Name: Isolatie en cryopreservatie van zeer levensvatbare mononucleaire cellen van menselijk perifeer bloed uit volbloed: een gids voor beginners (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Leer de isolatie en cryopreservatie van zeer levensvatbare mononucleaire cellen uit menselijk perifeer bloed met dichtheidsgradiëntcentrifugatie. Dit protocol garandeert hoogwaardige cellen voor immunologisch en hematologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mathew, J., Sankar, P., Varacallo, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMathew%2C+J+%22Physiology%2C+Blood+Plasma%22">Physiology, Blood Plasma</a>. , StatPearls Pubs. Treasure Island, Florida. (2018).</li>
<li>Van Oost, B., Van Hien-Hagg, I. H., Timmermans, A. P., Sixma, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+thrombin+on+the+density+distribution+of+blood+platelets%3A+Detection+of+activated+platelets+in+the+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The effect of thrombin on the density distribution of blood platelets: Detection of activated platelets in the circulation.</a> Blood. 62 (2), 433-438 (1983).</li>
<li>Hassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+low-density+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">On the origin of low-density neutrophils.</a> Journal of Leukocyte Biology. 107 (5), 809-818 (2020).</li>
<li>Norouzi, N., Bhakta, H. C., Grover, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+cells+by+their+density%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Sorting cells by their density.</a> PLOS ONE. 12 (7), e0180520(2017).</li>
<li>Manzone, T. A., Dam, H. Q., Soltis, D., Sagar, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+volume+analysis%3A+A+new+technique+and+new+clinical+interest+reinvigorate+a+classic+study%5BTitle%5D)+AND+%22JNMT%22%5BJournal%5D)">Blood volume analysis: A new technique and new clinical interest reinvigorate a classic study.</a> JNMT. 35 (2), 55-63 (2007).</li>
<li>Kleiveland, C. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKleiveland%2C+CR+%22The+impact+of+food+bioactives+on+health%3A+In+vitro+and+ex+vivo+models%22">The impact of food bioactives on health: In vitro and ex vivo models</a>. , Springer. Cham. 161-167 (2015).</li>
<li>Rosado, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+biomarker+detection%3A+Alternative+approaches+for+blood-based+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Advances in biomarker detection: Alternative approaches for blood-based biomarker detection.</a> Adv Clin Chem. 92, 141-199 (2019).</li>
<li>Riedhammer, C., Halbritter, D., Weissert, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRiedhammer%2C+C+%22Multiple+sclerosis%3A+Methods+and+Protocols%22">Multiple sclerosis: Methods and Protocols</a>. 1304, Humana Press. New York, NY. 53-61 (2016).</li>
<li>Panda, S. K., Ravindran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Culture+of+Human+PBMCs%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro Culture of Human PBMCs.</a> Bio Protoc. 3 (3), e322(2013).</li>
<li>He, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+blood+vs+PBMC%3A+Compartmental+differences+in+gene+expression+profiling+exemplified+in+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy+Asthma+Clinic+Immol%22%5BJournal%5D)">Whole blood vs PBMC: Compartmental differences in gene expression profiling exemplified in asthma.</a> Allergy Asthma Clinic Immol. 15, 67(2019).</li>
<li>Pelák, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+enrichment+using+CD81-targeted+immunoaffinity+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte enrichment using CD81-targeted immunoaffinity matrix.</a> Cytometry Part A. 91 (1), 62-72 (2017).</li>
<li>Higdon, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+on+in-depth+immunophenotyping+of+delay+to+peripheral+blood+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Impact on in-depth immunophenotyping of delay to peripheral blood processing.</a> Clin Exp Immunol. 217 (2), 119-132 (2024).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoactivatable+aptamer-CRISPR+nanodevice+enables+precise+profiling+of+interferon-gamma+release+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Photoactivatable aptamer-CRISPR nanodevice enables precise profiling of interferon-gamma release in humanized mice.</a> ACS Nano. 18 (4), 3826-3838 (2024).</li>
<li>Ren, Z., Li, C., Wang, J., Sui, J., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptome+revealed+dysregulated+RNA-binding+protein+expression+patterns+and+functions+in+human+ankylosing+spondylitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptome revealed dysregulated RNA-binding protein expression patterns and functions in human ankylosing spondylitis.</a> Front Med. 11, 1369341(2024).</li>
