Name: Laboratoriumonderhoud van de onderste dipteravlieg Bradysia (Sciara) coprophila: een nieuw/oud opkomend modelorganisme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 26 s
Description: Leer laboratoriumonderhoud van Bradysia coprophila voor genetisch en ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze protocollen omvatten kruisingen, voeding en het voorkomen van schimmelgroei.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Speciale dank aan eerdere B. coprophila veehouders (Jacob E. Bliss, Paula Bonazinga, Anne W. Kerrebrock, Ingrid M. Mercer, Heidi S. Smith) en onderzoekspersoneel (vooral Robert Baird, Michael S. Foulk, Donna Kubai, John M. Urban, Yutaka Yamamoto) voor het verfijnen van de houderijprotocollen. De eerste instructies over de verzorging van B. coprophila werden gegeven door Helen V. Crouse, Natalia Gabrusewycz-Garcia, Reba M. Goodman, Charles W. Metz en Ellen Rasch. Met dank aan Yukiko Yamashita en Anne W. Kerrebrock voor het overnemen van het Bradysia (Sciara) voorraadcentrum. Veel waardering voor de volgende personen voor hun behulpzame voorbereiding van de figuren: Brian Wiegmann (Figuur 1), John M. Urban (Figuur 4 bovenpaneel), Laura Ross (Figuur 4 onderpaneel), Yutaka Yamamoto (Figuur 5 linkerpaneel), Leo Kadota (Figuur 7 en Figuur 8). Veel dank aan Ava Filiss en het Brown University Multidisciplinary Laboratory voor hun hulp bij het fotograferen en filmen. Met dank aan Robert Baird voor zijn commentaar op dit manuscript. Ons onderzoek en onderhoud van B. coprophila is ondersteund door NIH en NSF, inclusief de meest recente steun van NIH GM121455 aan S.A.G. Verdere details over B. coprophila zijn beschikbaar op de Bradysia (Sciara) Stock Center websites (https://sites.brown.edu/sciara/ en https://sciara.wi.mit.edu) die momenteel worden gebouwd.

