Name: Isolatie, uitbreiding en differentiatie van fibro-adipogene voorlopers van het stekelige muismodel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T12:20:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Leer de isolatie van fibro-adipogene voorlopers uit spitsmuizen met enzymatische dissociatie en FACS. Dit protocol biedt betrouwbare celopbrengst en differentiatie naar myofibroblasten en adipocyten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Vertering van muizenhart en skeletspieren voor fibro-adipogene voorlopercultuur

<ol><li>Gaire, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiny+mouse+%28Acomys%29%3A+An+emerging+research+organism+for+regenerative+medicine+with+applications+beyond+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Spiny mouse (Acomys): An emerging research organism for regenerative medicine with applications beyond the skin.</a> NPJ Regen Med. 6, 1(2021).</li>
<li>Sandoval, A. G. W., Maden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+in+the+spiny+mouse%2C+Acomys%2C+a+new+mammalian+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Regeneration in the spiny mouse, Acomys, a new mammalian model.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 64, 31-36 (2020).</li>
<li>Judson, R. N., Zhang, R. H., Rossi, F. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+mesenchymal+stem%2Fprogenitor+cells+in+skeletal+muscle%3A+Collaborators+or+saboteurs%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident mesenchymal stem/progenitor cells in skeletal muscle: Collaborators or saboteurs.</a> FEBS J. 280 (17), 4100-4108 (2013).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipogenesis+originate+from+a+common+mesenchymal+progenitor+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle.</a> J Cell Sci. 124, 3654-3664 (2011).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S. I., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nat Cell Biol. 122 (12), 143-152 (2010).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+Potential+of+Hic1-Expressing+Cardiac+Stromal+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Pathogenic Potential of Hic1-Expressing Cardiac Stromal Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 26 (2), 205-220 (2020).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10, 1-15 (2021).</li>
<li>Gawriluk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ear-hole+closure+identifies+epimorphic+regeneration+as+a+discrete+trait+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ear-hole closure identifies epimorphic regeneration as a discrete trait in mammals.</a> Nat Commun. 71 (7), 1-16 (2016).</li>
<li>Seifert, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+shedding+and+tissue+regeneration+in+African+spiny+mice+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys).</a> Nature. 489, 561(2012).</li>
<li>Koopmans, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+tolerance+and+cardiac+repair+in+the+spiny+mouse+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemic tolerance and cardiac repair in the spiny mouse (Acomys).</a> NPJ Regen Med. 6, 78(2021).</li>
<li>Peng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+spiny+mice+%28Acomys%29+exhibit+endogenous+cardiac+recovery+in+response+to+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Adult spiny mice (Acomys) exhibit endogenous cardiac recovery in response to myocardial infarction.</a> NPJ Regen Med. 6, 74(2021).</li>
<li>Maden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfect+chronic+skeletal+muscle+regeneration+in+adult+spiny+mice%2C+Acomys+cahirinus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Perfect chronic skeletal muscle regeneration in adult spiny mice, Acomys cahirinus.</a> Sci Rep. 8, 8920(2018).</li>
<li>Riparini, G., Simone, J. M., Sartorelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-isolation+and+culture+of+fibro-adipogenic+progenitors+and+muscle+stem+cells+from+unperturbed+and+injured+mouse+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">FACS-isolation and culture of fibro-adipogenic progenitors and muscle stem cells from unperturbed and injured mouse skeletal muscle.</a> J Vis Exp. (184), e63983(2022).</li>
<li>Low, M., Eisner, C., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro%2Fadipogenic+progenitors+%28FAPs%29%3A+Isolation+by+FACS+and+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro/adipogenic progenitors (FAPs): Isolation by FACS and culture.</a> Methods Mol Biol. 1556, 179-189 (2017).</li>
<li>Molina, T., Fabre, P., Dumont, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+in+skeletal+muscle+homeostasis%2C+regeneration+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors in skeletal muscle homeostasis, regeneration and diseases.</a> Open Biol. 11 (12), 210110(2021).</li>
<li>Contreras, O., Rossi, F. M. V., Theret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins%2C+potency%2C+and+heterogeneity+of+skeletal+muscle+fibro-adipogenic+progenitors-time+for+new+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Skelet+Muscle%22%5BJournal%5D)">Origins, potency, and heterogeneity of skeletal muscle fibro-adipogenic progenitors-time for new definitions.</a> Skelet Muscle. 111 (11), 1-25 (2021).</li>