<li>Honardoost, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+immune+cell+dysregulation+and+molecular+subtypes+revealed+by+single-cell-RNA-seq+of+subjects+with+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Systematic immune cell dysregulation and molecular subtypes revealed by single-cell-RNA-seq of subjects with type 1 diabetes.</a> Genome Med. 16, 45(2024).</li>
<li>Amini, A., Esmaeili, F., Golpich, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+role+of+lncRNAs+in+amelioration+of+Parkinson%27s+disease+symptoms+by+transplantation+of+dopaminergic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">Possible role of lncRNAs in amelioration of Parkinson's disease symptoms by transplantation of dopaminergic cells.</a> NPJ Parkinsons Dis. 10, 56(2024).</li>
<li>Luo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sars-Cov-2+spike+induces+intestinal+barrier+dysfunction+through+the+interaction+between+CEACAM5+and+Galectin-9%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Sars-Cov-2 spike induces intestinal barrier dysfunction through the interaction between CEACAM5 and Galectin-9.</a> Front Immunol. 15, e1303356(2024).</li>
<li>Zhang, X., Wu, G., Ma, X., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cell+alterations+and+PI3k-PKB+pathway+suppression+in+patients+with+allergic+rhinitis+undergoing+sublingual+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Ther%22%5BJournal%5D)">Immune cell alterations and PI3k-PKB pathway suppression in patients with allergic rhinitis undergoing sublingual immunotherapy.</a> Adv Ther. 41 (2), 777-791 (2024).</li>
<li>Rucci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+mitochondrial+DNA+copy+number+in+circulating+cell-free+DNA+and+extracellular+vesicles+across+cardiovascular+health+status%3A+A+prospective+case-control+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Exploring mitochondrial DNA copy number in circulating cell-free DNA and extracellular vesicles across cardiovascular health status: A prospective case-control pilot study.</a> FASEB J. 38 (10), e23672(2024).</li>
<li>Ghamrawi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buffy+coat+DNA+Methylation+Profile+is+Representative+of+Methylation+Patterns+in+White+Blood+Cell+Types+in+Normal+Pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Buffy coat DNA Methylation Profile is Representative of Methylation Patterns in White Blood Cell Types in Normal Pregnancy.</a> Front Bioeng Biotechnol. 9, e782843(2022).</li>
<li>Johansson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+biomarker+profiles+in+autosomal+dominant+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Plasma biomarker profiles in autosomal dominant Alzheimer's disease.</a> Brain. 146 (3), 1132-1140 (2023).</li>
<li>Bonaterra-Pastra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+plasma+lipoprotein+composition+and+function+in+cerebral+amyloid+angiopathy+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Comparison of plasma lipoprotein composition and function in cerebral amyloid angiopathy and Alzheimer's disease.</a> Biomedicines. 9 (1), 72(2021).</li>
<li>Green, M. R., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+cell+number+by+hemocytometry+counting%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Estimation of cell number by hemocytometry counting.</a> Cold Spring Harb Protoc. (11), prot097980(2019).</li>
<li>Cobo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosodium+urate+crystals+regulate+a+unique+JNK-dependent+macrophage+metabolic+and+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Monosodium urate crystals regulate a unique JNK-dependent macrophage metabolic and inflammatory response.</a> Cell Rep. 38 (10), e110489(2022).</li>
<li>Andrews, S. Fastqc: A quality control tool for high throughput sequence data. , 
 <a target="_blank" href=" http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/"> http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/</a> (2015).</li>
<li>Corkum, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cell+subsets+and+their+gene+expression+profiles+from+human+PBMC+isolated+by+Vacutainer+Cell+Preparation+Tube+%28CPT%E2%84%A2%29+and+standard+density+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immune cell subsets and their gene expression profiles from human PBMC isolated by Vacutainer Cell Preparation Tube (CPT™) and standard density gradient.</a> BMC Immunology. 16, 48(2015).</li>
<li>Golke, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delays+during+PBMC+isolation+have+a+moderate+effect+on+yield+but+severely+compromise+cell+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Delays during PBMC isolation have a moderate effect on yield but severely compromise cell viability.</a> Clin Chem Lab Med. 60 (5), 701-706 (2022).</li>