Bradysia coprophila Lab Protocols and Chromosomal Research

<ol><li>Lewin, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Earth+BioGenome+project%3A+Sequencing+life+for+the+future+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Earth BioGenome project: Sequencing life for the future of life.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 115 (17), 4325-4333 (2018).</li>
<li>Wiegmann, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Episodic+radiations+in+the+fly+tree+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Episodic radiations in the fly tree of life.</a> Proc Nat Acad Sci USA. 108 (14), 5690-5695 (2011).</li>
<li>Yeates, D. K., Wiegmann, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeny+of+Diptera%5BTitle%5D)+AND+%22Manual+of+Afrotropical+Diptera.Suricata%22%5BJournal%5D)">Phylogeny of Diptera.</a> Manual of Afrotropical Diptera.Suricata. 3, 149-161 (2017).</li>
<li>Vilkamaa, P., Burdíková, N., Ševčík, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genus+Spinopygina+gen.+nov.+%28Diptera%2C+Sciaridae%29+from+Western+North+America%3A+Preliminary+molecular+phylogeny+and+description+of+seven+new+species%5BTitle%5D)+AND+%22Insects%22%5BJournal%5D)">The genus Spinopygina gen. nov. (Diptera, Sciaridae) from Western North America: Preliminary molecular phylogeny and description of seven new species.</a> Insects. 14 (2), 173(2023).</li>
<li>Metz, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+behavior%2C+inheritance+and+sex+determination+in+Sciara%5BTitle%5D)+AND+%22Amer+Naturalist%22%5BJournal%5D)">Chromosome behavior, inheritance and sex determination in Sciara.</a> Amer Naturalist. 72 (743), 485-520 (1938).</li>
<li>Gerbi, S. A. Unusual chromosome movements in Sciarid flies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGerbi%2C+SA+%22Results+and+Problems+in+Cell+Differentiation.+Vol+13+Germ+Line+-+Soma+Differentiation%22">Results and Problems in Cell Differentiation. Vol 13 Germ Line - Soma Differentiation</a>. Hennig, N. 13, Springer-Verlag. Berlin, Heidelberg. 71-104 (1986).</li>
<li>Gerbi, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-random+chromosome+segregation+and+chromosome+eliminations+in+the+fly+Bradysia+%28Sciara%29%5BTitle%5D)+AND+%2234%3BNon-Mendelian+Inheritance+and+Meiotic+Drive.%26%2334%3B%2C+Chromosome+Research.%28special+issue%29%22%5BJournal%5D)">Non-random chromosome segregation and chromosome eliminations in the fly Bradysia (Sciara).</a> 34;Non-Mendelian Inheritance and Meiotic Drive.&#34;, Chromosome Research.(special issue). Larracuente, A., Hanlon, S. 30, 273-288 (2022).</li>
<li>Steffan, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+generic+revision+of+the+family+Sciaridae+%28Diptera%29+of+America+North+of+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22University+of+California+Publications+in+Entomology%22%5BJournal%5D)">A generic revision of the family Sciaridae (Diptera) of America North of Mexico.</a> University of California Publications in Entomology. 44, 1-77 (1966).</li>
<li>Shin, S., Jung, S., Menzel, F., Heller, K., Lee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+phylogeny+of+black+fungus+gnats+%28Diptera%3A+Sciaroidea%3A+Sciaridae%29+and+the+evolution+of+larval+habitats%5BTitle%5D)+AND+%22Molec+Phylogenetics+Evolution%22%5BJournal%5D)">Molecular phylogeny of black fungus gnats (Diptera: Sciaroidea: Sciaridae) and the evolution of larval habitats.</a> Molec Phylogenetics Evolution. 66 (3), 833-846 (2013).</li>
<li>Mohrig, W., Heller, K., Hippa, H., Vilkamaa, P., Menzel, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revision+of+the+black+fungus+gnats+%28Diptera%3A+Sciaridae%29+of+North+America%5BTitle%5D)+AND+%22Studia+Dipterologica%22%5BJournal%5D)">Revision of the black fungus gnats (Diptera: Sciaridae) of North America.</a> Studia Dipterologica. 19 (1-2), 141-286 (2013).</li>
<li>Ševčík, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+phylogeny+of+the+megadiverse+insect+infraorder+Bibionomorpha+sensu+lato+%28Diptera%29%5BTitle%5D)+AND+%22PeerJ%22%5BJournal%5D)">Molecular phylogeny of the megadiverse insect infraorder Bibionomorpha sensu lato (Diptera).</a> PeerJ. 4, e2563(2016).</li>
<li>Menzel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudolycoriella+hygida+%28Sauaia+and+Alves%29-An+overview+of+a+model+organism+in+genetics%2C+with+new+aspects+in+morphology+and+systematics%5BTitle%5D)+AND+%22Insects%22%5BJournal%5D)">Pseudolycoriella hygida (Sauaia and Alves)-An overview of a model organism in genetics, with new aspects in morphology and systematics.</a> Insects. 15 (2), 118(2024).</li>
<li>Meigen, J. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeigen%2C+JW+%22Klassifikazion+und+Beschreibung+der+europ%C3%A4ischen+zweifl%C3%BCgligen+Insekten+%28Diptera+Linn%29%22">Klassifikazion und Beschreibung der europäischen zweiflügligen Insekten (Diptera Linn)</a>. 1 (1), Karl Reichard. Braunschweig. (1804).</li>
<li>Johannsen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fungus+gnats+of+North+America+part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Maine+Agricultural+Experimental+Station+Bulletin%22%5BJournal%5D)">The fungus gnats of North America part I.</a> Maine Agricultural Experimental Station Bulletin. 172, 209-276 (1909).</li>
<li>Johannsen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycetophilidae+of+North+America%5BTitle%5D)+AND+%22Maine+Agricultural+Experimental+Station+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Mycetophilidae of North America.</a> Maine Agricultural Experimental Station Bulletin. 200, 57-146 (1912).</li>
<li>Urban, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bradysia+%28Sciara%29+coprophila+larvae+up-regulate+DNA+repair+pathways+and+down-regulate+developmental+regulators+in+response+to+ionizing+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Bradysia (Sciara) coprophila larvae up-regulate DNA repair pathways and down-regulate developmental regulators in response to ionizing radiation.</a> Genetics. (3), (2024).</li>
<li>Hodson, C. N., Jaron, K. S., Gerbi, S., Ross, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-rich+germline-restricted+chromosomes+in+black-winged+fungus+gnats+evolved+through+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Gene-rich germline-restricted chromosomes in black-winged fungus gnats evolved through hybridization.</a> PLoS Biology. 20 (2), e3001559(2021).</li>
<li>Urban, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+contiguity+de+novo+genome+assembly+and+DNA+modification+analyses+for+the+fungus+fly%2C+Sciara+coprophila%2C+using+single-molecule+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">High contiguity de novo genome assembly and DNA modification analyses for the fungus fly, Sciara coprophila, using single-molecule sequencing.</a> BMC Genomics. 22, 643(2021).</li>
<li>Baird, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+evolution+of+a+maternally+acting+sex-determining+supergene+in+a+fly+with+single-sex+broods%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Evol%22%5BJournal%5D)">Recent evolution of a maternally acting sex-determining supergene in a fly with single-sex broods.</a> Mol Biol Evol. 40 (7), (2023).</li>
<li>Yamamoto, Y., Gerbi, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+ends+meet%3A+targeted+integration+of+DNA+fragments+by+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Making ends meet: targeted integration of DNA fragments by genome editing.</a> Chromosoma. 127 (4), 405-420 (2018).</li>
<li>Yamamoto, Y., Gerbi, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+transformation+for+genome+editing+of+an+emerging+model+organism%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Development of transformation for genome editing of an emerging model organism.</a> Genes. 13 (7), 1108-1124 (2022).</li>
<li>Metz, C. W., Smith, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+observation+on+the+nature+of+the+x-prime+%28X%27%29+chromosome+in+Sciara%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Further observation on the nature of the x-prime (X') chromosome in Sciara.</a> Proc Nat Acad Sci USA. 17 (4), 195-198 (1931).</li>
<li>Crouse, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+induced+sex-linked+recessive+lethals+and+visibles+in+Sciara+coprophila%5BTitle%5D)+AND+%22Amer+Naturalist%22%5BJournal%5D)">X-ray induced sex-linked recessive lethals and visibles in Sciara coprophila.</a> Amer Naturalist. 95 (880), 21-26 (1961).</li>
<li>Metz, C. W., Ullian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+identification+of+the+sex+chromosomes+in+Sciara+%28Diptera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Genetic identification of the sex chromosomes in Sciara (Diptera).</a> Proc Nat Acad Sci USA. 15 (2), 82-85 (1929).</li>
<li>Crouse, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X+heterochromatin+subdivision+and+cytogenetic+analysis+in+Sciara+coprophila+%28Diptera%2C+Sciaridae%29.+I.+Centromere+localization%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">X heterochromatin subdivision and cytogenetic analysis in Sciara coprophila (Diptera, Sciaridae). I. Centromere localization.</a> Chromosoma. 63, 39-55 (1977).</li>
<li>Crouse, H. V., Gerbi, S. A., Liang, C. M., Magnus, L., Mercer, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+ribosomal+DNA+within+the+proximal+X+heterochromatin+of+Sciara+coprophila+%28Diptera%2C+Sciaridae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Localization of ribosomal DNA within the proximal X heterochromatin of Sciara coprophila (Diptera, Sciaridae).</a> Chromosoma. 64 (4), 305-318 (1977).</li>
<li>Crouse, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X+heterochromatin+subdivision+and+cytogenetic+analysis+in+Sciara+coprophila+%28Diptera%2C+Sciaridae%29.+II.+The+controlling+element%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">X heterochromatin subdivision and cytogenetic analysis in Sciara coprophila (Diptera, Sciaridae). II. The controlling element.</a> Chromosoma. 74, 219-239 (1979).</li>
<li>Mok, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+the+DNA+puff+expanded+state+is+independent+of+active+replication+and+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Maintenance of the DNA puff expanded state is independent of active replication and transcription.</a> Chromosoma. 110 (3), 186-196 (2001).</li>
<li>Smith-Stocking, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+studies+on+selective+segregation+of+chromosomes+in+Sciara+coprophila+Lintner%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic studies on selective segregation of chromosomes in Sciara coprophila Lintner.</a> Genetics. 21 (4), 421-443 (1936).</li>
<li>Gabrusewycz-Garcia, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytological+and+autoradiographic+studies+in+Sciara+coprophila+salivary+gland+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Cytological and autoradiographic studies in Sciara coprophila salivary gland chromosomes.</a> Chromosoma. 15, 312-344 (1964).</li>
<li>Wu, N., Liang, C., DiBartolomeis, S. M., Smith, H. S., Gerbi, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+progression+of+DNA+puffs+in+Sciara+coprophila%3A+amplification+and+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Developmental progression of DNA puffs in Sciara coprophila: amplification and transcription.</a> Dev Biol. 160 (1), 73-84 (1993).</li>
<li>Yamamoto, Y., Gustafson, E. A., Foulk, M. S., Smith, H. S., Gerbi, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+evolution+of+a+DNA+replication+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Anatomy and evolution of a DNA replication origin.</a> Chromosoma. 130 (2-3), 199-214 (2021).</li>
<li>Misof, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenomics+resolves+the+timing+and+pattern+of+insect+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Phylogenomics resolves the timing and pattern of insect evolution.</a> Science. 346 (6210), 763-767 (2014).</li>
<li>Bertone, M. A., Courtney, G. W., Wiegmann, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetics+and+temporal+diversification+of+the+earliest+true+flies+%28Insecta%3A+Diptera%29+based+on+multiple+nuclear+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Syst+Entomol%22%5BJournal%5D)">Phylogenetics and temporal diversification of the earliest true flies (Insecta: Diptera) based on multiple nuclear genes.</a> Syst Entomol. 33, 668-687 (2008).</li>
<li>de Saint Phalle, B., Sullivan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incomplete+sister+chromatid+separation+is+the+mechanism+of+programmed+chromosome+elimination+during+early+Sciara+coprophila+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Incomplete sister chromatid separation is the mechanism of programmed chromosome elimination during early Sciara coprophila embryogenesis.</a> Development. 122 (12), 3775-3784 (1996).</li>
<li>de Saint Phalle, B., Oldenbourg, R., Kubai, D., Salmon, E. D., Gerbi, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paternal+chromosome+elimination+and+X+non-disjunction+on+asymmetric+spindles+in+Sciara+male+meiosis%5BTitle%5D)+AND+%22BioRxiv%22%5BJournal%5D)">Paternal chromosome elimination and X non-disjunction on asymmetric spindles in Sciara male meiosis.</a> BioRxiv. , (2021).</li>
<li>Bath, J. D., Sponsler, O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+the+culture+of+Sciara+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An alternative method for the culture of Sciara larvae.</a> Science. 109 (2828), 255(1949).</li>
<li>Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crane+fly+spermatocytes+and+spermatids%3A+A+system+for+studying+cytoskeletal+components%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Crane fly spermatocytes and spermatids: A system for studying cytoskeletal components.</a> Methods Cell Biol. 25, Pt B 227-252 (1982).</li>
<li>Gillespie, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+rearing+method+for+fungus+gnats+Corynoptera+sp.+%28Diptera%3A+Sciaridae%29+with+notes+on+life+history%5BTitle%5D)+AND+%22J+Entomol+Soc+Br+Colum%22%5BJournal%5D)">A simple rearing method for fungus gnats Corynoptera sp. (Diptera: Sciaridae) with notes on life history.</a> J Entomol Soc Br Colum. 83, 45-48 (1986).</li>
<li>Gardiner, R. B., Jarvis, W. R., Shipp, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ingestion+of+Pythium+spp.+by+larvae+of+the+fungus+gnat+Bradysia+impatiens+%28Diptera%3A+Sciaridae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Appl+Biol%22%5BJournal%5D)">Ingestion of Pythium spp. by larvae of the fungus gnat Bradysia impatiens (Diptera: Sciaridae).</a> Ann Appl Biol. 116, 205-212 (1990).</li>
<li>Hungerford, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sciara+maggots+injurious+to+potted+plants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Econ+Entomol%22%5BJournal%5D)">Sciara maggots injurious to potted plants.</a> J Econ Entomol. 9 (6), 538-549 (1916).</li>
<li>Thomas, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+rearing+mushroom+insects+and+mites%5BTitle%5D)+AND+%22Entomol+News%22%5BJournal%5D)">A method for rearing mushroom insects and mites.</a> Entomol News. 40, 222-225 (1929).</li>
<li>Austin, M. D., Pitcher, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+laboratory+method+for+rearing+Sciara+and+phorid+flies%5BTitle%5D)+AND+%22Entomol+Mon+Mag%22%5BJournal%5D)">A laboratory method for rearing Sciara and phorid flies.</a> Entomol Mon Mag. 72, No. 860 12-15 (1936).</li>
<li>Butt, F. H. Culture of Sciara. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aButt%2C+FH+%22Culture+methods+for+invertebrate+animals%22">Culture methods for invertebrate animals</a>. Galtsoff, P. S., Lutz, F. E., Welch, P. S., Needham, J. G. , Comstock Publ. Co. Ithaca. 400-401 (1937).</li>
<li>Hudson, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+greenhouse+sciarid+fly+populations+using+Tetradonema+plicans+%28Nematoda%3A+Mermithoidea%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invert+Pathol%22%5BJournal%5D)">Regulation of greenhouse sciarid fly populations using Tetradonema plicans (Nematoda: Mermithoidea).</a> J Invert Pathol. 23 (1), 85-91 (1974).</li>
<li>Wilkinson, J. D., Daughterty, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+development+of+Bradysia+impatiens+%28Diptera%3A+Sciaridae%29+under+constant+and+variable+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Entomol+Soc+Am%22%5BJournal%5D)">Comparative development of Bradysia impatiens (Diptera: Sciaridae) under constant and variable temperatures.</a> Ann Entomol Soc Am. 63 (4), 1079-1083 (1970).</li>
</ol>