<li>Fitzgerald, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MME%2B+fibro-adipogenic+progenitors+are+the+dominant+adipogenic+population+during+fatty+infiltration+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">MME+ fibro-adipogenic progenitors are the dominant adipogenic population during fatty infiltration in human skeletal muscle.</a> Commun Biol. 61 (6), 1-21 (2023).</li>
<li>Babaeijandaghi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPPIV%2B+fibro-adipogenic+progenitors+form+the+niche+of+adult+skeletal+muscle+self-renewing+resident+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">DPPIV+ fibro-adipogenic progenitors form the niche of adult skeletal muscle self-renewing resident macrophages.</a> Nat Commun. 141 (14), 1-10 (2023).</li>
<li>Schutz, P. W., Cheung, S., Yi, L., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+activation+patterns+of+CD10%2B+fibro-adipogenic+progenitors+across+acquired+disease+states+in+human+skeletal+muscle+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Cellular activation patterns of CD10+ fibro-adipogenic progenitors across acquired disease states in human skeletal muscle biopsies.</a> Free Neuropathol. 5, 3-3 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5M EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575&ndash;038</td><td></td></tr><tr><td>1.7 mL Microcentrifuge tubes</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>15&nbsp;mL centrifuge tube</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>1x Dulbecco&rsquo;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>20 mL syringe</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>40&nbsp;&mu;m cell strainer</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>48 well flat-bottom tissue culture plate</td><td>Falcon</td><td>53078</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polypropylene</td><td>Falcon</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polystyrene round-bottom tube with cell-strainer cap</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>5 mL syringe</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50&nbsp;mL centrifuge tube</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petri dish</td><td>Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>96 well V-bottom tissue culture plate</td><td>Corning</td><td>3894</td><td></td></tr><tr><td>Acomys dimidiatus muizen (stekelmuizen)</td><td></td><td></td><td>vriendelijk ter beschikking gesteld door Dr. Ashley W. Seifert (University of Kentucky).</td></tr><tr><td>Ammonium-chloride-kalium (ACK) lysing buffer</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Anti-perilipin (1:100)</td><td>Sigma</td><td>P1873</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SMA (1:100)</td><td>Invitrogen</td><td>14-9760-82</td><td></td></tr><tr><td>APC PDGFRa (1:800)</td><td>Abcam</td><td>ab270085</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Needle 18 G</td><td>BD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Needle 23 G</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma</td><td>A7906-100g</td><td></td></tr><tr><td>BV605 CD31 (1:500)</td><td>BD biosciences</td><td>744359</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-mouse Alexa 555 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31570</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-rabbit Alexa 647 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>Donkey serum</td><td>Sigma</td><td>S30-100ML</td><td></td></tr><tr><td>FACS sorter - MoFlo Astrios 5 lasers</td><td>Beckman coulter</td><td>B52102</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gemini</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Fine scissors</td><td>FST</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>FST</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>FST</td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>human FGF-basic recombinant protein (bFGF)</td><td>Gibco</td><td>13256029</td><td></td></tr><tr><td>Human TGF beta 1 recombinant protein (TGFb1)</td><td>eBiosciences</td><td>14-8348-62</td><td></td></tr><tr><td>Incubator - Heracell 160i CO2</td><td>ThermoFisher</td><td>51033557</td><td></td></tr><tr><td>Inverted microscope - Revolve</td><td>ECHO</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Roche</td><td>5401127001</td><td></td></tr><tr><td>Mouse MesenCult Adipogenic Differentiation 10x Supplement</td><td>STEMCELL technologies</td><td>5507</td><td></td></tr><tr><td>Mouse on mouse (MOM) blocking reagent</td><td>Vector Laboratories</td><td>MKB-2213</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma</td><td>P1648-500g</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140&ndash;122</td><td></td></tr><tr><td>PicoLab Mouse Diet 20</td><td>LabDiet</td><td>3005750-220</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iodide (PI)</td><td>Invitrogen</td><td>P3566</td><td></td></tr><tr><td>Transport vial 5mL tube</td><td>Caplugs Evergreen</td><td>222-3005-080</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie, uitbreiding en differentiatie van fibro-adipogene voorlopers van het stekelige muismodel