<li>Fuss, I. J., Kanof, M. E., Smith, P. D., Zola, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+whole+mononuclear+cells+from+peripheral+blood+and+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Isolation of whole mononuclear cells from peripheral blood and cord blood.</a> Curr Protoc Immunol. 85 (1), 7.1.1-7.1.8 (2009).</li>
<li>Faass, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+heptose+metabolites+and+the+cag+pathogenicity+island+to+the+activation+of+monocytes%2Fmacrophages+by+Helicobacter+Pylori%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Contribution of heptose metabolites and the cag pathogenicity island to the activation of monocytes/macrophages by Helicobacter Pylori.</a> Front Immunol. 12, e632154(2021).</li>
<li>Preobrazhensky, S. N., Bahler, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomagnetic+bead+separation+of+mononuclear+cells+from+contaminating+granulocytes+in+cryopreserved+blood+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Immunomagnetic bead separation of mononuclear cells from contaminating granulocytes in cryopreserved blood samples.</a> Cryobiology. 59 (3), 366-368 (2009).</li>
<li>Schenz, J., Obermaier, M., Uhle, S., Weigand, M. A., Uhle, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocyte+contamination+from+peripheral+blood+mononuclear+cells+of+patients+with+sepsis+and+how+to+remove+it+-+A+technical+report%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocyte contamination from peripheral blood mononuclear cells of patients with sepsis and how to remove it - A technical report.</a> Front Immunol. 12, e684119(2021).</li>
<li>Tessema, B., Riemer, J., Sack, U., König, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+stress+assay+in+peripheral+blood+mononuclear+cells%3A+factors+influencing+its+results%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cellular stress assay in peripheral blood mononuclear cells: factors influencing its results.</a> Int J Mol Sci. 23 (21), 13118(2022).</li>
<li>abc. Chen, X., Thibeault, S. 2013 35th Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society (EMBC), , IEEE. 6228-6231 (2013).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+storage+temperature+on+PBMC+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">The effects of storage temperature on PBMC gene expression.</a> BMC Immunol. 17, 6(2016).</li>
<li>Ticha, O., Moos, L., Bekeredjian-Ding, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+long-term+cryopreservation+of+PBMC+on+recovery+of+B+cell+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Effects of long-term cryopreservation of PBMC on recovery of B cell subpopulations.</a> J Immunol Methods. 495, e113081(2021).</li>
<li>Chao, S. -H., Price, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavopiridol+inactivates+P-TEFb+and+blocks+most+RNA+polymerase+II+transcription+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Flavopiridol inactivates P-TEFb and blocks most RNA polymerase II transcription in vivo.</a> J of Biol Chem. 276 (34), 31793-31799 (2001).</li>
<li>Banfi, G., Salvagno, G. L., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ethylenediamine+tetraacetic+acid+%28EDTA%29+as+in+vitro+anticoagulant+for+diagnostic+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">The role of ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) as in vitro anticoagulant for diagnostic purposes.</a> Clin Chem Lab Med. 45 (5), 565-576 (2007).</li>
<li>Mohri, M., Rezapoor, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+heparin%2C+citrate%2C+and+EDTA+on+plasma+biochemistry+of+sheep%3A+Comparison+with+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of heparin, citrate, and EDTA on plasma biochemistry of sheep: Comparison with serum.</a> Res Vet Sci. 86 (1), 111-114 (2009).</li>
<li>Edwards, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparin-mediated+PCR+interference+in+SARS-CoV-2+assays+and+subsequent+reversal+with+heparinase+I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Heparin-mediated PCR interference in SARS-CoV-2 assays and subsequent reversal with heparinase I.</a> J Virol Methods. 327, 114944(2024).</li>
<li>Yokota, M., Tatsumi, N., Nathalang, O., Yamada, T., Tsuda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+heparin+on+polymerase+chain+reaction+for+blood+white+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Lab+Anal%22%5BJournal%5D)">Effects of heparin on polymerase chain reaction for blood white cells.</a> J Clin Lab Anal. 13 (3), 133-140 (1999).</li>