De auteur heeft geen belangenconflicten te melden.

De hier gepresenteerde protocollen voor de veehouderij van B. coprophila zullen nuttig zijn voor wetenschappers die dit organisme in hun laboratoria willen kweken voor experimenten om zich te verdiepen in zijn unieke biologische kenmerken. De eerste beschrijving van de voedingsmethode met gist en paddenstoelenpoeder gestrooid op een agarbasis om B. coprophila29 te behouden, werd in het laboratorium van Metz gebruikt om 14 verschillende soorten varenrouwmug te kweken5. Vervolgens werd vastgesteld dat de toevoeging van brandnetel- en/of spinaziepoeder de vitaliteit van B. coprophila verder verhoogde (Gabrusewycz-Garcia, persoonlijke communicatie). Deze methoden zijn succesvol geweest voor het behoud van verwante soorten binnen de familie Sciaridae, waaronder Bradysia impatiens en Lycoriella ingenua die momenteel in cultuur zijn (Robert Baird, persoonlijke communicatie).
Andere methoden (zoals de alternatieve voedingsmethoden die hieronder worden beschreven) zijn geprobeerd om B. coprophila te kweken, maar de hier beschreven protocollen zijn geoptimaliseerd om de meest gunstige verhouding larven per oppervlak van agar te hebben om de meest vruchtbare vetvolwassenen te verkrijgen en de groei van schimmel te minimaliseren. Om op te schalen, kan massaparing worden gedaan in glazen flacons zoals beschreven in protocol 2 hierboven. Als alternatief kunnen een paar (2-4) volwassen vrouwtjes samen met twee keer zoveel volwassen mannetjes in een kolf worden geplaatst, zoals die wordt gebruikt om Drosophila groot te brengen (wegwerp 6 oz. = 177,4 ml vierkante bodem Drosophila polypropyleen fles). In beide gevallen moet de onderzoeker er volledig op kunnen vertrouwen dat de kolf alleen moeders bevat die door vrouwen of door mannen worden geproduceerd.
Voer de larven alleen, want de poppen en volwassenen eten niet. Voer de injectieflacon niet als de larven in poppen zijn veranderd (een teken hiervan is wanneer de eerste vroeg opkomende volwassen vliegen verschijnen). Zodra de volwassenen sluiten, plaatst u de injectieflacons in een koelere couveuse (bijv. 16 °C) indien beschikbaar, omdat de volwassenen hierdoor langer kunnen leven. Voer drie keer per week (bijv. maandag, woensdag, vrijdag) en verhoog de hoeveelheid voer die per injectieflacon wordt gegeven naarmate de larven ouder worden. Voer royaal en je wordt beloond met vette, vruchtbare volwassenen. Als u echter te veel voert, verschijnt er witte schimmel en dat is een teken om de hoeveelheid voedsel die u in een injectieflacon deponeert te verminderen. Verder, als je te veel voert, zal er een dikke pad met voedsel bovenop de agar ontstaan en het moeilijker maken voor de volwassenen om tevoorschijn te komen (je kunt de pad met een tang verwijderen, maar pas op dat je geen larven meeneemt met de pad - het is het beste om dit helemaal niet te hoeven doen). Injectieflacons met weinig larven (gemarkeerd met "weinig") hebben minder voedsel nodig. Als je te weinig voert, zullen de larven langs de wanden van de flacon klimmen op zoek naar voedsel. Ondervoede larven resulteren in kleine volwassen larven die minder vruchtbaar zijn.
Alternatieve voedingsmethoden Er zijn verschillende methoden geprobeerd om larven slechts één keer tijdens het larvale stadium te voeren in plaats van 3 keer per week. B. coprophila groeit niet op voedsel in Drosophila-stijl . John Urban (persoonlijke communicatie) probeerde B. coprophila-voedsel te mengen met de agar, maar er groeide te veel schimmel. Hij ontdekte dat het toevoegen van twee schimmelremmers (tegosept en propionzuur) in combinatie en afzonderlijk, waarbij verschillende concentraties werden geprobeerd, allemaal giftig waren voor B. coprophila op niveaus die schimmel remmen. De agar moet pH 6-7 (neutraal) zijn , omdat B. coprophila ziek wordt bij een zure pH (zoals bij propianinezuur). Als alternatief, om driemaal per week voeden te voorkomen, probeerde hij een spatel of spuit zonder naald te gebruiken om een dikke gistpasta (Red Star actieve droge gist gemengd met een beetje gedestilleerd water om het te bevochtigen) als een klodder bovenop de agar in elke flacon een week na het paren (d.w.z. rond de tijd dat de larven beginnen te verschijnen).
Een andere methode om driemaal per week voeding te vermijden, is door aan elke flacon een levende cultuur van schimmels toe te voegen. Bath en Sponsler37 meldden dat een schuin agar-oppervlak met het medium van Sabouraud besmeurd moest zijn met een schimmelcultuur van de geslachten Chaetoconidia (best) of anders Baplosporangia of Xllescheria. De schimmel werd enkele dagen tot een week voordat B. coprophila werd geïntroduceerd gekweekt. Hierna was er geen voeding meer nodig. Een variant van deze methode werd ook gebruikt door Ellen Rasch (persoonlijke communicatie). In onze handen waren de flesjes te nat met deze methode en verdronken de larven, maar het kon opnieuw worden geprobeerd om het aantal larven te optimaliseren ten opzichte van de flesjes met levende schimmels.
Arthur Forer (persoonlijke communicatie) heeft enig succes gehad met het kweken van B. coprophila op dezelfde manier als kraanvogels38. Met deze aanpak werden poppen gekweekt op vochtig papier-maché. Vervolgens werden de volwassen dieren gedekt en werden de eieren afgezet op vers, vochtig papier-maché. De resulterende larven werden op papier-maché in petrischaaltjes gehouden en twee keer per week gevoed met brandnetelbladeren in poedervorm. Poppen werden in een kooi gestopt om de cyclus te herhalen.
Yukiko Yamashita (persoonlijke communicatie) heeft tevergeefs geprobeerd om B. coprophila op aarde te kweken, waarbij hij de omstandigheden nabootst waarin ze in de natuur worden aangetroffen in potplanten en kassen met een hoge luchtvochtigheid. Schimmel kan echter een probleem worden wanneer de luchtvochtigheid wordt verhoogd. Desalniettemin is vochtige grond met succes gebruikt om Pseudolycoriella (voorheen Bradysia) hygida-larven te kweken in plastic dozen met vochtige grond; ze worden gevoed met afgebroken Ilex paraguariensis bladeren, in het late larvale leven aangevuld met 1,2% gistextract, 1,4% maizena, 0,8% havermoutmeel, 1,2% agar12. Op dezelfde manier kan de vochtige grond worden vervangen door vochtig veenmos met gemalen bruine bonen om varenrouwmugvliegen te kweken39,40.
Er zijn nog andere methoden gebruikt om laboratoriumculturen van Bradysia in stand te houden: (i) geautoclaveerde aardappel waaraan gist en gedroogde bloedmeststof zijn toegevoegd41; ii) mest 42,43,44 waaraan gedroogd bloed kan worden toegevoegd 45; iii) plastic recipiënten met wattenschijfjes en vochtig keukenpapier met gemalen sojabonen46.
Mijten Mijten kunnen worden overgedragen van Drosophila naar B. coprophila. Om dit tot een minimum te beperken, is het het beste om B. coprophila in een aparte incubator of kamer te bewaren, niet in de buurt van Drosophila-bestanden . Voer bovendien eventuele onderhoudswerkzaamheden aan B. coprophila vroeg op de dag uit voordat u Drosophila aanraakt. Mijten kunnen ook van kamerplanten worden overgebracht naar B. coprophila , dus houd planten niet in dezelfde ruimte als B. coprophila. Als mijten de flesjes binnendringen, kunnen ze worden gezien als kleine witte bolvormige organismen die op het lichaam van B. coprophila kruipen. Chemische behandelingen die werken om mijten in Drosophila te vernietigen, kunnen niet worden gebruikt voor B. coprophila, omdat de chemicaliën B. coprophila doden (B. coprophila is ook gevoelig voor organische dampen zoals fenol). De enige behandeling om B. coprophila-voorraden van mijten te ontdoen, is door de embryo's handmatig op een agarplaat te verzamelen, ze allemaal te onderzoeken op de afwezigheid van mijten en ze vervolgens met een fijne kwast over te brengen in verse agarflesjes. Met katoen gevulde gaaspluggen en flugs van celluloseacetaatschuim (zoals gebruikt voor Drosophila polypropyleen injectieflacons) helpen beide om het binnendringen van mijten in de injectieflacons te voorkomen.
Nut van de houderijprotocollen De hier beschreven protocollen zullen de groeiende gemeenschap van wetenschappers in staat stellen om B. coprophila te kweken als een nieuw/oud opkomend modelorganisme om zijn unieke biologische kenmerken te bestuderen. Nieuwe laboratoriumgroepen worden aangemoedigd om zich aan te sluiten bij de groeiende gemeenschap om de unieke biologische kenmerken van Bradysia (Sciara) te behouden en te onderzoeken.