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model

Isolatie, uitbreiding en differentiatie van fibro-adipogene voorlopers van het stekelige muismodel

Due to its exceptional repair program, the spiny mouse is an emerging research model for regenerative medicine. Fibro-adipogenic progenitors are ...

fibro-adipogenic-progenitor-isolation-expansion-differentiation-from

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Hier worden een methode beschreven voor het isoleren van Adipocyte Progenitor Cell (APC) populaties uit Perivascular Adipose Tissue (PVAT) met behulp van Magnetisch-geactiveerde Cell Sorting (MCS). Deze methode zorgt voor een verhoogde isolatie van APC per gram vetweefsel in vergelijking met Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS).

Uitbreiding en Adipogenese Inductie van Adipocyt Progenitors van Perivasculaire Adipose Weefsel Geïsoleerd door Magnetische Geactiveerde Cell Sorting

Dit protocol beschrijft de technische benadering om adipogene en fibro-inflammatoire stromale celsubpopulaties te isoleren uit intra-abdominale witte vetweefseldepots (WAT) van muizen door middel van fluorescentie-geactiveerde celsortering of immunomagnetische parelscheiding.

Isolatie van adipogene en fibro-inflammatoire stromale celsubpopulaties uit intra-abdominale vetdepots van muizen

We presenteren een eenvoudige methode om zeer levensvatbare adipose voorlopercellen te isoleren van epididymale vetkussens van muizen met behulp van fluorescentie geactiveerde celsortering.

Voorbereiding van adipose voorlopercellen van muis epididymale vetweefsels

Dit rapport beschrijft een protocol voor de gelijktijdige isolatie van primaire bruine en witte preadipocyten van pasgeboren muizen. Geïsoleerde cellen kunnen in cultuur worden gekweekt en worden geïnduceerd om zich te onderscheiden in volgroeide witte en bruine adipocyten. De methode maakt genetische, moleculaire en functionele karakterisering van primaire vetcellen in cultuur mogelijk.

Isolatie en differentiatie van primaire witte en bruine preadipocyten van pasgeboren muizen

Dit protocol beschrijft de isolatie van muis preadipocyten uit onderhuids vet, hun differentiatie in volwassen adipocyten en de inductie van insulineresistentie. De werking van insuline wordt geëvalueerd door de fosforylering/activering van leden van de insulinesignaleringsroute door western blot. Deze methode maakt directe bepaling van insulineresistentie/gevoeligheid in primaire adipocyten mogelijk.

Gedifferentieerde muis adipocyten in primaire cultuur: een model van insulineresistentie

De precieze identificatie van fibro-adipogene voorlopercellen (FAPs) en spierstamcellen (MuSC's) is van cruciaal belang voor het bestuderen van hun biologische functie in fysiologische en pathologische omstandigheden. Dit protocol biedt richtlijnen voor de isolatie, zuivering en cultuur van FAPs en MuSC's van volwassen muisspieren.

FACS-isolatie en kweek van fibro-adipogene voorlopers en spierstamcellen van onverstoorbare en gewonde muizenskeletspieren

Preadipocyten worden geïsoleerd uit de stromale vasculaire fractie van interscapulier bruin vetweefsel van pasgeboren muizen en gedifferentieerd tot cellen die lipidedruppeltjes accumuleren, moleculaire markers tot expressie brengen en de mitochondriale morfologie van volwassen bruine vetcellen vertonen. Deze cellen worden verder geanalyseerd door middel van immunofluorescentie en transmissie-elektronenmicroscopie.

Differentiatie en beeldvorming van bruine vetcellen uit de stromale vasculaire fractie van interscapulier vetweefsel van pasgeboren muizen

Dit protocol beschrijft de semi-geautomatiseerde isolatie van de stromale vasculaire fractie (SVF) uit muizenvetweefsel om preadipocyten te verkrijgen en adipocytendifferentiatie in vitro te bereiken. Het gebruik van een weefseldissociator voor collagenasevertering vermindert experimentele variatie en verhoogt de reproduceerbaarheid.

Semi-geautomatiseerde isolatie van de stromale vasculaire fractie uit muizenwit vetweefsel met behulp van een weefseldissociator

Hier beschrijven we de isolatie, kweek en adipogene inductie van stromale vasculaire fractie-afgeleide preadipocyten uit periaorta-vetweefsel van muizen, waardoor de perivasculaire vetweefselfunctie en de relatie met vasculaire cellen kunnen worden bestudeerd.

Isolatie, kweek en adipogene inductie van van stromale vasculaire fractie afgeleide preadipocyten uit periiaorta-vetweefsel van muizen

De grootte en kwetsbaarheid van rijpe vetcellen hebben de technieken en hulpmiddelen die beschikbaar zijn voor hun studie en isolatie beperkt. Hier wordt een protocol beschreven voor de isolatie van rijpe muizenadipocyten, dat gemakkelijk kan worden aangepast voor verschillende vetdepots en muizendiëten.

Isolatie en kweek van primaire adipocyten van muizen van magere en zwaarlijvige muizen

Leer de isolatie van fibro-adipogene voorlopers uit spitsmuizen met enzymatische dissociatie en FACS. Dit protocol biedt betrouwbare celopbrengst en differentiatie naar myofibroblasten en adipocyten.

Isolatie, uitbreiding en differentiatie van fibro-adipogene voorlopers van het stekelige muismodel

Meer video's verkennen