<li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+long-term+cryopreservation+of+pluripotent+stem+cells+at+-80+%C2%A0%C2%B0C%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient long-term cryopreservation of pluripotent stem cells at -80  °C.</a> Sci Rep. 6 (1), 34476(2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 &micro;L Tips</td><td>Gilson</td><td>F174501</td><td>Ongeveer 3 tips nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>15 mL buis</td><td>Biopioneeer</td><td>CNT-15</td><td>Om oplossingen 2/3 te houden 2 nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>2 mL Cryovials</td><td>Globe Scientific</td><td>3012</td><td>Ongeveer 40 cryovials nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>20 &micro;L Tips</td><td>Gilson</td><td>F174201</td><td>Voor gebruik in celtelling; benodigd volume is afhankelijk van de gebruikte methode voor celtelling. 1 tip is nodig per 1 mL van niet-gepoolde bevroren PBMC's om te ontdooien</td></tr><tr><td>50 mL Conische buis</td><td>CEM Corporation</td><td>50-187-7683</td><td>2 nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie 3 nodig per 1 mL van niet-gepoolde bevroren PBMC's om te ontdooien</td></tr><tr><td>CD14 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>325621</td><td></td></tr><tr><td>CD16 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>360723</td><td></td></tr><tr><td>CD19 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>363007</td><td></td></tr><tr><td>CD3 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>300405</td><td></td></tr><tr><td>CD56 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>318303</td><td></td></tr><tr><td>CD66b Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>305103</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainer</td><td>Biopioneeer</td><td>DGN258367</td><td>1 nodig per 1 mL van niet-gepoolde bevroren PBMC's om te ontdooien</td></tr><tr><td>CPT Mononuclear Cell Preparation Tube</td><td>BD Biosciences</td><td>362753</td><td>6 buizen nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>Cryo Freezer Box</td><td>Southern Labware</td><td>SB2CC-81</td><td>Houdt 81 buizen 1 nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>Cryotube Rack</td><td>Fisherbrand</td><td>05-669-45</td><td>Houdt tot 50 cryovials</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td>Ongeveer 2,5 mL nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>DNase/RNase-Free Gedistilleerd Water</td><td>Invitrogen</td><td>10977015</td><td>Ongeveer 2 mL nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie Ongeveer 9 mL nodig per 1 mL van bevroren PBMC's om te ontdooien</td></tr><tr><td>EDTA Buizen</td><td>BD Biosciences</td><td>366643</td><td>1 buis nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>Flavopiridol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3055-5MG</td><td></td></tr><tr><td>HLA-DR Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>307609</td><td></td></tr><tr><td>Human Serum Albumine</td><td>GeminiBio</td><td>800-120</td><td>Ongeveer 25 mL nodig per patiënt of behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>Human Trustain FcX</td><td>Biolegend</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W292912-1KG-K</td><td>Voor gebruik in Mr. Frosty</td></tr><tr><td>Label Printer</td><td>Phomemo</td><td>M110-WH</td><td></td></tr><tr><td>Live-Dead Stain</td><td>Biolegend</td><td>423105</td><td></td></tr><tr><td>Mr. Frosty</td><td>Thermo Scientific</td><td>5100-0001</td><td>Houdt tot 18 buizen. 2 Mr. Frosty's nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>Multidispense Pipette</td><td>Brandtech</td><td>705110</td><td></td></tr><tr><td>Multidispense Pipette Tips</td><td>Brandtech</td><td>705744</td><td>Ongeveer 3 tips nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>P1000 Pipette</td><td>Gilson</td><td>F144059M</td><td></td></tr><tr><td>P20 Pipette</td><td>Gilson</td><td>F144056M</td><td>Voor gebruik in celtelling; benodigd volume is afhankelijk van de gebruikte methode voor celtelling.</td></tr><tr><td>Printer Labels</td><td>Phomemo</td><td>PM-M110-3020</td><td>Ongeveer 45 labels nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie Ongeveer 5 labels nodig per 1 mL van niet-gepoolde bevroren PBMC's om te ontdooien</td></tr><tr><td>RNase-Free EDTA (0,5 M)</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td>Ongeveer 40 &micro;L nodig per 1 mL van bevroren PBMC's om te ontdooien</td></tr><tr><td>RNase-Free PBS (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>AM9625</td><td>Ongeveer 1 mL nodig per 1 mL van bevroren PBMC's om te ontdooien</td></tr><tr><td>RNasin</td><td>Promega</td><td>N2111</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td>Ongeveer 80 mL nodig per patiënt of behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>Transfer Pipettes</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-7M</td><td>Ongeveer 5 nodig per patiënt/behandelingsconditie voor PBMC/Plasma/Buffy Coat Collectie</td></tr><tr><td>Tube Holder</td><td>Endicott-Seymour</td><td>14-781-15</td><td>Houdt tot 80 CPT/EDTA Buizen</td></tr></tbody></table>