Een volledig begrip van biologische principes vereist de studie van vele verschillende organismen die de Boom des Levens overspannen. Hoewel tot het einde van de19e eeuw een breed scala aan organismen werd beschreven, werden experimentele studies tegen het midden van de 20eeeuw beperkt tot een handvol van minder dan een dozijn modelorganismen. Met de komst van het genomische tijdperk en het doel om genomen van alle soorten in de Tree of Life1 te sequencen, zijn we nu in staat om de soorten organismen die voor laboratoriumexperimenten worden gebruikt uit te breiden en het voordeel te plukken van hun diversiteit. Een dergelijke uitbreiding van opkomende modelorganismen voor experimenten heeft een voorwaarde om ze in het laboratorium te kunnen behouden. Hier worden protocollen beschreven voor het kweken van zo'n opkomend nieuw/oud modelorganisme.
Het grootste deel van het dierenleven op aarde wordt veroorzaakt door vier superstralingen van insecten2. Binnen de insecten zijn er ongeveer 158.000 soorten Diptera (echte vliegen)3, met ongeveer 3000 soorten in de familie Sciaridae (zwarte rouwvliegjes)4. De fruitvlieg Drosophila is de meest grondig bestudeerde van de Dipteran-vliegen. De lagere Dipteran-vlieg (Nematocera), Bradysia (voorheen Sciara genoemd) coprophila, divergeerde 200 miljoen jaar geleden van Drosophila, een "hogere Dipteran" -vlieg (Brachycera). Daarom bevindt B. coprophila zich in een gunstige taxonomische positie voor vergelijkende studies met D. melanogaster (Figuur 1). Bovendien heeft B. coprophila veel unieke biologische kenmerken die op zichzelf al het bestuderen waard zijn 5,6,7. Veel van deze kenmerken zijn ongehoorzaam aan de regel van DNA-constantheid waarin alle cellen van een organisme dezelfde DNA-inhoud hebben. In B. coprophila, (i) wordt het vaderlijke genoom geëlimineerd op een monopolaire spoel in mannelijke meiose I; (ii) er is non-disjunctie van de X-dyade bij mannelijke meiose II; (iii) kiembaanbeperkte (L) chromosomen worden geëlimineerd uit de soma; en (iv) een of twee X-chromosomen worden geëlimineerd in het vroege embryo, afhankelijk van het geslacht van het individu. Chromosoominprenting om maternale van vaderlijke homologen te onderscheiden, werd voor het eerst ontdekt in B. coprophila en speelt een rol bij veel van deze chromosoomeliminatiegebeurtenissen. Naast chromosoomeliminatie vindt een andere bypass van DNA-constantheid plaats via ontwikkelingsgereguleerde, locusspecifieke DNA-amplificatie op de DNA-puff-loci in de polyteenchromosomen van de larvale speekselklier. Studies naar deze unieke kenmerken vereisen laboratoriumonderhoud van B.coprophila; Details van de veehouderij worden hier gepresenteerd om dergelijke studies te vergemakkelijken.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig01v3.jpg"> Figuur 1: Fylogenie van Bradysia (Sciara) coprophila. Populaire modelorganismen worden aangegeven in een blauw lettertype en hun taxonomische volgorde in een rood lettertype. Bradysia en andere Sciarid-rouwmuggen en muggen zijn lagere diptera-vliegen (voorheen onderorde Nematocera), terwijl Drosophila-soorten hogere dipteran-vliegen zijn (onderorde: Brachysera). Informatie aan de linkerkant van de figuur is afkomstig van Misof et al.33; informatie aan de rechterkant is afkomstig van Bertone et al.34 en Wiegmann et al.2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
Voorheen had het geslacht Sciara het grootste aantal (700) soorten voor een eukaryoot, wat Steffan ertoe aanzette ze onder te verdelen8. Vervolgens stelde Shin voor om de familie Sciaridae onder te verdelen in de onderfamilie Sciarinae (met zes geslachten, waaronder Sciara, Trichosia en Leptosciarella), de onderfamilie Megalosphyinae (inclusief het geslacht Bradysia) en drie andere groepen (waaronder Pseudolycoriella)9. De fylogenie van de Sciaridae is de laatste jaren door verschillende groepen verder bestudeerd 9,10,11. In de afgelopen decennia zijn de namen van veel organismen in de familie Sciaridae veranderd12. Hoewel de meeste literatuur van meer dan een eeuw verwijst naar het organisme dat we bestuderen als Sciara coprophila, is de huidige taxonomische naam nu Bradysia coprophila (syn. Bradysia tilicola en andere synoniemen)10. Ze komen wereldwijd voor en zijn algemeen bekend als rouwvliegjes omdat ze paddenstoelen en andere schimmels eten. Ze werden voor het eerst beschreven in 1804 door Meigen13 in Europa en vervolgens door Johannsen14,15 in Noord-Amerika. B. coprophila werd verzameld in het Cold Spring Harbor Laboratory en laboratoriumvoorraden werden opgericht door Charles Metz in de vroege jaren 1900 toen hij een afgestudeerde student was aan de Columbia University bij Thomas Hunt Morgan. De huidige voorraden weerspiegelen dus een eeuw van inteelt. Evenzo werd de biologie van B. coprophila verder opgehelderd door tientallen jaren van cytogenetische studies door Helen Crouse (die haar Ph.D. werk met Barbara McClintock).
In de jaren 1930 concurreerde Bradysia (Sciara) met Drosophila melanogaster als modelsysteem voor genetische studies. Ondanks de vele unieke biologische kenmerken werd B. coprophila overschaduwd door D. melanogaster als een populair modelorganisme, omdat door straling geïnduceerde fenotypische mutaties nodig waren voor genetische studies en gemakkelijker te bereiken waren in de laatste, ook al is B. coprophila slechts iets resistenter tegen gammastraling dan D. melanogaster16. In het moderne tijdperk van genomica is dit niet langer een probleem. Aangezien de genoomsequentie 17,18,19 (Urban, Gerbi en Spradling, gegevens niet getoond ) en methoden voor transformatie20,21 (Yamamoto en Gerbi, gegevens niet getoond) voor B. coprophila onlangs beschikbaar zijn gekomen, is de tijd nu rijp om het te gebruiken als een nieuw/oud opkomend modelsysteem, zoals gezien door de groeiende gemeenschap van wetenschappers die het voor hun onderzoek hebben aangenomen. In dit artikel worden de procedures voor het laboratoriumonderhoud beschreven.
B. coprophila mist een Y-chromosoom en het geslacht van de nakomelingen wordt bepaald door de moeder. Vrouwen met het X'-chromosoom ("X-prime") met een lange paracentrische inversie zullen alleen dochters hebben, terwijl vrouwen die homozygoot zijn voor het standaard (niet-omgekeerde) X-chromosoom alleen zonen5 zullen hebben (Figuur 2). Sequentie-informatie is beschikbaar voor het X-chromosoom19, maar het moleculaire mechanisme moet nog worden opgehelderd over hoe het X-chromosoom bepaalt dat nakomelingen vrouwtjes zullen zijn. Mannetjes hebben nooit het X'-chromosoom en na de bevruchting zijn vrouwtjes X'X (heterozygoot voor de X') of XX. Volwassen X'X-vrouwtjes kunnen worden onderscheiden van XX-vrouwtjes door fenotypische markers op de vleugel (Figuur 3). X'X vrouwtjes (die alleen dochters zullen krijgen) zijn te herkennen aan de dominante Wavy (W) vleugelmarkering op de X' (zoals in de HoLo2 stam)22. Als alternatief kunnen XX vrouwtjes (die alleen zonen zullen hebben) worden herkend aan de recessieve petite (p) vleugelmarkering op de X zoals bij de 91S voorraad23. In dit geval hebben X'Xp vrouwtjes vleugels over de volledige lengte (niet kleine) vleugels en hebben ze alleen dochters. De standaard 6980 draagt een recessieve marker op het X-chromosoom voor gezwollen (sw) aders24, evenals de dominante marker Wavy op de X', waardoor twee markers kunnen worden geselecteerd voor kruisingen. De mate van expressie van Wavy kan variëren en lijkt zwakker in overvolle flesjes waar het voedsel beperkt is of als de temperatuur te warm wordt. Het fenotype van de golvende vleugel is uitzonderlijk sterk als de larven in de koelcel (4°-8 °C) worden gehouden in plaats van de gebruikelijke 21 °C. Hoewel de recessieve petite wing marker niet variabel is en zeer gemakkelijk te identificeren is, worden 91S-kolven minder vaak gebruikt omdat ze minder gezond zijn dan de HoLo2-kolf. De paringsschema's van B. coprophila worden hier gepresenteerd (Figuur 2) en in detail beschreven voor de HoLo2-, 7298- en W14-bestanden (Supplemental File 1), de 91S-bestanden (Supplemental File 1), de 6980-bestanden (Supplemental File 1) en de translocatie-bestanden (Supplemental File 1). De translocatievoorraden bestaan niet meer; het waren wederzijdse translocaties van heterochromomeren (H1, H2 en H3) op de korte arm van de X die de ribosomale RNA-genen 25,26,27 bevat.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig02.jpg"> Figuur 2: Paringsschema voor B. coprophila. Dit organisme heeft geen Y-chromosoom (de mannelijke soma heeft een enkele X); Moeders bepalen het geslacht van hun kroost. XX moeders hebben alleen zonen en X'X vrouwen hebben alleen dochters. Het X'-chromosoom heeft een lange paracentrische inversie in vergelijking met het X-chromosoom. De vaderlijke of moederlijke afstamming van het X-chromosoom (of X') wordt in deze figuur respectievelijk blauw of rood aangeduid. Sperma is haploïde voor de autosomen, maar heeft twee kopieën van het X-chromosoom vanwege non-disjunctie in meiose II. De somatische afstamming van vroege embryo's elimineert een of twee kopieën van de vaderlijk afgeleide X als ze respectievelijk vrouwelijk of mannelijk zijn. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig03.jpg"> Figuur 3: Vleugelfenotypes van B. coprophila. Volwassen vrouwtjesvliegen worden getoond met verschillende vleugelfenotypen: (A) rechte vleugel (XX), (B) golvende vleugel (X'WX), (C) extreem golvende vleugel (X'WX) fenotype dat verschrompeld uiterlijk heeft na opslag van larven in de koude room, (D) kleine vleugel (XpXp) die rudimentair is, (E) rechte vleugel met wildtype (XX) en niet gezwollen aders, (F) rechte vleugel met gezwollen aders (XswXsw) waarbij kleine belletjes (zwarte pijlen) verschijnen aan de bovenrand van de vleugel en/of bij de punt van beide vleugels, (G) extreem voorbeeld van gezwollen waarbij een blaar (witte pijl) voorkomt op één of beide vleugels. Mannetjes missen het X'-chromosoom en zullen daarom nooit golvende vleugels hebben, maar ze hebben kleine of gezwollen vleugels in respectievelijk de 91S-voorraad of de 6980-voorraad. Schaalbalk = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig03large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
Het doel bij voorraadonderhoud is om kruisingen uit te voeren waarbij de helft van de kruisen afkomstig is van vrouwelijke moeders en de helft van de kruisingen van mannelijke producerende moeders om gelijke aantallen vrouwelijke en mannelijke volwassenen in de volgende generatie te hebben voor volgende kruisingen. Dit houdt echter ook planning in, aangezien de levenscyclus voor mannetjes korter is dan voor vrouwtjes en volwassen mannetjes tot een week voor volwassen vrouwtjes verschijnen. De natuur past zich aan deze asynchronie tussen de geslachten aan door de mannelijke embryo's als larven te laten verschijnen 1-2 dagen na de vrouwelijke larven uit een kruising op dezelfde datum. Om er echter voor te zorgen dat mannelijke en vrouwelijke adulte dieren tegelijkertijd beschikbaar zijn voor laboratoriumkruisingen, kan de ontwikkeling van vrouwtjes enigszins worden versneld door flesjes met vrouwelijke larven bij kamertemperatuur te laten staan in plaats van bij 21 °C of door flesjes met mannelijke larven bij iets koelere temperaturen (bijv. 16 °C) te plaatsen. Een andere route die meer onfeilbaar is, is om op maandag kruisingen te maken met moeders die vrouwen produceren en kruisingen met moeders die mannelijk produceren op vrijdag van dezelfde week. De gemakkelijkste route, en dat is wat we gebruiken, is om elke week op dezelfde dag kruisingen uit te voeren met moeders die vrouw en moeder produceren, en op die dag in elke opeenvolgende week kruisingen uit te voeren. In die benadering kunnen volwassen vrouwtjes uit een kruising in week 1 worden gedekt met volwassen mannetjes die in week 2 uit een kruising zijn gekomen.
De levenscyclus van vrouwelijke B. coprophila is 5 weken bij een opfok bij 21 °C (tabel 1). De lengte van hun levenscyclus is iets langer bij koelere temperaturen of als ze ondervoed zijn. De levenscyclus van mannelijke B. coprophila is ~4-4,5 weken sinds ze 0,5-1 week voor vrouwtjes verpoppen. Het einde van elke larvale instar wordt gemarkeerd door het afstoten van de nagelriem, die wordt veroorzaakt door een uitbarsting in het niveau van het steroïde hormoon ecdyson. In tegenstelling tot D. melanogaster, die drie larvale instars heeft, heeft B. coprophila vier larvale instars.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Ontwikkelingsfase</td>
			<td>Dagen na de dekking (dpm)</td>
			<td>Duur van de etappe (dagen)</td>
		</tr><tr><td>Gelegd ei</td>
			<td>1-2</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Embryo</td>
			<td>1-2 tot 7-8</td>
			<td>~7 dagen</td>
		</tr><tr><td>Larve</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Larvale instars 1, 2 en 3</td>
			<td>7-8 tot 16-19</td>
			<td>~10</td>
		</tr><tr><td>4e larve instar pre-oogvlek</td>
			<td>16-19 tot 21-24</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>4e larvale instar oogvlekkenstadium</td>
			<td>21-24 tot 25-28</td>
			<td>4</td>
		</tr><tr><td>Pop</td>
			<td>25-28 tot 30-33</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>Volwassene</td>
			<td colspan="2">leeft 1-2 dagen bij 21 °C als ze gepaard worden of leeft 2-3 weken bij 16 °C als ze niet gepaard zijn.</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 1: Levenscyclus van vrouwelijke B. coprophila bij 21 °C.
B. coprophila kan overal in het bereik van 15 °C-25 °C worden gehouden, waarbij de ontwikkeling langzamer verloopt bij lagere temperaturen. Dit insect geeft de voorkeur aan een vochtige omgeving (te vinden in de grond van kamerplanten of champignonbedden), dus we bewaren een beker met gedeïoniseerd water in de broedmachine. B. coprophila kan op kamertemperatuur worden bewaard in een metalen brooddoos met een loszittend deksel en een beker water, maar ze gaan in een hitteschok bij 37 °C28, wat een gevaar is in warme klimaten. Michael Ashburner en anderen hebben met weinig succes geprobeerd om D. melanogaster in de kou te bewaren om de tijd die nodig is voor het bijhouden van de voorraad te verkorten. Een groot voordeel van B. coprophila daarentegen is dat flacons met larven in het middenstadium tot 3 maanden kunnen worden bewaard op een open plank in de koelcel (4-8 °C) met minimale zorg van slechts één keer per maand voeren. Ze ontwikkelen zich in de kou uiterst langzaam tot aan het popstadium en zullen als vruchtbare volwassenen tevoorschijn komen wanneer de flesjes worden teruggebracht naar 21 °C. Vermoedelijk bootst dit hun overwintering in het wild na. Deze door kou veroorzaakte ontwikkelingsstagnering kan vergelijkbaar zijn met die welke wordt waargenomen na gammabestraling van B. coprophila-larven 16 in het middenstadium, maar ontwikkelingsstagnering wordt niet gezien bij larven in een laat stadium die het point of no return voor hun normale ontwikkelingsprogressie zijn gepasseerd.

