwitsynthese binnen 24 uur met behulp van celvrije auto-inductieworkflow

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor de bereiding en bufferkalibratie van celextracten uit exonuclease V knock-out stammen van Escherichia coli BL21 Rosetta2 (ΔrecBCD en ΔrecB). Dit is een snelle, eenvoudige en directe benadering voor expressie in celvrije eiwitsynthesesystemen met behulp van lineaire DNA-sjablonen.

Celvrije eiwitsynthese uit exonuclease-deficiënte cellulaire extracten met behulp van lineaire DNA-sjablonen

We presenteren een geactualiseerd protocol voor de productie van het OnePot 'Protein synthesis Using Recombinant Elements' (PURE)-systeem en ruwe ribosomen voor celvrije eiwitsynthese, met de nadruk op het beheersen van celgroei om batch-tot-batchvariaties te minimaliseren.

Verfijning van de productie van OnePot PURE en ruwe ribosomen voor reproduceerbare celvrije eiwitsynthese

Leer een celvrij eiwitsynthesesysteem opbouwen voor synthetische celonderzoek met microfluidische apparaten en biocompatibele materialen. Deze methode ondersteunt modulaire celmimiek en minimal celontwikkeling.

Celvrij eiwitsynthesesysteem voor het bouwen van synthetische cellen

Meer video's verkennen