isolatie en cryopreservatie van zeer levensvatbare mononucleaire cellen van menselijk perifeer bloed uit volbloed: een gids voor beginners

Isolation and Cryopreservation of Highly Viable Human Peripheral Blood Mononuclear Cells From Whole Blood: A Guide for Beginners

Isolatie en cryopreservatie van zeer levensvatbare mononucleaire cellen van menselijk perifeer bloed uit volbloed: een gids voor beginners

Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are commonly used in biomedical research on the immune system and its response to disease and pathogens. This ...

isolation-cryopreservation-highly-viable-human-peripheral-blood

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In this video, we demonstrate the isolation of monocytes from whole human blood by immunomagnetic negative separation. The isolated monocytes can be used for further downstream analysis.

Isolation of Monocytes from Whole Blood by Immunomagnetic Negative Selection

In this video, we demonstrate the isolation of peripheral blood mononuclear cells, PBMCs, containing monocytes and lymphocytes from a human buffy coat by density gradient centrifugation. The isolated PBMCs can be used for further analysis.

Isolation of Peripheral Blood Mononuclear Cells from Human Buffy Coats

We schetsen een methodologie voor de verwerking van volbloed om een verscheidenheid aan componenten te verkrijgen voor verdere analyse. We hebben een gestroomlijnd protocol geoptimaliseerd dat snelle, hoogwaardige, gelijktijdige verwerking van volbloedmonsters in een niet-klinische omgeving mogelijk maakt.

Snelle Fractionering en isolatie van volbloed componenten in monsters verkregen van een communautair gevestigde instelling

Geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) vormen een bron van patiënt-specifieke weefsels voor klinische toepassingen en fundamenteel onderzoek. Hier presenteren we een gedetailleerd protocol voor humane perifere bloed mononucleaire cellen (PBMNCs) die van bevroren buffy coats in viraal-vrije iPSCs met niet-integrerende episomale plasmiden herprogrammeren.

Generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen van Frozen Buffy Coats behulp van niet-integrerende Episomaal plasmiden

Hier demonstreren we hoe monocyten worden geïsoleerd door magnetische kralenscheiding van mononucleaire cellen uit het perifere bloed na dichtheidsgradiëntcentrifugatie van humaan geanticoaguleerd bloed. Na incubatie gedurende 5 dagen, worden menselijke monocyten gedifferentieerd in onrijpe dendritische cellen en zijn ze klaar voor experimentele procedures in een niet-klinische omgeving.

Genereren van Human-monocyten afgeleide dendritische cellen uit volbloed

Dit protocol beschrijft klinisch implementeerbare bereiding van hoogwaardige PBMC- en plasmabioamples op de klinische proeflocatie die kunnen worden gebruikt voor translationele biomarkeranalyse.

Voorbereiding van perifere bloedmononucleaire celkorrels en plasma uit een enkele bloedafname op klinische proeflocaties voor biomarkeranalyse

We presenteren een eenvoudig protocol voor de isolatie van perifere mononucleaire bloedcellen uit volbloed verkregen van patiënten met de diagnose Sézary-syndroom, gevolgd door selectie van CD4 + T-cellen, hun stimulatie met phorbol12-myristate13-acetaat en A23187 ionofoor, en voorbereiding van RNA voor transcriptomische profilering.

Isoleren van menselijke perifere bloedmonucleaire cellen en CD4 + T-cellen van patiënten met het Sézary-syndroom voor transcriptomische profilering

Geïsoleerde perifere mononucleaire bloedcellen kunnen worden gebruikt voor de analyse van immuunfuncties en -aandoeningen, stofwisselingsziekten of mitochondriale functies. In dit werk beschrijven we een gestandaardiseerde methode voor de bereiding van PBMC's uit volbloed en de daaropvolgende cryopreservatie. Cryopreservatie maakt deze tijd en plaats onafhankelijk.

Cryopreservatie en bio-energetische evaluatie van mononucleaire cellen in menselijk perifeer bloed

Hier presenteren we een geoptimaliseerd protocol voor de cytokinese-blok-micronucleustest op gecryopreserveerde volbloedmonsters. Deze geoptimaliseerde methode voor cryopreservatie van volbloed voor micronucleusanalyse is een betrouwbare techniek voor grootschalige bemonstering en multicenter studies en kan ook worden gebruikt voor andere bloedgerelateerde tests.

De micronucleustest op gecryopreserveerd volbloed

Dit protocol beschrijft een high-throughput automatisering-compatibele methode om menselijke perifere bloed mononucleaire cellen te isoleren voor biobanking en andere doeleinden.

Het isoleren van Menselijke Perifere Bloed Mononucleaire Cellen van Buffy Coats via de Scheiding van de Hoge Doorvoer Immunomagnetische Parel

Leer de isolatie en cryopreservatie van zeer levensvatbare mononucleaire cellen uit menselijk perifeer bloed met dichtheidsgradiëntcentrifugatie. Dit protocol garandeert hoogwaardige cellen voor immunologisch en hematologisch onderzoek.

Isolatie en cryopreservatie van zeer levensvatbare mononucleaire cellen van menselijk perifeer bloed uit volbloed: een gids voor beginners (Video) | JoVE Journal

Isolatie en cryopreservatie van zeer levensvatbare mononucleaire cellen van menselijk perifeer bloed uit volbloed: een gids voor beginners

Meer video's verkennen