<table><tbody><tr><td>Agar (bacteriologisch)</td><td>U.S. Biological</td><td>A0930</td><td>https://www.usbio.net;&nbsp;</td></tr><tr><td>CO2 FlyStuff Voetpedaal</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-121</td><td></td></tr><tr><td>CO2 FlyStuff Blaaspijt</td><td>Genesee Scientific</td><td>54-104</td><td></td></tr><tr><td>CO2 FlyStuff UltimaterFlypad</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-172</td><td>https://www.geneseesci.com</td></tr><tr><td>Eether dampkap</td><td>Labconco&nbsp;</td><td>3955220</td><td>Zit op de laboratoriumtafel</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Filtervervanging&nbsp; cat # 6961300</td></tr><tr><td>Voedsel: Biergist Poeder</td><td>Solgar</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Verkrijgbaar bij Amazon of in gezondheidsvoedingswinkel</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>https://www.solgar.com;</td></tr><tr><td>Voedsel: Brandnetel Poeder&nbsp; (pesticide vrij)</td><td>Starwest Botanicals</td><td>209460-51</td><td></td></tr><tr><td>Voedsel: Shiitake Paddenstoelen (pesticide vrij)</td><td>Starwest Botanicals</td><td>202127-5</td><td>https://www.starwest-botanicals.com;</td></tr><tr><td>Voedsel: Spinazie Poeder (pesticide vrij)</td><td>Starwest Botanicals</td><td>209583-5</td><td></td></tr><tr><td>Voedsel: Stro (pesticide vrij )</td><td>Starwest Botanicals</td><td>209465-3</td><td></td></tr><tr><td>Pot: helder glas, polypropyleen deksel</td><td>Fisher Scientific:</td><td>FB02911765</td><td>73 mm dia, 89 mm ht (240 ml) https://www.fishersci.com;</td></tr><tr><td>Naaldsonde, houten handgreep</td><td>US Geo Supply Inc</td><td>SKU: 4190</td><td>5,75&rdquo; lange sonde, roestvrijstalen naald https://usgeosupply.com; (970)-434-3708</td></tr><tr><td>Flesjes: glas, bij voorkeur:</td><td>Wilmad LabGlass</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wilmad-glas aangepaste flesjes</td><td></td><td></td><td>28-33 mm binnendiameter, 33 mm buitendiameter, 9,5 cm ht Wilmad: https://www.SP-WilmadLabglass.com</td></tr><tr><td>Flesjes: glas (goedkoper en ok)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-339-26H</td><td>29 mm buitendiameter, 9,5 cm h &nbsp;https://www.fishersci.com;&nbsp;</td></tr><tr><td>Flesjes: glas (een beetje smal)&nbsp;</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>32-201</td><td>24,5 mm buitendiameter,9,5 cm h thttps://www.geneseesci.com</td></tr><tr><td>Flesjes: polypropyleen&nbsp;</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-114</td><td>28,5 mm buitendiameter,9,5 cm ht</td></tr><tr><td>Flesjesstoppen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>rol niet-absorberende katoen</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-456881</td><td></td></tr><tr><td>Kaasdoek</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-055053</td><td>https://www.fishersci.com;</td></tr></tbody></table>

laboratoriumonderhoud van de onderste dipteravlieg bradysia (sciara) coprophila: een nieuw/oud opkomend modelorganisme

Laboratory Maintenance of the Lower Dipteran Fly Bradysia (Sciara) coprophila: A New/Old Emerging Model Organism

Laboratoriumvoorraden van de onderste dipteravlieg, Bradysia (Sciara) coprophila, worden al meer dan een eeuw in stand gehouden. Protocollen voor laboratoriumonderhoud van B. coprophila worden hier gepresenteerd. Deze protocollen zullen nuttig zijn voor het snel toenemende aantal laboratoria dat B. coprophila bestudeert om te profiteren van zijn unieke biologische kenmerken, waaronder (1) een monopolaire spoel bij mannelijke meiose I; (2) non-disjunctie van de X-dyade in mannelijke meiose II; (3) chromosoominprenting om maternale en vaderlijke homologen te onderscheiden; (4) kiembaan-beperkte (L) chromosomen; (5) chromosoomeliminatie (vaderlijke chromosomen in mannelijke meiose I; één tot twee X-chromosomen in vroege embryo's; L-chromosomen van de soma in vroege embryo's); (6) geslachtsbepaling door de moeder (er is geen Y-chromosoom); en (7) ontwikkelingsgereguleerde DNA-amplificatie op de DNA-puff-loci in polyteenchromosomen van de speekselklier van larven. 
Het is nu mogelijk om deze vele unieke kenmerken van chromosoommechanica te verkennen door gebruik te maken van de recente ontwikkelingen in sequencing en assemblage van het B. coprophila-genoom en de ontwikkeling van transformatiemethodologie voor genomische engineering. De groeiende wetenschappelijke gemeenschap die B. coprophila gebruikt voor onderzoek zal profiteren van de protocollen die hier worden beschreven voor het paren van de vliegen (fenotypische markers voor moeders die alleen zonen of enige dochters zullen hebben; details van massale paring voor biochemische experimenten), het controleren van het uitkomen van embryo's, het voeden van larven en andere opmerkingen over het grootbrengen ervan.

De hier beschreven protocollen hebben geleid tot bewezen succes bij het kweken van B. coprophila. Wanneer recent gesloten vette volwassenen worden gekozen om te paren (Figuur 4), kan meer dan 90% van de kruisingen vruchtbaar zijn en nakomelingen opleveren. Het vruchtbaarheidssucces varieert wel bij verschillende bestanden (tabel 2). Voorraad 7298 (X'-chromosoom met golvende marker) was de gezondste van de bestanden, maar maakte een periode van achteruitgang door, blijkbaar als gevolg van activering van mobiele DNA-elementen die genoomherschikkingen creëerden32. De HoLo2-voorraad vertegenwoordigt een gezonde stam die is afgeleid van 7298, waar blijkbaar de herschikkingen van het genoom zijn gestabiliseerd, en het heeft de ouderlijke 7298-voorraad in het voorraadcentrum vervangen. De HoLo2-voorraad is degene die werd gebruikt om het genoom van B. coprophila te sequencen en wordt het meest gebruikt door verschillende laboratoriumgroepen. Onlangs is CRISPR-mutagenese van HoLo2-vliegen gebruikt om de W14-voorraad te creëren met een fenotype van witte ogen om te worden gebruikt voor transformatie met fluorescerende oogmarkers (Yamamoto en Gerbi, gegevens niet getoond). De W14-stam is uitzonderlijk robuust. De 6980 kolf (Wavy wing en swollen vein markers) is iets minder robuust en de 91S kolf (petite wing marker) is nog minder robuust.
Succesvolle kruisingen resulteren in embryo's (Figuur 5). Embryo's ondergaan eliminatie van de ingeprinte vaderlijke X-chromosomenbij de 7e tot9e splitsingsafdeling . Bovendien worden kiembaanbeperkte L-chromosomen geëlimineerd uit de somatische afstamming in embryo's bij de 5etot 6esplitsingsdivisie . De embryo's komen tevoorschijn als larven, wat niet verward moet worden met schimmels die ook aanwezig kunnen zijn (Figuur 6). Oogvlekken (anlage naar de volwassen ogen) verschijnen in de tweede helft van de4e larvale instar (Figuur 7). De grootte van de oogvlekken biedt een handige fenotypische marker voor het begin en de progressie van DNA-trekamplificatie, wat een van de slechts twee bekende voorbeelden is van natuurlijk voorkomende ontwikkelingsgereguleerde plaatsspecifieke intrachromosomale DNA (gen) amplificatie. Vervolgens ontwikkelen poppen zich en de hoeveelheid pigment die hun ogen vult, kan dienen als een ontwikkelingsmarker voor meiose I en II in spermatogenese (Figuur 8) met zijn unieke chromosoomgedrag in deze divisies.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig04.jpg"> Figuur 4: Paring van volwassen B. coprophila vliegen. Het bovenste paneel toont de drie soorten volwassen vliegen in de HoLo2-voorraad: vrouwtjes producerende moeders met golvende vleugels (X'WX volwassen vrouwtjes), mannetjes producerende moeders met rechte vleugels (XX volwassen vrouwtjes) en mannetjes met rechte vleugels (X0 volwassen mannetjes). Let op de puntige legboor aan het achterste uiteinde van de vrouwelijke vliegen en de haakvormige klem aan het achterste uiteinde van de mannelijke vliegen. Het onderste paneel toont een mannelijke en vrouwelijke paring, waarbij de mannelijke clasper de legboor van het vrouwtje heeft gegrepen. Het sperma wordt opgeslagen in de spermatheca van het vrouwtje en bevrucht de eieren terwijl ze naar buiten worden afgevoerd. De lengte van volwassenen is 2,0 mm (mannetjes), 2,5 mm (vrouwtjes). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig04large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig05v2.jpg"> Figuur 5: B. coprophila embryo's. Het paneel linksboven is een weergave van embryo's met behulp van standaardlicht in een ontleedmicroscoop; De kernen in het syncytiele cytoplasma verschijnen als zwarte stippen. Het paneel aan de rechterkant maakt gebruik van fluorescentiemicroscopie om de met propidiumjodide gekleurde kernen van embryo's te visualiseren. De embryo's hebben een gemiddelde lengte van 200 micron en een gemiddelde breedte van 150 micron. De kernen voor de kiemcellen clusteren zich aan de achterpool van het embryo, zoals te zien is in de cycli 6 (naar voren gekanteld embryo) en 7-9, waarna ze worden afgewisseld met somatische kernen. Eliminatie van het L-chromosoom in de somatische lijn vindt plaats in splitsingsdivisie 5 of 6; Eliminatie van het X-chromosoom in de somatische afstamming vindt plaats in de 7e, 8e of 9esplitsingsafdeling. Cellularisatie vindt plaats tijdens de interfase van cyclus 11. De tabel aan de linkerkant toont de gemiddelde tijdsduur voor elke divisiecyclus bij 22 °C. De tafel aan de linkerkant en het paneel aan de rechterkant zijn aangepast met toestemming van de Saint Phalle en Sullivan35. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig05large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig06.jpg"> Figuur 6: B. coprophila embryo's komen tevoorschijn als larven. Een cluster van embryo's (blauwe dikke pijl) is te zien in de buurt van de legboor van het volwassen vrouwtje dat stierf na het leggen van eieren. Een week na het leggen van de eieren worden de embryo's jonge larven, van wie er verschillende worden aangegeven met de zwarte pijlen. De nieuw uitgekomen larven hebben een zwarte kaak aan het voorste uiteinde en een doorschijnend lichaam. Ze bewegen bovenop het agar-oppervlak en moeten niet worden verward met schimmel die niet beweegt. De inzet vertoont wat schimmel, met een wit filament (rode pijl) en een zwarte spore aan het uiteinde (groene pijl), en is iets kleiner dan de nieuw opgekomen larven. Schaalbalk = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig06large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig07.jpg"> Figuur 7: Oogvlekkenstadia van B. coprophila larven. Oogvlekken vormen zich aan de voorkant van de larve, net achter de kaak, en zijn samengesteld uit pigmentkorrels die in aantal toenemen. De oogvlekken zijn de anlage van het volwassen oog. Het bovenste paneel toont larven die met een ontleedmicroscoop zijn gevisualiseerd; Het onderste paneel is een vergrote weergave van de oogvlekken met behulp van een fasecontrastmicroscoop om een larve op een microscoopglaasje te visualiseren met een druppel gedestilleerd water en een dekglaasje dat licht op de bovenkant drijft. De nomenclatuur van de oogspotstadia is volgens Gabrusewycz-Garcia30 , waarbij het aantal korrels wordt geteld in de langste rij (bijv. 12) en het aantal extra rijen exclusief de langste rij wordt genoteerd (bijv. 6 voor oogspotstadium 12x6). De start van plaatsspecifieke DNA-amplificatie in de speekselklier polyteenchromosomen begint in het oogvlekstadium 10x5 en wordt voltooid op 14x7 wanneer er een uitbarsting van transcriptie is op de locus en expansie van de DNA-pufjes31. In het daaropvolgende stadium van het randoog/de gevallen kaak beginnen de oogvlekkorrels samen te smelten en bewegen ze zijwaarts weg van de middellijn; De lengte van het larvale lichaam wordt korter. Verder condenseren de DNA-pufjes in dit stadium. Het duurt ongeveer een dag bij 21 °C om elk stadium van de oogvlek te doorlopen. Schaalbalk = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig07large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66751/66751fig08.jpg"> Figuur 8: Ontwikkeling van B. coprophila poppen. Tijdens de verpopping histolyseren alle larvale weefsels behalve het zenuwstelsel en worden ze vervangen door volwassen weefsels die ontstaan door celdelingen van de denkbeeldige schijven. De lichaamskleur verandert van wit naar bruin naar zwart naar bruin naar zwart. Pigment vult geleidelijk het popoog op; meiose I en II komen voor bij mannelijke poppen met ogen die voor 1/4 tot 1/2 gevuld zijn met pigment36. Schaalbalk = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/66751fig08large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Naam van de voorraad</td>
			<td>Markeringen</td>
			<td>Vruchtbaarheidscijfer</td>
			<td>Opmerkingen</td>
		</tr><tr><td>7298</td>
			<td>Golvende (W) vleugel</td>
			<td>~75%</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>HoLo2 zei:</td>
			<td>Golvende (W) vleugel</td>
			<td>~90%</td>
			<td>afgeleid van 7298</td>
		</tr><tr><td>W14</td>
			<td>Golvende (W) vleugel; Witte ogen</td>
			<td>~95%</td>
			<td>afgeleid van HoLo2</td>
		</tr><tr><td>6980</td>
			<td>Golvende (W) vleugel; Gezwollen (ZW) aderen</td>
			<td>~65%</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>JAREN 91</td>
			<td>zwakke golvende (W) vleugel; Kleine (P) vleugels</td>
			<td>~50%</td>
			<td>de Wavy marker werd geïntroduceerd in een kruis om 91S te redden</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 2: Bestanden van Bradysia (Sciara) coprophila. Tabel 1 van Gerbi6 geeft een overzicht van deze en andere markeringen die niet meer bestaan. Vijf translocaties (T1, T23, T29, T32, T70) aan het centromeeruiteinde van de X27 zijn samengevat in figuur 8 van Gerbi6 , maar bestaan niet meer.
Aanvullend bestand 1: HoLo2 (en 7298 en W14) kruisen, 91S kruis en redding, 6980 kruis, translocatie kruisen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66751/Supplemental%20Materials.zip" target="_blank">Klik hier om dit bestand te downloaden.</a>

Dit artikel schetst het laboratoriumonderhoud (inclusief paring en voeding) van de onderste dipteranvlieg Bradysia (Sciara) coprophila.

Laboratoriumonderhoud van de onderste dipteravlieg Bradysia (Sciara) coprophila: een nieuw/oud opkomend modelorganisme

Laboratory stocks of the lower dipteran fly, Bradysia (Sciara) coprophila, have been maintained for over a century. Protocols for laboratory upkeep of B. ...

We handhaven de onderste dipteranvlieg, Bradysia, ook bekend als Sciara coprophila om enkele van zijn unieke biologische eigenschappen te bestuderen, waaronder een monopolaire spoel en x-dyad non-disjunctie in meiose, chromosoominprenting, kiembaanspecifieke chromosomen, chromosoomeliminatie, geslachtsbepaling van de moeder en DNA-amplificatie in vervuilende chromosoom-DNA-pufjes. In ons lab heeft Yutaka Yamamoto een methodologie ontwikkeld voor de genomische transformatie van Bradysia coprophila. Bovendien is het transcriptoom van dit organisme beschikbaar gesteld en is het genoom gesequenced en geassembleerd door John Urban.Deze doorbraken maken het mogelijk om de unieke biologie van Bradysia coprophila te verkennen. We moedigen je aan om je aan te sluiten bij de groeiende gemeenschap van wetenschappers om de unieke eigenschappen van Bradysia coprophila aan te pakken. Uw resultaten zullen moleculaire mechanismen ophelderen die van fundamenteel belang zijn voor de cel- en ontwikkelingsbiologie.De hier gepresenteerde houderijprotocollen dienen als handleiding voor het onderhouden van Bradysia coprophila in uw eigen laboratorium.

laboratory-maintenance-lower-dipteran-fly-bradysia-sciara-coprophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We stelden een systeem dat goedkope, niet-invasieve pseudo-akoestische optische sensoren gebruikt om automatisch en nauwkeurig te detecteren, te tellen en classificeren vliegende insecten op basis van hun vliegende geluid.

Vliegende Insect Detectie en classificatie met goedkope sensoren

Een procedure voor het opfokken van stabiele vliegen (Stomoxys calcitrans) wordt gepresenteerd. De procedure wordt lokaal beschikbare materialen voor dieet onderdelen, uitrustingsstukken en voorraden.

Laboratorium fokken van stabiel vliegen en andere Muscoid Diptera

Dit artikel schetst basismethoden om belangrijke factoren zoals dichtheid, voerbeschikbaarheid, hydratatiebron en omgevingscontroles te standaardiseren voor het langdurig kweken van laboratoriumculturen van de eetbare krekel, Gryllus bimaculatus.

Het onderhouden van laboratoriumculturen van Gryllus bimaculatus, een veelzijdig orthopteraanmodel voor insectenlandbouw en ongewervelde fysiologie

Vibrio cholerae: modelorganisme Bacteriële Pathogenese Study - Interview

Medaka en zebravissen zijn complementair voor genetische dissectie van gewervelde genoom functies. Dit protocol worden de belangrijkste punten voor een succesvolle micro-injectie in medaka embryo's, een belangrijke techniek voor de embryologische en genetische analyse met behulp van medaka en zebravis in een laboratorium.

Micro-injectie van Medaka embryo&#39;s voor gebruik als een model organisme Genetische

Dit protocol beschrijft regelmatig onderhoud en zorg aan optimale omstandigheden voor zebravis veeteelt te behouden. De video illustreert het protocol dat voor systeem onderhoud, regelmatige huisvesting, voeding, fokkerij, en het verhogen van de zebravis larven.

Regelmatige verzorging en onderhoud van een zebravis (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Laboratorium: Een inleiding

We tonen een methode magnetotactic bacteriën (MTB) die kunnen worden toegepast in natuurlijke wateren verzamelen. MTB kunnen worden geïsoleerd en verrijkt door sediment monsters met behulp van een relatief eenvoudige installatie die gebruik maakt van de bacteriën de natuurlijke magnetisme. Geïsoleerde MTB kunnen dan worden in detail onderzocht met behulp van zowel licht-en elektronenmicroscopie.

Collection, Isolatie en Verrijking van natuurlijk voorkomende Magnetotactic Bacteriën van het milieu

Om de relatie tussen eiwithomeostase, stress en veroudering te bestuderen, hebben we veranderingen in eiwitvouwing gemonitord door eiwitdisfunctie, eiwitlocalisatie in de cel en eiwitstabiliteit op organismisch, cellulair en eiwitniveau te volgen, met behulp van de genetisch hanteerbare metazoa Caenorhabditis elegans als modelsysteem.

Gebruik Caenorhabditis elegans Als een modelsysteem voor de Protein Homeostase studeren in een meercellige

Prion-achtige verspreiding van eiwitaggregaten is recent naar voren gekomen als een factor die bij veel neurodegeneratieve ziekten betrokken is. Het doel van dit protocol is om te beschrijven hoe de rondworm C. elegans als modelsysteem kan worden gebruikt om eiwitverspreiding te volgen en prion-achtige fenomenen te onderzoeken.

Onderzoek naar de verspreiding en de toxiciteit van Prion-achtige eiwitten met behulp van de Metazoan modelorganisme<em&gt; C. elegans</em

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor het kweken, op regelmatige basis, van een populatie Drosophila melanogaster met behulp van een vliegenpopulatiekooi.

Handhaving van<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Bevolking Cage

Leer laboratoriumonderhoud van Bradysia coprophila voor genetisch en ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze protocollen omvatten kruisingen, voeding en het voorkomen van schimmelgroei.

Laboratoriumonderhoud van de onderste dipteravlieg Bradysia (Sciara) coprophila: een nieuw/oud opkomend modelorganisme

Meer video's verkennen